專利名稱：醛糖還原酶抑制劑，其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種新的醛糖還原酶抑制劑，其制備方法和其用途，更具體地說，本發(fā)明涉及作為醛糖還原酶抑制劑的通式(I)化合物，含有它們的藥物組合物，利用微生物發(fā)酵制備通式(I)化合物的方法及其中使用的新的微生物，和通式(I)化合物或含有它們的藥物組合物在制備用于預(yù)防糖尿病并發(fā)癥的藥物中的用途。
背景技術(shù)：
糖尿病是由胰島素分泌和/或胰島素作用的絕對或相對減弱而引起的綜合癥，主要表現(xiàn)為高血糖。糖尿病分為胰島素依賴型糖尿病(I型糖尿病)和胰島素非依賴型糖尿病(II型糖尿病)，II型糖尿病晚期可出現(xiàn)并發(fā)癥，其中微血管并發(fā)癥包括眼病、腎病和外周和自主神經(jīng)病，大血管并發(fā)癥包括動脈粥樣硬化冠心病和外周動脈病。糖尿病，特別是其并發(fā)癥，給患者及其親屬帶來了巨大的痛苦。
根據(jù)世界衛(wèi)生組織糖尿病專家委員會2002年公布的數(shù)據(jù)，全世界糖尿病人數(shù)已接近2億，其中96％患者會因慢性并發(fā)癥而死亡。據(jù)報導(dǎo)，中國糖尿病患者已超過5000萬。隨著工業(yè)化進(jìn)程加快，患病人數(shù)呈不斷上升趨勢。
自從胰島素用于治療糖尿病以來，酮酸中毒、感染不再威脅糖尿病患者的生命安全。但長期的糖尿病導(dǎo)致的并發(fā)癥仍然是糖尿病患者頭痛的嚴(yán)重問題。通過對糖尿病患者多元醇代謝通路異常的研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞組織中山梨醇的蓄積是組織結(jié)構(gòu)、功能改變的重要原因，而多元醇代謝通路中的關(guān)鍵酶是醛糖還原酶(aldose reductase，AR)。醛糖還原酶以還原型輔酶II(NADPH)為輔酶，它催化己糖的還原反應(yīng)，可以將葡萄糖和半乳糖轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的還原產(chǎn)物山梨醇和半乳糖醇。然后，山梨醇再在山梨醇脫氫酶(sorbitol dehydrogenase)的作用下氧化成果糖。山梨醇脫氫酶則是多元醇代謝通路中的第二個酶，它可以氧化多種糖醇，但卻不能氧化半乳糖醇。因此，在體內(nèi)易導(dǎo)致半乳糖醇的積聚，從而引起半乳糖血癥的發(fā)生(張禮萍等人，醛糖還原酶抑制劑研究，國外醫(yī)藥抗生素分冊，1997，18(1)5-10)。值得注意的是，葡萄糖和半乳糖均不是AR的最適底物，當(dāng)血糖濃度維持在正常的生理水平時，AR并不被激活。在高血糖的生理狀況(如糖尿病發(fā)生時)，催化葡萄糖轉(zhuǎn)化為6-磷酸葡萄糖的己糖激酶被飽和，此時AR則被激活，促使體內(nèi)的葡萄糖轉(zhuǎn)化成山梨醇。然而，山梨醇脫氫酶的活力并未呈比例地相應(yīng)增加，山梨醇又由于自身極性因素不易通過細(xì)胞膜，所以在胞內(nèi)造成了山梨醇的聚積。大量的動物和臨床試驗都已證實(shí)，醛糖還原酶抑制劑(ARI)能有效地改善糖尿病患者的聚醇代謝紊亂，從而預(yù)防和延緩糖尿病并發(fā)癥如白內(nèi)障、神經(jīng)病變、腎臟病變等的發(fā)生和發(fā)展(楊哲，醛糖還原酶抑制劑和糖尿病并發(fā)癥，國外醫(yī)學(xué)藥學(xué)分冊，1999，26(4)217-222)。
人們對醛糖還原酶抑制劑已經(jīng)進(jìn)行了一些研究，Ayerst公司開發(fā)的羧酸類醛糖還原酶抑制劑托瑞司他(Tolrestat)1989年在愛爾蘭上市。但是后來在治療糖尿病并發(fā)癥神經(jīng)病變的大規(guī)模隨機(jī)雙盲臨床試驗中因未能表現(xiàn)出足夠的療效而未能通過FDA批準(zhǔn)上市。
輝瑞公司開發(fā)出第一個在體內(nèi)外均具有較高活性的海因類ARI索比尼爾(sorbinil)，其對大鼠晶狀體AR和人胎盤AR有效，并已在美國、歐洲和日本上市，但后來發(fā)現(xiàn)引起嚴(yán)重的過敏反應(yīng)而被終止臨床應(yīng)用(Sarges R.German Patent 2746244，1977)。
Varma等人研究了多種黃酮類化合物的醛糖還原酶抑制活性。結(jié)果表明它們不同程度具有活性。但至今還沒有一個化合物投放市場(Var SD，etal，F(xiàn)lavonoids as inhibitors of lens aldose reductase，Science NY，1975，1881215-1216)。
Eugene de Juan等人發(fā)現(xiàn)，具有異黃酮結(jié)構(gòu)的Genistein具有治療糖尿病性白內(nèi)障的作用(US5919813、US5980929、US6208099和US6399655)。
(Genestein)但是他們并未發(fā)現(xiàn)作為甙元的Genestein形成的糖甙在治療白內(nèi)障中的活性。
盡管已有預(yù)防糖尿病并發(fā)癥的藥物，但仍不能滿足市場的需要。市場仍需要預(yù)防或治療糖尿病并發(fā)癥的替代藥物，特別是天然來源的替代藥物。
因此，本發(fā)明的一個目的是提供一種新型的治療或預(yù)防糖尿病或其并發(fā)癥的化合物、含有它們的藥物組合物及將它們用于治療或預(yù)防糖尿病并發(fā)癥。
本發(fā)明另一目的是提供一種制備這樣化合物的方法及在該方法中使用的新的微生物。
本發(fā)明另一目的是提供一種治療糖尿病同時預(yù)防糖尿病并發(fā)癥的藥物組合物。
發(fā)明概述本發(fā)明發(fā)明人對醛糖還原酶抑制劑進(jìn)行了大量研究，結(jié)果驚人地發(fā)現(xiàn)某些微生物的代謝產(chǎn)物具有醛糖還原酶抑制劑活性，因此完成本發(fā)明。
一方面，本發(fā)明提供了一種下面通式(I)的化合物，及其可藥用鹽、溶劑化物、立體異構(gòu)體或前藥
其中，R1為OH，或 所示的α-L-吡喃巖藻糖基或其羥基被其他糖基或者保護(hù)基取代的基團(tuán)；R2為H或-OHR3為-OH或羥基保護(hù)基，或是如下式所示的 α-L-鼠李糖基，或其羥基被其他糖基或者保護(hù)基取代的基團(tuán)，條件是R1和R3至少有1個是糖基或糖基衍生得到的基團(tuán)。
