專利名稱：一種新的天然藥物有效部位－尾葉香茶菜總二萜的制作方法
技術領域：
本發(fā)明屬于天然藥物化學領域，涉及從尾葉香茶菜[Rabdosiaexcisa(Maxim.)Hara]地上部分提取的尾葉香茶菜總二萜，一種新的天然藥物有效部位及其制備方法和在制備癌癥治療藥物中的用途。
背景技術：
腫瘤是一種常見病、多發(fā)病，它嚴重威脅著人類的健康和生命。近年來由于手術切除和放射療法有駐足不前之勢，而化學藥物治療又無法回避嚴重的毒副作用，所以人們的目光集中到了毒副作用相對較輕的天然藥物上。
二萜類化合物是一類抗癌作用較強的天然化合物之一，目前人們已對幾百種二萜類化合物進行了抗癌活性篩選，從中找出了一些適于作為抗癌藥物開發(fā)的化合物，有些已進入臨床試驗階段。
尾葉香茶菜[Rabdosia excisa(Maxim.)Hara]是唇形科香茶菜屬植物，在吉林省長白山區(qū)野生資源較為豐富。到目前為止，已從中分離出了ExcisaninA、ExcisaninB、ExcisaninC、ExcisaninD、ExcisaninE、ExcisaninF、ExcisaninG、Kamebakaurin、Kamebanin等二萜類化合物。日本公開特許公報(昭57-167938)和Tetsuro Fujita(Plant medica，1988，414-417)的論文報道了它們中的一些單體的細胞毒活性和對荷瘤動物的生命延長作用，結(jié)果表明ExcisaninA、ExcisaninB、Kamebanin、Kamebakaurin具有較強的細胞毒活性，對荷瘤動物具有生命延長作用。
中醫(yī)中藥是我國人民千百年來同疾病抗爭過程中積累創(chuàng)造出來的防病治病的科學理論體系，它強調(diào)辯證施治和中藥的多組分多靶點協(xié)同作用，這一理論在中醫(yī)治療癌癥的過程中取得了良好的效果，為世人所矚目。我國藥品管理法規(guī)中也制定了把中藥、天然藥物有效部位作為新藥審批的規(guī)定。另外研究結(jié)果表明，有時中藥總提取物或有效部位的活性不完全等同于其中單體的活性，同時提取物或有效部位的毒性往往比單體低。
至今為止，沒有人對尾葉香茶菜地上部分的二萜類化合物的自然混合物，即尾葉香茶菜總二萜的化學及藥理作用進行過研究。
綜合上述考慮，本發(fā)明人在單體化合物研究的基礎上開始了以尾葉香茶菜地上部分中二萜類化合物的自然混合物即尾葉香茶菜總二萜的化學及藥理研究工作，從而完成了本發(fā)明。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所述的新的天然藥物有效部位，即尾葉香茶菜總二萜是指從尾葉香茶菜地上部分提取分離的二萜類化合物的自然混合物。
本發(fā)明的目的就是要提供以尾葉香茶菜地上部分的總二萜為有效部位的新的抗癌藥物。
本發(fā)明是通過如下技術研究過程完成的，包括尾葉香茶菜地上部分化學成分研究，有效部位即尾葉香茶菜總二萜的提取工藝研究，有效部位化學成分組成研究，有效部位中總二萜含量測定方法研究，有效部位抗癌活性研究及有效部位急性毒性研究。
1.尾葉香茶菜地上部分化學成分研究本發(fā)明人對尾葉香茶菜地上部分(莖葉)的化學成分進行了更加深入的研究，從尾葉香茶菜地上部分共分離出了12個二萜類化合物，其中除了上述前人已分離過的二萜類化合物ExcisaninA(ent-1β，7β，12β，14α-tetrahydroxy-16-kauren-15-one)、ExcisaninB(ent-12β-Acetoxy-1β，7β，14α-trihydroxy-16-kauren-15-one)、ExcisaninD(ent-18-Acetoxy-1β，7β，14α-trihydroxy-16-kauren-15-one)、Kamebakaurin(ent-1β，7β，14α，20-tetrahydroxy-16-kauren-15-one)、Kamebanin(ent-1β，7β，14α-trihydroxy-16-kauren-15-one)、RabdoserrinB(ent-1β，7β，12β，14α，20-Pentahydroxy-16-kauren-15-one)外，還首次從尾葉香茶菜地上部分分離出了RabdokunminC(ent-7β，12