專利名稱：variolin B的衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及variolin B的衍生物。
Variolin A(1)、variolin B(2)、variolin D(3)和N(3′)-甲基四氫variolin B(4)是在1994年從南極海綿Kirkpatrickia varialosa中分離出來的海洋雜環(huán)物質(zhì)上的小基團，參見Tetrahedron 1994，50，3987-3992和Tetrahedron 1994，50，3993-4000。它們具有共同的吡啶并[3′，2′4，5]吡咯并[1，2-c]嘧啶三環(huán)骨架。這種結(jié)構(gòu)在陸地或海洋天然產(chǎn)物中均不存在?，F(xiàn)有技術(shù)中也僅有幾篇文獻描述了相關(guān)結(jié)構(gòu)的合成，參見Chem.Ber.1974，107，929-936和Tetrahedron Lett.2000，41，4777-4780。 這些化合物的一個重要特征是它們的生物活性variolin B最為活躍，對P388細胞系具有細胞毒素活性，還能有效地對抗單純皰疹(Herpes simplex)；variolin B對其它微生物不具有活性，參見Tetrahedron 1994，50，3987-3992。Variolin A對P388細胞系同樣具有重要的細胞毒素活性。N(3′)-甲基四氫variolin B抑制Sacharomycescerevisiae的生長，并顯示出對HCT 116細胞系的體外活性。Variolin D在所有的測試中都沒有顯示出活性。人們認為這些生物堿所具有的不同活性說明相對于variolin D(3)中的甲氧羰基取代基，(2)中的氨基嘧啶環(huán)、(1)中的氧化形式和(4)中的還原嘧啶具有生物重要性。
本發(fā)明提供具有細胞毒素活性的deoxyvariolin化合物，并期望將這類化合物用作抗腫瘤藥物。
基團R1一般為4至10元、更優(yōu)選5或6元，最優(yōu)選6元芳族環(huán)。在本發(fā)明中R1還可以是稠合環(huán)。所述環(huán)可具有一個或多個雜原子，具有1至3個選自氮、氧或硫的環(huán)雜原子是合適的，特別是2個雜原子。特別優(yōu)選為氮雜原子，例如R1為嘧啶環(huán)，特別是具有下式的4-嘧啶基取代基
所述芳族環(huán)可被取代，如被一個或多個選自以下的基團取代烷基、烷氧基、硫代烷基、鹵基、氨基、取代氨基、鹵代烷基、烷氧基烷基、芳基、羥基、羧基、烷氧基羰基或其它常規(guī)的基團，包括甲磺?；?。在下文中給出的其它基團也可用作取代基。
當(dāng)R2存在時，優(yōu)選為氫、氮保護基或一些其它的取代基。氮保護基的例子如甲氧基甲基或甲苯磺?；潜娝苤?，無須進行詳細的討論。其它取代基的例子包括可通過其中R1為氫的化合物的反應(yīng)，在該位置上進行取代的任何基團。更具體的可參考下文給出的其它基團。
R3為氧代基，或者可為通過所述氧代化合物的反應(yīng)而引入的取代基，包括氨基、取代氨基(包括受保護的氨基)和硫代烷基。更具體的可參考下文給出的其它基團。
R4為氫，或取代基，如烷氧基(特別是甲氧基)、羥基、鹵基(特別是氯基)，或其它可通過親核取代或通過其它衍生化作用引入的基團，包括硫代烷基或甲磺?；?。當(dāng)R4為氫時，所述化合物為deoxyvariolin B衍生物。當(dāng)R4為羥基時，所述化合物為variolin B衍生物。更具體的可參考下文給出的其它基團。
優(yōu)選R1為在2位取代的4-嘧啶基。適合的取代基包括氨基及其衍生物，如N-?；?，特別是N-乙?；?。其它親核取代基也包括在內(nèi)，如烷氧基或烷硫基取代基，特別是甲硫基。
優(yōu)選不存在R2。
優(yōu)選R3為氨基及其衍生物，如N-酰基，特別是N-乙?；?。
優(yōu)選R4為氫。
優(yōu)選虛線表示鍵。
特別優(yōu)選的一類化合物包括其中R1為在2位上被以下基團取代的4-嘧啶基氨基、N-?；?特別是N-乙?；?、烷硫基(特別是甲硫基)、烷基或芳基-亞磺?；?特別是甲亞磺酰基)、烷基或芳基磺酰基(特別是甲磺?；?；
R2不存在；R3為任選受保護的氨基或N-?；貏e是N-乙?；?；并且R4為氫、羥基或甲氧基的式(I)化合物。
本發(fā)明還涉及藥學(xué)上可接受的鹽。
可用于本發(fā)明的取代基的例子包括OH、OR′、SH、SR′、SOR′、SO2R′、NH2、NHR′、N(R′)2、NHCOR′、N(COR′)2、NHSO2R′、C(＝O)R′、CO2H、CO2R′、C1-C12烷基和C1-C12鹵代烷基，所述R′基團或各個R′基團獨立選自O(shè)H、C1-C12烷基、C1-C12鹵代烷基、芳基(可任選被選自C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷硫基、NH2、C1-C6烷基氨基、二(C1-C6烷基)氨基、NO2、CN和鹵素的基團取代)、芳烷基或芳基鏈烯基(其中的芳基部分可任選被選自C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷硫基、NH2、C1-C6烷基氨基、二(C1-C6烷基)氨基、NO2、CN和鹵素的基團取代)，并且其中R1為式N(R′)2或N(COR′)2的基團，各個R′基團可相同或不同，或兩個R′基團與它們連接的氮原子一起形成一個5-12元雜環(huán)。
