專利名稱：新的扁桃酸衍生物及其作為凝血酶抑制劑的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新穎的可藥用化合物，特別是本身是和/或代謝成胰蛋白酶樣絲氨酸蛋白酶(尤其是凝血酶)的競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑的那些化合物，它們作為藥物的應(yīng)用，含有它們的藥物組合物及制備它們的合成方法。
背景技術(shù)：
血液凝結(jié)是止血(即，防止受傷血管中血液流失)和血栓形成(即，血管中形成血塊，有時(shí)會(huì)導(dǎo)致血管阻塞)中都涉及的一個(gè)關(guān)鍵過(guò)程。
凝血是一系列酶促反應(yīng)的綜合結(jié)果。這一系列反應(yīng)的最后步驟之一是酶原凝血酶原轉(zhuǎn)化成活性酶凝血酶。
已知凝血酶在凝血中起關(guān)鍵作用。它激活血小板，導(dǎo)致血小板聚結(jié)，將血纖蛋白原轉(zhuǎn)化成血纖蛋白單體，后者血發(fā)地聚合形成血纖蛋白聚合物，以及激活凝血因子XIII，它又將該聚合物交聯(lián)形成不溶性的血纖蛋白。另外，凝血酶還激活凝血因子V和VIII，導(dǎo)致由凝血酶原形成凝血酶的“正反饋”。
由于抑制血小板聚結(jié)和血纖蛋白的形成與交聯(lián)，可以預(yù)料凝血酶的有效抑制劑會(huì)顯示抗血栓形成活性。此外，可以預(yù)料通過(guò)有效地抑制正反饋機(jī)制，能夠增強(qiáng)抗血栓形成活性。
現(xiàn)有技術(shù)Claesson在Blood Coagul.Fibrinol.(1994)5，411中描敘了低分子量的凝血酶抑制劑的早期發(fā)展。
Blomb_ck等(在J.Clin.Lab.Invest.24，Suppl.107，59，(1969))報(bào)道了以位于血纖蛋白原Aα鏈裂解部位周圍的氨基酸序列為基礎(chǔ)的凝血酶抑制劑。在所討論的氨基酸序列中，這些作者提出三肽序列Phe-Val-Arg(P9-P2-P1，此后稱為P3-P2-P1序列)會(huì)是最有效的抑制劑。
美國(guó)專利4,346,078和國(guó)際專利申請(qǐng)WO 93/11152報(bào)道了以在P1位有一個(gè)α，ω-氨基烷基胍的二肽基衍生物為基礎(chǔ)的凝血酶抑制劑。還報(bào)道了結(jié)構(gòu)上相關(guān)的類似的二肽基衍生物。例如國(guó)際專利申請(qǐng)WO94/29336公開了在P1位帶有例如氨甲基苯甲脒、環(huán)形氨基烷基脒和環(huán)形氨基烷基胍的化合物(國(guó)際專利申請(qǐng)WO 97/23499公開了一些這類化合物的前藥)；歐洲專利申請(qǐng)0 648 780公開了在P1位帶有例如氨基烷基胍的化合物。
歐洲專利申請(qǐng)0 468 231、0 559 046和0 641 779報(bào)道了以也在P1位帶有環(huán)形氨基烷基胍(例如3-或4-氨甲基-1-脒基哌啶)的肽基衍生物為基礎(chǔ)的凝血酶抑制劑。
歐洲專利申請(qǐng)0 185 390最先公開了以在P1位帶有精氨醛的三肽基衍生物為基礎(chǔ)的凝血酶抑制劑。
近來(lái)報(bào)道了在P3位上改性的基于精氨醛的肽基衍生物。例如國(guó)際專利申請(qǐng)WO 93/18060公開了在P3位的羥基酸，歐洲專利申請(qǐng)0 526877公開了脫氨基酸，歐洲專利申請(qǐng)0 542 525公開了O-甲基扁桃酸。
基于P1位中親電子的酮的絲氨酸蛋白酶(例如凝血酶)抑制劑也是已知的。例如，歐洲專利申請(qǐng)0 195 212公開了在P1位的肽基α-酮酯和酰胺，歐洲專利申請(qǐng)0 362 002公開了氟烷基酰胺酮，歐洲專利申請(qǐng)0 364 344公開了α，β，δ-三酮基化合物，歐洲專利申請(qǐng)0 530167公開了精氨酸的α-烷氧基酮衍生物。
歐洲專利申請(qǐng)0 293 881報(bào)道了以精氨酸及其異硫脲鎓類似物的C終端烴基硼酸衍生物為基礎(chǔ)的結(jié)構(gòu)上不同的胰蛋白酶樣絲氨酸蛋白酶的其它抑制劑。
最近，在歐洲專利申請(qǐng)0 669 317和國(guó)際專利申請(qǐng)(WO 95/35309，WO 95/23609，WO 96/25426，WO 97/02284，WO 97/46577，WO 96/32110，WO 96/31504，WO 96/03374，WO 98/06740，WO 97/49404，WO 98/57932，WO 99/29664，WO 00/35869和WO 00/42059)中公開了基于肽基衍生物的凝血酶抑制劑。
特別是，WO 97/02284和WO 00/42059公開了在P3位帶有取代的扁桃酸的凝血酶抑制劑。
然而，仍然需要胰蛋白酶樣絲氨酸蛋白酶(例如凝血酶)的有效抑制劑。還需要化合物具有有利的藥物動(dòng)力學(xué)型式，并且對(duì)凝血酶的抑制是選擇性的，勝過(guò)對(duì)其它絲氨酸蛋白酶、特別是參與止血的蛋白酶的抑制。對(duì)于凝血酶具有競(jìng)爭(zhēng)性抑制活性的化合物預(yù)期特別適合作為抗凝血?jiǎng)?，因此可用于血栓形成及相關(guān)病癥的治療性處理。

發(fā)明內(nèi)容
根據(jù)本發(fā)明，提供了一種式I化合物或其可藥用的衍生物。
(即Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2，6-二氟))，“可藥用的衍生物”一詞包括可藥用的鹽(例如酸加成鹽)。
縮寫符號(hào)列在本說(shuō)明書的末尾。
式I化合物可以按照本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方法制備，例如利用下述的方法制備。
根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了一種制備式I化合物的方法，其中包括(1)式II化合物 與式III化合物
在偶聯(lián)劑(例如在DMF、EDC、DCC、HBTU、HATU、PYBOP或TBTU中的草酰氯)、合適的堿(例如吡啶、DMAP、TEA、2，4，6-三甲基吡啶或DIPEA)和合適的有機(jī)溶劑(例如二氯甲烷、乙腈、EtOAc或DMF)存在下偶合；(2)式IV化合物 與式V化合物 在例如上述方法(1)的條件下偶合；或(3)后文定義的式XVI的相應(yīng)化合物與合適的氨源(例如乙酸銨或氨氣)在本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的條件下反應(yīng)，例如通過(guò)亞氨酸乙酯中間體(通過(guò)式XVI化合物與HCl氣在乙醇中反應(yīng)形成)與氨氣在乙醇中反應(yīng)，或是在Tetrahedron Lett.40，7067(1999)中所述的條件下進(jìn)行反應(yīng)，上述文獻(xiàn)的公開內(nèi)容在本文中引用作為參考。
式II化合物可以用已知的和/或標(biāo)準(zhǔn)的方法得到。
例如，式II化合物可以通過(guò)式VI的醛
進(jìn)行以下反應(yīng)來(lái)制備(a)與式VII化合物R″CN VII其中R″代表H或(Ch3)3Si，在例如室溫或高溫(例如低于100℃)和合適的有機(jī)溶劑(例如氯仿或二氯乙烷)以及必要時(shí)合適的堿(例如TEA)和/或合適的催化劑體系(例如氯化芐銨或碘化鋅，或使用手性催化劑，如Chem.Rev.，(1999)，99，3649中所述)存在下反應(yīng)，隨后在本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的條件下水解(例如下文所述)；(b)與NaCN或KCN在例如NaHSO3和水存在下反應(yīng)，隨后水解；(c)與氯仿反應(yīng)，例如在高溫(例如高于室溫但低于100℃)和合適的有機(jī)溶劑(如氯仿)以及必要時(shí)合適的催化劑體系(例如氯化芐銨)存在下反應(yīng)，隨后水解；(d)與式VIII化合物反應(yīng) 其中M代表Mg或Li，隨后在本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的條件下氧化裂解(例如臭氧解或者鋨或釕催化的裂解)；或(e)與三(甲硫基)甲烷在本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的條件下反應(yīng)，隨后在例如HgO和HBF4存在下水解。
或者是，式II化合物可以通過(guò)式IX化合物
或其在仲羥基處任選保護(hù)的衍生物在合適的氧化劑(例如合適的自由基氧化劑(例如TEMPO)和合適的次氯酸鹽(例如次氯酸鈉)的組合)存在和本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的條件下進(jìn)行氧化來(lái)制備，例如在-10℃至室溫的溫度并于合適的溶劑(例如水、丙酮或其混合物)、合適的鹽(例如堿金屬鹵化物，如溴化鉀)及合適的堿(例如堿金屬碳酸鹽或碳酸氫鹽，如碳酸氫鈉)存在下進(jìn)行氧化。
對(duì)映異構(gòu)純形式的式II化合物(即，圍繞α-至CO2H基團(tuán)的碳原子的取代基有不同構(gòu)型的那些化合物)可以用對(duì)映特異性衍生轉(zhuǎn)化步驟分離。這可以利用例如酶促方法達(dá)到。這類酶促方法包括α-OH基團(tuán)在室溫至回流溫度(例如45-65℃)于合適的酶(例如脂肪酶PSAmano)、合適的酯(例如乙酸乙烯酯)及合適的溶劑(例如甲基叔丁基醚)存在下的酯交換。衍生形成的異構(gòu)體隨后可以用常規(guī)的分離方法(例如色譜法)與未反應(yīng)的異構(gòu)體分離。
在這樣一個(gè)衍生轉(zhuǎn)化步驟中加到式II化合物上的基團(tuán)可以在任何進(jìn)一步反應(yīng)之前或者在隨后的式1化合物合成中任何階段去除。這些另加的基團(tuán)可以用常規(guī)方法去除(例如，對(duì)于α-OH基團(tuán)的酯，在本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的條件下水解，例如在室溫至回流溫度于合適的堿(如NaOH)和合適的溶劑(如甲醇、水或其混合物)存在下水解)。
式III化合物可以通過(guò)氮雜環(huán)丁烷-2-羧酸與前面定義的式V化合物在本文中對(duì)于制備式I化合物所述的類似條件下偶合來(lái)制備。
式IV化合物可以通過(guò)前文定義的式II化合物與氮雜環(huán)丁烷-2-羧酸在例如對(duì)于制備式I化合物所述的類似條件下偶合來(lái)制備。
式VI化合物可以用已知的和/或標(biāo)準(zhǔn)的方法得到。例如它可用以下方法制備(1)式X化合物金屬化(其中金屬可以是例如堿金屬，如Li，或者最好是二價(jià)金屬，如Mg)
式中Hal代表選自Cl、Br和I的一個(gè)鹵原子，隨后與合適的甲?；?例如N，N-二甲基甲酰胺)在后文敘述的條件下反應(yīng)；(2)式XI化合物 在合適的還原劑(例如DIBAL-H)存在下還原；(3)式XII化合物 在合適的氧化劑(例如MnO2，氯鉻酸吡啶鎓，DMSO與草酰氯的組合，或SO3吡啶絡(luò)合物在DMSO中)存在下氧化。
式IX化合的可以通過(guò)相應(yīng)的式XIII化合物