β，14α-18-tetrahydroxy-16-kauren-15-one)、ReniforminA(ent-20-Acetoxy-1β，7β，14α-trihydroxy-16-kauren-15-one)兩個已知二萜類化合物，同時還分離鑒定了四個新的二萜類化合物，分命名為ExcisaninH(ent-14，20-epoxy-1β，7β，14-trihydroxy-16-kauren-15-one)、ExcisaninI(ent-7β，12β，14α，20-tetrahydroxy-16-kauren-15-one)、ExcisaninJ(ent-7β，14α，18，20-tetrahydroxy-16-kauren-15-one)、ExcisaninK(ent-1β，7β，14α，20-tetrahydroxy-16-kauren-15-one)，而且發(fā)現(xiàn)RabdokunminC在尾葉香茶菜中的含量較高，僅次于Kamebakaurin、ExcisaninA、Kamebanin，與ExcisaninB相近。上述12個二萜類化合物的結(jié)構(gòu)式如下。光譜圖見圖1-38。
Kamebakaurin Excisanin B Kamebanin Excisanin A Rabdokunmin C Rabdoserrin B
Excisanin I Excisanin K Excisanin J Excisanin D Excisanin H reniformin A
2.尾葉香茶菜總二萜提取包括本發(fā)明人新分離的二萜類化合物，尾葉香茶菜地上部分含有10多種二萜類化合物，其中含量較高的有5、6種。從這些化合物的理化性質(zhì)及將來大生產(chǎn)的要求考慮，發(fā)明了如下提取工藝。尾葉香茶菜地上部分用水加熱提取，提取液過大孔吸附樹脂(D4020、AB-8、860021、D101、HP-20等)吸附，再用乙醇、甲醇、丙酮等有機溶劑或它們與水的混合溶劑洗脫，洗脫液減壓回收溶劑，真空干燥得尾葉香茶菜總二萜。另外上述從大孔吸附樹脂柱下來的洗脫液直接或經(jīng)過濃縮后再用脫色樹脂(D941)、氧化鋁、活性炭的一種或多種脫色，脫色后的溶液減壓回收溶劑，真空干燥，可以得到總二萜的含量提高了的尾葉香茶菜總二萜。另外，還可以經(jīng)過硅膠柱層析和/或ODS柱層析和/或氧化鋁柱層析和/或聚酰胺柱層析進一步純化，獲得總二萜含量更加提高了的尾葉香茶菜總二萜。上述方法制備的尾葉香茶菜總二萜，能夠滿足我國《藥品注冊管理辦法》中的有關規(guī)定，可以制備成片劑、膠囊劑、顆粒劑、口服液、注射劑以及其它醫(yī)藥學上可能的制劑供臨床使用。
3.有效部位化學成分組成研究通過高效液相色譜法與標準品對照，發(fā)現(xiàn)本有效部位中除了含有ExcisaninA、ExcisaninB、RabdokunminC、Kamebakaurin、Kamebanin等二萜類化合物外還可能含有ExcisaninD、RabdoserrinB、ExcisaninH、ExcisaninI、ExcisaninJ、ExcisaninK等含量較低的二萜類成分和含量更低的結(jié)構(gòu)尚不清楚的其他二萜類成分。
4.有效部位中總二萜含量測定方法研究化合物的含量測定有多種方法可以選擇，其中一般以高效液相色譜法的準確度較高，為此目前本發(fā)明人完成了利用HPLC法測定總二萜含量的方法。分別以ExcisaninA、RabdokunminC、Kamebakaurin、Kamebanin四個含量最高的成分作對照品，按外標法以峰面積計算，計算出有效部位中上述四種二萜類成分的含量，以它們的總和作為總二萜的含量。結(jié)果上述四種二萜類化合物在有效部位中的含量之和大于50％。當然，還可以把ExcisaninB等其他二萜類化合物也包括進去。
5.尾葉香茶菜總二萜抗癌活性研究(1)細胞毒活性研究利用體外培養(yǎng)方法觀察了本有效部位(尾葉香茶菜總二萜，含量59.6％)和從尾葉香茶菜中提取分離的12個二萜類單體化合物對小鼠白血病P388癌細胞的細胞毒活性。試驗結(jié)果如下Cytotoxic activity of some Rabdosia diterpenoidsagainst P388 cells.