另一方面，本發(fā)明提供了一種制備上述通式(I)化合物的方法，該方法包括將選定的放線菌在培養(yǎng)基上發(fā)酵，然后對所得發(fā)酵液進(jìn)行分離和純化。
另一方面，本發(fā)明提供了兩種新的微生物，它可用于上述發(fā)酵方法，它的保藏編號為CGMCC 0834和CGMCC 0885。
另一方面，本發(fā)明提供了一種藥物組合物，其包括上述式(I)化合物或其可藥用鹽作為活性成分和可藥用載體。另外，所述藥物組合物還可包含一種常用的治療糖尿病的已知藥物。
另一方面，本發(fā)明涉及上述式(I)化合物或組合物用于制備預(yù)防糖尿病并發(fā)癥的藥物的用途，以及含有已知藥物的藥物組合物用于制備治療糖尿病和預(yù)防糖尿病并發(fā)癥的藥物的用途。
圖1為菌株N99-253的光學(xué)顯微照片。
圖2為菌株N99-596的光學(xué)顯微照片。
圖3依據(jù)16S rDNA序列構(gòu)建的菌株N99-596及相關(guān)菌種的系統(tǒng)發(fā)育樹圖4依據(jù)16S rDNA序列構(gòu)建的菌株N99-253及相關(guān)菌種的系統(tǒng)發(fā)育樹。
圖5為N99-596A、B對醛糖還原酶抑制的量效曲線。
圖6為N99-253A對醛糖還原酶抑制的量效曲線。
發(fā)明的詳細(xì)描述如上所述，本發(fā)明涉及作為醛糖還原酶抑制劑的式(I)化合物，其可藥用鹽、溶劑化物、立體異構(gòu)體或前藥 其中R1為OH，或 所示的α-L-吡喃巖藻糖基或其羥基被其他糖基或者保護(hù)基取代的基團(tuán)；R2為H，-OHR3為-OH或羥基保護(hù)基，或是如下式所示的 α-鼠李糖基，或其羥基被其他糖基或者保護(hù)基取代的基團(tuán)，條件是R1和R3至少有1個是糖基或糖基衍生得到的基團(tuán)。
按照本發(fā)明的優(yōu)選方案，式(I)化合物中的R3為OH，R2為H或-OH，R1為α-L-吡喃巖藻糖基。
上述化合物可做為醛糖還原酶抑制劑用于預(yù)防糖尿病并發(fā)癥。
本發(fā)明的醛糖還原酶抑制劑可以是上述化合物本身，適當(dāng)時也可以是其藥學(xué)上可接受的衍生物，例如羥基保護(hù)基或者糖基上的羥基再被其他糖基或者保護(hù)基取代的衍生物等。
作為羥基保護(hù)基，例如保護(hù)單羥基的甲基、叔丁基、烯丙基、芐基、三苯甲基、被甲氧基等取代的三苯甲基、三甲基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基、四氫吡喃基、四氫呋喃基、四氫硫代吡喃基、噻吩基、甲醛縮醛、環(huán)己酮縮醛、甲硫基甲基、乙酰氧基、苯甲酰氧基、鄰、間、對硝基苯甲酰氧基、甲酰氧基、三氟乙酰氧基、氯乙酰氧基、甲氧基乙酰氧基、苯氧基乙酰氧基、甲氧羰基、乙氧羰基、異丁氧羰基、芐氧羰基、2，2，2-三氯乙氧羰基、2，2，2-三溴乙氧羰基、對硝基苯氧羰基、苯氨羰基、芐硫羰基、新戊酰氧基、3-苯甲酰乙酰氧基、苯甲酰甲酰基、琥珀酰氧基、惕各酰氧基、鄰芐氧羰基苯甲酰基、3-苯丙酰氧基、硝基、對甲苯磺酰氧基、2，4-二硝基苯氧磺酰氧基、烷氧基乙?；⒓籽趸谆?、1-乙氧基乙基、苯甲酰基甲基、三甲基甲硅烷基、三乙基甲硅烷基、β-三甲基甲硅烷基乙氧基甲基、苯甲酰氧基羰基等，保護(hù)雙羥基的甲叉縮醛、乙叉縮醛、芐叉縮醛、取代芐叉縮醛、異丙叉縮醛、環(huán)己叉縮醛、原甲酸酯、碳酸環(huán)酯、苯硼酸環(huán)酯等。以及其他常規(guī)羥基保護(hù)基等。
在保護(hù)基含有酸性或堿性基團(tuán)的情況下，上述化合物也可以與非毒性的堿或酸形成可藥用鹽的形式。酸的例子包括無機(jī)酸，諸如鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、硫酸、磷酸；有機(jī)酸，諸如乙酸、丙酸、羥乙酸、乳酸、丙酮酸、乙醇酸、馬來酸、丙二酸、草酸、苯磺酸、甲苯磺酸、甲磺酸、三氟乙酸、富馬酸、琥珀酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、水楊酸、對氨基水楊酸、撲酸、苯甲酸、抗壞血酸等。堿加成鹽形式的例子是鈉、鉀、鈣鹽，以及與藥學(xué)可接受的胺形成的鹽，所述的胺是諸如氨、烷基胺、苯胺和氨基酸，諸如精氨酸和賴氨酸等。
上述化合物、衍生物和鹽可以形成溶劑化物，例如水合物、醇合物等。上述醛糖還原酶抑制劑還可以是前藥或可在體內(nèi)代謝變化后釋放出所述活性成分的形式。選擇和制備適當(dāng)?shù)那八幯苌锸潜绢I(lǐng)域技術(shù)人員公知技術(shù)。
下文中為簡便起見，本發(fā)明限定的任何化合物、其可藥用鹽、其溶劑化物及其立體異構(gòu)體都簡稱為本發(fā)明的化合物。
本發(fā)明另一方面提供了制備上述化合物的方法，該方法包括將能夠通過發(fā)酵產(chǎn)生式(I)化合物的微生物培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵，并選擇性地對所得培養(yǎng)物進(jìn)行分離和純化。
在需要獲得特定取代基的特定化合物的情況下，可以根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員熟悉的方法，通過在培養(yǎng)液中加入特定的誘導(dǎo)物或者誘導(dǎo)微生物產(chǎn)生特定發(fā)酵物的方法進(jìn)行。
本發(fā)明的一個具體實(shí)施方案中，包括選擇性地在種子培養(yǎng)基上培養(yǎng)微生物獲得預(yù)培養(yǎng)物，將預(yù)培養(yǎng)物在發(fā)酵培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)(發(fā)酵)，對所得發(fā)酵液進(jìn)行分離和純化獲得本發(fā)明的化合物。
得到的本發(fā)明化合物可以進(jìn)一步進(jìn)行衍生化獲得各種衍生物。
分離包括離心發(fā)酵液，收集菌體，用溶劑提取菌體再除去溶劑，純化包括硅膠柱層析和選擇性的HPLC單組分制備等，以上操作屬于本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的操作。
本發(fā)明方法不受上述順序的限制，并且所述培養(yǎng)基成分可以在本領(lǐng)域技術(shù)人員可預(yù)見的范圍內(nèi)采用其變體。