在合適的二羥基化試劑(例如，提供OsO4的試劑或試劑混合物，如AD-mix-α，尤其是AD-mix-β)存在下進(jìn)行二羥基化來(lái)制備，反應(yīng)在本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的條件下進(jìn)行，例如在-10℃至室溫的溫度于合適的溶劑(例如水、叔丁醇或其混合物)存在下反應(yīng)。當(dāng)使用不對(duì)稱氧化劑如AD-mix-α或AD-mix-β時(shí)，可以用此方法制備圍繞著與伯和仲羥基連接的兩個(gè)C原子的基團(tuán)有特殊構(gòu)型(即，R或S構(gòu)型)的式IX化合物。
式XIII化合物可以通過(guò)前文所定義的式X化合物與合適的乙烯基陰離子源(例如三丁基乙烯基钖)在本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的條件下反應(yīng)來(lái)制備，例如在室溫至回流溫度(例如50℃)下于合適的溶劑(如甲苯)、合適的偶聯(lián)劑(如鈀(O)共配位絡(luò)合物，例如四(三苯膦)合鈀(O))及任選地合適催化劑(如2，6-二叔丁基-4-甲基苯酚)存下在反應(yīng)。
式V、VII、VIII、X、XI、XII化合物和氮雜環(huán)丁烷-2-羧酸或是可以由市場(chǎng)上買到，或是文獻(xiàn)中已知的，或者可以用與本文所述的類似方法或用常規(guī)的合成步驟，按照標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)，采用合適的試劑和反應(yīng)條件，由容易得到的起始物制備。式XVI化合物可以用后文所述的方法得到。
式I、II、III、IV、V、VI、IX、X、XI、XII和XIII化合物中的苯基環(huán)上的取代基可以用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的技術(shù)，利用標(biāo)準(zhǔn)的官能基互變反應(yīng)，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方法，由容易得到的起始物出發(fā)，使用合適的試劑和反應(yīng)條件引入。
例如式I、II、IV、VI、X、XI和XII化合物可以由與這些化合物相應(yīng)，但其中用-OH基團(tuán)代替該-OCHF2基團(tuán)的化合物(以后稱為“相關(guān)的酚前體化合物”)來(lái)制備，例如這些相關(guān)的酚前體化合物與合適的氟化鹵化烴(如ClCHF2)在室溫或更高溫度(例如在回流下)于合適的堿(例如叔丁醇鉀、KOH或NaOH，在水溶液中)和合適的有機(jī)溶劑(例如THF、氯仿或異丙醇)存在下的反應(yīng)，如后文所述。
專業(yè)人員會(huì)理解，這些官能基轉(zhuǎn)化反應(yīng)也可以在式II、IV、VI、X、XI和XII化合物全合成的早期階段進(jìn)行(即，在相關(guān)的酚前體化合物的合適前體上進(jìn)行)。相關(guān)的酚前體化合物或是市場(chǎng)上可得到的，或是文獻(xiàn)中已知的，或者是可以用與本文所述的類似方法或常規(guī)的合成步驟，按照標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)，由容易得到的起始物出發(fā)，使用合適的試劑和反應(yīng)條件得到。例如，相關(guān)的酚前體化合物可以通過(guò)相應(yīng)的被保護(hù)酚(其中保護(hù)基團(tuán)可以是例如甲基、烯丙基、芐基或叔丁基)在標(biāo)準(zhǔn)條件下去保護(hù)得到。
式I化合物可以用常規(guī)方法由其反應(yīng)混合物中分離。
根據(jù)本發(fā)明，可藥用的式I化合物衍生物也包括“被保護(hù)的”式I化合物的衍生物和/或作為式I化合物的前藥起作用的化合物。
可以提到的可作為式I化合物的前藥起作用的化合物包括式Ia化合物及其可藥用的衍生物， 其中R1代表OR2或C(O)OR3；R2代表氫，C1-10烷基，C1-3烷基芳基或C1-3烷氧基芳基(后兩個(gè)基團(tuán)的烷基部分可任選地被一個(gè)或多個(gè)氧原子間斷，其芳基部分可任選地被選自鹵素、苯基、甲基或甲氧基的一個(gè)或多個(gè)取代基取代，后三個(gè)基團(tuán)還可任選地被一個(gè)或多個(gè)鹵原子取代基取代)；R3代表C1-10烷基(它可任選地被一個(gè)或多個(gè)氧原子間斷)或者C1-3烷芳基或C1-3烷氧基芳基(后兩個(gè)基團(tuán)的烷基部分可任選地被一個(gè)或多個(gè)氧原子間斷，后兩個(gè)基團(tuán)的芳基部分可任選地被選自鹵素、苯基、甲基或甲氧基的一個(gè)或多個(gè)取代基取代，后三個(gè)基團(tuán)還可被一個(gè)或多個(gè)鹵原子取代基取代)。
術(shù)語(yǔ)式Ia化合物的“可藥用衍生物”包括可藥用的鹽(例如酸加成鹽)。
R2和R3可以代表的烷氧基芳基包括用氧原子連接的烷基和芳基。烷芳基和烷氧基芳基是通過(guò)這些基團(tuán)的烷基部分與分子的其余部分相連，該烷基部分可以是(如果有充分?jǐn)?shù)目(即3個(gè))的碳原子)支化鏈。R2和R3可以代表或者可被其取代的烷芳基和烷氧基芳基的芳基部分包括碳環(huán)和雜環(huán)的芳族基團(tuán)，例如苯基、萘基、吡啶基、噁唑基、噁異唑基、噻二唑基、吲哚基和苯并呋喃基等。
R2和R3可以代表的烷基可以是直鏈的，或者在有足夠數(shù)目(即，最少3個(gè))碳原子的情形，可以是支鏈和/或環(huán)狀的。另外，在有足夠數(shù)目(即，最少4個(gè))碳原子的情形，這些烷基還可以是部分環(huán)狀/無(wú)環(huán)的。這些烷基也可以是飽和的，或者在有足夠數(shù)目(即，最少2個(gè))碳原子的情形，是不飽和的。
R2和R3可以被其取代的鹵原子包括氟、氯、溴和碘。
當(dāng)R1代表C(O)OR3時(shí)，優(yōu)選的R3基團(tuán)包括(a)直鏈、支鏈或環(huán)狀的C3-6烷基，例如C4-6環(huán)烷基；(b)C1-2烷基芳基，例如芐基，它可如前所述地被任選取代。
優(yōu)選的式Ia化合物包括其中R1代表OR2的化合物。
當(dāng)R1代表OR2時(shí)，優(yōu)選的R2基團(tuán)包括(a)H；(b)未被取代的直鏈、支鏈或環(huán)形的C1-8(例如C1-6)烷基，如直鏈C1-3烷基(例如乙基，尤其是甲基)，支鏈的C3-8烷基(例如異丙基、異丁基或4-庚基)或環(huán)形的C4-7烷基(例如C4-7環(huán)烷基，例如環(huán)丁基或環(huán)己基)；(c)C1-3烷氧基苯基(例如C2烷氧基苯基)，該苯基可任選地被一個(gè)或多個(gè)前文所述的取代基(例如三氟甲基)取代；(d)C1-2烷基芳基(例如甲基芳基)，其中的芳基是苯基、吡啶基、噁唑基或異噁唑基，后三個(gè)基團(tuán)可任選地被一個(gè)或多個(gè)前面所述的取代基(例如甲氧基、甲基、溴和/或氯)取代。
優(yōu)選的式Ia化合物包括其中R1代表OR2，R2代表直鏈、支鏈(合適時(shí))或環(huán)形(合適時(shí))的C1-6(例如C1-4)烷基，例如甲基、乙基、正丙基、異丙基或環(huán)丁基的那些化合物。
式Ia化合物可以利用以下的一種或多種方法制備(a)前面定義的相應(yīng)的式II化合物與式XIV化合物在與此前對(duì)式I化合物的合成所述的類似條件下反應(yīng)
其中R1同前面的定義；(b)前面定義的相應(yīng)的式IV化合物與式XV化合物在與此前對(duì)式I化合物的合成所述的類似條件下反應(yīng) 其中R1同前面的定義；(c)對(duì)于其中R1代表OH的式Ia化合物，相應(yīng)的式XVI化合物 與羥胺在本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的條件下反應(yīng)；(d)對(duì)于其中R1代表OR2的式Ia化合物，相應(yīng)的式I化合物的被保護(hù)的衍生物，例如式XVII化合物
其中Ra代表例如-CH2CH2-Si(CH3)3或芐基，或其互變異構(gòu)體，與式XVIII化合物R2ONH2XVIII其中R2定義同上，或與其酸加成鹽，例如在室溫至回流溫度和合適的有機(jī)溶劑(如THF、CH3CN、DMF或DMSO)存在下反應(yīng)，隨后在本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的條件下除去該-C(O)ORa基團(tuán)(例如通過(guò)與QF或TFA反應(yīng)(如后文所述))；(e)對(duì)于其中R1代表OH的式Ia化合物，使前面定義的其中Ra代表芐基的式XVII化合物與羥胺或其酸加成鹽，在本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的條件下反應(yīng)；(f)對(duì)于其中R1代表COOR3的式Ia化合物，使此前定義的相應(yīng)的式I化合物與式XIX化合物L(fēng)1COOR3XIX在室溫下或室溫附近于合適的堿(例如NaOH，如在水溶液中)和合適的有機(jī)溶劑(例如二氯甲烷)存在下反應(yīng)，式XIX中L′代表一個(gè)合適的離去基團(tuán)，例如鹵素或硝基苯基(例如4-硝基苯基)，R3同前面的定義；或(g)對(duì)于其中R1代表OCH3或OCH2CH3的式Ia化合物，使其中R1代表OH的式Ia化合物分別與硫酸二甲酯或硫酸二乙酯反應(yīng)，例如在合適的堿(例如堿金屬氫氧化物，如KOH(例如在50wt％水溶液中))和合適的催化劑(例如季銨鹵化物，如氯化芐基在三甲銨(例如在10wt％的CH2Cl2或THF溶液中))存在下反應(yīng)。
式XVI化合物可以通過(guò)如上定義的相應(yīng)的式II化合物與式XX化合物 在與此前對(duì)式I化合物的合成所述相似的條件下反應(yīng)制得。
式XVI化合物也可以通過(guò)如上定義的相應(yīng)的式IV化合物與式XXI化合物 在與此前對(duì)式I化合物的合成所述相似的條件下反應(yīng)制備。
式XVII化合物可以通過(guò)如上定義的相應(yīng)的式II化合物與式XXII化合物 其中Ra的定義同前，在與此前對(duì)式I化合物的合成所述的相似條件下反應(yīng)制備。
或者是，式XVII化合物可以通過(guò)相應(yīng)的式I化合物與其中用以上定義的Ra代表R3的相應(yīng)的式XIX化合物在以上對(duì)于式Ia化合物的制備所述相似的條件下反應(yīng)制備。
式XIV和XXII化合物可以通過(guò)氮雜環(huán)丁烷-2-羧酸分別與前面定義的式XV化合物或以下的式XXIII化合物在此前對(duì)于式I化合物的合成所述的類似條件下反應(yīng)制備 其中Ra的定義同前。
化合物XV、XVIII、XIX、XX、XXI和XXIII或是市場(chǎng)上可購(gòu)得的，文獻(xiàn)中已知的，或者可以通過(guò)與本文所述的類似方法或利用常規(guī)的合成步驟，按照標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)，由容易得到的起始物出發(fā)，利用合適的試劑和反應(yīng)條件得到。例如，式XX化合物可以通過(guò)相應(yīng)的式XXI化合物與氮雜環(huán)丁烷-2-羧酸在與此前所述相類似的條件下反應(yīng)制備。
如上定義的式I和Ia化合物及各自的衍生物，以后被稱作“本發(fā)明化合物”。
本發(fā)明化合物可能呈現(xiàn)互變異構(gòu)現(xiàn)象。所有的互變異構(gòu)形式及其混合物均包括在本發(fā)明的范圍之內(nèi)?？梢蕴岬降木唧w的互變異構(gòu)形式包括與式Ia化合物中脒官能團(tuán)的雙鍵位置及取代基R1的位置有關(guān)聯(lián)的互變異構(gòu)形式。