結(jié)果表明，尾葉香茶菜總二萜的細胞毒活性ReniforminA、ExcisaninB相同外，高于其它單體的細胞毒活性。
(2)對荷瘤動物生命延長作用研究1、材料與方法2、1.1動物 昆明小鼠，雌性，體重20～22g瘤株 肝癌(HepA)細胞1.2藥品尾葉香茶菜總二萜(總二萜含量59.6％)
Excisanin A (95.9％)Kamebakaurin (98.8％)Kamebanin (98.2％)RabdokunminC (94.0％)1.3儀器 SB-JB-1B型超凈工作臺，上海博迅實業(yè)有限公司醫(yī)療設備廠產(chǎn)品；AB204-N型單量程十萬分之一電子天平，梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司產(chǎn)品。
1.4方法 實驗小鼠隨機分為16組，即對照(ig蒸餾水20ml/kg，每日1次)組、Excisanin A(ig 30mg/kg、20mg/kg和10mg/kg，每日1次)組、Kamebanin(ig30mg/kg、20mg/kg和10mg/kg，每日1次)組、Kamebakaurin(ig 30mg/kg、20mg/kg和10mg/kg，每日1次)組、RabdokunminC(ig 30mg/kg、20mg/kg和10mg/kg，每日1次)組和尾葉香茶菜總二萜(ig 30mg/kg、20mg/kg和10mg/kg，每日1次)組。選取移植HepA腫瘤細胞株7天左右，腫瘤生長良好，腹部膨隆明顯的小鼠，在超凈工作臺內(nèi)，將小鼠腹部皮膚消毒，用一次性無菌采血器經(jīng)腹壁刺入腹腔，抽取腹水，放入無菌燒杯中以生理鹽水稀釋成1∶4的癌細胞混懸液，在顯微鏡下觀察，腫瘤細胞數(shù)為1.2×107/ml。給每只小鼠腹腔接種0.2ml。于接種腫瘤次日隨機分組并開始給藥，記錄腹腔接種腫瘤起動物存活天數(shù)，以下列公式計算生命延長率。試驗共重復3批。
2、結(jié)果2.1Excisanin A對移植肝癌腹水(HepA)小鼠存活時間的影響三批試驗結(jié)果表明Excisanin A30mg/kg ig給藥，可使腹腔接種肝癌腹水(HepA)小鼠的存活時間比對照組明顯延長(p＜0.01或0.001)，平均生命延長率為69.6％；20mg/kg組有二批動物存活時間比對照組明顯延長(p＜0.05或0.001)，平均生命延長率為50.6％；10mg/kg組三批試驗的平均生命延長率為13.2％，動物存活時間與對照組比較均無明顯差異(p＞0.05)。提示Excisanin A可明顯延長腹腔接種肝癌腹水(HepA)小鼠的存活時間及生命延長率，見表1。
2.2Kamebanin對移植肝癌腹水(HepA)小鼠存活時間的影響三批試驗結(jié)果表明Kamebanin30mg/kg ig給藥，可使腹腔接種肝癌腹水(HepA)小鼠的存活時間比對照組明顯延長(p＜0.01或0.001)，平均生命延長率為78.4％；20mg/kg組有二批動物存活時間比對照組明顯延長(p＜0.05或0.01)，平均生命延長率為53.6％；10mg/kg組三批試驗的平均生命延長率為27.2％，動物存活時間與對照組比較均無明顯差異(p＞0.05)。提示Kamebanin可明顯延長腹腔接種肝癌腹水(HepA)小鼠的存活時間及生命延長率，見表2。
2.3Kamebakaurin對移植肝癌腹水(HepA)小鼠存活時間的影響三批試驗結(jié)果表明Kamebakaurin30mg/kg ig給藥，可使腹腔接種肝癌腹水(HepA)小鼠的存活時間比對照組明顯延長(p＜0.01或0.001)，平均生命延長率為74.8％；20mg/kg組也比對照組明顯延長(p＜0.05或0.001)，平均生命延長率為52.3％；10mg/kg組三批試驗的平均生命延長率為26.9％，動物存活時間與對照組比較均無明顯差異(p＞0.05)。提示Kamebakaurin可明顯延長腹腔接種肝癌腹水(HepA)小鼠的存活時間及生命延長率，見表3。