產(chǎn)生本發(fā)明式(I)化合物的微生物，例如由下述本發(fā)明人等分離得到滇南鏈霉菌(Streptomyces diannanensis)CGMCC No.0834(N99-596)或華云鏈霉菌(Streptomyces huayunensis)CGMCCNo.0885(N99-253)等鏈霉菌。但本發(fā)明并非限于這兩種鏈霉菌，只要其代謝產(chǎn)物中可以獲得本發(fā)明通式(I)化合物，均可以用于發(fā)酵生產(chǎn)。
菌株N99-596是從中國云南省的土壤樣品中分離得到的(圖1)。
*特征描述該菌株在酵母膏-麥芽膏培養(yǎng)基上菌落灰色，表面平坦、絨毛狀。顯微鏡下觀察其菌絲發(fā)達(dá)，多分枝，無隔；孢子鏈或波曲形或不規(guī)則螺旋及鉤狀。能在所有供試培養(yǎng)基上生長良好，氣絲和基絲均以灰棕色或棕灰色為主，培養(yǎng)特征參見表1和2。
表1菌株N99-596的培養(yǎng)特征
表2菌株N99-596的生理生化特征和碳源利用狀況
*16S rDNA序列及系統(tǒng)進(jìn)化分析*菌株N99-596的16S rDNA部分序列如序列1所示。將N99-596的16S rDNA與已知的若干菌株的16S rDNA進(jìn)行比對，所得的依據(jù)16SrDNA序列構(gòu)建的菌株N99-596及相關(guān)菌種的系統(tǒng)發(fā)育樹參見圖3。
進(jìn)行比對的菌株如下
表3
綜上，N99-596號菌株使明膠液化，牛奶凝固，硝酸鹽還原，均呈陽性，纖維素上不生長，硫化氫及黑色素不產(chǎn)生，不產(chǎn)生脲酶，能利用幾乎所有的受試碳源。細(xì)胞壁含有L-DAP，胞壁I型。根據(jù)其形態(tài)學(xué)特征及基于16S rDNA序列的系統(tǒng)進(jìn)化分析，將菌株N99-596定為鏈霉菌的一個新種，命名為滇南鏈霉菌(Streptomycesdiannanensis)。N99-596已于2002年11月15日保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，保藏編號為CGMCCN0.0834。
菌株N99-253是從中國云南省的土壤樣品中分離得到的(圖2)。
*特征描述該菌株在酵母膏-麥芽膏培養(yǎng)基上菌落灰色，周圍有小水解圈。顯微鏡下觀察其菌絲發(fā)達(dá)，多分枝，無隔；孢子鏈或波曲形或不規(guī)則螺旋。能在所有供試培養(yǎng)基上生長良好，氣絲和基絲均以灰棕色或棕灰色為主，培養(yǎng)特征參見表4。
表4菌株N99-253的培養(yǎng)特征
*16S rDNA序列及系統(tǒng)進(jìn)化分析*菌株N99-253的16S rDNA部分序列如序列2所示。將N99-253的16S rDNA與已知的若干菌株的16S rDNA進(jìn)行比對，所得的依據(jù)16SrDNA序列構(gòu)建的菌株N99-253及相關(guān)菌種的系統(tǒng)發(fā)育樹參見圖4。
進(jìn)行比對的菌株如下表5
依據(jù)16S rDNA序列構(gòu)建的菌株N99-253及相關(guān)菌種的系統(tǒng)發(fā)育樹參見圖4。
N99-253能利用幾乎所有的受試碳源。細(xì)胞壁含有L-DAP，胞壁I型。根據(jù)其形態(tài)學(xué)特征及基于16S rDNA序列的系統(tǒng)進(jìn)化分析，菌株N99-253定為鏈霉菌屬的一個新種，命名為華云鏈霉菌(Streptomyceshuayunensis)。N99-253于2003年1月21保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC No.0885。
本發(fā)明另一方面提供了一種藥物組合物，其含有作為活性成分的上述式(I)化合物和可藥用載體。藥物組合物的制備方法為本領(lǐng)域常用方法。
本文所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的加成鹽或水合物可以利用各種給藥途徑或方式釋放至患者。適合的給藥途徑包括但不限于吸入、透皮、口服、直腸、經(jīng)粘膜、腸內(nèi)和腸胃外給藥，腸胃外給藥包括肌內(nèi)、皮下和靜脈內(nèi)注射。
本文所用的術(shù)語“給藥”包括所有直接與間接釋放化合物到其預(yù)期作用部位的手段。
本文所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的衍生物可以單獨(dú)給藥或與其他本發(fā)明化合物聯(lián)合給藥，和/或以與其它已知糖尿病或者糖尿病并發(fā)癥治療劑聯(lián)合的形式給藥。
本發(fā)明的活性化合物可以本身形式給藥的，或者以藥物組合物形式給藥，其中活性化合物是與一種或多種藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑混合的。按照本發(fā)明使用的藥物組合物通常是按常規(guī)方式配制的，使用一種或多種生理學(xué)上可接受的載體，包含賦形劑和助劑，它們有利于將活性化合物加工成可以在藥學(xué)上使用的制劑。適當(dāng)?shù)闹苿┤Q于所選擇的給藥途徑，可以按照本領(lǐng)域熟知的常識進(jìn)行制造。
例如，對于治療糖尿病來說，通常采用口服制劑是有利的?？梢钥诜乃幬镏苿┌z囊劑和片劑等。病人吞咽有困難時，也可以采用舌下片或者其他非吞咽的方式給藥。
本發(fā)明化合物也可以配制用于腸胃外給藥或者透皮給藥或者經(jīng)粘膜給藥?；蛘卟捎盟▌┗蛘呗裰矂┑姆绞浇o藥。
本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解，在本發(fā)明化合物的基礎(chǔ)上，可以采用合適的藥物釋放系統(tǒng)(DDS)，以得到更有利的效果。
由于糖尿病屬于慢性病，因此，可以長期服用的口服劑型從經(jīng)濟(jì)上講對患者是有利的。
優(yōu)選地，組合物是單位劑型，例如片劑或膠囊劑。
給藥方式以及有效劑量的選擇將尤其根據(jù)所治療的疾病而異。給藥方式和劑量的選擇在本領(lǐng)域技術(shù)人員的能力范圍內(nèi)。
本發(fā)明化合物的單位劑型通常將含有0.1至99重量％活性物質(zhì)，更通常為5至75重量％活性物質(zhì)。舉例來說，單位劑型可以含有1mg至1g化合物，更通常為10mg至500mg，例如在50mg與400mg之間，劑量通常為100mg至200mg。
