專利名稱：四肽衍生物的晶體的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及作為藥物組合物中的活性成分有用的四肽衍生物的新型晶體及其制造方法。
背景技術(shù)：
下述式(I)表示的N2-(N，N-二甲基-L-纈氨?；?-N-[(1S，2R)-2-甲氧基-4-[(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-[(2-苯基乙基)氨基]丙基]-1-吡咯烷基]-1-[(S)-1-甲基丙基]-4-氧代丁基]-N-甲基-L-纈氨酰胺(以下稱為“TZT-1027”)是具有強(qiáng)效抗腫瘤作用的四肽衍生物，是期待用作抗癌劑等的物質(zhì)。
TZT-1027本身公開在例如PCT國際公開WO93/03054號小冊子中，其中記載了使用薄層色譜法和柱色譜法對TZT-1027的粗產(chǎn)物進(jìn)行精制，得到無定形(非晶形)粉末狀TZT-1027的內(nèi)容。另外，Chem.Pharm.Bull.，43(10)，1706-1718(1995)中，也記載了用快速色譜法和薄層色譜法處理粗產(chǎn)物，再用柱色譜法進(jìn)行精制，得到非晶形粉末狀TZT-1027的內(nèi)容。而且，在特開平7-2894號公報中，也公開了TZT-1027，在該文獻(xiàn)中也記載了用柱色譜法和薄層色譜法精制TZT-1027的粗產(chǎn)物，得到松軟的固狀TZT-1027的主旨。
如上所述，以前雖然對非晶形(非晶態(tài))的TZT-1027進(jìn)行了報告，但是沒有找到記載了晶體形態(tài)的TZT-1027的文獻(xiàn)。
一般而言，化合物為非晶形態(tài)的場合與晶體形態(tài)的場合相比，其精制操作煩雜，從穩(wěn)定性方面來看，多數(shù)情況下不充分，特別是作為藥物組合物的活性成分使用時，往往其純度不充分也會成為問題。而且，制成制劑時，化合物為非晶形態(tài)的場合，存在非晶形粉末易于飛揚(yáng)等問題，與化合物為晶體形態(tài)的場合相比，要求慎重操作。由于這些原因，將具有強(qiáng)效抗腫瘤作用的TZT-1027作為藥物組合物的活性成分使用時，與公知的非晶形態(tài)相比，希望是晶體形態(tài)。
本發(fā)明人為了使TZT-1027結(jié)晶化，進(jìn)行了各種嘗試，但由于TZT-1027是肽性化合物，因而結(jié)晶化非常困難，例如，通過使用醇類、鹵代烴類、腈類、酮類、有機(jī)酸類、水等溶劑進(jìn)行結(jié)晶化，不能得到TZT-1027的晶體。而且，使用異丙醚、四氫呋喃等醚類或正戊烷、正己烷、環(huán)己烷等烴類嘗試進(jìn)行了結(jié)晶化，但是也不能得到TZT-1027的晶體。
發(fā)明公開本發(fā)明人此次意外地發(fā)現(xiàn)通過用乙醚或乙酸乙酯的單一溶劑，或者酯類與烴類和/或醚類的組合構(gòu)成的混和溶劑處理未精制的TZT-1027或其鹽，能夠簡單地得到TZT-1027或其鹽的晶體，在世界上首次成功地將TZT-1027或其鹽作為晶體提供。
因而，本發(fā)明提供TZT-1027或其鹽的晶體。
根據(jù)本發(fā)明，通過對TZT-1027或其鹽進(jìn)行結(jié)晶化或重結(jié)晶這種簡單的精制操作，能夠以99％以上這一作為藥物充分的純度得到，而且，得到的晶體形態(tài)的TZT-1027或其鹽與非晶形態(tài)的相比，品質(zhì)上的偏差少，并且穩(wěn)定性優(yōu)良。