在本說明書的定義中，烷基可為直鏈或支鏈基團，并優(yōu)選具有1至約12個碳原子，更優(yōu)選1至約8個碳原子，更為優(yōu)選1至約6個碳原子，最優(yōu)選1、2、3或4個碳原子。在本發(fā)明的化合物中特別優(yōu)選烷基為甲基、乙基和丙基，包括異丙基。除非另有聲明，否則用于此處的術(shù)語“烷基”同時包括環(huán)狀和非環(huán)狀基團，而環(huán)狀基團包括至少三個碳環(huán)成員。
鹵代烷基為被一個或多個鹵原子(優(yōu)選氟、氯、溴或碘)取代的上述烷基(包括環(huán)烷基)，并優(yōu)選具有1至約12個碳原子，更優(yōu)選1至約8個碳原子，更為優(yōu)選1至約6個碳原子，最優(yōu)選1、2、3或4個碳原子。在本發(fā)明的化合物中特別優(yōu)選的鹵代烷基為被1、2或3個相同或不同的鹵原子取代的甲基、乙基和丙基(包括異丙基)，特別是氟代甲基、氟代氯代甲基、三氟代甲基和三氯代甲基。
本發(fā)明的化合物中優(yōu)選的鏈烯基和炔基具有一個或多個不飽和鍵，并具有2至約12個碳原子，更優(yōu)選2至約8個碳原子，更為優(yōu)選2至約6個碳原子，甚至更優(yōu)選2、3或4個碳原子。此處所用術(shù)語“鏈烯基和炔基”同時包括環(huán)狀和非環(huán)狀基團，而通常更優(yōu)選直鏈或支鏈非環(huán)狀基團。
在本發(fā)明的化合物中優(yōu)選的烷氧基包括具有一個或多個(但優(yōu)選只有一個)氧鍵和1至約12個碳原子，更優(yōu)選1至約8個碳原子，更為優(yōu)選1至約6個碳原子，最優(yōu)選1、2、3或4個碳原子的基團。
在本發(fā)明的化合物中優(yōu)選的烷硫基具有一個或多個(但優(yōu)選只有一個)硫醚鍵，并具有1至約12個碳原子，更優(yōu)選1至約8個碳原子，更為優(yōu)選1至約6個碳原子。特別優(yōu)選具有1、2、3或4個碳原子的烷硫基。
在本發(fā)明的化合物中優(yōu)選的烷基亞磺酰基包括那些具有一個或多個亞砜基(SO)和1至約12個碳原子，更優(yōu)選1至約8個碳原子，更為優(yōu)選1至約6個碳原子的基團。特別優(yōu)選具有1、2、3或4個碳原子的烷基亞磺酰基。
在本發(fā)明的化合物中優(yōu)選的烷基磺?；切┚哂幸粋€或多個砜基(SO2)和1至約12個碳原子，更優(yōu)選1至約8個碳原子，更為優(yōu)選1至約6個碳原子的基團。特別優(yōu)選具有1、2、3或4個碳原子的烷基磺酰基。
在本發(fā)明的化合物中優(yōu)選的烷?；切┚哂幸粋€或多個羰基(CO)和1至約12個碳原子，更優(yōu)選1至約8個碳原子，更為優(yōu)選1至約6個碳原子(包括羰基上的碳)的基團。特別優(yōu)選具有1、2、3或4個碳原子的烷?；绕涫羌柞；?、乙?；⒈；?、丁酰基和異丁?；?br> 在本發(fā)明的化合物中優(yōu)選的烷氨基具有一個或多個(但優(yōu)選只有一個)NH鍵和1至約12個碳原子，更優(yōu)選1至約8個碳原子，更為優(yōu)選1至約6個碳原子。特別優(yōu)選具有1、2、3或4個碳原子的烷氨基，尤其是甲氨基、乙氨基、丙氨基和丁氨基。
在本發(fā)明的化合物中優(yōu)選的二烷氨基具有一個或多個(但優(yōu)選只有一個)與兩個烷基結(jié)合的氮原子，兩個烷基的每一個可具有1至約12個碳原子，更優(yōu)選1至約8個碳原子，更為優(yōu)選1至約6個碳原子。所述烷基可相同或不同。特別優(yōu)選其中每個烷基具有1、2、3或4個碳原子的二烷氨基，尤其是二甲氨基、二乙氨基、N-甲基乙氨基、N-乙基丙氨基、二丙氨基、二丁氨基和N-甲基丁氨基。
在本發(fā)明的化合物中優(yōu)選的烷?；被哂幸粋€與烷基結(jié)合的NH-CO-鍵，所述烷基具有1至約12個碳原子，更優(yōu)選1至約8個碳原子，更為優(yōu)選1至約6個碳原子。特別優(yōu)選具有1、2、3或4個碳原子的烷?；被?，尤其是甲?；被⒁阴；被?、丙?；被投□；被?。特別優(yōu)選乙?；被?br> 在本發(fā)明的化合物中優(yōu)選的二烷?；被哂幸粋€與兩個上述烷酰基結(jié)合的氮原子，兩個烷酰基各自可相同或不同，具有1至約12個碳原子，更優(yōu)選1至約8個碳原子，更為優(yōu)選1至約6個碳原子。特別優(yōu)選其中每個烷?；哂?、2、3或4個碳原子的二烷酰基氨基，尤其是二甲?；被⒓柞；阴；被⒍阴；被?、二丙?；被投□；被?。特別優(yōu)選二乙酰基氨基。