每個劑量單位或每次口服給藥優(yōu)選地含有1至250mg(關(guān)于腸胃外給藥，優(yōu)選地含有0.1至25mg)結(jié)構(gòu)式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的衍生物，每日給藥3次或根據(jù)進(jìn)餐次數(shù)決定。
本發(fā)明的化合物將按照有效提供所需治療效果的量給藥。提供所需治療效果所必要的濃度將尤其根據(jù)疾病的明確性質(zhì)、患者的年齡、體重和疾病的嚴(yán)重性而異。
通常，本發(fā)明化合物的給藥量將在0.01mg/kg至100mg/kg體重的范圍內(nèi)，更優(yōu)選為0.1mg/kg至10mg/kg體重，特別是1mg/kg至5mg/kg體重。
藥學(xué)上可接受的本發(fā)明化合物正常地將按照每日劑量方案對受治療者給藥。關(guān)于成年患者，這例如可以是通式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽的口服劑量在1mg與500mg之間，優(yōu)選在1mg與250mg之間，或者靜脈內(nèi)、皮下或肌內(nèi)劑量在0.1mg與100mg之間，優(yōu)選在0.1mg與25mg之間，按照游離化合物計算，化合物每天分1至4次給藥。因而，關(guān)于體重70kg的普通人，本發(fā)明化合物的典型每日劑量將在70mg至700mg的范圍內(nèi)。這樣一種劑量例如可以每日分3次或者2至4次給藥，因進(jìn)餐次數(shù)而定。
不過，給藥劑量的大小和給藥的頻率最終將由治療該患者的醫(yī)師來決定和判斷。
本發(fā)明的化合物還可以選擇性地與已知的治療糖尿病的藥物聯(lián)合給藥。在上述組合物中可以加入有效量的治療糖尿病的藥物。治療糖尿病的藥物是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的，例如甲苯磺丁脲、醋磺己脲、格列苯脲、格列吡嗪、格列齊特、格列喹酮、格列美脲、苯乙雙胍、二甲雙胍、瑞格列奈、那格列奈、羅格列酮、吡格列酮、阿卡波糖、伏格列波糖、依帕司它、氯磺丙脲、格列波脲、格列喹酮、格列嘧啶、木糖醇或殼聚糖等。
當(dāng)本發(fā)明化合物與已知治療糖尿病的藥物聯(lián)合給藥時，它們可以同時、分別或順序給藥。或者將其制成復(fù)方制劑。
本發(fā)明的化合物可用于預(yù)防或治療糖尿病并發(fā)癥，其中糖尿病并發(fā)癥選自下面并發(fā)癥所組成的組糖尿病腎病，糖尿病眼病、糖尿病神經(jīng)系統(tǒng)疾病、糖尿病心臟病、糖尿病動脈硬化和糖尿病微血管病，優(yōu)選糖尿病腎病、糖尿病眼病、糖尿病神經(jīng)系統(tǒng)疾病或糖尿病微血管病。
本發(fā)明化合物預(yù)防糖尿病并發(fā)癥的原理如背景部分所述，關(guān)于多元醇通路與糖尿病并發(fā)癥的關(guān)系，有肌醇喪失假說。該假說從原理上對本發(fā)明進(jìn)行解釋，但是無論如何，本發(fā)明不受這種理論所限制，因為本發(fā)明化合物事實(shí)上已經(jīng)起到預(yù)防糖尿病并發(fā)癥的作用。
肌醇喪失假說Greene D研究發(fā)現(xiàn)，神經(jīng)細(xì)胞中山梨醇的蓄積導(dǎo)致肌醇喪失，使用ARI可以有效地阻止肌醇的喪失，于是提出了肌醇喪失假說，肌醇是合成一種叫聚磷酸肌醇磷脂的細(xì)胞膜脂質(zhì)的主要成分，這種脂質(zhì)與細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)和功能密切相關(guān)。葡萄糖具有與肌醇相似的空間三維結(jié)構(gòu)，所以組織中葡萄糖濃度的增加可以競爭性地抑制肌醇運(yùn)轉(zhuǎn)系統(tǒng)。肌醇的磷酸化衍生物磷酸酰肌醇二磷酸(PIP2)水解后，可以產(chǎn)生兩種具特殊性質(zhì)的化合物-甘油二酯和1，4，5-三磷酸肌醇。其中，甘油二酯可以激活細(xì)胞膜脂質(zhì)雙分子層中的蛋白激酶C。蛋白激酶C可以激活Na+/K+-ATP酶，而肌醇進(jìn)入胞內(nèi)又要依賴Na+/K+-ATP酶。所以糖尿病導(dǎo)致的高血糖依次使肌醇進(jìn)入胞內(nèi)減少，AR活力增強(qiáng)，山梨醇蓄積，從而形成了一個循環(huán)，最終導(dǎo)致肌醇喪失。周圍神經(jīng)的肌醇喪失使神經(jīng)索突間質(zhì)中的Na+蓄積，從而引起神經(jīng)電沖動傳導(dǎo)阻滯。Raskin對患糖尿病的小鼠和半乳糖喂養(yǎng)的大鼠模型的研究也證明腎小球和視網(wǎng)膜中肌醇喪失與Na+/K+-ATP酶活力下降和山梨醇蓄積有關(guān)。
上述假說僅用于理解本發(fā)明。
本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明提供了本發(fā)明化合物及含本發(fā)明化合物的組合物用于制備預(yù)防或治療糖尿病并發(fā)癥的藥物中的用途，其中所述并發(fā)癥如上所述。
本發(fā)明另一方面，本發(fā)明提供了含有治療糖尿病藥物的本發(fā)明組合物用于制備治療糖尿病和預(yù)防糖尿病并發(fā)癥的藥物中的用途，其中所述的糖尿病并發(fā)癥如上所述。
本發(fā)明，還提供了一種醛糖還原酶抑制劑的篩選方法。
以往醛糖還原酶抑制劑活性的一般測定方法為在輔酶NADPH的存在下，醛糖還原酶催化含醛基的糖類，同時NADPH轉(zhuǎn)化為NADP+(煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸)，而NADP+所含吡啶環(huán)的還原態(tài)NADPH在340nm處有特征吸收，可以通過測定340nm處光密度的下降速率，間接測定醛糖還原酶的活性。醛糖還原酶的來源可以為牛、豬、猴、鼠、或人等，也可以是來自不同的臟器如精囊、腦、胎盤等。但按文獻(xiàn)報道操作，該篩選模型存在以下難點(diǎn)(1)醛糖還原酶需自己從屠宰場挖豬眼進(jìn)行提取，每次活性不同。
(2)輔酶NADPH極不穩(wěn)定。
(3)測定指標(biāo)為每分鐘OD值的變化，要求精確到0.001，一般的分光光度計精密度不夠。
(4)有些樣品加到測活體系發(fā)生渾濁，帶來干擾。