圖1是TZT-1027晶體的IR圖譜。
圖2是TZT-1027晶體的粉末X射線衍射圖。
TZT-1027具有強(qiáng)效的抗腫瘤作用，對正常細(xì)胞也有非常強(qiáng)的毒性，因此其精制操作和制劑化操作中要求密切注意，例如操作人員即使稍微暴露于TZT-1027中，也會存在侵害健康的危險性，因此在操作中必須十分注意。在以前采用色譜法進(jìn)行的精制操作以及使用非晶形態(tài)的原體進(jìn)行的制劑化操作中，操作人員暴露于TZT-1027的粉塵中的危險性非常高，而本發(fā)明提供的晶體形態(tài)的TZT-1027與非晶形態(tài)相比，精制操作簡單，粉塵的飛散少，制劑化操作容易，TZT-1027的操作性得以顯著改善。
根據(jù)使用X射線進(jìn)行晶體結(jié)構(gòu)解析的結(jié)果，可以判斷本發(fā)明的TZT-1027的晶體系是斜方晶系，具有a＝18.180、b＝24.419、c＝10.632表示的晶格常數(shù)。另外，在粉末X射線衍射圖中，本發(fā)明的TZT-1027的晶體在晶格面間隔(d)14.72、12.27、9.84、9.28、8.68、7.39、6.11、5.32、5.10、4.90、4.61、4.47和4.36埃處具有特征峰。其中，“特征峰”這一用語是指粉末X射線衍射圖中“比較強(qiáng)的峰”，在本說明書中，將下述表1中I/I0的值為90以上的峰作為特征峰例舉。
TZT-1027能夠以游離堿的形態(tài)結(jié)晶化，或者也可以根據(jù)需要，與無機(jī)酸或有機(jī)酸形成制藥學(xué)上允許的鹽后，進(jìn)行結(jié)晶化。作為用于形成鹽的無機(jī)酸，可以例舉鹽酸、氫溴酸、硝酸、硫酸、磷酸等，另外，作為有機(jī)酸，可以例舉醋酸、丙酸、馬來酸、富馬酸、丙二酸、琥珀酸、乳酸、蘋果酸、酒石酸、枸櫞酸、苯甲酸、甲磺酸等。
如上所述，本發(fā)明人使用乙醚或乙酸乙酯的單一溶劑、或者酯類與烴類和/或醚類的混合溶劑作為用于結(jié)晶化的溶劑，首次成功地獲得了TZT-1027的晶體，TZT-1027的晶體不僅可以通過從上述溶液結(jié)晶化的方法獲得，也可以通過從熔融體結(jié)晶化等方法獲得。
另外，在本說明書中，“結(jié)晶化”是指將晶體形態(tài)以外的化合物轉(zhuǎn)變成晶體形態(tài)的化合物的操作，另外，“重結(jié)晶”是指對結(jié)晶形態(tài)的化合物進(jìn)一步進(jìn)行精制得到晶體形態(tài)的化合物的操作。
作為從溶液結(jié)晶化的方法，可以例舉濃縮法、緩慢冷卻法、反應(yīng)法(擴(kuò)散法、電解法)、水熱生長法、熔劑法等。作為這些結(jié)晶化方法中能夠使用的溶劑，單一溶劑的場合，可以例舉乙醚或乙酸乙酯，混合溶劑的場合，可以例舉酯類與烴類和/或醚類的組合構(gòu)成的混合溶劑。其中，作為酯類，可以例舉乙酸乙酯、乙酸甲酯等，作為烴類，可以例舉正己烷、正庚烷、環(huán)己烷、甲苯、二甲苯等，作為醚類，可以例舉乙醚、異丙醚、四氫呋喃、二氧六環(huán)等。其中，作為混合溶劑，特別優(yōu)選乙酸乙酯/正戊烷、乙酸乙酯/正己烷以及乙酸乙酯/乙醚的組合。將溶劑組合使用時，各種溶劑的使用比例沒有特別的限定，酯類/烴類或醚類的使用比例一般在1/1～1/100的范圍內(nèi)較合適。