本發(fā)明化合物還包含兩個(gè)或多個(gè)不對(duì)稱碳原子，因此可以表現(xiàn)出旋光和/或非對(duì)映異構(gòu)現(xiàn)象。非對(duì)映異構(gòu)體可以用常規(guī)技術(shù)例如色譜法分離。各種立體異構(gòu)物可以通過(guò)用常規(guī)技術(shù)，例如HPLC技術(shù)，將本發(fā)明化合物的外消旋物或其它混合物分離得到。或者是，所需要的旋光異構(gòu)體可以通過(guò)適當(dāng)?shù)男庑云鹗嘉镌诓灰鹜庀虿钕虍悩?gòu)化的條件下進(jìn)行反應(yīng)得到，或者通過(guò)例如用純手性酸衍生轉(zhuǎn)化，然后用常規(guī)方法(例如HPLC，在硅膠上層析)分離非對(duì)映異構(gòu)的衍生物得到。所有的立體異構(gòu)物均包括在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。
優(yōu)選的本發(fā)明化合物是其中的片段
處于S構(gòu)型的化合物。
優(yōu)選的本發(fā)明化合物還包括其中的結(jié)構(gòu)片段 處于R構(gòu)型的化合物。
以上兩個(gè)片段中鍵上的波紋線代表該片段的鍵位置。
于是，本發(fā)明的優(yōu)選化合物包括Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(2，6-二氟)；Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(2，6-二氟)(OMe)；和Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(2，6-二氟)(OH).
本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該理解，在以上和此后所述的方法中，中間體化合物的官能基可能需要用保護(hù)基團(tuán)保護(hù)。
希望加以保護(hù)的官能基包括羥基、氨基和羧酸。適合羥基的保護(hù)基包括任選取代和/或不飽和的烷基(例如甲基、烯丙基、芐基或叔丁基)、三烷基甲硅烷基或二芳基烷基甲硅烷基(例如叔丁基二甲基甲硅烷基、叔丁基二苯基甲硅烷基或三甲基甲硅烷基)和四氫吡喃基。適合羧酸的保護(hù)基包括C1-6烷基或芐基酯。適合氨基和脒基的保護(hù)基包括叔丁氧羰基、芐氧羰基或2-三甲硅烷基乙氧羰基(TeOC)。脒基氮也可以用羥基或烷氧基保護(hù)，并且可以是單保護(hù)或雙保護(hù)。
官能基的保護(hù)和去保護(hù)可以在偶合反應(yīng)之前或之后進(jìn)行，或者在上述反應(yīng)方案中任何其它反應(yīng)之前或之后進(jìn)行。
保護(hù)基團(tuán)可以按照本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的和下文敘述的方法除去。
本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該理解，為了以另一種方式或在某些情形以更方便的方式得到本發(fā)明化合物，上述的各個(gè)方法步驟可以以不同的次序進(jìn)行，和/或各個(gè)反應(yīng)可以在總反應(yīng)路線中的不同階段完成(即，取代基的加入和/或化學(xué)轉(zhuǎn)化可以在與此前就特定反應(yīng)所述的不同的中間體上進(jìn)行)。這可以使得保護(hù)基團(tuán)的需要取消或成為必要。
涉及的化學(xué)反應(yīng)的類型將決定保護(hù)基團(tuán)的需要和類型以及完成合成的順序。
在J.W.F.McOmie編著的“Protective Groups in OrganicChemistry”，plenum press(1973)和T.W.Greene & P.G.M.Wutz，“Protective Groups in Organic Synthesis”第3版，Wiley-Interscience(1999)中對(duì)保護(hù)基的使用作了充分說(shuō)明。
被保護(hù)的本發(fā)明化合物的衍生物可以用標(biāo)準(zhǔn)的去保護(hù)方法(例如氫化)化學(xué)轉(zhuǎn)化成本發(fā)明化合物。專業(yè)人員也會(huì)理解，某些式Ia化合物也可被稱為式I化合物的“被保護(hù)的衍生物”。
醫(yī)學(xué)和藥學(xué)應(yīng)用本發(fā)明化合物本身可具有藥理活性。可以具有這種活性的本發(fā)明化合物包括但不限于式I化合物。
然而，本發(fā)明的其它化合物(包括式Ia化合物)可能不具有這種活性，但可以非腸道給藥或口服，并且隨后在體內(nèi)代謝形成具有藥理學(xué)活性的化合物(包括但不限于相應(yīng)的式I化合物)。這些化合物(也包括可能具有一些藥理活性，但該活性明顯低于它們所代謝形成的“活性”化合物的那些化合物)因此可被稱作活性化合物“前藥”。
因此，本發(fā)明化合物是適用的，因?yàn)樗鼈兙哂兴幚砘钚院?或口服或非腸道給藥后在體內(nèi)被代謝成具有藥理活性的化合物。本發(fā)明化合物因此被表示成藥物。
根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了本發(fā)明化合物作為藥物使用。
特別是，本發(fā)明化合物本身是有效的凝血酶抑制劑和/或(例如在前藥的情形)在服用后代謝形成有效的凝血酶抑制劑，例如在下述試驗(yàn)中可以顯示的。
所謂“凝血酶抑制劑的前藥”，包括在口服或非腸道給藥后(例如見后面試驗(yàn)E)，或在肝微粒體存在下培養(yǎng)后(例如見后面試驗(yàn)G)，于預(yù)定的時(shí)間(例如約1小時(shí))內(nèi)形成實(shí)驗(yàn)上可檢測(cè)數(shù)量的凝血酶抑制劑的那些化合物。
因此預(yù)期本發(fā)明化合物可用于需要抑制凝血酶的病癥和/或需要抗凝血治療的病癥，包括治療和/或預(yù)防動(dòng)物(包括人)的血液和/或組織中的血栓形成和血凝固性過(guò)高。已知血凝固性過(guò)高可以導(dǎo)致血栓-栓塞疾病?？梢蕴岬降呐c血凝固性過(guò)高和血栓-栓塞疾病有關(guān)的病癥包括遺傳性或獲得性活化蛋白C抵抗，例如V基因突變(FV Leiden)，以及抗凝血酶III、蛋白C、蛋白S、肝素輔因子II中的遺傳性或獲得性缺陷。已知與血凝固性過(guò)高和血栓-栓塞疾病有關(guān)的其它癥狀包括循環(huán)性抗磷脂抗體(狼瘡抗凝物)、高半胱氨酸血、肝素誘導(dǎo)的血小板減少和血纖蛋白溶解缺陷，以及凝血綜合癥(例如彌漫性血管內(nèi)凝血(DLC))和一般性血管傷害(例如由于手術(shù))。
存在不良的凝血酶過(guò)剩但沒(méi)有血凝固性過(guò)高的跡象的癥狀治療，例如在神經(jīng)變性疾病如阿爾茨海默病的情形。
值得提出的具體的疾病狀態(tài)包括治療和/或預(yù)防性治療靜脈血栓形成(例如DVT)和肺栓塞，動(dòng)脈血栓形成(例如在心肌梗死、不穩(wěn)定性心絞痛、基于血栓形成的中風(fēng)和外周動(dòng)脈血栓形成)，以及常常源自心房纖顫期間的心房(例如非瓣膜病心房纖顫)或源自跨壁心肌梗塞后的左心室，或由充血性心力衰竭引起的系統(tǒng)性栓塞；預(yù)防在血栓溶解、經(jīng)皮腔內(nèi)血管形成術(shù)(PTA)和冠狀動(dòng)脈旁通術(shù)之后重新阻塞(即，血栓形成)；防止顯微手術(shù)和一般性血管手術(shù)后的血栓重新形成。
其它適應(yīng)癥包括由細(xì)菌、多發(fā)性腫瘤、中毒或其它任何機(jī)制引起的彌漫性血管內(nèi)凝血的治療和/或預(yù)防性治療；血液與體內(nèi)外來(lái)表面(如血管移植物、血管腔內(nèi)支架、血管插管、機(jī)械和生物的假體瓣膜或其它任何醫(yī)學(xué)裝置)接觸時(shí)的抗凝血處理；以及當(dāng)血液與體外醫(yī)學(xué)裝置例如在使用心肺機(jī)的心血管手術(shù)期間或血液透析期間接觸時(shí)的抗凝血處理；自發(fā)性和成人呼吸窘迫綜合癥、放療和化療后的肺纖維化、膿毒性休克、敗血癥、炎性響應(yīng)(包括但不限于浮腫)、急性和慢性動(dòng)脈粥樣硬化(例如冠狀動(dòng)脈病和動(dòng)脈粥樣硬化斑形成)、腦血管病、腦梗塞、腦血栓形成、腦栓塞、外周動(dòng)脈病、局部缺血、心絞痛(包括不穩(wěn)定性心絞痛)、再輸注損傷、經(jīng)皮腔內(nèi)血管形成術(shù)(PTA)和冠狀動(dòng)脈旁通手術(shù)后的再狹窄的治療和/或預(yù)防性治療。
抑制胰蛋白酶和/或凝血酶的本發(fā)明化合物也可用于治療胰腺炎。
因此本發(fā)明化合物適應(yīng)這些病癥的治療和/或預(yù)防性治療。
根據(jù)本發(fā)明的又一方面，提供了一種治療需要抑制凝血酶的病癥的方法，該方法包括對(duì)患有或容易感染這些病癥的人施用治療有效量的本發(fā)明化合物。
本發(fā)明化合物通常是以在可藥用劑型中含有本發(fā)明化合物的藥物制劑的形式，口服、靜脈內(nèi)、皮下、經(jīng)頰、經(jīng)直腸、經(jīng)皮、經(jīng)鼻、經(jīng)氣管、經(jīng)支氣管以及任何其它的非腸道途徑或以吸入方式給藥。
根據(jù)要治療的疾病和患者以及給藥途徑，所述組合物可以以不同劑量給藥。
本發(fā)明化合物也可以與具有不同作用機(jī)制的任何抗血栓劑結(jié)合和/或共同服用，這包括例如以下藥劑抗血小板劑乙酰水楊酸、噻氯匹定和氯吡格雷；凝血噁烷受體和/或合成酶抑制劑；血纖蛋白原受體拮抗劑；前列腺素模擬物；磷酸二酯酶抑制劑；ADP-受體(P2T)拮抗劑；和羧肽酶U(CPU)的抑制劑。
本發(fā)明化合物還可以與溶血栓藥物結(jié)合和/或共同服用，例如一種或多種組織血纖蛋白溶酶原激活物(天然的、重組的或改性的)、鍵激酶、尿激酶、尿激酶原、苯甲醚化纖溶酶原激活物絡(luò)合物(APSAC)、動(dòng)物唾腺纖溶酶原激活物等，用以治療血栓形成病，特別是心肌梗死。
根據(jù)本發(fā)明的又一方面，提供了一種藥物制劑，其中包含一種本發(fā)明的化合物和與其混合的可藥用的輔劑、稀釋劑或載體。
在人類治療中本發(fā)明化合物的合適日劑量是口服時(shí)每Kg體重約0.001-100mg，非腸道給藥時(shí)每Kg體重0.001-50mg，這不包括任何酸反離子的重量。
為避免混淆，這里所說(shuō)的術(shù)語(yǔ)“治療”包括治療性和/或預(yù)防性治療。
本發(fā)明化合物的優(yōu)點(diǎn)是它們比現(xiàn)有技術(shù)中已知的化合物可以更有效力、毒性更小、作用時(shí)間長(zhǎng)、活性范圍更寬、效能更強(qiáng)、副作用小、更易吸收和/或有更好的藥動(dòng)力學(xué)型式(即，較高的口服生物利用度和/或較低的清除率)，以及/或具有其它有用的藥理的、物理的或化學(xué)性能。本發(fā)明化合物可能具有的另一優(yōu)點(diǎn)是它們的服藥頻率可以少于現(xiàn)有技術(shù)中已知的化合物。
生物試驗(yàn)試驗(yàn)A凝血酶凝血時(shí)間(TT)的測(cè)定將抑制劑溶液(25μl)與血漿(25μl)一起培養(yǎng)3分鐘，然后加入在pH 7.4的緩沖溶液中的人凝血酶(T6769；Sigma Chem.Co或Hematologic Technologies)(25μl，4.0NIH單位/mL)，在自動(dòng)裝置(KC10，Amelung)中測(cè)定凝血時(shí)間。
