專利名稱：：非功能性p的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及疾病包括癌癥的診斷和治療。本發(fā)明涉及的疾病類型包括源自上皮細胞的癌癥和惡性淋巴瘤。本發(fā)明還涉及其它病癥，如腫瘤前狀態(tài)(preneoplasticstates)，腸易激綜合征(irritablebowelsyndrome)及病毒感染和其它感染。非常可能的是本發(fā)明還可應(yīng)用于其它疾病和病癥。背景三磷酸腺苷(ATP)可以激活配體門控性嘌呤受體(ligand-gatedpurinergicreceptors)，已知稱為P2X受體。已經(jīng)鑒別了受體亞型P2X1至P2X7。已知不同的P2X受體亞型存在于許多細胞中，包括上皮細胞和白細胞，包括淋巴細胞，胸腺細胞，巨噬細胞和樹突細胞。P2X受體能透過鈣離子以及一些其它陽離子，如鉀和鈉離子。鈣離子通過P2X受體流入細胞可與細胞死亡相關(guān)。現(xiàn)確認P2X7亞型參與許多細胞類型的編程性細胞死亡。在存在ATP的情況中，在細胞表面表達的P2X7受體能在一秒鐘內(nèi)打開通過細胞膜的鈣離子通道。持續(xù)暴露于ATP可以導(dǎo)致在幾秒鐘至幾十秒鐘內(nèi)形成大孔，其使得細胞內(nèi)涌進過量鈣離子，誘導(dǎo)編程性細胞死亡。已知人和大鼠P2X7受體的氨基酸序列，例如從美國專利No.6,133,434(Buelletal)中獲知。也見本發(fā)明圖1所示。在例如上皮癌細胞的情況中，暴露于ATP一般不導(dǎo)致編程性細胞死亡。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)這種細胞表達不能形成孔的P2X7受體。認為這些受體是非功能性受體。在人類癌細胞系如前列腺PC3和乳腺MCF7以及在動物細胞系包括嚙齒動物雜交瘤中，呈非功能性構(gòu)象的P2X7受體在細胞表面發(fā)現(xiàn)。惡性淋巴瘤患者的B細胞表達非功能性P2X7受體。淋巴瘤從逃脫溶胞破壞的惡性克隆中產(chǎn)生。這個過程導(dǎo)致惡性B淋巴細胞的進行性積聚并因此導(dǎo)致淋巴結(jié)病和/或脾腫大。發(fā)明概述在第一個方面，本發(fā)明提供了一種檢測疾病或病癥的探針，所述探針適合區(qū)分功能性P2X7受體和非功能性P2X7受體。優(yōu)選地，所述探針通過檢測三磷酸腺苷(ATP)與受體結(jié)合的變化，或者通過檢測在P2X7受體中孔形成所必需的一或多個蛋白質(zhì)的結(jié)合的變化而區(qū)分功能性和非功能性P2X7受體。在另一個實施方案中，所述探針檢測在無結(jié)合的ATP情況中暴露的P2X7受體的一或多個部分。這種受體部分可包括一個P2X7單體。本發(fā)明還提供了一種檢測疾病或病癥的方法，所述方法包括以下步驟使用本發(fā)明的探針區(qū)分功能性P2X7受體和非功能性P2X7受體，提供受體表達譜，并將該受體表達譜與受體正常表達譜相對比?？梢詸z測到其中的變化，例如上述就所述探針本身所描述的變化。所述探針可以是天然或人工的。優(yōu)選地，所述探針是一種抗體，其可以是多克隆抗體，單克隆抗體，重組抗體，人源化抗體，人抗體或其合適的片段。所述抗體優(yōu)選針對位于ATP結(jié)合位點鄰近的胞外結(jié)構(gòu)域中的一個表位。在人P2X7受體情況中，所述探針優(yōu)選適合區(qū)分功能性受體和非功能性受體，所述功能性受體具有一種序列，其中在第210氨基酸位的脯氨酸呈反式構(gòu)象，所述非功能性受體具有一種序列，其中在第210氨基酸位的脯氨酸呈順式構(gòu)象，其使局部蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)明顯改變。所述探針可使用本領(lǐng)域技術(shù)人員易于獲得的任何適當方法制備。在本發(fā)明范圍內(nèi)，所述探針通過檢測在ATP結(jié)合位點出現(xiàn)的其它構(gòu)象變化而可以區(qū)分功能性和非功能性受體。例如，所檢測的變化可以在除上述脯氨酸之外的一個氨基酸中。這種氨基酸例如是Pro199，當其呈順式構(gòu)象時明顯改變局部蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)。再例如所檢測到的變化也可以是在一些其它方面中的變化。所述探針還可以適合檢測功能狀態(tài)未改變的P2X7受體的其它區(qū)域。沒有結(jié)合ATP的單體亞單位的構(gòu)象可以使用所述探針檢測，因為所選擇的表位可特異性檢測只有當ATP未結(jié)合時才可及的受體表面的一個區(qū)域的形狀。所述探針可檢測一或多個蛋白質(zhì)的結(jié)合中的變化，所述蛋白質(zhì)如孔形成所必需的附屬蛋白質(zhì)或其它蛋白質(zhì)。這種蛋白質(zhì)非限制性例子為層粘連蛋白，整聯(lián)蛋白，β-肌動蛋白，α-輔肌動蛋白和超絨毛蛋白。在本發(fā)明中，可以使用P2X7受體亞型特異性抗體特異性檢測或結(jié)合非功能性P2X7受體，所述P2X7受體在形成腫瘤前組織，非常早期腫瘤組織，晚期腫瘤組織的一部分的細胞中或細胞上表達或者在表達非功能性P2X7受體的任何腫瘤細胞上表達。因此，P2X7受體即使可以在細胞膜中正常表達或者可以部分作為通道，但是只有當其處于關(guān)門(close-gated)或非功能性構(gòu)象時才可被檢測或結(jié)合。另外，沒有結(jié)合的ATP的單體亞單位的構(gòu)象也可以用抗體檢測，因為所選擇的表位特異性檢測只有當ATP未結(jié)合時才可及的表面的一個區(qū)域的形狀。在本發(fā)明中，非功能性P2X7受體可以使用針對一種經(jīng)歷從功能性受體中存在的結(jié)構(gòu)進行構(gòu)象變化的表位的抗體進行檢測或結(jié)合。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)非功能性受體的氨基酸序列可以與功能性受體的氨基酸序列相同，以便受體中構(gòu)象變化的原因與受體與ATP的相互作用相關(guān)。如上所述，ATP分子作為受體激動劑，由此當ATP與受體結(jié)合時，其能打開細胞膜的供鈣離子流入的通道。非功能性因此通過缺乏ATP激動劑與受體的適當結(jié)合而導(dǎo)致，原因可包括ATP產(chǎn)生不足或者降解率增加而導(dǎo)致的ATP局部可利用性不足。如果ATP與受體的結(jié)合被阻斷，則受體構(gòu)象被改變。這可以通過使用特異性設(shè)計的與受ATP結(jié)合影響的蛋白質(zhì)區(qū)域結(jié)合的抗體而檢測。在人P2X7受體的情況中，參與構(gòu)象變化的特異性序列可包括Pro210，其經(jīng)歷一個構(gòu)象變化，在不存在結(jié)合的ATP情況下從反式轉(zhuǎn)變?yōu)轫樖?。