2.4RabdokunminC對移植肝癌腹水(HepA)小鼠存活時間的影響三批試驗結(jié)果表明RabdokunminC30mg/kg ig給藥，可使腹腔接種肝癌腹水(HepA)小鼠的存活時間比對照組明顯延長(p＜0.01或0.001)，平均生命延長率為71.6％；20mg/kg組平均生命延長率為49.0％；10mg/kg組三批試驗的平均生命延長率為24.3％，動物存活時間與對照組比較均無明顯差異(p＞0.05)。提示RabdokunminC可明顯延長腹腔接種肝癌腹水(HepA)小鼠的存活時間及生命延長率，見表4。
2.5尾葉香茶菜總二萜對移植肝癌腹水(HepA)小鼠存活時間的影響三批試驗結(jié)果表明尾葉香茶菜總二萜30mg/kg ig給藥，可使腹腔接種肝癌腹水(HepA)小鼠的存活時間比對照組明顯延長(p＜0.01或0.001)，平均生命延長率為102.2％；20mg/kg組動物存活時間也比對照組明顯延長(p＜0.05或0.001)，平均生命延長率為71.6％；10mg/kg組三批試驗的平均生命延長率為34.9％，具有一定的延長動物存活時間作用。提示尾葉香茶菜總二萜可明顯延長腹腔接種肝癌腹水(HepA)小鼠的存活時間及生命延長率，見表5。
表1Excisanin A對腹腔接種移植肝癌腹水(HepA)小鼠存活時間的影響(x±s)組別 劑量 動物數(shù)存活時間生命延長率(mg/kg)(只) (天) (％)第一批試驗對照組 -10 12.3±3.2Excisanin a10 10 14.1±2.6 14.620 10 17.4±5.3* 41.530 10 20.5±4.9***66.7第二批試驗對照組 -10 10.5±3.8Excisanin A10 10 11.6±3.1 10.520 10 18.7±4.2***78.130 10 19.5±5.2***85.8第三批試驗對照組 -10 15.6±4.4Excisanin A10 10 16.7±4.8 7.020 10 18.3±7.1 17.330 10 22.8±5.4** 46.2與對照組比較*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001
表2Kamebanin對腹腔接種移植肝癌腹水(HepA)小鼠存活時間的影響(x±s)組別劑量 動物數(shù)存活時間生命延長率(mg/kg)(只) (天) (％)第一批試驗對照組 -10 12.3±3.2Kamebanin10 10 15.8±4.7 28.520 10 18.1±5.8**47.230 10 22.4±6.1*** 82.1第二批試驗對照組 -10 10.5±3.8Kamebanin10 10 14.2±4.5 35.220 10 17.9±5.3**70.530 10 20.1±6.2*** 91.4第三批試驗對照組 -10 14.6±4.4Kamebanin10 10 17.2±4.3 17.820 10 20.9±5.8* 43.230 10 23.6±6.2**61.6與對照組比較*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001
表3Kamebakaurin對腹腔接種移植肝癌腹水(HepA)小鼠存活時間的影響(x±s)組別 劑量 動物數(shù)存活時間生命延長率(mg/kg) (只) (天) (％)第一批試驗對照組 - 10 13.4±3.1Kamebakaurin1010 17.8±4.7 32.82010 20.1±5.8* 50.03010 24.4±6.0***82.1第二批試驗對照組 - 10 13.5±3.6Kamebakaurin1010 17.2±4.2 27.42010 20.9±5.3** 56.93010 23.1±6.0***71.1第三批試驗對照組 - 10 12.6±4.2Kamebakaurin1010 15.2±4.0 20.62010 18.9±5.2* 50.03010 21.6±5.6** 71.4與對照組比較*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001