在本發(fā)明的化合物中優(yōu)選的烷基磺?；被哂幸粋€與烷基結(jié)合的NH-SO2-鍵，所述烷基具有1至約12個碳原子，更優(yōu)選1至約8個碳原子，更為優(yōu)選1至約6個碳原子。特別優(yōu)選具有1、2、3或4個碳原子的烷基磺?；被?，尤其是甲磺?；被?、乙磺酰基氨基、丙磺?；被投』酋；被?。
本發(fā)明化合物的具體例子包括在以下各頁中的化合物(1)、(2)、(5)、(16)、(18)和(21)，以及我們標(biāo)記為(20a)的化合物，該化合物在方案4中為化合物(20)和(21)的中間體，具有下式的結(jié)構(gòu)，其中不存在R2，R3為乙酰氨基，R4為氫和R1為2-甲硫基嘧啶-4-基 本發(fā)明還提供包括本發(fā)明的化合物和藥學(xué)上可接受的載體的藥用組合物，提供本發(fā)明化合物在制備藥物中的用途。還提供治療方法。
藥用組合物的實例包括含有適當(dāng)組分的供口服、局部或腸胃外給藥的任何固體(如片劑、丸劑、膠囊劑、顆粒劑)或液體(溶液劑、混懸劑或乳劑)，且它們可包含所述純的化合物或者與任何載體或其它藥理活性的化合物相結(jié)合。當(dāng)這些組合物經(jīng)腸胃外給藥時，須經(jīng)滅菌處理。
本發(fā)明的各種化合物或組合物可通過任何合適的方法給藥，如靜脈內(nèi)輸注、口服制劑給藥、腹膜內(nèi)和靜脈內(nèi)給藥。優(yōu)選采用的輸注時間低于24小時，更優(yōu)選2-12小時，最優(yōu)選2-6小時。特別理想的是短時間的輸注，這樣不必留在醫(yī)院進行過夜治療。但是，如果需要，輸注時間可為12-24小時或者更長?？稍?-4周的適當(dāng)間隔內(nèi)進行輸注。含有本發(fā)明化合物的藥用組合物可通過在緩釋制劑中的脂質(zhì)體或毫微球囊體、或者通過其它標(biāo)準(zhǔn)傳遞方式進行傳遞。
所述化合物的正確劑量將根據(jù)具體的劑型、施用方式、具體的部位、宿主以及所治療的腫瘤而變化。還應(yīng)考慮到其它因素如年齡、體重、性別、飲食、給藥時間、排出率、宿主的癥狀、聯(lián)合使用的藥物、反應(yīng)敏感性以及疾病的嚴重程度?？稍谧畲蟮哪褪軇┝糠秶鷥?nèi)連續(xù)或周期性給藥。
本發(fā)明還提供用于聯(lián)合療法的藥用組合物，所述藥用組合物包括本發(fā)明的化合物和至少一種其它具有治療活性的化合物。這些其它的化合物可具有抗腫瘤活性，或可具有某些與本發(fā)明化合物的抗腫瘤活性一起發(fā)揮作用的活性。
這些其它藥物可作為同一組合物中的一部分，或者可作為獨立的組合物同時或在不同時間進行給藥。所述其它藥物不受特別限定，適當(dāng)?shù)暮蜻x藥物包括a)具有抗有絲分裂作用的藥物，尤其是那些靶向細胞骨架成分的藥物，包括微管調(diào)節(jié)劑，如紫杉烷類藥物(如紫杉酚、紫杉醇、taxotere、docetaxel)、鬼臼毒素或長春花堿類(長春新堿、長春堿)；b)抗代謝藥物，如5-氟尿嘧啶、阿糖胞苷、吉西他濱、嘌呤類似物(如噴司他丁、甲氨蝶呤)；c)烷基化劑，如氮芥類(如環(huán)磷酰胺或異環(huán)磷酰胺)；d)靶向DNA的藥物，如蒽環(huán)類(antracycline)藥物多柔比星(adriamycin)、多柔比星(doxorubicin)、pharmorubicin或表柔比星；e)靶向拓撲異構(gòu)酶的藥物，如依托泊苷；f)激素和激素激動劑或拮抗劑，如雌激素、抗雌激素(他莫昔芬及相關(guān)化合物)和雄激素、氟他胺、亮丙瑞林、戈舍瑞林、環(huán)丙孕酮(cyprotrone)或奧曲肽；g)靶向腫瘤細胞信號傳導(dǎo)的藥物，包括抗體衍生物，如herceptin；h)烷基化劑，如鉑類藥物(順鉑、卡鉑(carbonplatin)、奧沙利鉑、卡鉑(paraplatin))或亞硝基脲；i)有效影響腫瘤代謝的藥物，如基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑；j)基因療法和反義劑；k)抗體療法；1)其它源于海洋的生物活性化合物，特別是didemnins如aplidine，或海鞘素，如ET743。m)止吐藥，具體如地塞米松。
方案4的化合物的細胞毒性由以下的IC50μM數(shù)據(jù)來說明化合物 P-388 A-549 HT-2950.360.04 0.0421 ＞3 0.16 0.1620a ＞3 0.29 0.29variolinB0.850.17 0.09本發(fā)明還涉及從7-氮雜吲哚開始或在更后的階段開始合成所述化合物的方法。以7-氮雜吲哚為原料，在2位碳上鋰化，引入C2-側(cè)鏈，隨后環(huán)化得到了三環(huán)吡啶并吡咯并嘧啶酮(11)。通過雜芳基偶合反應(yīng)引入第四個芳環(huán)。
因此，本發(fā)明提供一種制備本發(fā)明化合物的方法，所述方法包括使任選取代的5-鹵代吡啶并[3′，2′4，5]吡咯并[1，2-c]嘧啶或8，9-二氫-5-鹵代吡啶并[3′，2′4，5]吡咯并[1，2-c]嘧啶-9-同與衍生的芳族化合物，如甲錫烷基芳基化合物，特別是三甲基甲錫烷基芳基化合物，尤其是三甲基甲錫烷基嘧啶衍生物反應(yīng)?？蓪⑺玫漠a(chǎn)物進一步反應(yīng)以改變?nèi)〈？蓪⒃匣衔镏械陌被蚱渌钚匀〈Ｗo起來，并隨后脫保護。