因此，在人受體的情況下，用于產(chǎn)生一種抗體的一個合適的表位序列可包含Pro210，而且可以從這個殘基的任一側(cè)延伸至誘導(dǎo)抗體應(yīng)答所必需的適當程度。非限制性例子包括從Gly200延伸至Cys216的一個節(jié)段。另外，可以使用來自其它哺乳動物如大鼠的同源節(jié)段，其與人體組織交叉反應(yīng)。例如，可以使用大鼠中相同的Gly200至Cys216節(jié)段，盡管與人序列相比在大鼠序列中有兩個氨基酸取代(例如參見美國專利No.6,133,434)。在非人類受體的情況中，可以通過適當?shù)膶嶒灤_定特異性序列。對本發(fā)明的非功能性P2X7受體進行檢測可以示出一種分布模式，其中功能性受體(及因此的正常細胞)可基本保持未標記。然而，P2X7受體的非功能性構(gòu)象可以最初在腫瘤前非常早的階段的細胞核和細胞質(zhì)中檢測到。例如在上皮細胞癌的情況中，使用本發(fā)明的方法可以在通過活檢組織的蘇木精和伊紅(H&E)染色玻片檢測的癌癥正常病理表現(xiàn)出現(xiàn)之前幾年檢測到前腫瘤形成。因此，可以比目前的檢測方法更早地檢測癌癥，如前列腺癌，皮膚癌和乳腺癌，由此具有可以早期治療的優(yōu)勢?？赏ㄟ^本發(fā)明的探針和方法檢測的疾病或病癥的全部范圍還未確定。然而，確信這些疾病或病癥包括上皮細胞癌，如前列腺癌，乳腺癌，皮膚癌，肺癌，子宮頸癌，子宮癌，胃癌，食管癌，膀胱癌，結(jié)腸癌和陰道癌，以及包括惡性淋巴瘤在內(nèi)的血癌，腸易激綜合征及病毒如HIV或其它病原微生物如結(jié)核分枝桿菌所致的感染。感染可直接通過抑制功能性所需的輔助因子或者通過正調(diào)節(jié)抑制上皮或其它細胞上的P2X7功能的輔助因子而引起非功能性受體表達，由此使感染的細胞不易受編程性細胞死亡的破壞。除非特別指出，在此所用術(shù)語“疾病或病癥(diseaseandcondition)”是指包括在前述段落中所述的所有這些特異性疾病和病癥。在腸易激綜合征(IBS)的情況中，發(fā)現(xiàn)在具有這種病癥的患者中，在上皮之下的基質(zhì)中存在的分布廣泛的淋巴細胞中正常表達P2X7受體的腸道粘膜變成正調(diào)節(jié)的。在受累患者中，這種提高的表達可以在十二指腸至直腸粘膜中觀測到。該提高的表達可以在分離的區(qū)域中發(fā)現(xiàn)，或者在更極端的情況中在小腸全長上均普遍提高。在受累及最小的情況中，總P2X7受體是正調(diào)節(jié)的，但這些全部是功能性的而且不侵入上皮層。在更嚴重的情況中，總P2X7受體表達更高，大多數(shù)受影響的腸道區(qū)域呈現(xiàn)非功能性的受體。這些例如可以位于盲腸粘膜，并可以侵入上皮層。最嚴重的情況是其中總P2X7受體表達進一步提高，而且大多數(shù)受體是非功能性的，其上皮細胞侵入增加。如已經(jīng)所揭示的，P2X7受體的非功能性是由于缺乏ATP激動劑與受體的適當結(jié)合所致。原因可包括ATP產(chǎn)量不足或者由于外-ATPase酶促降解ATP增加所致ATP局部可利用性不足。如果ATP與受體的結(jié)合被破壞，則受體構(gòu)象如所揭示樣改變，這可以使用本發(fā)明探針檢測。然而，檢測總P2X7受體分布最好通過使用一個表位而實現(xiàn)，所述表位是未受ATP結(jié)合影響的P2X7受體的胞外結(jié)構(gòu)域的其它區(qū)域的表位。探針能通過檢測功能性和非功能性構(gòu)象共有的表位而檢測功能狀態(tài)未改變的P2X7受體的區(qū)域，所述表位如Val65-Lys81。本發(fā)明包括使用一或兩種P2X7亞型特異性抗體以特異性區(qū)分總P2X7分布及在腸道粘膜中表達的非功能性受體的比例。因此一起使用的這兩種抗體既可以檢測總受體數(shù)也可以檢測只存在于關(guān)門的或非功能性構(gòu)象中的那些受體通道。第一種抗體適合檢測總P2X7受體表達。包含或附于本發(fā)明抗體的探針可以提供第二種抗體以檢測IBS，不僅區(qū)分功能性和非功能性P2X7受體，而且還可以檢測受體功能狀態(tài)未改變的其它區(qū)域。所述抗體可以單獨或者一起使用。優(yōu)選地，所述抗體組合使用。檢測與非功能性P2X7受體分離的所有P2X7受體能確定病癥的嚴重程度。非功能性P2X7受體在胃腸道粘膜中的表達以正常細胞基本保持未標記的模式出現(xiàn)。之后，P2X7的非功能性構(gòu)象首先在上皮下的基質(zhì)中檢測到，從輕微綜合征情況中分離的片狀分布直至在胃腸道全長廣泛表達同時伴有非功能性受體侵入上皮層的分離的片狀分布。本發(fā)明還提供了一種診斷腸易激綜合征的方法，所述方法包括檢測細胞和/或組織的P2X7受體表達譜，并將該表達譜與正常細胞和/或組織的預(yù)定表達譜相對比。優(yōu)選地，P2X7受體表達譜的檢測包括使用一或多種抗體。另外，優(yōu)選這種抗體與本發(fā)明的探針不同，其不檢測ATP與P2X7受體結(jié)合的變化。這種抗體的制備對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。本發(fā)明還包括一或多種抗體在診斷腸易激綜合征中的應(yīng)用。這種病癥的治療性處理在下文結(jié)合本發(fā)明的第三方面加以論述。診斷劑可以應(yīng)用標準免疫組織化學方法在標準顯微術(shù)中使用。診斷劑也可以在體內(nèi)使用。使用本發(fā)明探針和方法的診斷可以使用原位成像技術(shù)進行，以檢測在機體組織中的分布。另外，可以使用標準顯微術(shù)，聚焦顯微術(shù)及熒光激活的細胞淘選?？梢允褂脺y試淋巴，前列腺，乳腺，皮膚，肺，子宮，膀胱，子宮頸，胃，食管及相似活檢組織的正常免疫組織化學方法，及乳腺和其它組織的細針抽吸物及細胞涂片如檢測宮頸癌獲取的那些涂片。針對體內(nèi)診斷，優(yōu)選探針是無動物成分的人抗體或結(jié)構(gòu)域。所述抗體優(yōu)選用短半衰期的放射性標記物標記，所述放射性標記物可通過篩選方法如正電子發(fā)射斷層掃描(PET掃描儀)檢測。這種成像可檢測在機體任何部位聚集的標記抗體，因此發(fā)出存在與任一腫瘤相關(guān)的非功能性受體的信號。理想地，這種測試應(yīng)只在檢測原始癌癥之后進行，及為檢測繼發(fā)癌癥的目的而進行，或者在通過血液檢查(見以下所述)已經(jīng)檢測到可能存在一或多種腫瘤的一般篩選之后進行。本發(fā)明的探針和方法可用于提供一種血液檢查，以檢測非功能性P2X7受體并因此的癌癥或癌前病癥。例如，熒光標記抗體(單克隆或多克隆抗體)形式的探針可用于對患者血細胞組分進行流式細胞計量術(shù)，以檢測與各種門控性白細胞包括T淋巴細胞，B淋巴細胞或巨噬細胞上的非功能性受體的結(jié)合。