選用自動化程度較高的生化分析儀，針對以上存在的困難，對篩選和測活方法進(jìn)行了改進(jìn)。把測活體系的總體積減少到200微升，這就減少了酶和試劑的用量。自動化的程序設(shè)置減少了人工操作的偶然誤差并提高了測量的精密度。由于對大量樣品同時測定，這樣對每次測定時系統(tǒng)的穩(wěn)定性要求較高，所以在每次測活之前先測定酶的活性，作為對照，確認(rèn)OD值變化在一個合適的范圍中后再將該酶用于篩選。每次新配NADPH，并同時測定空白。選擇對樣品溶解性好而對酶活性影響小的溶劑，減少發(fā)生渾濁。對初篩呈陽性的樣品，為鑒別該樣品是否與NADPH作用，引起OD值上升，則在不加醛糖還原酶的條件下，記錄OD值的變化情況，若OD值上升，則此為假陽性，予以剔除。將此醛糖還原酶抑制劑高效篩選方法用于微生物代謝產(chǎn)物的篩選，提高了篩選的準(zhǔn)確性、穩(wěn)定性。
具體來說，本發(fā)明測活方法是以DL-甘油醛為底物，以NADPH為輔酶測定酶活性的
在NADPH的存在下，醛糖還原酶催化DL-甘油醛還原為甘油，同時NADPH轉(zhuǎn)化為NADP+，而還原態(tài)NADPH在340nm處有特征吸收，可以測定340nm處光密度的下降速率，間接測定醛糖還原酶的活性。
具體操作是在96孔板中，每個樣品孔加入緩沖液、酶液和樣品；對照孔以溶劑代替樣品，其余相同；空白孔以溶劑代替樣品并以緩沖液代替酶液，其余相同?；旌媳?5分鐘，再加入Li2SO4、DL-甘油醛和NADPH開始反應(yīng)，在與保溫相同溫度下測定在340nm波長處每分鐘的光密度減少值(ΔOD/min)。
下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步詳細(xì)說明本發(fā)明，但它們并非理解成對本儀器與試劑為本領(lǐng)域技術(shù)人員常用的。
材料NADPH(北京欣經(jīng)科生物技術(shù)公司)新鮮豬眼球(石家莊肉聯(lián)廠)。
巰基乙醇，PMSF(苯基甲基磺?；铮琒igma公司)1.斜面培養(yǎng)基葡萄糖4％，酵母粉4％，麥芽膏5％，瓊脂粉2.0％，復(fù)合VB 0.035％，微量鹽0.001％，pH7.2；2.種子培養(yǎng)基含淀粉2.4％，葡萄糖0.1％，蛋白胨0.3％，牛肉膏0.3％，酵母膏0.5％，CaCO30.4％，pH7.0；3.發(fā)酵培養(yǎng)基46號培養(yǎng)基可溶性淀粉4.0％，脫脂大豆粉2.0％，0.1mol/LNaS2O43.2微升，F(xiàn)eSO4·7H2O 0.05％，K2HPO40.05％，KCl 0.03％，pH6.5；48號培養(yǎng)基，含葡萄糖4.7％，蛋白胨0.4％，酵母粉0.1％，牛肉膏0.4％，NaCl 0.2％，CaCO30.5％，pH7.0實(shí)施例1培養(yǎng)方法由放線菌N99-596斜面，接種于種子培養(yǎng)基，27℃，72hr培養(yǎng)后，接入內(nèi)含量為140ml培養(yǎng)基的750ml三角瓶中，于發(fā)酵培養(yǎng)基中27℃振搖培養(yǎng)6天。
分離方法N99-596發(fā)酵液5000ml于3000rpm離心15分鐘，分別收集菌體與上清，菌體用2000ml丙酮提取后，蒸去丙酮，用2500mL乙酸乙酯抽提二次，乙酸乙酯層經(jīng)無水Na2SO4脫水后，濃縮抽干后，得到褐色物質(zhì)2.2g。
取2.2g樣品，用少量甲醇溶解后，使用硅膠柱(φ2.5×25cm)色譜進(jìn)行進(jìn)一步的分離純化，層析柱的洗脫條件為100％的CHCl3至100％MeOH的階段洗脫，收集合并活性組分，濃縮抽干后得褐色固體85.2mg。
取上述活性物質(zhì)，使用ODS反相柱(PHENOMENEXODSφ20×250mm)在制備型HPLC上進(jìn)行單組分的制備(流動相為30％CH3CN，流速為6ml/min，檢測波長為254nm)，得到黃色物質(zhì)N99-596 A(12.1mg)、B(9.6 mg)。
分析方法取N99-596A、B各1mg，加入甲醇1ml定容于1mg/ml，HPLC分析條件如下樣品N99-596A、B(1mg/ml)HPLC高壓液相泵Waters 515(雙泵)檢測器2487紫外檢測器色譜柱Kromasil 100_ C184.6mm×250mm流動相25％乙腈-水流速1ml/min檢測波長254nm柱溫為室溫(22-25℃)進(jìn)樣量10μl保留時間A9～10min，B19～20minN99-596A、B的純度均大于98％N99-596A、B的理化性質(zhì)分子量A為416，B為432分子式A為C21H20O9，B為C21H20O10紫外吸收A的λmax249nm，B的λmax260nmN99-596 A、B的結(jié)構(gòu)根據(jù)理化性質(zhì)與核磁共振圖譜，確定了A組份和B組份的化學(xué)結(jié)構(gòu)如下 N99-596A N99-596BN99-596 A、B組份的13C-NMR、1H-NMR如下N99-596 A1H-NMR(δ，ppm)8.29(1H，s，2-CH)7.95(1H，d，J＝9Hz，5-CH)7.28(1H，d，J＝2Hz，2’-CH)7.05(1H，dd，J＝8.5，2Hz，5’-CH)6.93(1H，dd，J＝9，2.5Hz，6-CH)6.87(1H，d，J＝8.5Hz，6’-CH)6.86(1H，d，J＝2.5Hz，8-CH)5.27(1H，s，1”-CH)3.90(1H，m，3”-CH)3.65-3.79(2H，m，2”，5”-CH)3.16(1H，m，4”-CH)1.13(3H，d，J＝6.5Hz，6”-CH3)13C-NMR(δ，ppm)174.59(4-C)162.51(7-C)157.39(9-C)154.584(2-C)147.85(4’-C)143.69(3’-C)127.31(5-C)123.45(6’-C)123.20(1’-C)122.97(3-C)119.45(2’-C)116.63(5’-C)116.31(10-C)115.15(6-C)102.09(8-C)99.94(1”-C)71.94(4”-C)70.33(3”-C)70.17(2”-C)69.48(5”-C)17.85(6”-C)N99-596 B1H-NMR(δ，ppm)8.34(1H，s，2-CH)7.28(1H，d，J＝2Hz，2’-CH)7.07(1H，dd，J＝8.5，2Hz，5’-CH)6.88(1H，d，J＝8.5Hz，6’-CH)6.38(1H，d，J＝2.5Hz，8-CH)6.22(1H，d，J＝2.5Hz，6-CH)5.27(1H，s，1”-CH)3.90(1H，m，3”-CH)3.65-3.79(2H，m，2”，5”-CH)3.16(1H，m，4”-CH)1.05(3H，d，J＝6.5Hz，6”-CH3)13C-NMR(δ，ppm)179.90(4-C)164.09(5-C)161.82(7-C)157.36(9-C)153.76(2-C)147.90(4’-C)143.69(3’-C)123.29(2’-C)121.91(3-C)121.51(1’-C)120.99(6’-C)115.96(5’-C)106.73(10-C)99.92(6-C)98.83(1”-C)93.48(8-C)71.86(4”-C)70.28(3”-C)69.96(2”-C)69.25(5”-C)17.49(6”-C)實(shí)施例2醛糖還原酶的制備下面的操作均在0～4℃進(jìn)行。