因此，本發(fā)明優(yōu)選的中間體化合物具有下式的結(jié)構(gòu) X為鹵基，R2、R3和R4如上定義，其中X具體為碘基、R2為保護基團、R3為受保護的氨基和R4為氫、羥基或甲氧基。
我們所研究的合成variolin B的方法以deoxyvariolin B(5)為目標(biāo)。我們的逆合成是以由7-氮雜吲哚制備的共同的吡啶并吡咯并嘧啶三環(huán)體系為基礎(chǔ)。關(guān)鍵步驟是用于引入嘧啶取代基的由Pd(O)催化的雜芳基偶合。 在7-氮雜吲哚的2位上引入官能化的2碳鏈(參見J.Org.Chem.1965，30，2531-2533)通過2-鋰-衍生物與2-鄰苯二甲酰亞氨基乙醛(6)的反應(yīng)來實現(xiàn)。2-鄰苯二甲酰亞氨基乙醛(6)本身通過以下步驟獲得在140℃下，使2-氨基乙醛二甲縮醛與鄰苯二甲酸酐在二氯甲烷中反應(yīng)15分鐘，將氨基保護；接著用10％的鹽酸在回流下將所述縮醛基團水解；收率為75％。關(guān)于7-氮雜吲哚的鋰化，現(xiàn)有技術(shù)僅描述的是對其N-苯基磺?；苌锏匿嚮?，參見Tetrahedron，1997，53，3637-3648。而我們使用Katritzky描述的方法(參見J.Am.Chem.Soc.1986，108，6808-6809)，該方法采用的是對原位形成的1-羧酸鋰鹽的2-鋰化，這是因為我們發(fā)現(xiàn)這樣的收率比采用1-苯基磺?；?7-氮雜吲哚的高，另外避免了N-保護基團的引入和除去兩步獨立的步驟。由此，雙鋰衍生物(7)與醛(6)的反應(yīng)以44％的收率得到醇(8)。醇的保護(變?yōu)樗臍溥拎训男问?得到非對映異構(gòu)體的混合物。該混合物沒有被進一步分離，這是因為在合成后期兩個立體異構(gòu)中心(stereogeniccenters)都將不復(fù)存在。鄰苯二甲酰亞胺殘基的肼解定量地得到胺(9)。所得的胺(9)在二氯甲烷中，以二異丙基乙胺(DIPEA)為堿，采用三光氣處理轉(zhuǎn)化為四氫嘧啶酮(10)，收率76％。通過酸水解除去羥基保護基團，接著通過甲磺酸鹽對所述醇進行脫水得到二氫嘧啶酮(11)(方案1)。方案1吡啶并[3′，2′4，5]吡咯并[1，2-c]嘧啶-1-酮(11)9的合成 in-BuLi、THF、-78℃至室溫；iiCO2、-78℃；iiit-BuLi、THF、-78℃；iv5 THF、-78℃至室溫(44％)；vDHF、HCl-苯、CHCl3，(87％)；viNH2NH2·H2O、EtOH，(100％)；
vii(Cl3CO)2CO、DIPEA、CH2Cl2、室溫(76％)；viii4N HCl、CH2Cl2(100％)；ixMsCl、TEA、CH2Cl2、0℃(95％)按照我們以前將雜芳基與7-氮雜吲哚偶合(參見Synthesis 1999，615-620)，以及將二氫吡咯并[1，2-c]嘧啶-1-酮鋰化(參見J.Soc.Chem.Perkin Trans.I，1999，249-255)的經(jīng)驗，我們計劃由受保護的鹵代衍生物(13)來制備錫衍生物(14)。在DMF中，以氫化鈉為堿，采用甲基氯甲基醚對三環(huán)嘧啶酮(11)進行保護，得到(12)。在氫氧化鉀中使用N-溴代琥珀酰亞胺(NBS)或碘對(12)進行鹵化，分別得到(13a)(80％)和(13b)(62％)?？赏ㄟ^對比1H-NMR波譜證實在C-5位上引入鹵素(12)在δ6.41ppm處出現(xiàn)的H-5單峰在(13a)和(13b)的波譜中沒有出現(xiàn)。遺憾的是我們無法分離出錫衍生物(14)，例如采用丁基鋰處理(13a)，隨后用氯化三甲基錫猝滅(參見Synthesis 1999，615-620)，得到一種絡(luò)合物混合物，但無法將其解析出來。試圖通過在二噁烷中，以Pd(PPh3)4為催化劑，用六甲基二錫處理(13b)來使碘-錫互換，得到(14)和(12)的混合物(比率為7∶3)，但無法通過柱層析分離出14。
方案2 iMOMCl，NaH，DMF，0℃(87％)；iiNBS，CH2Cl2，0℃(80％)；iiI2，KOH，DMF，0℃(62％)我們現(xiàn)在改用三甲基甲錫烷基嘧啶(15)和碘代-7-氮雜吲哚(13b)來實施偶聯(lián)反應(yīng)。對嘧啶(15)的制備(參見Tetrahedron 1989，45，993-1006)的改進之處在于使用Pd(OAc)2和PPh3的THF溶液。與現(xiàn)有技術(shù)描述的工作比較，減少了TBAF的量和反應(yīng)時間。 將碘代衍生物(1mmol)、(15)(3mmol)、催化劑A或B、LiCL(3mmol)的二噁烷(20ml)溶液回流5小時。蒸發(fā)溶劑，將剩余物通過快速柱層析純化。(13b)和(15)間的偶聯(lián)反應(yīng)在所有試驗條件下都得到(12)和(16)的混合物，無法將它們分離(表1)。