在另一種形式的血液檢查中，所述探針優(yōu)選采用附于試劑盒中提供的基質(zhì)的標記抗體形式，使得可以通過存在固定化抗體與陽性白細胞結(jié)合的生色反應(yīng)而進行檢測。這種試劑盒可以適于醫(yī)學從業(yè)者使用。在一個相似的血液檢查中，本發(fā)明的抗體探針可用作一種診斷工具，以篩選也許不具有癌癥但其正常細胞殺傷途徑由于缺乏一或多種白細胞上的P2X7功能而被抑制的患者。這種患者可在巨噬細胞上表達非功能性受體，表明那些巨噬細胞殺傷感染的細胞(如結(jié)核分枝桿菌，或者其它感染因子包括瘧疾和HIV等微生物感染的細胞)的能力被抑制。這種生物體優(yōu)先在其正常細胞殺傷途徑由于缺乏一或多種白細胞上的P2X7功能而被抑制的患者體內(nèi)增殖。其它方法也可以與本發(fā)明的探針和方法一起使用。本發(fā)明提供了一種治療疾病或病癥的抗體，所述抗體適于區(qū)分功能性P2X7受體和非功能性P2X7受體，及適于只結(jié)合非功能性受體。優(yōu)選地，所述抗體通過檢測三磷酸腺苷(ATP)與受體的結(jié)合中的變化或者通過檢測P2X7受體中孔形成所必需的一或多種蛋白質(zhì)的結(jié)合中的變化而區(qū)分功能性和非功能性受體，而且所述抗體適于只結(jié)合非功能性受體。在另一個實施方案中，所述抗體通過檢測在沒有結(jié)合的ATP的情況中暴露的受體的一部分而區(qū)分功能性和非功能性受體。治療疾病或病癥的抗體可以與用作診斷疾病或病癥的探針的抗體相同。這種抗體可例如用于局部治療皮膚癌。針對系統(tǒng)性治療癌癥，所述抗體或其活性片段應(yīng)是人抗體或人抗體結(jié)構(gòu)域，以使非所希望的免疫應(yīng)答副作用降至最低。本發(fā)明的抗體可用于治療哺乳動物包括人的疾病或病癥。所述疾病或病癥的實例已經(jīng)結(jié)合本發(fā)明的探針在上文示出。本發(fā)明還提供了一種表位，其能引起本發(fā)明第二方面所述抗體產(chǎn)生。所述表位優(yōu)選包含Pro210并涵蓋Gly200-Cys216(在人受體P2X7序列中)這一節(jié)段。所述表位應(yīng)優(yōu)選在C末端附著一Cys殘基(Cys216)，其通過化學交聯(lián)劑馬來酰亞氨基己?；?N-羥基琥珀酰亞胺(MCS)與白喉毒素交聯(lián)，以便所附著的表位肽采用的構(gòu)象具有一種穩(wěn)定的順式構(gòu)型。這種特異性肽構(gòu)象有意呈遞給具有一或多種疾病或病癥的人或動物，尤其是患有上皮細胞癌如前列腺癌，乳腺癌，皮膚癌，肺癌，子宮頸癌，子宮癌，胃癌，食管癌，膀胱癌，結(jié)腸癌和陰道癌，以及惡性淋巴瘤，腸易激綜合征及病毒如HIV或其它病原微生物結(jié)核分枝桿菌感染的患者。所述患者優(yōu)選對所應(yīng)用的綴合表位產(chǎn)生免疫應(yīng)答，并因此產(chǎn)生識別受影響的細胞表面上存在的非功能性P2X7受體的抗體，所述抗體與所述受體結(jié)合并給合適的免疫細胞發(fā)信號，以破壞該復(fù)合的細胞。引發(fā)細胞死亡的其它細胞也可以受影響。應(yīng)理解本發(fā)明不限于上述序列，而且還包括改變的序列和載體及交聯(lián)劑，它們相似地產(chǎn)生一種特異性應(yīng)答，優(yōu)選只針對非功能性P2X7受體，優(yōu)選忽視在細胞表面上表達的所有功能性受體并因此避免副作用。本發(fā)明在第二方面還提供了本發(fā)明的抗體在治療患者所患疾病或病癥中作為治療載體的應(yīng)用，其通過定向在細胞表面上表達的異?；蚍枪δ苄訮2X7受體而調(diào)節(jié)編程性細胞死亡，同時表達正常(功能性)受體的所有細胞未受影響。本發(fā)明還涵蓋了本發(fā)明的表位引起抗體產(chǎn)生的應(yīng)用，如上所述。本發(fā)明還提供了一種藥物組合物，以治療或預(yù)防患者所患疾病或病癥，所述組合物包含藥物有效量的抗體，或者引起產(chǎn)生這種量的抗體的表位，其能調(diào)節(jié)在細胞表面上有異?；蚍枪δ苄訮2X7受體表達的細胞編程性死亡。所述抗體或表位的藥物有效量根據(jù)患者及疾病或病癥的性質(zhì)而發(fā)生變化。這些變量可由本領(lǐng)域技術(shù)人員確定。本發(fā)明的藥物組合物可以與一種藥物可接受的載體聯(lián)合施用，所述載體可以是本領(lǐng)域已知的或者在后文所述的并適于指定用處的任何載體。除了載體之外，本發(fā)明的藥物組合物可包括其它成分，例如包括染料，防腐劑，緩沖劑和抗氧化劑。本發(fā)明的藥物組合物可采取任何希望的形式，并可以例如以軟膏劑，乳油(cream)，溶液，懸浮液，粉末，片劑，膠囊，栓劑或陰道栓劑形式施用。本發(fā)明的藥物組合物可以以任何適當方式施用，包括口服，非腸道，靜脈內(nèi)，肌內(nèi)，皮下或局部施用。本發(fā)明還提供了一種治療或預(yù)防患者所患疾病或病癥的方法，所述方法包括為患者施用本發(fā)明的藥物組合物。本發(fā)明還提供了本發(fā)明的藥物組合物在治療或預(yù)防患者所患疾病或病癥中的應(yīng)用。本領(lǐng)域技術(shù)人員意識到本發(fā)明的藥物組合物的使用模式可根據(jù)最佳作用效果而加以改變?？赡鼙匦杩紤]疾病或病癥的性質(zhì)以及嚴重程度。本發(fā)明的第三方面針對ATPases(酶)的表達，其控制供給P2X7受體的ATP供應(yīng)，例如在惡性淋巴瘤患者的B細胞中。白細胞上P2X7受體的通道開放通過由外ATPase(ecto-ATPases)和外ATP二磷酸水解酶(外ATPDases)對ATP激動劑的快速水解而終止。這些酶調(diào)節(jié)眾多的依賴于ATP的生理學過程。淋巴細胞上ATPase和ATPDase活性的底物特異性表明在所述淋巴細胞表面上存在一種以上類型，包括CD39。一或多種這些ATPases或ATPDases的增殖可限制控制P2X7孔形成所需的ATP供應(yīng)，及隨后的調(diào)節(jié)B細胞數(shù)目所需的細胞編程性死亡。相似地，據(jù)信在IBS的情況中，ATPases的增殖可使激動劑ATP與P2X7受體的適當結(jié)合減少。因此，在此第三方面中，本發(fā)明提供了一種治療或預(yù)防患者所患疾病或病癥的制劑，所述制劑包含適合調(diào)節(jié)在患者細胞或組織中控制ATP供給于P2X7受體的ATPase表達的一或多種物質(zhì)。本發(fā)明還提供了一種治療或預(yù)防患者所患疾病或病癥的方法，所述方法包括為患者施用一種制劑，所述制劑包含適合調(diào)節(jié)在患者細胞或組織中控制ATP供給于P2X7受體的ATPase表達的一或多種物質(zhì)。這類ATPase例如是CD39或CD73。