每批取豬的晶狀體約90g，于三倍體積的冷的NaPi緩沖液中勻漿，10000×g離心50分鐘除去不溶物。上清中加入(NH4)2SO4至40％的飽和度，輕度攪拌15分鐘，離心除去沉淀，再加入(NH4)2SO4至50％的飽和度，輕度攪拌15分鐘，離心除去沉淀，加入(NH4)2SO4至75％的飽和度，輕度攪拌15分鐘離心收集沉淀，用冷的0.05mol/L的NaPi(含0.5mmol/lPMSF和0.5mmol/lEtSH)溶解，于0.05mol/L的NaPi溶液(含0.5mmol/lPMSF和0.5mmol/lEtSH)中透析過夜。透析后，將上述酶液加入甘油至40％的濃度，于-20℃保存?zhèn)溆谩?br>
化合物活性測定方法取N99-596A、B各適量，用甲醇配制成6mg/ml溶液，并逐級稀釋至3mg/ml、1.5ml/ml、0.75mg/ml、0.375mg/ml。分別取出50微升加入共1000微升的測活體系中，其終濃度分別為0.3mg/ml，0.15mg/ml，0.075mg/ml，0.0375mg/ml，0.01875mg/ml，測定其對醛糖原原酶的抑制活性。
測活反應(yīng)的樣品管加入60mmol/L NaPi緩沖液(pH6.2)和適量的酶液，50μl樣品的甲醇溶液；對照孔加入60mmol/L NaPi緩沖液(pH6.2)和適量的酶液，50μl甲醇；空白孔加入60mmol/L NaPi緩沖液(pH6.2)，50μl甲醇。樣品孔、對照孔和空白孔均在37℃保濕15分鐘，各管加入334μl 1.2mol/L Li2SO4、83μl 36mmol/L DL-甘油醛和83μl 1.5mmol/LNADPH開始反應(yīng)，用生化分析儀于340nm波長處測定37℃每分鐘的光密度減少值(ΔOD/min)。
結(jié)果
如圖5所示N99-596 A、B對醛糖還原酶的IC50分別為170μmol/L和165μmol/L。
N99-596 A、B組份的衍生物具有相似的活性。
實(shí)施例3N99-253的培養(yǎng)方法與實(shí)施例1中N99-596的培養(yǎng)方法相同。
分離方法N99-253(46)發(fā)酵液5000ml于3000rpm離心15分鐘，分別收集菌體與上清，菌體用2000ml丙酮提取后，蒸去丙酮，用2500mL乙酸乙酯抽提二次，乙酸乙酯層經(jīng)無水Na2SO4脫水后，濃縮抽干后，得到褐色物質(zhì)1.2g。
取1.0g樣品，用少量甲醇溶解后，使用硅膠柱(φ2.5×25cm)層析，進(jìn)行進(jìn)一步的分離純化，層析柱的洗脫條件為CHCl3∶MeOH 100∶0～0～100梯度洗脫，收集合并活性組分，濃縮抽干后得褐色固體118mg。
取上述活性物質(zhì)，使用ODS反相柱(PHENOMENEX ODSφ20×250mm)在制備型HPLC上進(jìn)行單組分的制備(流動相為30％CH3CN，流速為6ml/min，檢測波長為210nm)，得到黃色物質(zhì)N99-253A(11.1mg)和N99-253B(9.6mg)。
2.2.3分析方法取N99-253A、B各1mg，加入甲醇1ml定容于1mg/ml，HPLC分析條件如下樣品N99-253A、B(各1mg/ml)HPLC高壓液相泵Waters 515(雙泵)檢測器2487紫外檢測器色譜柱Kromasil 100_ C184.6mm×250mm流動相25％乙腈-水流速1ml/min檢測波長254nm柱溫為室溫(22-25℃)進(jìn)樣量10μl保留時間A10-12min，B13-15min
N99-253A、B的純度均大于98％。
2.2.4 N99-253A、B的理化性質(zhì)分子量A、B均為416分子式A、B均為C21H20O9紫外吸收A的λmax261nm，B的λmax261nm2.2.5 N99-253的結(jié)構(gòu)根據(jù)理化性質(zhì)與核磁共振圖譜，確定了A、B組份的化學(xué)結(jié)構(gòu)如下253A 253B N99-253A、B的1H-NMR和13C-NMR如下N99-253 A1H-NMR(δ，ppm)8.42(1H，s，2-CH)7.40(2H，d，J＝8.5Hz，2’，6’-CH)6.84(1H，d，J＝2Hz，8-CH)6.67(2H，d，J＝8.5Hz，3’，5’-CH)6.43(1H，d，J＝2Hz，6-CH)5.26(1H，d，J＝8.0Hz，1”-CH)4.16(1H，m，3”-CH)3.84(1H，m，5”-CH)3.71(1H，m，2”-CH)3.37(1H，m，4”-CH)1.12(3H，d，J＝6.5Hz，6”-CH3)13C-NMR(δ，ppm)180.49(4-C)163.22(7-C)161.66(5-C)157.51(9-C)157.25(4’-C)154.56(2-C)130.18(2’，6’-C)122.55(3-C)121.00(1’-C)115.09(3’，5’-C)105.98(10-C)99.37(6-C)98.36(1”-C)94.28(8-C)71.88(4”-C)71.47(2”-C)69.92(3”-C)66.93(5”-C)16.08(6”-C)