表1.(13b)和(15)在二噁烷中的偶聯(lián)反應(yīng)(15)/(13b)aCatal/LigbLiCl/CuIc16/12d％e1.1A 3/-- 2∶1 561.2B 3/-- 2∶1 522 B 3/0.1 3∶1 53a摩爾比；bA＝Pd(PPh3)4，0.1當(dāng)量；B＝Pd2(dba)30.1當(dāng)量和PPh30.2當(dāng)量；c相對于1當(dāng)量的13b；d由1H-NMR測得的比；e由1H-NMR測量的由粗反應(yīng)混合物計算的(16)的收率。
由于難以將(16)純化，我們嘗試采用新的保護基團。碘代化合物(17)(與(13b)的區(qū)別在于保護基團不同)通過(11)與甲苯磺酰氯和氫化鈉的DMF溶液反應(yīng)，接著用NIS碘化來合成。
(17)和三甲基甲錫烷基嘧啶(15)間的偶聯(lián)反應(yīng)產(chǎn)生四環(huán)化合物(18)，但即使采用表1所示用于(13b)和(15)的偶聯(lián)反應(yīng)的最佳反應(yīng)條件，也只能得到10％的收率。
方案4.deoxyvariolin B的合成 iTsCl，NaH，DMF(40％)；iiNIS.CHCl3，室溫(80％)；iii15，Pd2(dba)3，PPh3，LiCl，CuI(10％)；ivTMSCl，HMDSA，2，6-二甲基吡啶；vNH3，150℃，60psi(30％兩步)；viAc2O，THF(75％)；viiNIS.CHCl3(95％)；viiiiii隨后為HCl-MeOH，(45％)；ixMCPBA，CH2Cl2，0℃(90％)；
xNH4OH，二噁烷，80℃(90％)。
下一種近似的方法是通過將嘧啶酮(11)轉(zhuǎn)化成iodoaniidopyrimidine(20)來改變C環(huán)的官能化。氨基衍生物19通過采用TMSCl和六甲基二硅氮烷(HMDSa)作為甲硅烷基化劑將(11)O-甲硅烷基化，接著用氨親核取代制得，參見Lebgs Ann.Chem.，1975，988-1002。胺(19)的?；驮诟缓须娮拥沫h(huán)空位上的鹵代可以很好的收率進行。
采用前述相同的反應(yīng)條件和催化劑，使(20)和(15)進行雜芳基偶聯(lián)得到各種?；腿ケＷo的胺的混合物，該產(chǎn)物用無水HCl的甲醇溶液進行甲醇解，得到胺(21)，收率45％。通過用氨基取代新產(chǎn)生的嘧啶環(huán)上的甲硫基制得deoxyvariolin B(5)。用間氯過苯甲酸氧化(21)，接著用氫氧化銨將所得的砜取代為氨基，以極好的收率得到(5)，參見Tetrahedron 1989，45，993-1006和Katrizky，A.R.；Rees，C.W.Comprehensive Heterocyclic Chemistry，Pergamon Press，Oxford，1984，第3卷，111頁。
一種更通用的合成方案為 試劑in-BuLi，THF，-78℃至室溫；iiCO2，-78℃；iiit-BuLi，THF，-78℃；iv6，THF，-78℃至室溫；vDHP，HCl，苯，CHCl3，Δ；viNH2NH2.H2O2，EtOH，Δ；vii(Cl3CO)2CO，DIPEA，CH2Cl2，室溫；viii4N HCl，CH2Cl2；ixMsCl，TEA，CH2Cl2，0℃；xMOMCl或TsCl，NaH，DMF，0℃；xiNBS/NIS，CH2Cl2，0℃或I2，KOH，，0℃；
xii15，Pd2(dba)3，PPh3，LiCl，CuI，二噁烷，Δ；xiiiTMSCl，HMDSA，二甲基吡啶，D；xivNH3，150℃，60psi；xvAc2O，THF，室溫；xviNIS，CHCl3，0℃；xviiTsN＝CCl2，DIPEA，CH2Cl2，室溫；xviii4N HCl，CHCl3，室溫；xixMsCl，TEA，CH2Cl2，室溫；xxNIS，CHCl3，-30℃；xxi無水MeOH-HCl或48％HBr，Δ。
由4-甲氧基-7-氮雜吲哚制備三環(huán)化合物11b(X＝OMe)，參見J.Heterocyclic Chem.1989，26，317，接著按照相同的方式制備11a。通過用三甲基甲硅烷基氯(TMSCl)和六甲基二硅氮烷(HMDSA)六甲基二硅氮烷進行O-甲硅烷基化，接著用氨進行親核取代將11b轉(zhuǎn)化為19b，收率僅為22％。將19b?；⑺玫囊阴；苌锏饣玫降獯阴０?0b。由于20b上存在H3-H4和H7-H8偶合質(zhì)子，因此在1HNMR上顯示為兩組獨立的AB芳族體系。20b和2-乙酰基氨基-4-三甲基甲錫烷基嘧啶(27)在鈀催化下偶聯(lián)，接著用酸處理得到O-methylvarioline B(5b)。以4-氯-2-甲磺酰基嘧啶為原料，用氨的異丙醇溶液對其甲磺?；M行親核取代，接著用乙酸酐?；S后以Pd(PPh3)4為催化劑，用六甲基二錫的二噁烷溶液進行鹵素金屬的互換制得甲錫烷基嘧啶(27)，收率40％，參見Heterocycles，1977，8，299。