表4RabdokunminC對腹腔接種移植肝癌腹水(HepA)小鼠存活時間的影響(x±s)組別劑量 動物數(shù)存活時間生命延長率(mg/kg)(只) (天) (％)第一批試驗對照組 -10 13.5±3.0RabdokunminC 10 10 16.1±3.6 19.320 10 18.9±5.4* 43.730 10 22.6±5.1** 67.4第二批試驗對照組 -10 13.0±3.3RabdokunminC 10 10 16.2±4.5 24.620 10 19.0±5.0* 46.130 10 21.8±5.2** 67.6第三批試驗對照組 -10 14.5±4.4RabdokunminC 10 10 18.7±4.6 29.020 10 22.8±5.8* 57.230 10 26.1±6.2***80.0與對照組比較*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001
表5尾葉香茶菜總二萜對腹腔接種移植肝癌腹水(HepA)小鼠存活時間的影響(x±s)組別 劑量 動物數(shù)存活時間 生命延長率(mg/kg)(只) (天) (％)第一批試驗對照組-10 14.6±3.2尾葉香茶菜10 10 18.7±5.328.1總二萜20 10 24.3±4.9** 66.430 10 28.8±6.8*** 97.3第二批試驗對照組-10 13.7±3.6尾葉香茶菜10 10 18.1±5.032.1總二萜20 10 22.0±5.5** 60.630 10 27.1±6.8*** 97.8第三批試驗對照組-10 12.3±2.1尾葉香茶菜10 10 17.8±4.244.7總二萜20 10 23.1±5.8** 87.830 10 23.6±6.2*** 111.4與對照組比較*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001
2.有效部位急性毒性研究材料實驗動物昆明種小鼠受試藥物尾葉香茶菜總二萜(59.6％)方法昆明種小鼠50只，19～21g，按體重及性別分為5組，每組10只，雌雄各半。各組分別按表1所示劑量于上午8點灌胃給藥1次，給藥體積為0.2ml/10g。藥后7日內(nèi)觀察動物的急性毒性反應及死亡情況，并根據(jù)各劑量組死亡率按Bliss法(孫瑞元NDST軟件)計算LD50及其95％可信限(L95)。
表1尾葉香茶菜總二萜灌胃給藥的小鼠LD50(Bilss法)劑量 對數(shù)劑量 動物數(shù) 死亡動物數(shù) 死亡率 機率單位(mg/kg)(X) (只) (只) (％) (Y)5000 0.70 1010 100 6.964000 0.60 10990 6.283200 0.51 10770 5.522560 0.41 10440 4.752048 0.31 10220 4.161638 0.21 10003.04
結(jié)果藥后0.5～1小時各劑量組小鼠呈現(xiàn)不同程度的安靜、伏臥不動，與劑量有關。死亡時間絕大多數(shù)在藥后3～8小時內(nèi)，個別在次日死亡。死前有呼吸困難。死亡動物尸檢，主要臟器心、肺、肝、脾、腎未見肉眼下明顯病理改變。存活者于藥后次日一般狀態(tài)及活動如常。按Bilss法計算，A藥灌胃給藥的小鼠LD50及L95為2737.4±199.8mg/kg。