凝血酶凝血時(shí)間(TT)表示成絕對(duì)值(秒)及沒(méi)有抑制劑時(shí)的TT(TT0)與有抑制劑時(shí)的TT(TTi)之比。將后一比值(范圍1至0)對(duì)抑制劑濃度(換算成對(duì)數(shù))畫圖，按以下方程擬合成S形劑量一響應(yīng)曲線y＝a/[1+(x/IC50)5]其中a＝最大值范圍，即1；S＝劑量響應(yīng)曲線的斜率；I50＝使凝血時(shí)間加倍時(shí)的抑制劑濃度。此計(jì)算在一臺(tái)個(gè)人計(jì)算機(jī)上利用軟件程序GraFit Version 3進(jìn)行，設(shè)定方程等于在0開始，定義終點(diǎn)＝1(Erithacus Software，Robin Leatherbarrow，Imperial Collegeof Science，London，UK)。
試驗(yàn)B利用一種自動(dòng)操縱的顯色試驗(yàn)測(cè)定對(duì)凝血酶的抑制利用顯色底物法在一臺(tái)plato 3300自動(dòng)操縱微板處理機(jī)(RosysAG，CH-8634 Hombrechtikoh，Switzerland)中用96孔半體積微量滴板(Costar，Cambridge，MA，USA；Cat No 3690)測(cè)定凝血酶抑制劑效力。將試驗(yàn)物在DMSO(72μL)中的貯備溶液(0.1-1mmol/L)用DMSO系列稀釋1∶3(24+48μL)以得到不同的濃度，將其作為試驗(yàn)中的分析樣品。2μL的試驗(yàn)樣品用124μL的試驗(yàn)緩沖液稀釋，加入12μL在試驗(yàn)緩沖液中的顯色底物溶液(S-2366，Chromogenix，M_lndal，Sweden)最后加入12μL在試驗(yàn)緩沖液中的α-凝血酶溶液(人類α-凝血酶，Sigma Chemical Co.或HematologicTechnologies)，將樣品混合。最后的試驗(yàn)濃度是試驗(yàn)物0.00068-13.3μmol/L，S-2366 0.30μmol/L，α-凝血酶0.020NIHU/mL。使用在37℃培養(yǎng)40分鐘期間的線性吸收增量，與不加抑制劑的空白相比，來(lái)計(jì)算試驗(yàn)化合物的抑制百分?jǐn)?shù)。由對(duì)數(shù)濃度～抑制百分?jǐn)?shù)(％)曲線計(jì)算出與造成凝血酶活性抑制50％的抑制劑濃度對(duì)應(yīng)的IC50-自動(dòng)測(cè)定值。
試驗(yàn)C測(cè)定對(duì)人凝血酶的抑制常數(shù)KiKi測(cè)定是在37℃于一臺(tái)Cobas Bio離心分析儀(Roche，Basel，Switzerland)上用顯色底物法進(jìn)行。在人類α-凝血酶與不同濃度的試驗(yàn)化合物一起培養(yǎng)后，在三個(gè)不同的底物濃度測(cè)量405處光吸收的變化，確定殘余的酶活性。
將試驗(yàn)化合物溶液(100μL，通常是在含10g/L的BSA的緩沖液或鹽水中)與200μL的人類α-凝血酶(Sigma Chemical Co)在含BSA(10g/L)的試驗(yàn)緩沖液(0.05mol/L Tris-HCl pH7.4，用NaCl調(diào)節(jié)至離子強(qiáng)度0.15)中混合，在Cobas Bio上作為樣品分析。取60μL樣品和20μL水加入到在試驗(yàn)緩沖液中的320μL底物S-2238(Chromogenix AB，M_lndal，Sweden)中，監(jiān)測(cè)吸光度的變化(ΔA/min)。S-2238的最終濃度為16、24和50μmol/L，凝血酶為0.125NIHU/mL。
用穩(wěn)態(tài)反應(yīng)速率構(gòu)成Dixon圖，即，抑制劑濃度對(duì)1/(ΔA/min)的圖。對(duì)于可逆的競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑，不同底物濃度的數(shù)據(jù)點(diǎn)通常形成截距在x＝-Ki處的直線。
試驗(yàn)D測(cè)定活化部分凝血活酶時(shí)間(APTT)用Stago制造的試劑PTT Automated 5在收集的正常人檸檬酸化血漿中測(cè)定APTT。向血漿中加入抑制劑(90μL血漿加10μL抑制劑溶液)并用該APTT試劑培養(yǎng)3分鐘，隨后加100μL氯化鈣溶液(0.025M)，按照試劑制造商的說(shuō)明利用凝血分析儀KC10(Amelung)測(cè)定APTT。
凝血時(shí)間表示成絕對(duì)值(秒)及不加抑制劑時(shí)的APTT(APTT0)與加抑制劑時(shí)的APTT(APTTi)之比。后一比值(范圍1至0)對(duì)抑制劑濃度(換算成對(duì)數(shù))作圖，按以下方程擬合成劑量-響應(yīng)曲線y＝a/[1+(x/IC50)5]其中a＝最大值范圍，即1；s＝劑量響應(yīng)曲線的斜率；I50＝使凝血時(shí)間加倍的抑制劑濃度。計(jì)算是在個(gè)人電腦上用軟件程序GraFitVersion 3進(jìn)行，設(shè)定方程等于在0開始，定義終點(diǎn)＝1(ErithacusSoftware，Robin Leatherbarrow，Imperial College of Science，London，UK)。IC50APTT定義為使活化部分凝血活酶時(shí)間加倍的人血漿中的抑制劑濃度。
試驗(yàn)E活體外測(cè)定凝血酶時(shí)間在意識(shí)清醒的大鼠中檢驗(yàn)口服或非腸道施用溶于乙醇SolutolK∶水(5∶5∶90)中的本發(fā)明化合物后對(duì)凝血酶的抑制作用，所述大鼠在實(shí)驗(yàn)前的1或2天裝上由頸動(dòng)脈取血樣的插管。在實(shí)驗(yàn)當(dāng)天于服藥后的固定時(shí)間將血樣抽取到含1份檸檬酸鈉溶液(每升0.130mol)和9份血的塑料管中。將該管離心以得到貧血小板血漿。
將50μL血漿樣品用100μL冷乙腈沉淀。樣品在4000rpm離心10分鐘。將75μL清液用75μL 0.2％甲酸稀釋，10μL的形成溶液用LC-MS/MS分析，用標(biāo)準(zhǔn)曲線確定凝血酶抑制劑的濃度。
試驗(yàn)F測(cè)定大鼠中血槳清除率血漿清除率在雄性Sprague Dawley大鼠中的測(cè)定。將化合物溶于水中，以4μmol/Kg的劑量皮下快速濃注給藥。給藥后以最高5小時(shí)的頻度間隔收集血樣。將血樣離心使血漿與血細(xì)胞分離并轉(zhuǎn)移到含檸檬酸鹽(最終濃度10％)的小瓶中。將50μL血漿樣品用100μL冷乙腈沉淀，樣品在4000rpm離心10分鐘。75μL上清液用75μL 0.2％甲酸稀釋。10μL形成的溶液用LC-MS/MS分析，用標(biāo)準(zhǔn)曲線確定凝血酶抑制劑的濃度。利用Log/線性梯形規(guī)則并外延至無(wú)限時(shí)間估算血漿濃度-時(shí)間曲線下的面積。化合物的血漿清除率(CL)用下式確定CL＝劑量/AUC該數(shù)值用mL/min/Kg表示。
試驗(yàn)G體外穩(wěn)定性的測(cè)定肝微粒體按照internal SOPs由Sprague-Dawley鼠和人肝樣品制備?；衔锱c總濃度為3mg/mL的微粒體于0.05mol/L Tris緩沖液(pH 7.4)中在輔因子NADH(2.5mmol/L)和NADPH(0.8mmol/L)存在下于37℃培養(yǎng)?；衔锏某跏紳舛葹?或10μmol/L。取樣分析，直至開始培養(yǎng)后60分鐘。通過(guò)加入相當(dāng)于樣品總體積3.3％的20％十四烷酸使收集的樣品中的酶促活性立即終止。在60分鐘樣品中剩余的化合物濃度(最終濃度)用LCMS方法測(cè)定，采用在0時(shí)間收集的樣品作為參照(起始濃度)。降解的凝血酶抑制劑的％按下式計(jì)算 試驗(yàn)H動(dòng)脈血栓形成模型利用向頸動(dòng)脈局部施加氯化鐵(FeCl3)誘發(fā)血管損傷。通過(guò)向腹膜內(nèi)注射戊巴比妥鈉將大鼠麻醉(80mg/kg，Apoteksbolaget；Ume Sweden)，隨后在整個(gè)實(shí)驗(yàn)中連續(xù)輸注(12mg/Kg/h)。利用外加熱將大鼠體溫在整個(gè)實(shí)驗(yàn)中保持38℃。實(shí)驗(yàn)以5分鐘對(duì)照期開始。5分鐘后，靜脈內(nèi)施用人的125I血纖蛋白原(80KBq；IM53；AmershamInternational，Buckinghamshire，UK)，作為隨后向血栓中加入血纖蛋白(原)的標(biāo)準(zhǔn)參照物。將頸動(dòng)脈片段的近端置于縱向開口的塑料管(6mm；silastic_；Dow corning，MI，USA)中，管內(nèi)裝有浸吸了FeCl3(2μL，55％ w/w，Merck，Darmstadt，Germany)的濾紙(直徑3mm，1F，Munktell，Grysksbo，Swedon)。將左頸動(dòng)脈在FeCl3中暴露10分鐘，然后由塑料管取出并置于鹽水中。50分鐘后，取出頸動(dòng)脈在鹽水中沖洗。在注射125I-血纖蛋白之后10分鐘和實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)還取參照血樣以測(cè)定血的125I活性。參照血樣和血管片段中的125I活性是在實(shí)驗(yàn)進(jìn)行的同一天于γ計(jì)數(shù)器(1282 Compugamma，LKB Wallac OyTurku，F(xiàn)inland)進(jìn)行。血栓大小由血管片斷中結(jié)合的125I活性與血液中125I活性比較的相對(duì)數(shù)量決定(cpm/mg)。
通用實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)TLC在硅膠上進(jìn)行。手性HPLC分析用帶有5cm保護(hù)柱的46mm×250mm Chiralcel OD柱進(jìn)行。柱溫保持在35℃。采用的流速為1.0mL/分。使用在228nm處的Gilson 115UV檢測(cè)器。移動(dòng)相由己烷、乙醇和三氟乙酸組成，對(duì)各個(gè)化合物列出了合適的比例。一般是將產(chǎn)物溶于最少量的乙醇中并將其用移動(dòng)相稀釋。
LC-MS/MS用裝有CTC-PAL注射器和一只5μm，4×100mm的Thermo Quest，Hypersil BDS C18柱的HP-1100儀器進(jìn)行。使用API-3000(Sciex)MS檢測(cè)器。流速為1.2mL/min，移動(dòng)相(梯度)由10-90％乙腈和90-10％的4M乙酸銨水溶液組成，二者皆含0.2％甲酸。
1H NMR光譜用四甲基硅烷作為內(nèi)標(biāo)記錄。13C NMR譜用列出的氖溶劑作為內(nèi)標(biāo)記錄。
實(shí)施例1Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(2，6-二氟) (1)3-氯-5-甲氧基苯甲醛將25℃向THF(100mL)中的鎂金屬(14.2g，585mmol，預(yù)先用0.5NHCl洗過(guò))逐滴加入在THF(200mL)中的3.5-二氯苯甲醚(74.0g，419mmol)。加完后，逐滴加入1，2-二溴甲烷(3.9g，20.8mmol)。形成的深棕色混合物加熱回流3小時(shí)。將該混合物冷卻至0℃，一次加入60mL N，N-二甲基甲酰胺。將混合物分配在乙醚(3×400mL)和6NHCl(500mL)中。合并的有機(jī)萃取液用鹽水(300mL)洗，干燥(Na2SO4)，過(guò)濾并減壓濃縮得到油狀物。在硅膠上快速層析2次，用己烷∶乙酸乙酯(4∶1)洗脫，得到小標(biāo)題化合物(38.9g，54％)，為黃色油狀物。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ9.90(s，1H)，7.53(s，1H)，7.38(s，1H)，7.15(s，1H)，3.87(s，3H).