為了改進三環(huán)體系19的制備，略去嘧啶環(huán)的形成步驟。通過使9a-c與N-二氯亞甲基-4-甲基苯磺酰胺和DIPEA的二氯甲烷溶液反應(yīng)，接著進行O-去保護和脫氫作用制得三環(huán)化合物22a-c，參見Chem.Ver.1966，99，1252。按照將10→11的相同轉(zhuǎn)化方法，通過對22進行酸催化的O-去保護，接著脫氫制得N-甲苯磺?；苌?3。使用Na的氨溶液或Na的萘溶液將23的N-甲苯磺酰基保護基去除得到19，中等收率。
在前述相同條件下使23與甲錫烷基衍生物27進行雜芳基偶聯(lián)反應(yīng)得到25，具有非常好的收率。
可通過用甲醇的鹽酸溶液進行酸催化的甲醇解來實施所述N-乙?；娜ケＷo。可通過用HBr處理來實現(xiàn)25a→26的轉(zhuǎn)化?；衔?6是一種僅一個氮受保護的新varioline B衍生物。
已經(jīng)得到varoline B的幾種衍生物，其中三種的差別僅是一個基團的變化5a為dehydroxyvarioline B、5b為methylvarioline B和26為tosylvarioline B。
可按照用于23的相同條件除去26的甲苯磺?；?，得到variolineB。
按照類似的試驗方法，由23c可制得化合物25c，由25c又可制得吡啶環(huán)的衍生物。
我們以前的試驗表明雜芳族錫衍生物和13b、17和24的偶聯(lián)具有很好的結(jié)果，使通式中的R1具有多樣性。
我們已經(jīng)研究出一種通用的合成方法，該方法不僅可用于合成這類海洋生物堿的這些基團，而且還可用于天然產(chǎn)物的其它衍生物。
本申請要求在先申請的優(yōu)先權(quán)。為了使在先申請的所有內(nèi)容均包括本說明書中，我們特別地通過引用該公開而將其結(jié)合到本文中來。
連續(xù)用二氯甲烷萃取6，7，8，9-四氫-6-羥基吡啶并[3′，2′4，5]吡咯并[1，2-c]嘧啶-9-酮鹽酸鹽的飽和Na2CO3水溶液得到共軛堿。6，7，8，9-四氫-6-羥基吡啶并[3′，2′4，5]吡咯并[1，2-c]嘧啶-9-酮IR(KBr)ν3400(m，NH/OH)，1707(s，C＝O)，1468(m，C-N)，1408(M，C-N)，1297(m，C-O).1H-NMR(DMSO-d6，300MHz)δ3.27(m，1H，H7)，3.42(m，1H，H7)，4.90(dd，J9.3和5.1，1H，H6)，5.88(d，J5.1.1H，OH)，6.54(s，1H，H5)，7.21(dd，J7.4和4.2，1H，H3)，7.88(br，1H，NH)，7.99(brd，J7.4，1H，H2)，8.30(brd，J4.2，1H，H4).13C-NMR(DMSO-d6，75MHz)δ41.0(t，C7)，55.7(d，C6)，95.4(d，C5)，113.8(d，C3)，116.7(s，C4a)，124.2(d，C4)，135.4(s，C5a)，139.3(d，C2)，142.9(s，C10a*)，143.8(s，C9*).實施例136，7，8，9-四氫-6-羥基-4-甲氧基吡啶并[3′，2′4，5]吡咯并[1，2-c]嘧啶-9-酮 往10b(25mg，0.08mmol)的二氯甲烷(5ml)溶液中加入4N的HCl水溶液(5ml)，室溫下將所得混合液攪拌45分鐘。分離出有機溶液，用4N的HCl水溶液萃取。過濾水溶液并蒸發(fā)得到6，7，8，9-四氫-6-羥基-4-甲氧基吡啶并[3′，2′4，5]吡咯并[1，2-c]嘧啶-9-酮(20mg，95％)的鹽酸鹽，為淡橙色固體。IR(薄膜法)ν3244(m，NH)，1718(s，C＝O)，1627(s，NCO)，1505(m，C＝N)，1298(m，C-O).1H-NMR(CD3OD，200MHz)δ3.56(dd，J13.6和4.8，1H，H7)，3.71(4d，J13.6和3.6，1H，H7)，4.29(s，3H，MeO)，5.11(dd，J4.8和3.6，1H，H6)，6.91(s，1H，H5)，7.40(d，J6.9，1H，H3)，8.42(d，J6.9，1H，H2).13C-NMR(CD3OD，75MHz)δ48.9(t，C7)，60.5(q，Me)，62.3(d，C6)，101.7(d，C5)，105.5(d，C3)，117.4(s，C4a)，137.0(s，C5a)，140.6(d，C2)，141.4(s，C10a)，151.9(s，C9)，169.0(s，C4).MS(EI)m/z234(M+1，12)，233(M+，77)，215(M-H2O，17)，55(100).HRMS m/z對C11H11N3O3的計算值233.0800；實測值233.0813。