這種物質(zhì)可采取ATP類似物形式，優(yōu)選不可水解并特異于P2X7的物質(zhì)，或者抑制局部ATPases作用的另一種物質(zhì)，所述ATPases使P2X7結(jié)合位點可利用的ATP耗竭。所述制劑可以是特異性針對非功能性P2X7受體的人抗體形式。一種物質(zhì)如ATP類似物可與P2X7結(jié)合并使其保持開放孔構(gòu)型，因此使孔呈現(xiàn)一種功能性狀態(tài)，使大和小陽離子均能通透。以這種方式，這種合成激動劑的應(yīng)用可恢復(fù)受體功能，同時控制P2X7作為鈣離子通道的作用所提供給細胞的生長優(yōu)勢。所述疾病或病癥優(yōu)選惡性淋巴瘤或IBS，但本發(fā)明還擴展到其它疾病或病癥，包括其它上皮細胞或血液癌癥或者病毒和其它病原體感染。在惡性淋巴瘤的情況中，ATPases控制對P2X7受體的ATP局部供應(yīng)，以降低與P2X7受體結(jié)合可利用的ATP的濃度，并由此使所述受體失活導(dǎo)致編程性B細胞死亡明顯降低。在惡性淋巴瘤中，這些ATPases可以在B細胞表面上特異性表達并表現(xiàn)為正調(diào)節(jié)。優(yōu)選地，特異性ATPase抑制劑的應(yīng)用可用于調(diào)節(jié)P2X7受體上ATP的可利用性，由此調(diào)節(jié)編程性B細胞死亡。為治療惡性淋巴瘤，所述物質(zhì)可包括一種不可水解的P2X7激動劑形式的合成激動劑，其能阻斷ATPases或ATPDases。關(guān)于腸易激綜合征，施用本發(fā)明的制劑意在恢復(fù)可能通過在粘膜受影響區(qū)域之下的肌層的過度活性而耗竭的受體功能。本發(fā)明的制劑可對粘膜直接起作用以除去這些非功能性受體，從而恢復(fù)局部正常的胃腸道分泌機制。治療性處理目的在于恢復(fù)ATP局部供應(yīng)于非功能性受體，以便恢復(fù)正常受體功能?？刂剖荏w功能的結(jié)果包括恢復(fù)對胃腸道分泌和蠕動的正常控制。這可以通過腸道應(yīng)用或系統(tǒng)補給合成的P2X7特異性激動劑，優(yōu)選不可由ATPases水解的P2X7特異性激動劑，通過系統(tǒng)應(yīng)用非功能性P2X7受體的抗體，優(yōu)選小型人特異性抗體，以除去非功能性受體，只留下功能性受體而實現(xiàn)。如果在平滑肌中的蠕動異常與結(jié)合正常P2X7受體所需的ATP的局部可利用性耗竭相關(guān)，則治療可包括恢復(fù)激動劑的這種天然供應(yīng)，這通過應(yīng)用暫時限制腸道活動的治療而限制平滑肌攝取或利用ATP而進行。本發(fā)明還提供了治療局部或病癥的一種藥物組合物，所述組合物包含藥物有效量的適合調(diào)節(jié)控制ATP供給于P2X7受體的ATPases(酶)表達的一或多種物質(zhì)。本發(fā)明在其所有方面中均擴展至這種相似應(yīng)用，其可以應(yīng)用在其它醫(yī)學條件下，例如異常P2X7受體是病毒感染的結(jié)果，其中所述病毒在感染的細胞中通過正調(diào)節(jié)非功能性P2X7受體而被保護，或者其中這種受體在正常細胞條件下是正調(diào)節(jié)的。本發(fā)明還提供了治療腸易激綜合征的一種方法，所述方法包括為患者施用一種上述藥物組合物。本發(fā)明還提供了這種藥物組合物在治療腸易激綜合征中的應(yīng)用。上述一或多種藥物有效制劑的使用模式可根據(jù)最佳作用效果而改變。另外，本發(fā)明提供了治療腸易激綜合征的一種方法，所述方法包括施用適合恢復(fù)P2X7受體功能的一種組合物。所述受體功能通過粘膜受影響區(qū)域之下的肌層的過度活性而被耗竭。所述組合物可以與上述本發(fā)明制劑中包括的物質(zhì)相同。另一方面，本發(fā)明提供了一種區(qū)分不同的蛋白質(zhì)構(gòu)象的方法，通過使用能引起抗體產(chǎn)生的一個表位或者抗體自身以從與具有選擇的構(gòu)象的蛋白質(zhì)所有成員的結(jié)合中實現(xiàn)特異性藥物學結(jié)果(主動以及被動免疫)。一個這樣的實例是呈導(dǎo)致vCJD病癥構(gòu)象的朊病毒蛋白。這種異常形式的蛋白質(zhì)可以由特異性抗體或引起所述抗體產(chǎn)生(優(yōu)選人抗體，并降低大小以達到最佳藥物學作用)的表位定向。附圖簡述圖1示出人P2X7受體的氨基酸序列(現(xiàn)有技術(shù))。序列第65-81位及第200-216位殘基被特別標示并在以下提及。發(fā)明詳述為產(chǎn)生特異于非功能性P2X7的抗體，所用表位為圖1所示序列第200-216位殘基，含有第216位的Cys。為產(chǎn)生無判別力的P2X7的抗體，所用表位為圖1所示序列的第65-81位殘基，其中加入一個N末端Cys。這種抗體不能檢測所述受體是否是非功能性的，但設(shè)計用于檢測所有受體以便功能性受體的比例可以通過對比分別使用兩種抗體獲得的染色而確定。這些表位上的Cys殘基通過馬來酰亞氨基己?；?N-羥基琥珀酰亞胺(MCS)交聯(lián)劑與白喉毒素(DT)載體偶聯(lián)，每個DT載體附著10個表位肽，以保持構(gòu)象穩(wěn)定性并提供一種較大的抗原性結(jié)構(gòu)。這些綴合的表位用作抗原，注射入一些動物物種中(綿羊，兔和小鼠)以通常的方式產(chǎn)生特異于所述表位的抗體?，F(xiàn)有技術(shù)已經(jīng)充分揭示了產(chǎn)生抗體的方法，通過在特定的時期將抗原/佐劑混合物注射入動物體內(nèi)而進行。產(chǎn)生抗體的特異性實例如下所述實施例1綿羊抗P2X7抗體將500μg綴合物(大約100μgP2X7表位)在磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)中稀釋為0.8ml，并用1.2mL的Freund′s完全佐劑乳化。將綿羊在多個部位經(jīng)皮下和肌內(nèi)注射抗原/佐劑乳狀液。8周后，將所述綿羊在多個部位再次注射相同量的用Freund′s不完全佐劑乳化的綴合物。4周后重復(fù)進行此操作并將動物經(jīng)頸靜脈取血樣。測試收集的血清的抗體特異性。然后將該綿羊以8周間隔定期注射并取血樣，以提供含有特異性抗體的血清集合。將其它綿羊用等劑量的綴合抗原經(jīng)與上述相似的方案但使用不同佐劑進行注射。在這些動物中，將0.7ml稀釋的抗原與0.1ml的QuillA/DEAEDextran溶液(2.5mgQuillA+25mgDEAEDextran/mLPBS)和1.2mL的ISA50VMontanide混合。將該乳狀液在多個部位經(jīng)皮下和肌內(nèi)注射。使用這種佐劑產(chǎn)生的抗體產(chǎn)生與使用Freund′s佐劑產(chǎn)生的那些抗體相同的特異性。實施例2兔抗P2X7抗體使用與在綿羊中進行的實驗相同的兩種佐劑及相同的注射方案在兔中產(chǎn)生抗體，唯一不同之處是使用300μg的綴合物進行注射。