(2)3-氯-5-羥基苯甲醛將3-氯-5-甲氧基苯甲醛(22.8g，134mmol；見以上步驟(1)的CH2Cl2(250mL)溶液冷卻到0℃。在15分鐘內(nèi)逐滴加入三溴化硼(15.8mL，167mmol)。攪拌該混合物2小時(shí)后，慢慢加入水(50mL)。該溶液用乙醚(2×100mL)萃取。將有機(jī)層合并，干燥(Na2SO4)，過(guò)濾并減壓濃縮。在硅膠上快速層析，用己烷∶乙酸乙酯(4∶1)洗脫，得到小標(biāo)題化合物(5.2g，25％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ9.85(s，1H)，7.35(s，1H)，7.20(s，1H)，7.10(s，1H)，3.68(s，1H)(3)3-氯-5-二氟甲氧基苯甲醛將3-氯-5-羥基苯甲醛(7.5g，48mmol，見步驟(2))在2-丙醇(250mL)和30％KOH(100mL)中的溶液加熱回流。在攪拌下向反應(yīng)混合物中鼓入CHClF22小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻，用1N HCl酸化并用EtOAc(2×100mL)萃取。該有機(jī)層用鹽水(100mL)洗，干燥(Na2SO4)，過(guò)濾并減壓濃縮。在硅膠上快速層析，用己烷∶乙酸乙酯(4∶1)洗脫，得到小標(biāo)題化合物(4.6g，46％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ9.95(s，1H)，7.72(s，1H)，7.52(s，1H)，7.40(s，1H)，6.60(t，JH-F＝71.1Hz，1H)(4)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R，S)CH(OTMS)CN將3-氯-5-二氟甲氧基苯甲醛(4.6g，22.3mmol；見以上步驟(3))在CH2Cl2(200mL)中的溶液冷卻至0℃。加入ZnI2(1.8g，5.6mmol)和氰化三甲基硅烷(2.8g，27.9mmol)，將反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝夭嚢?5小時(shí)。將該混合物減壓下部分濃縮，得以小標(biāo)題液體化合物，它直接用于下面的步驟(V)，不作進(jìn)一步的純化或鑒定。
(5)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R，S)CH(OH)C(NH)OEt將Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R，S)CH(OTMS)CN(6.82g，假定為2.3mmol，見以上步驟(4))逐滴加到HCl/EtOH(500mL)中。將反應(yīng)混合物攪拌15小時(shí)，然后在減壓下部分濃縮，得到液體形式的小標(biāo)題化合物，它不經(jīng)進(jìn)一步純化或鑒定，直接用于步驟(6)中。
(6)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R，S)CH(OH)C(O)OEt將Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R，S)CH(OH)C(NH)OEt(6.24g，假定22.3mmol，見以上步驟(5)溶于THF(250mL)中，加入0.5M H2SO4(400mL)，在40℃下攪拌反應(yīng)混合物65小時(shí)，冷卻后減壓下部分濃縮，除去大部分THF。反應(yīng)混合物用乙醚(3×100mL)萃取，干燥(Na2SO4)，過(guò)濾并減壓濃縮，得到固體形式的小標(biāo)題化合物，它在用于步驟(7)之前不作進(jìn)一步純化或鑒定。
(7)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R，S)CH(OH)C(O)OH將Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R，S)CH(OH)C(O)OEt(6.25g，假定22.3mmol，見以上步驟(6))在2-丙醇(175mL)和20％KOH(350mL)中的溶液于室溫下攪拌15小時(shí)。然后將反應(yīng)混合物在減壓下部分濃縮，除去大部分2-丙醇。剩余的混合物用1M H2SO4酸化，用乙醚(3×100mL)萃取，干燥(Na2SO4)并減壓濃縮形成固體。在硅膠上快速層析，用CHCl3∶MeOH∶濃NH4OH(6∶3∶1)洗脫，得到小標(biāo)題化合物的銨鹽。將該銨鹽溶于EtOAc(75mL)和水(75mL)的混合物中，用2N HCl酸化。分離有機(jī)層并用鹽水洗(50mL)，干燥(Na2SO4)，減壓濃縮，得到小標(biāo)題化合物(3.2g，自步驟(4)至(7)為57％)。
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.38(s，1H)，7.22(s，1H)，7.15(s，1H)，6.89(t，JH-F＝71.1Hz，1H)，5.16(s，1H)(8)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)OH(a)和Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(S)CH(OAc)C(O)OH(b)將Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R，S)CH(OH)C(O)OH(3.2g，12.7mmol；見以上步驟(7))和脂酶PS“Amano”(～2.0g)在乙酸乙烯酯(125mL)和MTBE(125mL)中的混合物加熱回流48小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻，經(jīng)Celite_過(guò)濾，濾餅用EtOAc洗。將濾液減壓濃縮，在硅膠上快速層析，用CHCl3∶MeOH∶濃NH4OH(6∶3∶1)洗脫，得到小標(biāo)題化合物(a)和(b)的銨鹽。鹽形式的化合物(a)溶于水中，用2N HCl酸化，用EtOAc萃取。有機(jī)層用鹽水洗，干燥(Na2SO4)，過(guò)濾并減壓濃縮，得到小標(biāo)題化合物(a)(1.2g，37％)。
對(duì)于小標(biāo)題化合物(a)1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.38(s，1H)，7.22(s，1H)，7.15(s，1H)，6.89(t，JH-F＝71.1Hz，1H)，5.17(s，1H)(9)2，6-二氧-4-[(甲基亞磺酰基)(甲硫基)甲基]芐腈將(甲基亞磺?；?(甲硫基)甲烷(7.26g，0.0584mol)在氬氣下溶于100mL無(wú)水THF中并冷卻至-78℃。在攪拌下逐滴加入在己烷中的丁基鋰(16mL，1.6M，0.0256mol)。將該混合物攪拌15分鐘。與此同時(shí)，將3，4，5-三氟芐腈(4.0g，0.025mmol)在100mL無(wú)水THF中的溶液在氬氣下冷卻至-78℃，在35分鐘內(nèi)將前一溶液經(jīng)由導(dǎo)管加到后一溶液中。30分鐘后，去掉冷卻浴，當(dāng)反應(yīng)混合物達(dá)到室溫后將其倒入400mL水中。蒸除THF，剩余的水層用乙醚萃取3次。合并的醚相用水洗，干燥(Na2SO4)并蒸發(fā)。產(chǎn)量2.0g(30％)。
1H NMR(500MHz，CDCl3)δ7.4-7.25(m，2H)，5.01(s，1H，非對(duì)映體)，4.91(s，1H，非對(duì)映體)，2.88(s，3H，非對(duì)映體)，2.52(s，3H，非對(duì)映體)，2.49(s，3H，非對(duì)映體)，2.34(s，3H，非對(duì)映體)，1.72(寬峰，1H)(10)2，6-二氟-4-甲?；S腈將2，6-二氟-4-[(甲基亞磺?；?(甲硫基)甲基]芐腈(2.17g，8.32mmol；見以上步驟(9))溶于90mL THF中，加入3.5mL濃硫酸。將混合物在室溫下放置3天，隨后倒入450mL水中。用乙酸乙酯萃取3次，隨后將合并的醚相用碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗2次，干燥(Na2SO4)并蒸發(fā)。產(chǎn)量1.36g(98％)。甲?；奈恢糜?3C NMR確定。162.7ppm處的來(lái)自氟化碳的信號(hào)顯示出與來(lái)自氟原子的本位和間位偶合相應(yīng)的，具有量級(jí)分別為260Hz和6.3Hz的兩個(gè)偶合常數(shù)的預(yù)期的偶合型式。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.35(s，1H)，7.33(m，2H)(11)2，6-二氟-4-羥甲基芐腈將2，6-二氟-4-甲酰芐腈(1.36g，8.13mmol；見以上步驟(10))溶于25mL甲醇中并在水浴上冷卻。在攪拌下分批加入硼氫化鈉(0.307g，8.12mmol)，將反應(yīng)混合物放置65分鐘。蒸除溶劑，殘余物分配在乙醚和碳酸氫鈉水溶液中。醚層用更多的碳酸氫鈉水溶液的鹽水洗，干燥(Na2SO4)并蒸發(fā)。粗產(chǎn)物很快就結(jié)晶，可以不經(jīng)純化直接使用。產(chǎn)量1.24g(90％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.24(m，2H)，4.81(s，2H)，2.10(寬峰，1H)(12)4-氰基-2，6-二氟芐基甲磺酸酯在攪拌下向2，6-二氟-4-羥甲基芐腈(1.24g，7.32mmol；見以上步驟(11))和甲磺酰氯(0.93g，8.1mmol)在60mL二氯甲烷中的冰冷卻的溶液加入三乙胺(0.81g，8.1mmol)。在0℃下3小時(shí)后，將混合物用1M HCl洗2次，用水洗1次，干燥(Na2SO4)并蒸發(fā)。產(chǎn)物可以不經(jīng)進(jìn)一步純化直接使用。產(chǎn)率1.61g(89％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.29(m，2H)，5.33(s，2H)，3.07(s，3H)(13)4-疊氮基甲基-2，6-二氟芐腈將4-氰基-2，6-二氟芐基甲磺酸酯(1.61g，6.51mmol；見以上步驟(12))和疊氮化鈉(0.72g，0.0111mmol)在10mL水和20mL DMF中的混合物于室溫下攪拌過(guò)夜。將形成物隨后倒入200mL水中，用乙醚萃取3次。合并的醚相用水洗5次，干燥(Na2SO4)并蒸發(fā)。一小份樣品蒸發(fā)用于NMR測(cè)定并將產(chǎn)物晶化。其余的樣品小心地蒸發(fā)直至完全干燥。產(chǎn)量(理論值1.26g)根據(jù)NMR和分析型HPLC幾乎是定量產(chǎn)量。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.29(m，2H)，4.46(s，2H)(14)4-氨基甲基-2，6-二氟芐腈此反應(yīng)按照在J.Chem.Res.(M)(1992)3128中所述的步驟進(jìn)行。向520mg 10％ pd/C(50％含水)在20mL的水中的懸浮液加入硼氫化鈉(0.834g，0.0221mmol)在20mL水中的溶液。結(jié)果放出一些氣體。