上述從溶液結(jié)晶化的方法中，通過將非晶體形態(tài)的TZT-1027在40℃附近加熱溶解于如上所述的溶劑，例如乙醚中，接著將該溶液冷卻或濃縮后冷卻，可以進(jìn)行結(jié)晶化。溶液中的TZT-1027的濃度優(yōu)選15～30重量％的程度，優(yōu)選冷卻至約0～約25℃的程度。另外，使用混合溶劑的場合，通過將非晶體狀態(tài)的TZT-1027在約40～77℃的溫度下溶解于例如乙酸乙酯等酯類溶劑中，然后相對于酯類溶劑在該溶液中加入0.5～5倍量的烴類溶劑，例如正戊烷、正己烷等，可以進(jìn)行結(jié)晶化。其中，將TZT-1027溶解于酯類溶劑得到的溶液的濃度優(yōu)選為10～40重量％，添加烴類溶劑時，優(yōu)選將液體溫度冷卻至0～30℃的程度。從而能夠在工業(yè)上有利地進(jìn)行TZT-1027的結(jié)晶化。
另外，作為從熔融體結(jié)晶化的方法，可以例舉正常凝固法(拉晶法、溫度梯度法、布里奇曼制單晶法)、區(qū)域熔融法(區(qū)域平均法、浮動區(qū)域法)、特殊生長法(VLS法、液相定向附晶生長法)等。
這樣得到的晶體在其純度不夠時，可以進(jìn)行重結(jié)晶。重結(jié)晶可以通過重復(fù)以上所述的結(jié)晶化方法，或者將上述結(jié)晶化方法適當(dāng)組合實施。
這樣得到的TZT-1027的晶體，特別是從溶液結(jié)晶化的場合，有時晶體中會含有結(jié)晶化或重結(jié)晶時使用的溶劑分子，因此這種情況下，使用本發(fā)明的晶體作為藥物組合物的活性成分時，有必要除去晶體中的溶劑分子。溶劑的除去可以通過例如將該晶體粉碎后減壓干燥進(jìn)行。因此，本發(fā)明的TZT-1027的晶體，除所謂的單晶以外，還包含能夠作為藥物組合物的活性成分有效使用的結(jié)晶性粉末的形態(tài)。
本發(fā)明的TZT-1027或其鹽的晶體作為藥物組合物的活性成分使用時，可以與制藥學(xué)上允許的制藥用添加劑一起，配制成固體形態(tài)(例如片劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、顆粒劑、散劑、細(xì)粒劑、丸劑、糖片等)、半固體形態(tài)(例如栓劑、軟膏等)或液體形態(tài)(例如注射劑、乳劑、懸濁液、酏劑、洗劑、噴霧劑等)的制劑形態(tài)后使用。作為制造上述制劑時可以使用的添加劑，例如淀粉、葡萄糖、蔗糖、乳糖、果糖、麥芽糖、甘露糖醇、山梨糖醇、環(huán)糊精、硅酸衍生物、甲基纖維素、羧甲基纖維素或其鹽、海藻酸鹽、明膠、聚乙烯基吡咯烷酮、碳酸鈣、碳酸氫鈉、碳酸鎂、滑石、硬脂酸鎂、阿拉伯膠、聚乙二醇、對羥基苯甲酸烷基酯、鯨蠟醇、糖漿、乙醇、丙二醇、凡士林、碳蠟、甘油、氯化鈉、亞硫酸鈉、磷酸鈉、枸櫞酸、乳酸、聚乳酸、聚乳酸-乙醇酸等。
上述制劑中的TZT-1027或其鹽的含量可以根據(jù)其劑型等改變，一般固體和半固體形態(tài)的場合，優(yōu)選以0.1～50重量％的范圍內(nèi)的濃度含有TZT-1027或其鹽，而液體形態(tài)的場合，優(yōu)選以0.05～10重量％的范圍內(nèi)的濃度含有TZT-1027或其鹽。
在本發(fā)明中，TZT-1027或其鹽的晶體作為抗腫瘤劑的活性成分使用時，特別優(yōu)選配制成注射用制劑或口服給藥用制劑的形態(tài)使用。
實施例以下，結(jié)合實施例更具體地說明本發(fā)明。