將17(50mg，0.11mmol)、2-甲硫基-4-三甲基甲錫烷基嘧啶(93mg，0.32mmol)、Pd2(dba)3(11mg，0.011mmol)、PPh3(6mg，0.022mmol)、LiCl(14mg，0.32mmol)和CuI(4mg，0.011mmol)的二噁烷(2ml)溶液回流5小時。蒸發(fā)出溶劑，粗產(chǎn)物經(jīng)快速柱層析純化。用CH2Cl2/MeOH/NH3水溶液(4/4/2)洗脫得到18(4mg，12％)。1H-NMR(DMSO-d6，300MHz)δ2.60(3H，s，MeS)，7.20(1H，d，J6.3，H7)，7.42(1H，dd，J7.5和4.2，H3)，7.45(1H，d，J5.7，H5’)，7.70(1H，d，J6.3，H6)，8.22(1H，d，J4.2，H2)，8.39(1H，d，J5.7，H6’)，8.73(1H，d，J7.5，H4).MS(APCI)AP-m/z309(M+，20)，308(M-1，90)，307(M-2，100)；AP+m/z331(M+Na，10)，310(M+1，20)，309(M+，25).
將9-乙?；被?5-(2-甲亞磺酰基嘧啶-4-基)吡啶并[3′，2′4，5]吡咯并[1，2-c]嘧啶(15mg，0.043mmol)在5N HCl/MeOH(5ml)中的溶液回流1小時。除去溶劑，將剩余物溶解在飽和Na2CO3水溶液中。用二氯甲烷萃取所述溶液。蒸發(fā)出有機溶劑，得到21(12mg，90％)。
重復(fù)反應(yīng)，并在臨快速柱層析純化前用HCl/MeOH處理，得到唯一的產(chǎn)物21(45％)。9-氨基-5-(2-甲亞磺?；奏?4-基)吡啶并[3′，2′4，5]吡咯并[1，2-c]嘧啶(21)mp 223-224℃(CH2Cl2/己烷)。IR(KBr)ν3390(m，NH)，1632 (m，C＝C)，1557(m，C＝N)，1517(m)，1464(m，C-N，1265(m).1H-NMR(CDCl3，300MHz)δ2.68(s，3H，Me)，7.33(d，J5.4，1H，H5’)，7.49(dd，J8.4和4.8，1H，H3)，7.58(d，J6.6，1H，H7)，7.68(d， J6.6，1H，H6)，8.40(dd，J4.8和1.6，1H，H2)，8.48(d，J5.4，1H，H6’)，8.73(dd，J8.4和1.6，1H，H4).13C-NMR(CDCl3，50MHz)δ14.4(q，MeS)，100.3(s，C5)，102.1(d，C6)，112.6(d，C5’)，120.7(d，C3)，122.0(s，C4a)，128.6(d，C4)，138.7(s，C5a)，140.3(d，C2)，142.1(s，C10a)，143.4(d，C7)，149.8(s，C9)，156.5(d，C6’)，161.2(s，C4’)，172.3(s，C2’).MS(EI)m/z309(M+1，7)，308(M+，33).HRMS m/z對C15H12N6S的計算值308.0844；實測值308.0839。UV(MeOH)λ217(16，324)，252(21，415)，400(11，692)。9-乙?；被?5-(2-甲亞磺?；奏?4-基)吡啶并[3′，2′4，5]吡咯并[1，2-c]嘧啶mp 160-162℃(CH2Cl2/己烷)。IR(KBr)ν1704(s，C＝O)，1620(m，C＝C)，1556(m)，1536(m，C＝N)，1517(m)，1502(m)，1476(m，C-N)，1265(m).1H-NMR(CDCl3，200MHz)δ2.67(s，3H，Me)，2.69(s，3H，MeS)，7.36(d，J5.2，1H，H5’)，7.58(dd，J8.2和4.8，1H，H3)，7.83(d，J6.6，1H，H7)，7.93(d，J6.6，1H，H6)，8.52(dd，J4.8和1.4，1H，H2)，8.54(d，J5.2，1H，H6’)，8.77(dd，J8.2和1.4，1H，H4).13C-NMR(CDCl3，75MHz)δ14.4(q，MeS)，26.4(q，Me)，104.5(s，C5)，107.4(d，C6)，113.0(d，C5’)，121.1(d，C3)，121.6(s，C4a)，129.5(d，C4)，137.7(s，C5a)141.0(d，C2)，141.1(d，C7)，142.5(s，C10a)，143.3(s，C9)，156.8(d，C6’)，160.7(s，C4’)，170.2(s，C2’)，172.7(s，CO).MS(EI)m/z351(M+1，3)，350(M+，33)，308(M-Ac，100).HRMS m/z對C17H14N6OS的計算值350.0949；實測值350.0940。UV(MeOH)λ255(25，480)，400(17，710)。
參見Heterocycles，1977，8，299。室溫下，往4-氯-2-甲亞磺?；奏?5g，31mmol)的二氯甲烷(100ml)溶液中加入mCPBA(16.12g，94mmol)，并攪拌2小時。用飽和Na2S2O3水溶液洗滌所得混合液，并將水溶液用飽和Na2CO3水溶液堿化。分離出有機層，用CH2Cl2萃取水溶液。將有機層一起蒸發(fā)得到4-氯-2-甲磺?；奏?5.5g，92％)的白色固體。1H-NMR(CDCl3，200MHz)δ3.39(s，3H，Me)，7.61(d，J5.4，1H，H5)，8.83(d，J5.4，1H，H6).MS(CI，CH4)m/z192(M35Cl+，1)，157(M-Cl，1)，97(100).