將4-疊氮甲基-2，6-二氟芐腈(1.26g，6.49mmol；見以上步驟(13))溶于50mL THF中，在15分鐘內(nèi)加到在冰浴上的上述含水混合物中。將混合物攪拌4小時(shí)，隨后加入20mL 2M鹽酸，將混合物經(jīng)Celite過(guò)濾。該Celite用更多的水沖洗，合并的水相用EtOAc洗，隨后用2M NaOH使呈堿性。用二氯甲烷萃取3次，合并的有機(jī)相用水洗，干燥(Na2SO4)并蒸發(fā)。產(chǎn)率0.87g(80％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.20(m，2H)，3.96(s，2H)，1.51(寬峰，2H)(15)2，6-二氟-4-叔丁氧羰基氨基甲基芐腈4-氨基甲基-2，6-二氟芐腈(0.876g，5.21mmol；見以上步驟(14))溶于50mL THF中，加入在10mL THF中的二碳酸二叔丁酯(1.14g，5.22mmol)。將該混合物攪拌3.5小時(shí)。蒸除THF，殘余物分配在水和乙酸乙酯中。有機(jī)層用0.5M HCl洗3次，干燥(Na2SO4)并蒸發(fā)。產(chǎn)物可不經(jīng)進(jìn)一步純化直接使用。產(chǎn)率1.38g(99％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.21(m，2H)，4.95(broad，1H)，4.43(寬峰，2H)，1.52(s，9H)(16)Boc-Pab(2，6-二氟)(OH)將2，6-二氟-4-叔丁氧碳基氨基甲基芐腈(1.38g，5.16mmol，見以上步驟(15))、鹽酸羥胺(1.08g，0.0155mol)和三乙胺(1.57g，0.0155mol)在20mL乙醇中的混合物在室溫下攪拌36小時(shí)。將溶劑蒸發(fā)，殘余物分配在水和二氟甲烷中。有機(jī)層用水洗，干燥(Na2SO4)并蒸發(fā)。產(chǎn)物可不經(jīng)進(jìn)一步純化直接使用。產(chǎn)率1.43g(92％)。
1H NMR(500MHz，CD3OD)δ7.14(m，2H)，4.97(寬峰，1H)，4.84(寬峰，2H)，4.40(寬峰，2H)，1.43(s，9H)(17)Boc-Pab(2，6-二氟)x HOAc此反應(yīng)按照J(rèn)udkins等在Synth.Comm.(1998)4351中所述的步驟進(jìn)行。將Boc-Pab(2，6-二氟)(OH)(1.32g，4.37mmol；見以上步驟(16)、乙酸酐(0.477g，4.68mmol)和442mg 10％ pd/C(50％水份)在100mL乙酸中于5大氣壓下氫化3.5小時(shí)。將混合物經(jīng)Celite過(guò)濾，用乙醇沖并蒸發(fā)。殘余物自乙腈和水及幾滴乙醇中冷凍干燥。小標(biāo)題化合物可不經(jīng)進(jìn)一步純化直接使用。產(chǎn)量0.149g(99％)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.45(m，2H)，4.34(s，2H)，1.90(s，3H)，1.40(s，9H)(18)Boc-Pab(2，6-二氟)(Teoc)向Boc-Pab(2，6-二氟)x HOAc(1.56g，5.49mmol；見以上步驟(17))在100mL THF和1mL水中的溶液加入2-(三甲基甲硅烷基)乙基對(duì)硝基苯基碳酸酯(1.67g，5.89mmol)。在5分鐘內(nèi)逐滴加入碳酸鉀(1.57g，1.0114mmol)在20mL水中的溶液。將混合物攪拌過(guò)夜。蒸除THF，殘余物分配在水和二氯甲烷中。水層用二氯甲烷萃取，合并的有機(jī)相用碳酸氫鈉水溶液洗2次，干燥(Na2SO4)并蒸發(fā)。在硅膠上用庚烷/乙酸乙酯(2∶1)快速層析，得到1.71g(73％)純化合物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.43(m，2H)，4.97(寬峰，1H)，4.41(寬峰，2H)，4.24(m，2H)，1.41(s，9H)，1.11(m，2H)，0.06(s，9H)(19)Boc-(S)Aze-Pab(2，6-二氟)(Teoc)Boc-Pab(2，6-二氟)(Teoc)(1.009g，2.35mmol；見以上步驟(18))溶在用HCl氣飽和的50mL乙酸乙酯中。將該混合物放置10分鐘，蒸發(fā)并溶解在18mL DMF中，然后在冰浴上冷卻。加入Boc-(S)Aze-OH(0.450g，2.24mmol)、PyBOP(1.24g，2.35mmol)，最后加二異丙基乙基胺(1.158g，8.96mmol)。將反應(yīng)混合物攪拌2小時(shí)后倒入350mL水中，用乙酸乙酯萃取3次。合并的有機(jī)相用鹽水洗，干燥(Na2SO4)并蒸發(fā)。在硅膠上用庚烷∶乙酸乙酯(1∶3)快速層析，得到1.097g(96％)所要化合物。
1H NMR(500MHz，CDCl3)δ7.46(m，2H)，4.65-4.5(m，3H)，4.23(m，2H)，3.87(m，1H)，3.74(m，1H)，2.45-2.3(m，2H)，1.40(s，9H)，1.10(m，2H)，0.05(s，9H)
(20)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(2，6-二氟)(Teoc)將Boc-(S)Aze-Pab(2，6-二氟)(Teoc)(0.256g，0.500mmol；見以上步驟(19))溶在用HCl氣飽和的20mL乙酸乙酯中。將該混合物放置10分鐘，蒸發(fā)并溶解在5mL DMF中。依次加入Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)OH(0.120g，0.475mmol；見以上步驟(8))、PyBOP(0.263g，0.498mmol和二異丙基乙胺(0.245g，1.89mmol)。將反應(yīng)混合物攪拌2小時(shí)后倒入350mL水中，用乙酸乙酯萃取3次。合并的有機(jī)相用鹽水洗，干燥(Na2SO4)和蒸發(fā)。在硅膠上用乙酸乙酯快速層析，得到0.184g(60％)所要的小標(biāo)題化合物。
1H NMR(400MHz，CD3OD，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物)δ7.55-7.45(m，2H)，7.32(m，1H，主旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，7.27(m，1H，次旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，7.2-7.1(m，2H)，6.90(t，1H，主旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，6.86(t，1H，次旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.15(s，1H，主旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.12(m，1H，次旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.06(s，1H，次旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.72(m，1H，主旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.6-4.45(m，2H)，4.30(m，1H，主旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.24(m，2H)，4.13(m，1H，主旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.04(m，1H，次旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，3.95(m，1H，次旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.62(m，1H，次旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.48(m，1H，主旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.22(m，1H，主旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.10(m，1H，次旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，1.07(m，2H)，0.07(m，9H)(21)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(2，6-二氟)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(2，6-二氟)(Teoc)(81mg，0.127mmol；見以上步驟(20))溶于0.5mL二氯甲烷中并在冰浴上冷卻。加入TEA(3mL)，將反應(yīng)混合物放置75分鐘。蒸除TFA，殘余物自水和乙腈中冷凍干燥。粗產(chǎn)物用制備型RPLC純化，使用CH3CN0.1MNH4oAc(3565)，得到39mg(55％)標(biāo)題化合物的乙酸鹽，純度99％。
1H NMR(400MHz，CD3OD旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物)δ7.5-7.4(m，2H)，7.32(m，1H，主旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，7.28(m，1H，次旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，7.2-7.1(m，3H)6.90(t，1H，主旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，6.86(t，次旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.15(s，1H，主旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.14(m，1H，次旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.07(s，1H，次旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.72(m，1H，主旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.65-4.45(m，2H)，4.30(m，1H，主旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.16(m，1H，主旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.03(m，1H，次旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，3.95(m，1H，次旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.63(m，1H，次旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.48(m，1H，主旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.21(m，1H，主旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.07(m，1H，次旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，1.89(s，3H)13C-NMR(75MHz；CD3OD)(羰基和/或脒碳，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物)δ171.9，171.2，165.0，162.8，160.4APCl-MS(M+1)＝503/505m/z.