所產(chǎn)生的抗體與在綿羊中產(chǎn)生的那些抗體具有相同的特異性，可易于區(qū)別用于產(chǎn)生這些抗體的表位。實施例3小鼠抗P2X7抗體在小鼠中針對綴合的表位及非功能性P2X7表位的未綴合的表位(其能區(qū)分不能形成孔并因此不能導(dǎo)致編程性死亡的受體)產(chǎn)生抗體。在這些實驗中，所用佐劑是QAJGENPty有限公司的產(chǎn)品ImmunEasyTM，其含有免疫刺激性產(chǎn)物CpGDNA(ColeyPharmaceuticalGroup公司的商標)。將5μg表位或綴合的表位在70μLPBS和30μLImmunEasyTM佐劑中稀釋。將小鼠在多個部位進行皮下和肌內(nèi)注射。兩周后重復(fù)此方案并在再一個兩周后再次重復(fù)。在第三次注射后8天將小鼠放血取血樣。通過這種方法在小鼠中產(chǎn)生的抗體能區(qū)分不同的P2X7表位，而且P2X7非功能性表位的抗體示出與在綿羊和兔中產(chǎn)生的抗體相同的結(jié)果。如以上實施例所示，P2X7受體的各種表位的抗體可以在不同物種中及使用不同的佐劑一致產(chǎn)生。特別地，可以常規(guī)產(chǎn)生P2X7受體的一個鑒別非功能性狀態(tài)受體的表位的抗體，此非功能性狀態(tài)受體在正常條件下不能形成孔并且不能進行其編程性死亡功能。實施例4檢測非功能性P2X7的抗體通過所述抗體與表達具有已知功能的P2X7(人)的細胞的結(jié)合而測試，這通過攝取溴化乙錠或銣的能力而表明。這些P2X7蛋白質(zhì)通道可以在堿基對1513突變，由此該通道不能形成編程性死亡孔。在惡性B淋巴細胞上表達的這些及相似的非功能性P2X7受體在流式細胞計量術(shù)和標準免疫組織化學中也結(jié)合所述抗體，而表達正常功能性P2X7的細胞(能以大流量攝取鈣，溴化乙錠和銣)不能結(jié)合所述抗體，因為所選擇的檢測非功能性受體的表位在功能性受體中不可利用。在非功能性受體中Pro210采用一種順式構(gòu)象，而且已經(jīng)明確這個構(gòu)象在用于產(chǎn)生抗體的綴合表位中是穩(wěn)定的。Pro210在示出是功能性的受體中是反式構(gòu)象。這是ATP(三磷酸腺苷)與P2X7受體結(jié)合的結(jié)果。當ATP被結(jié)合時，在緊鄰ATP結(jié)合位點的一個節(jié)段上的Pro210采用一種反式構(gòu)象。這通過使用定點誘變將Pro210改變?yōu)楣潭ǔ史词綐?gòu)象的Ala而加以證實，發(fā)現(xiàn)這種突變蛋白有完全功能而且不能與產(chǎn)生的抗體結(jié)合以檢測非功能性受體。實施例5在表達P2X7的標記的巨噬細胞中進行實驗以進一步確認抗體檢測非功能性受體的特異性。巨噬細胞使用P2X7通用抗體結(jié)合P2X7受體的抗體，但不結(jié)合非功能性P2X7的抗體，直至它們暴露于癌細胞如小鼠雜交瘤細胞。巨噬細胞與雜交瘤細胞之間的接觸誘導(dǎo)非功能性P2X7在巨噬細胞上的表達，這通過非功能性P2X7的抗體以及通用的P2X7抗體檢測。測試從惡性淋巴瘤患者中提取的巨噬細胞和B淋巴細胞，所有這些細胞均結(jié)合通用的P2X7的抗體以及非功能性P2X7受體的抗體，證實P2X7在所有檢測的癌細胞中均是非功能性的，由功能性P2X7形成的編程性細胞死亡孔不能形成，并因此不能誘導(dǎo)癌細胞編程性細胞死亡。來自人體所有上皮細胞癌如前列腺癌，乳腺癌，腸癌，皮膚癌，胃癌，子宮頸癌及其它癌以及惡性淋巴瘤，慢性淋巴細胞性白血病及腦腫瘤的所有這些癌細胞，以及在所測試的其它哺乳動物中的相同腫瘤包括在狗中的乳腺癌和前列腺癌及在貓中的皮膚癌以及所有小鼠雜交瘤細胞和小鼠纖維肉瘤細胞，均表達相同的非功能性P2X7。在選擇的表位中人，大鼠，貓，狗和小鼠之間的序列相似性足以在上述情況中進行陽性鑒別。這示出在這些哺乳動物中癌癥的機制是相同的，因為所有癌細胞均表達非功能性P2X7受體，所述受體不能形成編程性細胞死亡孔，所述孔當激活時通常殺死細胞。以這種方式，癌細胞成為無限增殖的，編程性細胞死亡程序被關(guān)閉。實施例6為進一步證實癌細胞如受影響的B淋巴細胞不能通過P2X7功能誘導(dǎo)編程性細胞死亡，將含有非功能性P2X7受體的白血病患者的B細胞與5mMATP溫育培養(yǎng)2小時。結(jié)果是所有非功能性受體由于過量的ATP而迫使開放并誘導(dǎo)殺死受影響的細胞的編程性細胞死亡。實施例7為進一步證實抗體選擇性結(jié)合癌細胞，將基底細胞癌(BCC)患者的皮膚用非功能性P2X7受體的抗體處理，所述抗體懸浮在惰性乳油基質(zhì)中并應(yīng)用于皮膚損害部位和周圍(見以下實施例10)。在1周內(nèi)每日局部應(yīng)用所述抗體，所有BCC痕跡均消失，同時示出對周圍皮膚無作用，因為正常皮膚沒有所述受體。診斷應(yīng)用在此舉例描述在動物中使用特異的非功能性P2X7抗體及證實本發(fā)明的探針和方法在診斷大多數(shù)人和其它動物癌癥中的一般應(yīng)用。在人和動物如貓和狗的前列腺組織中，當本發(fā)明的抗體用于診斷時，在不存在癌癥或癌前損害的情況中無標記獲得。然而，本發(fā)明的診斷方法能揭示通過H&E染色尚不可檢測到伴隨的形態(tài)學改變時的腫瘤性轉(zhuǎn)化的最初跡象。在這個階段，必需染色首先在上皮細胞核中出現(xiàn)的受體單位。它們在疾病晚期遷移至細胞質(zhì)中，在前列腺中發(fā)揮場效應(yīng)，從而減少確定腫瘤的存在所需要活檢的組織。在疾病晚期中，染色變得更限于頂部上皮。相似地，人及其它哺乳動物如貓和狗的其它上皮細胞癌如乳腺癌，肺癌，結(jié)腸癌和皮膚癌，可以用邊緣檢測，因為在這些其它組織中不再有明顯的場效應(yīng)。在這些其它組織如乳腺癌和子宮頸癌組織中見到相同的階段發(fā)育，在胞質(zhì)染色之前有核染色，而正常組織不染色。在乳腺組織中受影響的乳腺管和乳腺小葉易于檢測，因為甚至在正常形態(tài)學提示沒有癌癥的情況下，乳腺中個別受影響的乳腺管系內(nèi)的局部場效應(yīng)也可被檢測。相鄰的未受影響的乳腺管表現(xiàn)為未染色。相似地，直接引流含有腫瘤的組織的受影響的淋巴結(jié)，通過受影響的淋巴細胞的場效應(yīng)示出腫瘤跡象。因此，在沒有任何轉(zhuǎn)移的細胞播散至淋巴結(jié)時即可以檢測崗哨淋巴結(jié)。皮膚癌如基底細胞癌，鱗狀上皮細胞癌和發(fā)育異常的痣以及惡性黑素瘤示出在角質(zhì)細胞和黑素細胞層中非功能性受體及通道成分(單體)的陽性染色，且具有清晰邊緣，在所述清晰邊緣之外的正常皮膚在表皮和深處的真皮內(nèi)均無標記。所有測試的哺乳動物癌細胞系如人前列腺(PC3)和乳腺(MCF7)及嚙齒動物雜交瘤在細胞表面上非功能性受體均呈陽性，由此在這些癌細胞中編程性細胞死亡被抑制。