權(quán)利要求
1.一種式(I)的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽 其中R1為芳族取代基；R2為氫，或當(dāng)虛線不存在時為取代基，或當(dāng)虛線表示鍵，使得在帶有R2的氮和帶有R3的碳之間為雙鍵時，R2不存在；當(dāng)虛線不存在時，R3為氧代基＝O，而當(dāng)虛線表示鍵，使得在帶有R2的氮和帶有R3的碳之間為雙鍵時，R3為取代基；R4為氫或取代基。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中R1為4-嘧啶基。
3.權(quán)利要求2的化合物，其中4-嘧啶基被取代。
4.前述權(quán)利要求中任一項的化合物，其中R2如存在則為氫。
5.前述權(quán)利要求中任一項的化合物，其中R3為氧代基或為例如可通過所述氧代化合物的反應(yīng)而引入的取代基。
6.前述權(quán)利要求中任一項的化合物，其中R4為氫、甲氧基或羥基。
7.前述權(quán)利要求中任一項的化合物，其中所述點劃線表示鍵。
8.前述權(quán)利要求中任一項的化合物，其中R1為在2位上被以下基團取代的4-嘧啶基氨基、N-?；?、甲硫基、甲亞磺?；蚣谆酋；?；R2不存在；R3為任選受保護的氨基或N-酰基；并且R4為氫、甲氧基或羥基。
9.權(quán)利要求1的化合物，所述化合物選自下式的8，9-二氫-5-(2-甲硫基嘧啶-4-基)吡啶并[3′，2′4，5]吡咯并[1，2-c]嘧啶-9-酮 下式的9-氨基-5-(2-甲硫基嘧啶-4-基)吡啶并[3′，2′4，5]吡咯并[1，2-c]嘧啶 下式的9-乙酰基氨基-5-(2-甲磺?；奏?4-基)吡啶并[3′，2′4，5]吡咯并[1，2-c]嘧啶 下式的9-氨基-5-(2-甲亞磺酰基嘧啶-4-基)吡啶并[3′，2′4，5]吡咯并[1，2-c]嘧啶 下式的9-氨基-5-(2-甲磺?；奏?4-基)吡啶并[3′，2′4，5]吡咯并[1，2-c]嘧啶 下式的9-氨基-5-(2-氨基嘧啶-4-基)吡啶并[3′，2′4，5]吡咯并[1，2-c]嘧啶 下式的4-甲氧基-9-甲苯磺酰氨基-5-(2-乙?；被奏?4-基)吡啶并[3′，2′4，5]吡咯并[1，2-c]嘧啶
10.一種藥用組合物，所述藥用組合物包括前述權(quán)利要求中任一項的化合物和藥學(xué)上可接受的載體。
11.用于聯(lián)合療法的藥用制劑，所述藥用制劑包括權(quán)利要求1至9中任一項的化合物和至少一種其它具有治療活性的化合物。
12.權(quán)利要求1至9中任一項的化合物在制備用于治療癌癥的藥物中的用途。
13.一種制備權(quán)利要求1至9中任一項的化合物的方法，所述方法包括使任選取代的5-鹵代吡啶并[3′，2′4，5]吡咯并[1，2-c]嘧啶或8，9-二氫-5-鹵代吡啶并[3′，2′4，5]吡咯并[1，2-c]嘧啶-9-酮與衍生的芳族化合物反應(yīng)，并任選將所得的產(chǎn)物衍生。
14.權(quán)利要求13的方法，其中所述衍生的芳族化合物為甲錫烷基芳基化合物。
15.一種中間體化合物，所述中間體化合物為下式的任選取代的5-鹵代吡啶并[3′，2′4，5]吡咯并[1，2-c]嘧啶或8，9-二氫-5-鹵代吡啶并[3′，2′4，5]吡咯并[1，2-c]嘧啶-9-酮 X為鹵基，R2、R3和R4如權(quán)利要求1中定義。
16.權(quán)利要求15的中間體化合物，其中X為碘基，R2為保護基團，R3為受保護的氨基，R4為氫、羥基或甲氧基。
全文摘要
本發(fā)明提供式(I)的抗腫瘤化合物以及其藥學(xué)上可接受的鹽，其中R
文檔編號C07D471/14GK1468240SQ0181666
公開日2004年1月14日 申請日期2001年8月3日 優(yōu)先權(quán)日2000年8月3日
發(fā)明者M·阿瓦雷滋, D·F·布勒達, J·L·F·普恩特斯, F 普恩特斯, M 阿瓦雷滋, 布勒達 申請人:巴塞羅那大學(xué)