實(shí)施例2Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(2，6-二氟)(OMe) (1)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(2，6-二氟)(OMe，Teoc)將Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(2，6-二氟)(Teoc)(64mg，0.099mmol；見以上實(shí)施例1(20))和0-甲基羥胺鹽酸鹽(50mg，0.60mmol)在4mL乙腈中的混合物于70℃加熱3小時(shí)。蒸除溶劑，殘余物分配在水和乙酸乙酯中。水層用乙酸乙酯萃取2次，合并的有機(jī)相用水洗，干燥(Na2SO4)和蒸發(fā)。產(chǎn)物可不經(jīng)進(jìn)一步純化直接使用。產(chǎn)率58mg(87％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.90(bt，1H)，7.46(m，1H)，7.25-6.95(m，5H)，6.51，t，1H)，4.88(s，1H)，4.83(m，1H)，4.6-4.5(m，2H)，4.4-3.9(m，4H)，3.95(s，3H)，3.63(m，1H)，2.67(m，1H)，2.38(m，1H)，1.87(寬峰，1H)，0.98(m，2H)，0.01，s，9H)(2)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(2，6-二氟)(OMe)將Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(2，6-二氟)(OMe，Teoc)(58mg，0.086mmol；見以上步驟(1))溶于3mL HFA中，在冰浴上冷卻并令其反應(yīng)2小時(shí)。蒸除TFA，殘余物溶在乙酸乙酯中。有機(jī)層用碳酸鈉水溶液和水洗2次，干燥(Na2SO4)和蒸發(fā)。將殘余物自水和乙腈中冷凍干燥，得到42mg(92％)標(biāo)題化合物。純度94％。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.95(bt，1H)，7.2-7.1(m，4H)，6.99(m，1H)，6.52(t，1H)，4.88(s，1H)，4.85-4.75(m，3H)，4.6-4.45(m，2H)，4.29(寬峰，1H)，4.09(m，1H)，3.89(s，3H)，3.69(m，1H)，2.64(m，1H)，2.38(m，1H)，1.85(寬峰，1H)13C-NMR(100MHz；CDCl3)(羰基和/或脒碳)δ172.1，169.8，151.9APCI-MS(M+1)＝533/535m/z實(shí)施例3Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(2，6-二氟)(OH) (1)Boc-(S)Aze-NHCH2-Ph(2，6-二氟，4-CN)將Boc-(S)Aze-OH(1.14g，5.6mmol)溶于45mL DMF中。加入4-氨甲基-2，6-二氟芐腈(1.00g，5.95mol；見以上實(shí)施例1(14))、PyBOP(3.10g，5.95mmol)和DIPEA(3.95mL，22.7mmol)，室溫下攪拌該溶液2小時(shí)。蒸除溶劑，殘余物分配在水和乙酸乙酯(各75mL)中。水相用2×50mL乙酸乙酯萃取，合并的有機(jī)相用鹽水洗，用Na2SO4干燥。快速層析(SiO2，EtOAc/庚烷(3∶1))得到油狀的小標(biāo)題化合物，它在冰箱中結(jié)晶。
1H-NMR(400MHz；CD3OD)δ7.19(m，2H)，4.65-4.5(m，3H)，3.86(m，1H)，3.73(m，1H)，2.45-2.3(m，2H)，1.39(s，9H)(2)H-(S)Aze-NHCH2-Ph(2，6-二氟，4-CN)xHCl將Boc-(S)Aze-NHCH2-Ph(2，6-二氟，4-CN)(0.707g，2.01mmol；見以上步驟(1))溶于60mL用HCl氣飽和的EtOAc中。在室溫下攪拌15分鐘后，蒸除溶劑。將殘余物溶在CH3CN/H2O(1∶1)中，冷凍干燥，得到小標(biāo)題化合物(0.567g，98％)，為灰白色無(wú)定形粉末。
1H-NMR(400MHz；CD3OD)δ7.49(m，2H)，4.99(m，1H)，4.58(m，2H)，4.12(m，1H)，3.94(m，1H)，2.80(m，1H)，2.47(m，1H)MS(m/z)252.0(M+1)+(3)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-NHCH2-Ph(2，6-二氟，4-CN)將Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)OH(0.40g，1.42mmol；見以上實(shí)施例1(8))溶于10mL DMF中，依次加入H-(S)Aze-NHCH2-Ph(2，6-二氟，4-CN)×HCl(0.43g，1.50mmol；見以上步驟(2))、PyBOP(0.779g，1.50mmol)和DIPEA(1.0mL，5.7mmol)，室溫下攪拌2小時(shí)后，蒸除溶劑，殘余物分配在水(200mL)和乙酸乙酯(75mL)中。水相用2×75mL EtoAc萃取，合并的有機(jī)相用鹽水洗，用Na2SO4干燥?？焖賹游?SiO2，EtOAc/庚烷(4∶1))得到小標(biāo)題化合物(0.56g，81％)，為油狀物。
1H-NMR(400MHz；CD3OD)旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體δ7.43(m，2H)，7.31(m，1H，主旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，7.26(m，1H，次旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，7.2-7.1(m，2H)，6.90(t，1H，主旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，6.86(t，1H，次旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.14(s，1H，主旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.11(m，1H，次旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.04(s，1H，次旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.71(m，1H，主旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.6-4.45(m，2H)，4.30(m，1H，主旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.2-3.9(m，1H；和1H，次旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.62(m，1H，次旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.48(m，1H，主旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.21(m，1H，主旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.09(m，1H，次旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，13C-NMR(100MHz；CD3OD)(羰基碳)δ171.9，171.8MS(m/z)484.0，485.9(M-1)-，486.0，487.9(M+1)+(4)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(2，6-二氟)(OH)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-NHCH2-Ph(2，6-二氟，4-CN)(0.555g，1.14mmol，得自以上步驟(3))溶于10mL EtOH(95％)中。向此溶液中加入鹽酸羥胺(0.238g，3.42mmol)和Et3N(0.48mL，3.44mmol)。室溫下攪拌14小時(shí)后，除去溶劑，殘余物溶在EtOAc中。有機(jī)相用鹽水和水洗，用Na2SO4干燥。粗產(chǎn)物用制備型RPLC純化，以CH3CN0.1M NH4OAc作為洗脫劑，冷凍干燥后得到無(wú)定形粉末狀標(biāo)題化合物(0.429g，72％)。
1H-NMR(400MHz；CD3OD)旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體δ7.35-7.1(m，5H)，6.90(t，1H，主旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，6.85(t，1H，次旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.15(s，1H，主旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.12(m，1H，次旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.08(s，1H，次旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.72(m，1H，主旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.6-4.4(m，2H)，4.30(m，1H，主旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.12(m，1H，主旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.04(m，1H，次旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，3.94(m，1H，次旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.62(m，1H，次旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.48(m，1H，主旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.22(m，1H，主旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.10(m，1H，次旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)13C-NMR(100MHz；CD3OD)(羰基和/或脒碳，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)δ172.4，171.9，171.0，152.3，151.5MS(m/z)517.1，519.0(M-1)-，519.1，521.0(M+1)+實(shí)施例4實(shí)施例1的標(biāo)題化合物在以上試驗(yàn)A中試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)其顯示出IC50TT值小于0.02μm。