在以下的實施例中，熔點使用ヤマト熔點測定裝置(MP-21型)進(jìn)行測定。紅外吸收光譜使用Perkin-Elmer FT-IR spectrometer(1600 Series)，采用日本藥典一般試驗法漿糊法進(jìn)行測定。紫外吸收光譜使用Hitachi U-3210 spectrophotometer，采用日本藥典一般試驗法吸光度測定法對TZT-1027的0.01mol/L鹽酸-乙醇(95)溶液進(jìn)行測定。核磁共振光譜使用JEOL JNM-LA500 FT-NMRspectrometer，以四甲基硅烷(TMS)作為內(nèi)標(biāo)物，在重氫化氯仿中進(jìn)行測定。粉末X射線衍射使用MAC Science Powder X-ray Diffractionsystem(MXP3)進(jìn)行測定。旋光度使用JASCO DIP-140 digitalpolarimeter，利用層長100mm、鈉D射線對TZT-1027的乙醇(95)溶液進(jìn)行測定。晶體的X射線衍射數(shù)據(jù)使用Cu-Kα射線，采用四軸衍射計(RIGAKU AFC7R)測定，通過直接法確定初期位相，通過SHELXL-93使結(jié)構(gòu)精密化。
實施例1N2-(N，N-二甲基-L-纈氨酰基)-N-[(1S，2R)-2-甲氧基-4-[(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-[(2-苯基乙基)氨基]丙基]-1-吡咯烷基]-1-[(S)-1-甲基丙基]-4-氧代丁基]-N-甲基-L-纈氨酰胺(TZT-1027)晶體的制造按照Chem.Pharm.Bull.，43(10)，1706-1718(1995)的1718頁左欄20～26行記載的方法，在叔丁醇/水(9∶1)中，在5％鈀-碳催化劑的存在下，在氫氣環(huán)境下，使Dov-Val-Dil-Dap-OBzl脫苯甲基化，接著，在二甲基甲酰胺中，在氰基磷酸二乙酯和三乙胺的存在下，使之與β-苯乙胺反應(yīng)。將得到的TZT-1027的未精制物5.0g溶解于干燥乙醚20ml中，在室溫下攪拌約3小時。過濾收集析出的粗晶體，在其中加入乙酸乙酯25ml，在約40～60℃的溫度下使粗晶體完全溶解后，在約110℃的油浴上加熱濃縮至乙酸乙酯的餾出量達(dá)到約15ml的程度。將濃縮后的溶液在水浴中攪拌的同時緩慢冷卻至約30℃，接著，再繼續(xù)緩慢冷卻至浴溫達(dá)到10℃的同時，將正戊烷20ml分3次滴加。滴加后，在浴溫10℃下再攪拌30分鐘后，在室溫下放置30分鐘。過濾收集析出的晶體，用正戊烷/乙酸乙酯混合溶液(2∶1)9ml洗滌2次后，減壓干燥，得到TZT-1027的晶體4.8g(HPLC純度99.3％)。
熔點85-95℃1H-NMR、500MHz(CDCl3，δ)0.81(3H，t，J＝7.5Hz)，0.90-1.09(3Hx5，m)，1.21(3H，d，J＝7.0Hz)，1.67-1.78(2H，m)，1.89-1.95(2H，m)，1.99(1H，sextet，J＝6.6Hz)，2.
07(1H，sextet，J＝6.7Hz)，2.24(3Hx2，s)，2.35-2.40(2H，m)，2.43(1H，d，J＝6.4Hz)，2.
83(2H，t，J＝7.0Hz)，3.01(3H，s)，3.30(3H，s)，3.35(3H，s)，3.41-3.57(2H，m)，3.84(1H，dd，J＝8.1Hz，J＝2.3Hz)，4.05-4.08(1H，m)，4.12(1H，broad ddd)，4.77(1H，dd，J＝9.