N99-253B1H-NMR(δ，ppm)8.42(1H，s，2-CH)7.39(2H，d，J＝8.5Hz，2’，6’-CH)6.86(1H，d，J＝2Hz，8-CH)6.83(2H，d，J＝8.5Hz，3’，5’-CH)6.48(1H，d，J＝2Hz，6-CH)5.57(1H，s，1”-CH)3.85(1H，m，3”-CH)3.65-3.79(1H，m，5”-CH)3.29-3.654(1H，m，2”-CH)3.17(1H，m，4”-CH)1.12(3H，d，J＝6.5Hz，6”-CH3)13C-NMR(δ，ppm)180.52(4-C)161.75(7-C)161.68(5-C)157.51(9-C)157.21(4’-C)154.58(2-C)130.18(2’，6’-C)122.58(3-C)121.02(1’-C)115.10(3’，5’-C)106.09(10-C)99.65(6-C)98.38(1”-C)94.59(8-C)71.57(4”-C)70.24(3”-C)70.07(2”-C)69.83(5”-C)17.85(6”-C)2.2.7 N99-253A的生物學(xué)活性按照實(shí)施例2方法測定其活性。
測定結(jié)果表明N99-253 A對AR的抑制活性IC50為200μmol/L。N99-253 A組份的衍生物具有相似的活性。
序列表<110>華北制藥集團(tuán)有限責(zé)任公司<120>醛糖還原酶抑制劑、其制備方法和用途<130>IDC020023<140>CN<141>2003-07-09<160>2<170>PatentIn version 3.1<210>1<211>1487<212>DNA<213>滇南鏈霉菌Streptomyces diannanensis<220>
<221>misc_feature<222>(783)..(834)<223>n＝a或g或c或t<400>1gctaccttgt tacgacttcg tcccaatcgc cagtcccacc ttcgacagct ccctcccaca60aggggttggg ccaccggctt cgggtgttac cgactttcgt gacgtgacgg gcggtgtgta120caaggcccgg gaacgtattc accgcagcaa tgctgatctg cgattactag caactccgac180ttcatggggt cgagttgcag accccaatcc gaactgagac cggctttttg agattcgctc240cgcctcgcgg catcgcagct cattgtaccg gccattgtag cacgtgtgca gcccaagaca300taaggggcat gatgacttga cgtcgtcccc accttcctcc gagttgaccc cggcagtctc360ctgtgagtcc ccatcacccc gaagggcatg ctggcaacac agaacaaggg ttgcgctcgt420tgcgggactt aacccaacat ctcacgacac gagctgacga cagccatgca ccacctgtac480accgaccaca aggggggcac catctctgat gctttccggt gtatgtcaag ccttggtaag540gttcttcgcg ttgcgtcgaa ttaagccaca tgctccgctg cttgtgcggg cccccgtcaa600
ttcctttgag ttttagcctt gcggccgtac tccccaggcg gggaacttaa tgcgttagct660gcggcaccga cgacgtggaa tgtcgccaac acctagttcc caacgtttac ggcgtggact720accagggtat ctaatcctgt tcgctcccca cgctttcgct cctcagcgtc agtaatggcc780canagatccg ccttcgccac cggtgttcct cctgatatct gcgcatttca ccgntacacc840aggaattccg atctccccta ccacactcta gcctgcccgt atcgactgca gacccggggt900taagccccgg gctttcacaa ccgacgcaac aagccgccta cgagctcttt acgcccaata960attccggaca acgcttgcgc cctacgtatt accgcggctg ctggcacgta gttagccggc1020gcttcttctg caggtaccgt cactctcgct tcttccctgc tgaaagaggt ttacaacccg1080aaggccgtca tccctcacgc ggcgtcgctg catcaggctt tcgcccattg tgcaatattc1140cccactgctg cctcccgtag gagtctgggc cgtgtctcag tcccagtgtg gccggtcgcc1200ctctcaggcc ggctacccgt cgtcgccttg gtaggccatc accccaccaa caagctgata1260ggccgcgggc tcatccttca ccgccggagc tttcaacccc gtcccatgcg ggacagagtg1320ttatccggta ttagaccccg tttccagggc ttgtcccaga gtgaagggca gattgcccac1380gtgttactca cccgttcgcc actaatccac cccgaagggc ttcatcgttc gacttgcatg1440tgttaagcac gccgccagcg ttcgtcctga gccaggatca aactcta 1487<210>2<211>1476<212>DNA<213>華云鏈霉菌Streptomyces huayunensis<400>2tagacgaacg ctggcggcgt gcttaacaca tgcaagtcga acgatgaagc ccttcggggt60ggattagtgg cgaacgggtg agtaacacgt gggcaatctg cccttcactc tgggacaagc120cctggaaacg gggtctaata ccggataaca ctctgtcccg catgggacgg ggttgaaagc180tccggcggtg aaggatgagc ccgcggccta tcagcttgtt ggtggggtga tggcctacca240aggcgacgac gggtagccgg cctgagaggg cgaccggcca cactgggact gagacacggc300