這種診斷的一般應(yīng)用通過小鼠雜交瘤細胞上的相同標記而示出受體在人之外其它類型動物中的遍在性。正常人B淋巴細胞示出功能性P2X7受體在細胞表面上表達，因此當需要時能夠進行編程性細胞死亡，而惡性淋巴瘤患者的B淋巴細胞示出非功能性P2X7受體在細胞表面表達，因此減少編程性細胞死亡。治療應(yīng)用在試圖進行編程性細胞死亡的癌細胞表面上表達這種明顯遍在的P2X7非功能性構(gòu)象子可用于治療人和其它哺乳動物中的大多數(shù)癌癥。實施例如下實施例8將小鼠雜交瘤細胞在存在和不存在親和純化的非功能性P2X7的抗體的巨噬細胞基質(zhì)中生長。細胞計數(shù)表明4天后，與純化的正常IgG一起溫育的細胞從1×104生長至7×104個，而與非功能性P2X7抗體一起溫育的細胞計數(shù)僅為1.5×104個。實施例9這個實施例示出針對非功能性P2X7受體的表位產(chǎn)生的抗體在體內(nèi)抑制腫瘤形成。如上所示，在綿羊中針對非功能性P2X7表位產(chǎn)生的抗體能識別在小鼠雜交瘤細胞表面上的這一非功能性P2X7編程性細胞死亡受體。將這種抗體加入雜交瘤細胞培養(yǎng)物中延遲細胞的生長。小鼠雜交瘤細胞當注入制備的近親雜交的小鼠品系中時導(dǎo)致腫瘤形成。在這個實驗中，將3組(10只/組)Balb-c雌性小鼠各接受以下處理第1組將10只小鼠均在第1天腹膜內(nèi)(IP)注射于0.5ml細胞培養(yǎng)基中的1×106個雜交瘤細胞。在第2天和第3天，它們接受腹膜內(nèi)注射0.5ml細胞培養(yǎng)基。第2組將10只動物均在第1天腹膜內(nèi)(IP)注射于含有1mg純化的綿羊IgG的0.5ml細胞培養(yǎng)基中的1×106個雜交瘤細胞。在第2天和第3天，為它們注射含有1mg純化的綿羊IgG的0.5ml細胞培養(yǎng)基。第3組將10只小鼠均在第1天腹膜內(nèi)(IP)注射于含有1mg純化的綿羊抗P2X7非功能性表位IgG的0.5ml細胞培養(yǎng)基中的1×106個雜交瘤細胞。在第2天和第3天，它們接受另一次注射含有1mg純化的綿羊抗P2X7IgG的0.5ml細胞培養(yǎng)基。將所有組的小鼠在第11天均處死，并檢測腫瘤的存在情況。切除腫瘤并稱重。結(jié)果如下方差分析示出各組之間腫瘤重量有顯著差異(概率P＜0.01)。用抗P2X7非功能性抗體處理的實驗組與兩個對照組有顯著差異(P＜0.01)。即用P2X7非功能性表位的抗體進行處理在實驗動物中顯著降低腫瘤量。實施例10以放置7天的液體或者懸浮于二甲硅油乳油基質(zhì)中的形式，將特異性親和純化的抗體(明顯改良特異性)應(yīng)用于3個人基底細胞癌(BCC)中。在處理之后無BCC損害跡象可檢測到，而對照皮膚完全不受影響，因為沒有蛋白質(zhì)靶位。實施例11將基底細胞癌(BCC)和鱗狀上皮細胞癌(SCC)(原發(fā)腫瘤和繼發(fā)腫瘤)形式的皮膚損害，包括復(fù)發(fā)的腫瘤和發(fā)育異常的痣，在進一步的實驗中使用在二甲硅油乳油基質(zhì)或滲透性乳油基質(zhì)中混合的純化的抗體，親和純化或未親和純化的IgG治療。因為在正常皮膚中沒有非功能性受體，因此在任何類型的正常皮膚中檢測到無副作用。所有類型的癌癥均應(yīng)答抗體的存在，這種應(yīng)答通過在每日應(yīng)用兩次而在36小時至1周的期間內(nèi)癌癥消失而表現(xiàn)出。在直至12個月的時間內(nèi)無復(fù)發(fā)。被治療的腫瘤的大小從無凸起邊界的3mm直徑至5cm直徑并最多4mm厚。共34個經(jīng)組織學證實的腫瘤在1周的治療期內(nèi)成功消除。據(jù)信對患者的應(yīng)用一般包括產(chǎn)生人單克隆抗體(如herceptin)，由此內(nèi)部癌癥可以與局部應(yīng)用同樣有效地治療。在細胞如淋巴細胞表面表達的所有正常的功能性P2X7需要保持不受抗體存在的影響以避免副作用?？贵w因此應(yīng)只結(jié)合在試圖但不能引發(fā)編程性細胞死亡的細胞表面上表達的蛋白質(zhì)。因此所有定向的細胞只是那些試圖通過編程性細胞死亡殺死其自身的細胞，包括癌細胞。這些細胞尤其癌細胞上的P2X7受體是非功能性或ATP耗竭的狀態(tài)。主動免疫主動免疫也可以用于治療目的。在這種情況中，人或其它哺乳動物需要針對一個或多個特異性表位被免疫接種，所述表位的構(gòu)象是模擬僅由在細胞表面上其非功能性(ATP耗竭的)形態(tài)的受體所采取的構(gòu)象。應(yīng)避免存在于功能性受體中的包括部分暴露表位形態(tài)的受體構(gòu)象柔性。例如表位Gly200-Cys216的順式構(gòu)型在使用之前應(yīng)通過適當方式固定。關(guān)于這一概念有一進一步的證據(jù)，即觀察到用于產(chǎn)生抗體的許多動物包括小鼠，兔和綿羊已經(jīng)不是無免疫應(yīng)答的。這些動物無一再發(fā)生任何腫瘤。在此例證了一個特異性實施例實施例12方案基于小鼠腫瘤模型進行實驗。使用40只10周齡的雌性近親交配的BalbC小鼠，分為2組，每組20只，第1組為實驗組，第2組為對照組。第1天將第1組中20只實驗動物注射0.1mg經(jīng)MCS交聯(lián)劑與白喉毒素綴合的肽表位(hP2X7序列200-216)。其包含大約0.02mg肽表位。將肽綴合物用QUILLA/DEAEDextran/MontanideISA50V佐劑混合物乳化并在多個皮下和肌內(nèi)注射部位注射0.1ml。將對照組即第2組的20只小鼠在多個皮下和肌內(nèi)注射部位注射無肽綴合物的0.1ml佐劑混合物。第8天將20只第1組小鼠注射0.01mg經(jīng)MCS交聯(lián)劑與白喉毒素綴合的肽表位(hP2X7序列200-216)(含有大約0.002mg的肽表位)。所述肽包含于磷酸鹽緩沖鹽水溶液中并根據(jù)方案與商購的CpGDNA佐劑ImmunEasy(得自Qiagen)混合。在每只小鼠的多個皮下和肌內(nèi)注射部位注射0.1mL肽綴合物/佐劑溶液。將20只第2組小鼠注射相似的磷酸鹽緩沖鹽水/CpGDNA佐劑混合物。這是在每只小鼠的多個皮下和肌內(nèi)注射部位注射0.1ml所述混合物。第26天將20只第1組小鼠注射0.025mg經(jīng)MCS交聯(lián)劑與白喉毒素綴合的肽表位(hP2X7序列200-216)(含有大約0.005mg肽表位)，其包含于磷酸鹽緩沖鹽水溶液中并與QiagenCpGDNA佐劑ImmunEasy混合。再次將0.1mL的混合物在多個皮下和肌內(nèi)注射部位注射入每只小鼠中。對照組如在第8天所述進行注射。第29天所有小鼠均在一個皮下部位接受于0.1ml組織培養(yǎng)基中的腫瘤細胞注射，所述部位位于頸背部。所用的腫瘤細胞是由澳大利亞墨爾本的WalterandElizaHallInstitute提供的小鼠纖維肉瘤細胞系，細胞系名稱為WEHI164。