綜上所述，本發(fā)明與已有的技術相比具有如下明顯的優(yōu)點。本發(fā)明的有效部位即尾葉香茶菜總二萜具有很強的細胞毒活性，其IC50達到十幾ng/ml，而且它的細胞毒活性略強于組成它的二萜類單體化合物；對荷瘤動物具有明顯的延長生存時間作用，其作用大于組成它的主要二萜類單體Kamebanin、Kamebakaurin、RabdokunminC和ExcisaninA；同時尾葉香茶菜總二萜毒性較小(LD50及L95為2737.4±199.8mg/kg)，小于現(xiàn)有化學合成抗癌藥物。另外，本有效部位的制造成本很低，能夠保證大部分癌癥患者使用。因此可以說本發(fā)明的新的天然藥物有效部位-尾葉香茶菜總二萜有可能成為一種更有效、更安全、更廉價的抗癌藥物。


圖1 ExcisaninA的1H-NMR圖2 ExcisaninA的13C-NMR圖3 ExcisaninB的1H-NMR圖4 ExcisaninB的13C-NMR圖5 ExcisaninD的1H-NMR圖6 Kamebakaurin的1H-NMR圖7 Kamebakaurin的13C-NMR圖8 Kamebanin的1H-NMR圖9 Kamebanin的13C-NMR圖10 Rabdoserrin B的1H-NMR圖11 Rabdoserrin B的13C-NMR圖12 Rabdokunmin C的1H-NMR圖13 Rabdokunmin C的13C-NMR圖14 Reniformin A的1H-NMR圖15 Excisanin H的1H-NMR圖16 Excisanin H的13C-NMR圖17 Excisanin H的1H-1HCOSY圖18 Excisanin H的HMQC圖19 Excisanin H的HMBC圖20 Excisanin H的NOESY圖21 Excisanin I的1H-NMR圖22 Excisanin H的13C-NMR
圖23 Excsanin H的1H-1HCOSY圖24 Excsanin H的HMQC圖25 Excisanin H的HMBC圖26 Excisanin H的NOESY圖27 Excisanin J的1H-NMR圖28 Excisanin J的13C-NMR圖29 Excisanin J的1H-1HCOSY圖30 Excisann J的HMQC圖31 Excisann J的HMBC圖32 Excisann J的NOESY圖33 Excsann K的1H-NMR圖34 Excsanin K的13C-NMR圖35 Excsanin K的1H-1HCOSY圖36 Excsanin K的HMQC圖37 Excisanin K的HMBC圖38 Excisanin K的NOESY圖39 高效液相色譜40 高效液相色譜圖實施例下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進一步的說明。
實施例1尾葉香茶菜地上部分2kg，加水煎煮三次，加水量分別為藥材重量的24倍、18倍、15倍；煎煮時間依次為60分鐘、45分鐘、30分鐘，濾過，合并煎煮液，過AB-8(南開大學化學工廠，3kg)大孔吸附樹脂柱吸附，用30L水沖洗柱子后用85％乙醇洗脫至無尾葉香茶菜二萜類成分流出為止。減壓濃縮洗脫液，濃縮至一定體積后過D941脫色樹脂(山東魯抗醫(yī)藥股份有限公司)脫色，再過氧化鋁柱脫色，脫色后的溶液減壓濃縮，真空干燥得尾葉香茶菜總二萜24g，得率1.2％。
實施例2尾葉香茶菜地上部分2kg，加丙酮回流提取3次，丙酮用量分別為10、8、6升，提取時間分別為1.5、1、0.8小時。提取液減壓回收溶劑、真空干燥。得提取物208克。取提取物20克用甲醇溶解后拌入硅膠60克，烘盡溶劑后干法上樣，先用氯仿∶乙酸乙酯＝1∶1的洗脫液洗脫后改用純乙酸乙酯洗脫至二萜類成分流盡為止，收集含有二萜類成分的流分，減壓回收溶劑，真空干燥，得尾葉香茶菜總二萜1.6g。
實施例3取實施例1所得尾葉香茶菜總二萜5g，用甲醇溶解，拌入20g硅膠后揮干溶劑，取層析用硅膠(青島海洋化工廠分廠)200g干法裝柱，干法上樣，用氯仿∶乙酸乙酯＝1∶1的洗脫液700ml洗脫后改用純乙酸乙酯洗脫至二萜類成分流盡為止，收集含有二萜類成分的流分，減壓回收溶劑，真空干燥，得精制尾葉香茶菜總二萜2.48g，得率0.6％。