2Hz，J＝6.7Hz)，6.48(1H，broad t)，6.87(1H，d，J＝9.2Hz)，7.16-7.31(5H，m)IR(ν，nujol)3330，3250，1640，1621，1090cm-1IR的光譜如圖1所示。
UVmax(HCl-C2H5OH)252.8nm，258.5nm，267.7nm處吸收極大[α]D20-38.4°[c＝0.5，乙醇(95)]粉末X射線衍射的數(shù)據(jù)如表1所示。
表1

粉末X射線衍射圖如圖2所示。
實施例2按照PCT國際公開WO93/03054號小冊子的實施例28中記載的方法，在二甲基甲酰胺中，在氰基磷酸二乙酯和三乙胺的存在下，使在二氯甲烷中用三氟乙酸將(3R，4S，5S)-4-[N-[(N，N-二甲基-L-纈氨?；?-L-纈氨酰基]-N-甲基氨基]-3-甲氧基-5-甲基庚酸叔丁酯(Dov-Val-Dil-OBut)脫保護(hù)基得到的化合物，以及用氯化氫/乙酸乙酯將(2S)-2-[(1’R，2’R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-[(2-苯基乙基)氨基]丙基]-1-(叔丁氧基羰基吡咯烷)(Boc-Dap-NHCH2CH2-Ph)脫保護(hù)基得到的化合物縮合。將得到的未精制物11.1g溶解于干燥乙醚48ml中，在室溫下攪拌約3小時。過濾收集析出的粗晶體，在其中加入乙酸乙酯20ml，在約50℃的溫度下使粗晶體完全溶解。將溶液在水浴中攪拌的同時緩慢冷卻至約30℃，接著再繼續(xù)緩慢冷卻至浴溫達(dá)到10℃的同時，將乙醚60ml分3次滴加。滴加后，在浴溫10℃下再攪拌30分鐘后，在室溫下放置30分鐘。過濾收集析出的晶體，用乙醚-乙酸乙酯混合溶液(3∶1)20ml洗滌2次后，減壓干燥，得到TZT-1027的晶體8.42g(HPLC純度99.2％)。
實施例3單晶結(jié)構(gòu)解析用晶體的制造將實施例1得到的TZT-1027的結(jié)晶性粉末2.0mg溶解于0.5mL的乙酸乙酯后，加入正戊烷0.5mL。將裝有該溶液的試樣管放入裝有正戊烷5mL的容器中并密閉。在保持于約0℃的冰箱中放置5天，得到適于單晶結(jié)構(gòu)解析的晶體。
單晶結(jié)構(gòu)解析的晶體數(shù)據(jù)如下述表2所示。
表2組成式 C39H67N5O6分子量 701.98晶體顏色 無色晶體外形 棱柱狀晶系 斜方晶系空間群 P212121晶格常數(shù) a＝18.180b＝24.419c＝10.632單位晶格的體積 V＝47193單位晶格中的分子數(shù) Z＝4晶體的密度(計算值) Dcalc＝1.089g/cm3R因子 R(F)＝0.050(I＞2σ(I))
權(quán)利要求
1.下述式(I)表示的N2-(N，N-二甲基-L-纈氨?；?-N-[(1S，2R)-2-甲氧基-4-[(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-[(2-苯基乙基)氨基]丙基]-1-吡咯烷基]-1-[(S)-1-甲基丙基]-4-氧代丁基]-N-甲基-L-纈氨酰胺或其鹽的晶體。
2.如權(quán)利要求1所述的晶體，在晶體的粉末X射線衍射圖中，晶格面間隔(d)14.72、12.27、9.84、9.28、8.68、7.39、6.11、5.32、5.10、4.90、4.61、4.47和4.36埃處具有特征峰。
3.如權(quán)利要求1所述的晶體，晶體為結(jié)晶性粉末的形態(tài)。
4.權(quán)利要求1所述的晶體的制造方法，其特征在于，用乙醚或乙酸乙酯的單一溶劑、或者酯類與烴類和/或醚類的組合構(gòu)成的混合溶劑，將非晶形態(tài)的N2-(N，N-二甲基-L-纈氨?；?-N-[(1S，2R)-2-甲氧基-4-[(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-[(2-苯基乙基)氨基]丙基]-1-吡咯烷基]-1-[(S)-1-甲基丙基]-4-氧代丁基]-N-甲基-L-纈氨酰胺或其鹽結(jié)晶化，接著根據(jù)需要進(jìn)行重結(jié)晶。
5.如權(quán)利要求4所述的方法，酯類為乙酸乙酯，烴類為正戊烷或正己烷，醚類為乙醚。
6.藥物組合物，含有權(quán)利要求1～3中任意一項所述的晶體以及制藥學(xué)上允許的制藥用添加劑。
7.如權(quán)利要求6所述的藥物組合物，是注射劑的形態(tài)。
8.如權(quán)利要求6所述的藥物組合物，是口服給藥用制劑的形態(tài)。
9.權(quán)利要求1～3中任意一項所述的晶體在腫瘤處理中的用途。
全文摘要
本發(fā)明提供具有強(qiáng)效抗腫瘤作用的四肽衍生物N
文檔編號C07K5/103GK1556701SQ0281852
公開日2004年12月22日 申請日期2002年9月19日 優(yōu)先權(quán)日2001年9月20日
發(fā)明者宮崎宏一, 慶野勝幸, 金田有弘, 南信義, 幸, 弘 申請人:帝國臟器制藥株式會社