將所述細胞以兩種濃度注射入實驗組小鼠和對照組小鼠中。將每組再分為兩組。每個實驗組和對照組的10只小鼠接受160000個細胞/小鼠，每組的另10只小鼠接受320000個細胞/小鼠。將這個細胞系的細胞預(yù)先測試其細胞表面上非功能性P2X7表位的存在情況。這通過使用在綿羊中產(chǎn)生的特異性識別受體的非功能性形式的抗體進行。第38天將所有小鼠均處死并收集血液以分析非功能性P2X7表位的抗體。將所有小鼠均稱重并切除腫瘤及稱重。結(jié)果對結(jié)果進行方差分析示出在對照組和治療組之間及在低和高劑量組之間存在有統(tǒng)計學意義的差異(P＝0.0003)。較低劑量組示出較大差異，因為較低的腫瘤荷載對小鼠免疫系統(tǒng)的能力的作用較小。ATP類似物在以下培養(yǎng)實驗中示出使用一種合成的激動劑有效結(jié)合P2X7孔上ATP結(jié)合位點，并使所述孔進入功能狀態(tài)從而恢復(fù)受體功能以及控制P2X7提供給細胞的生長優(yōu)勢的效力。從CLL患者中收集的腫瘤B細胞與從正?；颊呤占南嗨茢?shù)目的相似細胞混合，用2.5mM的ATP處理4小時，沒有腫瘤細胞保持下來，只剩正常細胞。在體內(nèi)不適合使用ATP或者更具選擇性的P2X7激動劑苯甲酰，苯甲酰ATP。因此，可以設(shè)計一種選擇性ATP類似物以在受影響的細胞類型中恢復(fù)編程性細胞死亡過程，所述ATP類似物能以比ATP或BzATP更高的結(jié)合親和性選擇性結(jié)合P2X7。工業(yè)實用性本發(fā)明所有方面均可應(yīng)用于人和動物醫(yī)藥和健康領(lǐng)域，具有能早期精確診斷疾病并有效治療的潛力，在許多情況中其遠比現(xiàn)有技術(shù)中利用的那些藥物的侵害和傷害力低下。權(quán)利要求1.一種檢測疾病或病癥的探針，所述探針適合區(qū)分功能性P2X7受體和非功能性P2X7受體。2.權(quán)利要求1的探針，其中所述探針適合通過檢測三磷酸腺苷(ATP)與受體結(jié)合中的變化而區(qū)分功能性P2X7受體和非功能性P2X7受體。3.權(quán)利要求1的探針，其中所述探針適合通過檢測P2X7受體中孔形成所必需的一或多個蛋白質(zhì)的結(jié)合中的變化而區(qū)分功能性P2X7受體和非功能性P2X7受體。4.權(quán)利要求3的探針，其中所述探針適合通過檢測在無結(jié)合的ATP的情況中暴露的所述受體的一或多個部分而區(qū)分功能性P2X7受體和非功能性P2X7受體。5.權(quán)利要求4的探針，其中所述部分包括一P2X7單體。6.權(quán)利要求1-5任一項的探針，其是天然或者人工的。7.權(quán)利要求1-5任一項的探針，其中所述探針是一種抗體，選自多克隆抗體，單克隆抗體，重組抗體，人源化抗體，人抗體及其片段。8.權(quán)利要求7的探針，其中所述抗體針對每個受體的位于ATP結(jié)合位點鄰近的胞外結(jié)構(gòu)域中的一個表位。9.權(quán)利要求1-5任一項的探針，其中所述受體是哺乳動物P2X7受體，所述探針適合區(qū)分功能性受體和非功能性受體，所述功能性受體具有在第210氨基酸位的脯氨酸呈反式構(gòu)象的序列，所述非功能性受體具有在第210氨基酸位的脯氨酸呈改變局部蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的順式構(gòu)象的序列。10.權(quán)利要求1-5任一項的探針，其中所述受體是哺乳動物P2X7受體，所述探針適合區(qū)分功能性受體和非功能性受體，所述功能性受體具有在第199氨基酸位的脯氨酸呈反式構(gòu)象的序列，所述非功能性受體具有在第199氨基酸位的脯氨酸呈改變局部蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的順式構(gòu)象的序列。11.權(quán)利要求9的探針，其中所述探針是或包括針對P2X7受體的一表位序列而產(chǎn)生的一種抗體，所述表位序列是從Gly200至Cys216。12.權(quán)利要求1-11任一項的探針，其中所述疾病或病癥選自前列腺癌，乳腺癌，皮膚癌，肺癌，子宮頸癌，子宮癌，胃癌，食管癌，膀胱癌，結(jié)腸癌和陰道癌，其它上皮細胞癌，惡性淋巴瘤，其它血癌，腸易激綜合征及病毒或其它病原微生物感染。13.權(quán)利要求12的探針，其中所述病毒或病原微生物是HIV或結(jié)核分枝桿菌。14.權(quán)利要求7的探針，其中所述病癥是腸易激綜合征，所述抗體能通過檢測功能性和非功能性構(gòu)象共有的表位而檢測功能狀態(tài)未改變的P2X7受體的其它區(qū)域。15.權(quán)利要求7或14的探針，其中所述病癥是腸易激綜合征，所述抗體與能檢測總P2X7表達的另一個抗體組合使用。16.一種檢測疾病或病癥的方法，所述方法包括以下步驟使用權(quán)利要求1-10任一項的探針區(qū)分功能性P2X7受體和非功能性P2X7受體，提供受體表達譜，以及將所述表達譜與正常表達譜相對比。17.權(quán)利要求16的方法，其中所述受體表達譜是非功能性受體表達譜。18.權(quán)利要求16的方法，其中所述探針適合通過檢測三磷酸腺苷(ATP)與受體結(jié)合中的變化而區(qū)分功能性P2X7受體和非功能性P2X7受體。19.權(quán)利要求16的方法，其中所述探針適合通過檢測P2X7受體中孔形成必需的一或多個蛋白質(zhì)的結(jié)合中的變化而區(qū)分功能性P2X7受體和非功能性P2X7受體。20.權(quán)利要求16的方法，其中所述探針適合通過檢測在無結(jié)合的ATP情況中暴露的受體的一或多個部分而區(qū)分功能性P2X7受體和非功能性P2X7受體。21.權(quán)利要求16的方法，其中所述部分包括一P2X7單體。22.權(quán)利要求16-21任一項的方法，其中所述受體表達譜使用原位成像技術(shù)提供。23.權(quán)利要求16-21任一項的方法，其中所述受體表達譜使用顯微術(shù)，聚焦顯微術(shù)或熒光激活的細胞淘選而提供。24.權(quán)利要求1-15任一項的探針在檢測疾病或病癥中的應(yīng)用。25.一種與權(quán)利要求1-15任一項的探針復(fù)合的分離的細胞或組織樣品。26.一種診斷腸易激綜合征的方法，包括檢測細胞和/或組織的P2X7表達譜，并與正常細胞和/或組織的預(yù)定表達譜相對比。27.權(quán)利要求26的方法，其中P2X7表達譜的檢測包括使用一或多個抗體。28.一或多個抗體在診斷腸易激綜合征中的應(yīng)用。29.一種治療腸易激綜合征的方法，所述方法包括施用一種適合恢復(fù)P2X7受體功能的組合物。30.一種治療或預(yù)防疾病或病癥的抗體，所述抗體適合區(qū)分功能性P2X7受體和非功能性P2X7受體并只結(jié)合非功能性受體。