ccagactcct acgggaggca gcagtgggga atattgcaca atgggcgaaa gcctgatgca360gcgacgccgc gtgagggatg acggccttcg ggttgtaaac ctctttcagc agggaagaag420cgaaagtgac ggtacctgca gaagaagcgc cggctaacta cgtgccagca gccgcggtaa480tacgtagggc gcaagcgttg tccggaatta ttgggcgtaa agagctcgta ggcggcttgt540tgcgtcggtt gtgaaagccc ggggcttaac cccgggtctg cagtcgatac gggcaggcta600gagtgtggta ggggagatcg gaattcctgg tgtagcggtg aaatgcgcag atatcaggag660gaacaccggt ggcgaaggcg gatctctggg ccattactga cgctgaggag cgaaagcgtg720gggagcgaac aggattagat accctggtag tccacgccgt aaacgttggg aactaggtgt780tggcgacatt ccacgtcgtc ggtgccgcag ctaacgcatt aagttccccg cctggggagt840acggccgcaa ggctaaaact caaaggaatt gacgggggcc cgcacaagca gcggagcatg900tggcttaatt cgacgcaacg cgaagaacct taccaaggct tgacatacac cggaaagcat960cagagatggt gccccccttg tggtcggtgt acaggtggtg catggctgtc gtcagctcgt1020gtcgtgagat gttgggttaa gtcccgcaac gagcgcaacc cttgttctgt gttgccagca1080tgcccttcgg ggtgatgggg actcacagga gactgccggg gtcaactcgg aggaaggtgg1140ggacgacgtc aagtcatcat gccccttatg tcttgggctg cacacgtgct acaatggccg1200gtacaatgag ctgcgatgcc gcgaggcgga gcgaatctca aaaagccggt ctcagttcgg1260attggggtct gcaactcgac cccatgaagt cggagttgct agtaatcgca gatcagcatt1320gctgcggtga atacgttccc gggccttgta cacaccgccc gtcacgtcac gaaagtcggt1380aacacccgaa gccggtggcc caaccccttg tgggagggag ctgtcgaagg tgggactggc1440gattgggacg aagtcgtaac aaggtagccg tacgga 147權(quán)利要求
1.下面通式(I)的化合物及其衍生物、可藥用鹽、溶劑化物、立體異構(gòu)體或前藥 其中，R1為羥基，或 所示的α-L-吡喃巖藻糖基或其羥基被其他糖基或者保護(hù)基取代的基團(tuán)；R2為H或羥基；R3為羥基或羥基保護(hù)基，或是如下式所示的 α-L-鼠李糖基，或其羥基被其他糖基或者保護(hù)基取代的基團(tuán)，條件是R1和R3至少其一為糖基。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中R1為-OH、R3為
3.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中R3為H，R2為-OH，R1為α-L-吡喃巖藻糖基。
4.一種制備權(quán)利要求1化合物的方法，其包括培養(yǎng)通過發(fā)酵產(chǎn)生通式(I)化合物的微生物，然后對所得發(fā)酵液進(jìn)行分離和純化。
5.權(quán)利要求4的方法，其中微生物為華云鏈霉菌(Streptomyceshuayunensis)CGMCC No.0885或滇南鏈霉菌(Streptomycesdiannanensis)CGMCC No.0834。
6.權(quán)利要求4的方法，其中所述分離方法包括離心發(fā)酵液，收集菌體，用溶劑提取菌體，再除去溶劑，所述純化方法包括硅膠柱層析和選擇性的HPLC單組分制備。
7.一種藥物組合物，其含有權(quán)利要求1-3中任一項的化合物作為活性成份和可藥用載體。
8.權(quán)利要求7的藥物組合物，其還含有一種已知的治療糖尿病的藥物。
9.權(quán)利要求1-3中任一項的化合物或權(quán)利要求7或8的組合物在制備用于預(yù)防或治療糖尿病和/或糖尿病并發(fā)癥的藥物中的用途。
10.權(quán)利要求9的用途，其中所述的糖尿病并發(fā)癥選自由下面并發(fā)癥組成的組糖尿病腎病、糖尿病眼病、糖尿病神經(jīng)系統(tǒng)疾病、糖尿病心臟病、糖尿病動脈硬化和糖尿病微血管病。
11.權(quán)利要求10的用途，其中所述并發(fā)癥為糖尿病腎病、糖尿病眼病、糖尿病神經(jīng)系統(tǒng)病或糖尿病微血管病。
12.下面通式(I)的化合物及其衍生物、可藥用鹽、溶劑化物、立體異構(gòu)體或前藥在制備預(yù)防或治療醛糖還原酶抑制劑可以預(yù)防或治療的疾病的藥物中的應(yīng)用 其中，R1為羥基，或 所示的α-L-吡喃巖藻糖基或其羥基被其他糖基或者保護(hù)基取代的基團(tuán)，或 所示的α-鼠李糖基或其羥基被其他糖基或者保護(hù)基取代的基團(tuán)；R2為H或羥基R3為羥基或羥基保護(hù)基，或是如下式所示的 α-鼠李糖基，或其羥基被其他糖基或者保護(hù)基取代的基團(tuán)，條件是R1和R3至少其一是糖基。
全文摘要
本發(fā)明提供了下面通式(I)的化合物、其制備方法和含有它們的藥物組合物，所述化合物及含有它們的藥物組合物可用于防治糖尿病及其并發(fā)癥，本發(fā)明還提供了兩種新的微生物。
文檔編號C07D407/04GK1566109SQ0314665
公開日2005年1月19日 申請日期2003年7月10日 優(yōu)先權(quán)日2003年7月10日
發(fā)明者呂渭川, 張華 , 董悅生, 任曉, 任鳳芝, 鄭智慧, 路新華, 倪慧敏, 李韶菁, 林潔, 楊健, 舒薇, 馬英, 單越琦, 賀秉坤 申請人:華北制藥集團(tuán)有限責(zé)任公司