實(shí)施例5實(shí)施例1的標(biāo)題化合物在以上試驗(yàn)D中試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)其顯示出IC50APTT值小于1μm。
實(shí)施例6實(shí)施例2的標(biāo)題化合物在以上試驗(yàn)E中試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)其顯示出和相應(yīng)的活性抑制劑(游離脒)一樣的大鼠內(nèi)口服和/或非腸道生物利用度。
實(shí)施例7實(shí)施例2的標(biāo)題化合物在以上試驗(yàn)G中試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)它在人和大鼠的肝微粒體內(nèi)被轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的活性抑制劑(游離脒)。
縮寫符號(hào)AC ＝ 乙?；鵄PCI ＝ 大氣壓下化學(xué)離子化(與MS相關(guān))API ＝ 大氣壓下離子化(與MS相關(guān))aq. ＝ 含水的AUC ＝ 曲線下面積Aze ＝ 氮雜環(huán)丁烷-2-羧酸酯AzeOH＝ 氮雜環(huán)丁烷-2-羧酸Boc ＝ 叔丁氧羰基BSA ＝ 牛血清蛋白CI ＝ 化學(xué)離子化(與MS相關(guān))d＝ 天DCC ＝ 二環(huán)己基碳化二亞胺DIBAL-H ＝ 二異丁基氫化鋁DIPEA＝ 二異丙基乙胺DMAP ＝ 4-(N，N-二甲基氨基)吡啶DMF ＝ 二甲基甲酰胺DMSO ＝ 二甲基亞砜DVT ＝ 深靜脈血栓形成EDC ＝ 1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽Et ＝ 乙基ether＝ 乙醚EtOAc＝ 乙酸乙酯EtOH ＝ 乙醇Et2O ＝ 乙醚h＝ 小時(shí)HATU ＝ O-(氮雜苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽HBTU ＝ [N，N，N’，N’-四甲基-O-(苯并三唑-1-基)]脲鎓六氟磷酸鹽HCl ＝ 鹽酸，氯化氫氣或鹽酸鹽(依上下文定)
Hex ＝ 己烷HOAc ＝ 乙酸或乙酸鹽HPLC ＝ 高效液相色譜LC ＝ 液相色譜Me ＝ 甲基MeOH ＝ 甲醇min ＝ 分MS ＝ 質(zhì)譜MTBE ＝ 甲基叔丁基醚NADH ＝ 煙酰胺腺嘌呤二核苷酸，還原形式NADPH＝ 煙酰胺腺嘌呤二核酸磷酸，還原形式NIH ＝ 國(guó)家衛(wèi)生研究所(美國(guó))NIHU ＝ 國(guó)家衛(wèi)生研究所單位NMR ＝ 核磁共振OAc ＝ 乙酸酯Pab ＝ 對(duì)脒基芐氨基H-Pab＝ 對(duì)脒基芐胺Ph ＝ 苯基PyBOP＝ (苯并三唑-1-基氧)三吡咯烷基磷鎓六氟磷酸鹽QF ＝ 氟化四丁胺RPLC ＝ 反相高效液相色譜rt/RT＝ 室溫SOPs ＝ 標(biāo)準(zhǔn)操作程序TBTU ＝ [N，N，N’，N’-四甲基-O-(苯并三唑-1-基)]脲鎓四氟硼酸鹽TEA ＝ 三乙胺Teoc ＝ 2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基羰基TEMPO＝ 2，2，6，6-四甲基-1-哌啶氧基自由基
TFA ＝ 三氟乙酸THF ＝ 四氫呋喃TLC ＝ 薄層色譜UV ＝ 紫外前綴n、s、i和t具有它們的常用含義正、仲、異和叔。前綴c代表環(huán)。
權(quán)利要求
1.一種式I化合物 或其可藥用的衍生物。
2.權(quán)利要求1中定義的式I化合物的衍生物，該衍生化合物是式Ia化合物或其可藥用的衍生物 其中R1代表OR2或C(O)OR3，R2代表H、C1-10烷基、C1-3烷基芳基或C1-3烷氧基芳基(后兩種基團(tuán)的烷基部分可任選地被一個(gè)或多個(gè)氧原子間斷，而且后兩種基團(tuán)的芳基部分可任選地被選自鹵素、苯基、甲基或甲氧基的一個(gè)或多個(gè)取代基取代，后三種基團(tuán)還可任選地被一個(gè)或多個(gè)鹵素取代基取代)；和R3代表C1-10烷基(該基團(tuán)可任選地被一個(gè)或多個(gè)氧原子間斷)、C1-3烷基芳基或C1-10烷氧基芳基(后兩種基團(tuán)的烷基部分可任選地被一個(gè)或多個(gè)氧原子間斷，其芳基部分可任選地被選自鹵素、苯基、甲基或甲氧基的一個(gè)或多個(gè)取代基取代，后三種基團(tuán)還可任選地被一個(gè)或多個(gè)鹵素取代基取代)。
3.權(quán)利要求2的化合物，其中R1代表OR2。
4.權(quán)利要求3的化合物，其中R2代表H或是未被取代的直鏈、支鏈或環(huán)形的C1-8烷基。
5.權(quán)利要求4的化合物，其中R2代表H或C1-6烷基。
6.權(quán)利要求4的化合物，其中R2代表直鏈的C1-3烷基、支鏈的C3-8烷基或環(huán)形的C4-7烷基。
7.權(quán)利要求5或6的化合物，其中R2代表甲基、乙基、正丙基、異丙基或環(huán)丁基。
8.權(quán)利要求7的化合物，其中R2代表甲基。
9.權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)的化合物，其中下述片斷 是處在S構(gòu)型。
10.權(quán)利要求1至9中任一項(xiàng)的化合物，其中下述片斷 是處在R構(gòu)型。
11.權(quán)利要求1的化合物，它是Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(2，6-二氟)
12.權(quán)利要求2的化合物，它是Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(2，6-二氟)(OMe)；或Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(2，6-二氟)(OH)。
13.一種藥物組合物，其中包含權(quán)利要求1至12中任一項(xiàng)所定義的化合物或其可藥用的衍生物，以及與其混合的可藥用的輔劑、稀釋劑或載體。
14.權(quán)利要求1至12中任一項(xiàng)定義的化合物或其可藥用的衍生物作為藥物使用。
15.權(quán)利要求1至12中任一項(xiàng)的化合物或其可藥用的衍生物用于治療需要抑制凝血酶的病癥。
16.權(quán)利要求1至12中任一項(xiàng)的化合物或其可藥用的衍生物用于治療需要抗凝血療法的病癥。
17.權(quán)利要求1至12中任一項(xiàng)的化合物或其可藥用的衍生物用于治療血栓形成。
18.權(quán)利要求1至12中任一項(xiàng)的化合物或其可藥用的衍生物用來(lái)作為抗凝血?jiǎng)?br> 19.權(quán)利要求1至12中任一項(xiàng)的化合物或其可藥用的衍生物作為活性組分在制造用于治療需要抑制凝血酶的病癥的藥物方面的應(yīng)用。
20.權(quán)利要求1至12中任一項(xiàng)的化合物或其可藥用的衍生物作為活性組分在制造用于治療需要抗凝血療法的病癥的藥物方面的應(yīng)用。
21.權(quán)利要求19或20的應(yīng)用，其中的病癥是血栓形成。
22.權(quán)利要求19或20的應(yīng)用，其中的病癥是血液和/或組織中血凝固性過(guò)高。
23.權(quán)利要求1至12中任一項(xiàng)的化合物或其可藥用的衍生物作為活性組分用于制造抗凝血?jiǎng)┑膽?yīng)用。
24.一種治療需要抑制凝血酶的病癥的方法，該方法包括向患有或易感染該病癥的人施用治療有效量的權(quán)利要求1至12中任一項(xiàng)的化合物或其可藥用的衍生物。
25.一種治療需要抗凝血療法的病癥的方法，該方法包括向患有或易感染該病癥的人施用治療有效量的權(quán)利要求1至12中任一項(xiàng)的化合物或其可藥用的衍生物。
26.權(quán)利要求24或25的方法，其中的病癥是血栓形成。
27.權(quán)利要求24或25的方法，其中的病癥是血液和/或組織中血凝血固性過(guò)高。
28.一種制備權(quán)利要求1的式I化合物的方法，該方法包括(1)式II化合物 與式III化合物偶合， (2)式IV化合物 與式V化合物偶合， (3)相應(yīng)的權(quán)利要求29定義的式XVI化合物與合適的氨源反應(yīng)；或(4)權(quán)利要求1的化合物的被保護(hù)衍生物的去保護(hù)。
29.一種制備權(quán)利要求2中定義的式Ia化合物的方法，其中包括(a)相應(yīng)的權(quán)利要求28中定義的式II化合物與式XIV化合物反應(yīng) 其中R1同權(quán)利要求2中的定義；(b)相應(yīng)的權(quán)利要求28中定義的式IV化合物與式XV化合物反應(yīng)， 其中R1同權(quán)利要求2中定義；(c)對(duì)于其中R1代表OH的式Ia化合物，相應(yīng)的式XVI化合物 與羥胺反應(yīng)；(d)對(duì)于其中R1代表OR2的式Ia化合物，式XVII化合物 其中Ra代表-CH2CH2-Si(CH3)3或芐基，或其互變異構(gòu)體，與式XVIII化合物或其酸加成鹽反應(yīng)R2ONH2XVIII其中R2同權(quán)利要求2的定義，隨后除去-C(O)ORa基團(tuán)；(e)對(duì)于基中R1代表OH的式Ia化合物，其中Ra代表芐基的以上定義的式XVII化合物與羥胺或基酸加成鹽反應(yīng)；(f)對(duì)于其中R1代表COOR3的式Ia化合物，相應(yīng)的權(quán)利要求1定義的式I化合物與式XIX化合物反應(yīng)L1COOR3XIX其中L1代表一個(gè)合適的離去基團(tuán)，R3的定義同權(quán)利要求2；或(g)對(duì)于其中R1代表OCH3或OCH2COH3的式I化合物，其中R1代表OH的相應(yīng)的式I化合物分別與硫酸二甲酯或硫酸二乙酯反應(yīng)。
全文摘要
提供了一種式(I)化合物及其可藥用的衍生物(包括前藥)，該化合物及衍生物可用來(lái)作為胰蛋白酶樣蛋白酶(例如凝血酶)的競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑或其前藥，因此特別適用于治療需要抑制凝血酶的病癥(例如血栓)或作為抗凝血?jiǎng)?br> 文檔編號(hào)C07C205/59GK1549808SQ02816924
公開日2004年11月24日 申請(qǐng)日期2002年8月30日 優(yōu)先權(quán)日2001年8月30日
發(fā)明者T·因哈德特, A·約翰松, A·斯文松, T 因哈德特, 乃, 菜 申請(qǐng)人:阿斯特拉曾尼卡有限公司