31.權(quán)利要求30的抗體，其中所述抗體適合通過檢測三磷酸腺苷(ATP)與受體結(jié)合中的變化而區(qū)分功能性P2X7受體和非功能性P2X7受體。32.權(quán)利要求30的抗體，其中所述抗體適合通過檢測P2X7受體中孔形成所必需的一或多個蛋白質(zhì)的結(jié)合中的變化而區(qū)分功能性P2X7受體和非功能性P2X7受體。33.權(quán)利要求30的抗體，其中所述抗體適合通過檢測在無結(jié)合的ATP的情況下暴露的受體的一或多個部分而區(qū)分功能性P2X7受體和非功能性P2X7受體。34.權(quán)利要求30的抗體，其中所述部分包括一P2X7單體。35.權(quán)利要求30-34任一項的抗體，其是多克隆抗體，單克隆抗體，重組抗體，人源化抗體或人抗體或其合適的片段。36.權(quán)利要求30-34任一項的抗體，其中所述受體是哺乳動物P2X7受體，所述抗體適合區(qū)分功能性受體和非功能性受體，所述功能性受體具有在第210氨基酸位的脯氨酸呈反式構(gòu)象的序列，所述非功能性受體具有在第210氨基酸位的脯氨酸呈順式構(gòu)象的序列。37.權(quán)利要求36的抗體，其是針對P2X7受體的一表位序列而產(chǎn)生的，所述表位序列是從Gly200至Cys216。38.權(quán)利要求30-34任一項的抗體，其中所述受體是P2X7受體，所述抗體適合區(qū)分功能性受體和非功能性受體，所述功能性受體具有在第199氨基酸位的脯氨酸呈反式構(gòu)象的序列，所述非功能性受體具有在第199氨基酸位的脯氨酸呈順式構(gòu)象的序列。39.權(quán)利要求30-37任一項的抗體，其中所述疾病或病癥選自前列腺癌，乳腺癌，皮膚癌，肺癌，子宮頸癌，子宮癌，胃癌，食管癌，膀胱癌，結(jié)腸癌和陰道癌，其它上皮細胞癌，惡性淋巴瘤，其它血癌，腸易激綜合征及病毒或其它病原微生物感染。40.權(quán)利要求39的抗體，其中所述病毒或病原微生物是HIV或者結(jié)核分枝桿菌。41.一個適合導(dǎo)致權(quán)利要求30-40任-項的抗體產(chǎn)生的表位。42.權(quán)利要求41的表位，其通過C末端Cys殘基利用化學交聯(lián)劑馬來酰亞氨基己?；?N-羥基琥珀酰亞胺(MCS)附著于白喉毒素，由此附著的表位肽的構(gòu)象具有一種穩(wěn)定的順式脯氨酸構(gòu)型。43.權(quán)利要求30-40任一項的抗體作為治療載體在治療患者所患疾病或病癥中的應(yīng)用，其通過針對在細胞表面上表達的異常或非功能性P2X7受體，同時不影響表達正常(功能性)受體的所有細胞而調(diào)節(jié)編程性細胞死亡。44.權(quán)利要求41或42的表位在導(dǎo)致權(quán)利要求30-40任一項的抗體產(chǎn)生中的應(yīng)用。45.一種治療或預(yù)防患者所患疾病或病癥的藥物組合物，所述組合物包含藥物有效量的權(quán)利要求30-40任一項的抗體或者引起這種有效量的抗體產(chǎn)生的一個表位，所述組合物能調(diào)節(jié)在表面上有異?；蚍枪δ苄訮2X7受體表達的細胞編程性死亡。46.一種治療或預(yù)防患者所患疾病或病癥的制劑，所述制劑包括一或多種適合調(diào)節(jié)在患者細胞或組織中控制ATP供應(yīng)于P2X7受體的ATPase或ATPDase表達的物質(zhì)。47.一種治療或預(yù)防患者所患疾病或病癥的方法，所述方法包括為患者施用一種制劑的步驟，所述制劑包含一或多種適合調(diào)節(jié)在患者細胞或組織中控制ATP供應(yīng)于P2X7受體的ATPase或ATPDase表達的物質(zhì)。48.權(quán)利要求46的制劑，其中所述疾病或病癥選自前列腺癌，乳腺癌，皮膚癌，肺癌，子宮頸癌，子宮癌，胃癌，食管癌，膀胱癌，結(jié)腸癌和陰道癌，其它上皮細胞癌，惡性淋巴瘤，其它血癌，腸易激綜合征及病毒或其它病原微生物感染。49.權(quán)利要求47的方法，其中所述疾病或病癥選自前列腺癌，乳腺癌，皮膚癌，肺癌，子宮頸癌，子宮癌，胃癌，食管癌，膀胱癌，結(jié)腸癌和陰道癌，其它上皮細胞癌，惡性淋巴瘤，其它血癌，腸易激綜合征及病毒或其它病原微生物感染。50.權(quán)利要求35-40任一項的抗體，其中所述抗體當用于在體內(nèi)診斷或治療時是人源化抗體或人抗體或其片段。51.權(quán)利要求50的抗體，當與一種放射標記組合時適于通過掃描方法檢測。52.權(quán)利要求51的抗體，其中所述掃描技術(shù)是正電子發(fā)射斷層掃描。53.權(quán)利要求50的抗體，當與一種熒光標記組合時適于在流式細胞計量術(shù)中應(yīng)用。54.權(quán)利要求50的抗體，當與一種基質(zhì)組合時適于比色測定。55.一種檢測非功能性P2X7受體的測試試劑盒，所述試劑盒包含權(quán)利要求1-15任一項的探針，及正常P2X7受體表達譜。56.一種檢測非功能性P2X7受體的測試試劑盒，所述試劑盒包含權(quán)利要求30-40任一項的抗體，及正常P2X7受體表達譜。57.一種檢測非功能性P2X7受體的測試試劑盒，所述試劑盒包含權(quán)利要求50-54任一項的抗體，及正常P2X7受體表達譜。58.權(quán)利要求56或57的測試試劑盒，其適合檢測血液樣品中的非功能性P2X7。59.權(quán)利要求46或48的制劑，其中ATPase和ATPDase選自CD39和CD73。60.權(quán)利要求46，48和59任一項的制劑，其中所述一或多種物質(zhì)是一或多種ATP類似物。61.一種治療或預(yù)防疾病或病癥的方法，所述方法包括使用權(quán)利要求30-40任一項的抗體。62.一種治療或預(yù)防疾病或病癥的方法，所述方法包括使用權(quán)利要求41或42的表位。63.一種治療或預(yù)防疾病或病癥的方法，所述方法包括使用權(quán)利要求45的藥物組合物。64.一種治療或預(yù)防疾病或病癥的方法，所述方法包括使用權(quán)利要求46或48的制劑。65.權(quán)利要求14的探針，其中所述表位是Val65-Lys81。66.權(quán)利要求30的抗體，其基本上如本發(fā)明實施例1-3任一所述抗體。67.一種治療或預(yù)防患者所患疾病或病癥的方法，其基本上如本發(fā)明實施例10或11所述方法。全文摘要本發(fā)明涉及廣泛的疾病及病癥，包括癌癥。本發(fā)明提供了檢測這種疾病或病癥的探針。所述探針能區(qū)分功能性P2X文檔編號C07K16/28GK1625565SQ02821433公開日2005年6月8日申請日期2002年9月3日優(yōu)先權(quán)日2001年9月3日發(fā)明者安格斯·吉德利-貝爾德,朱莉安·亞歷山大·巴登申請人:因特里特有限公司