實施例4尾葉香茶菜總二萜含量測定高效液相色譜儀Agilent 1100色譜柱ZORBAX Extend-C18(4.6×250mm)
檢測器G1314A VWD流動相甲醇∶水＝55∶45流速1.2ml/分檢測波長230nm柱溫25℃對照品溶液的制備 精密稱Kamebakaurin、Kamebanin、ExcisaninA、RabdokunminC標準品適量，加甲醇制成每1ml含1mg溶液。
供試品溶液的制備 取尾葉香茶菜總二萜適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml約含3mg溶液。
測定方法分別精密吸取上述對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，按外標法以峰面積計算，即得。
測定結(jié)果(1)取實施例1所得尾葉香茶菜總二萜，按上述方法操作，結(jié)果其中Kamebakaurin、Kamebanin、ExcisaninA、RabdokunminC的含量之和為45.3％。HPLC色譜圖如圖39所示。
(2)取實施例3所得尾葉香茶菜總二萜，按上述方法操作，結(jié)果其中Kamebakaurin、Kamebanin、ExcisaninA、RabdokunminC的含量之和為59.6％。HPLC色譜圖如圖40所示。
實施例5膠囊劑的制備取尾葉香茶菜總二萜，加藥用輔料淀粉適量，充分混勻后裝入膠囊，制成每粒含尾葉香茶菜總二萜100mg的膠囊劑供口服使用。
實施例6注射劑的制備取尾葉香茶菜總二萜，以聚氧乙烯醚蓖麻油為助溶劑加注射用純凈水溶解，制成每500ml含尾葉香茶菜總二萜100mg的注射液，供靜脈點滴使用。
權利要求
1.一種新的天然藥物有效部位—尾葉香茶菜總二萜，其特征在于主要由尾葉香茶菜[Rabdosia excisa(Maxim.)Hara]地上部分提取的二萜類化合物組成。
2.權利要求1所述的尾葉香茶菜總二萜，其特征在于其中所述的二萜類化合物包括ExcisaninA、ExcisaninB、Kamebakaurin、Kamebanin、RabdokunminC中的至少兩種或兩種以上。
3.權利要求1所述的尾葉香茶菜總二萜，其特征在于其中二萜類化合物的含量大于50％。
4.權利要求1所述的尾葉香茶菜總二萜，其特征在于其中ExcisaninA、ExcisaninB、Kamebakaurin、Kamebanin和RabdokunminC五個二萜類化合物的含量之和大于50％。
5.權利要求1所述的尾葉香茶菜總二萜，其特征在于其中至少含有RabdokunminC。
6.權利要求1所述的尾葉香茶菜總二萜的制備方法，其特征在于尾葉香茶菜地上部分用水提取，提取液過大孔吸附樹脂吸附，有機溶劑洗脫，洗脫液濃縮干燥而得。
7.權利要求6所述的制備方法，其特征在于進一步包括脫色樹脂和/或氧化鋁和/或活性炭脫色，從而獲得總二萜含量更高的有效部位。
8.權利要求6所述的制備方法，其特征在于進一步包括柱層析純化，從而獲得總二萜含量更高的有效部位。
9.權利要求6所述的大孔吸附樹脂包括AB-8、D4020、D101、HP-20、860021；有機溶劑包括甲醇、乙醇、丙酮或它們與水的混合溶劑。
10.權利要求7所述的制備方法，其特征在于脫色樹脂是D941。
11.權利要求8所述的柱層析，其特征在于擔體選自硅膠、氧化鋁、聚酰胺、ODS的一種或一種以上。
12.權利要求1所述的尾葉香茶菜總二萜在制備癌癥治療藥物中的用途。
13.權利要求1所述的尾葉香茶菜總二萜與藥用輔料組成的藥物組合物及其制劑。
14.權利要求13所述的制劑，包括片劑、膠囊劑、顆粒劑、口服液、注射劑。
全文摘要
本發(fā)明公開了從尾葉香茶菜地上部分提取的尾葉香茶菜總二萜，一種新的天然藥物有效部位以及它的制備方法和在抗癌藥物制備中的用途。
文檔編號C07C49/00GK1566061SQ0314553
公開日2005年1月19日 申請日期2003年6月30日 優(yōu)先權日2003年6月30日
發(fā)明者桂明玉, 金永日, 李緒文 申請人:桂明玉