蒼術(shù)抗腫瘤提取物及其組合物的制備方法和醫(yī)藥應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明屬醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種維吾爾藥蒼術(shù)抗腫瘤提取物及其組合物的制備方法和其在制備預(yù)防及治療乳腺癌、肺癌、胃癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、宮頸癌、腦膠質(zhì)瘤、肝癌等惡性腫瘤的藥物中的應(yīng)用。所述的蒼術(shù)抗腫瘤提取物通過(guò)如下方法制備得到：先用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:0，體積比）洗脫，繼用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100：1-100:4，體積比）洗脫，石油醚：丙酮100：1-100:4洗脫液干燥或先用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:6，體積比）洗脫，繼用石油醚：丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:8，體積比）洗脫，石油醚：乙酸乙酯100:8洗脫液干燥即得。
【專利說(shuō)明】
蒼術(shù)抗腫瘤提取物及其組合物的制備方法和醫(yī)藥應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種維吾爾藥蒼術(shù)抗腫瘤提取物及其組合物的 制備方法和其制備預(yù)防及治療肝癌、肺癌、胃癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、乳腺癌、宮頸癌、腦膠質(zhì)瘤 等惡性腫瘤藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 本品為菊科植物蒼術(shù)，拉丁學(xué)名Atractylodes Lancea(Thunb. )DC.。多年生草本 植物。根狀莖平臥或斜升，粗長(zhǎng)或通常呈疙瘩狀，生多數(shù)等粗等長(zhǎng)或近等長(zhǎng)的不定根。分布 黑龍江、遼寧、吉林、內(nèi)蒙古、河北、山西、甘肅、陜西、河南、江蘇、浙江、江西、安徽、四川、湖 南、湖北等地。朝鮮及蘇聯(lián)遠(yuǎn)東地區(qū)亦有分布蒼術(shù)多生長(zhǎng)在稀疏柞樺林、灌木林帶山坡草 地、灌叢及林間草叢中，為稀見(jiàn)伴生植物。其中江蘇是茅蒼術(shù)的主要產(chǎn)區(qū)，稱之地道蒼術(shù)產(chǎn) 區(qū)，一向調(diào)供全國(guó)。用于濕阻中焦，脘腹脹滿，泄瀉，水腫，腳氣痿蹙，風(fēng)濕痹痛，風(fēng)寒感冒，夜 盲，眼目昏澀。
[0003] 但是，對(duì)其抗腫瘤的有效成分一直不清楚，本發(fā)明通過(guò)系統(tǒng)地篩選研究，在研究蒼 術(shù)抗腫瘤活性時(shí)意外地發(fā)現(xiàn)，蒼術(shù)亦具有很好的乳腺癌、宮頸癌、肝癌、肺癌、胃癌、結(jié)腸癌、 胰腺癌、腦膠質(zhì)瘤等惡性腫瘤的預(yù)防及治療作用，可以應(yīng)用癌癥的預(yù)防和治療。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明所解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種蒼術(shù)提取物。
[0005] 本發(fā)明還提供了以蒼術(shù)提取物為主要活性成分的組合物。
[0006] 本發(fā)明同時(shí)提供了蒼術(shù)提取物及其組合物的制備和在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
[0007] 本發(fā)明是通過(guò)如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：
[0008] 維吾爾藥蒼術(shù)經(jīng)甲醇超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠（SiO2)柱分離，上樣后的硅 膠柱，用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（100:0-0:100)梯度洗脫（石油醚：乙酸乙酯，具體比 例見(jiàn)表1)，然后再用甲醇洗脫，各石油醚：乙酸乙酯比例混合溶劑洗脫液，濃縮，干燥后，利 用體外抗腫瘤活性篩選體系測(cè)試其抗腫瘤活性，意外地發(fā)現(xiàn)先用石油醚：乙酸乙酯混合溶 劑（石油醚：乙酸乙酯，100:0,體積比）洗脫，繼用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙 酸乙酯，100 :1-100:4,體積比）洗脫，石油醚：乙酸乙酯100 :1-100:4洗脫液干燥后，具有 顯著地抗腫瘤活性。優(yōu)選地，先用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:0， 體積比）洗脫，繼用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:4,體積比）洗脫， 石油醚：乙酸乙酯100 :1-100:4洗脫液干燥即得?？鼓[瘤活性的化合物，可以通過(guò)以上方 法，得到富集，從而與其他雜質(zhì)類成分分離開(kāi)。該活性部位從未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道，其100 :4洗脫 液的TLC分析表征如圖1，TLC色譜條件：GF254硅膠板，展開(kāi)系統(tǒng)：石油醚：乙酸乙酯：丙酮 (6:1:1)，顯色方法：香草醛-濃硫酸顯色。
[0009] 或維吾爾藥蒼術(shù)經(jīng)甲醇超聲提取，先用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸 乙酯，100 :0-100:6,體積比）洗脫，繼用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯， 100:8,體積比）洗脫，石油醚：乙酸乙酯100:8洗脫液干燥后，具有顯著地抗腫瘤活性。優(yōu) 選地，先用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:6,體積比）洗脫，繼用石油 醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:8,體積比）洗脫，石油醚：乙酸乙酯100:8 洗脫液干燥后即得?？鼓[瘤活性的化合物，可以通過(guò)以上方法，得到富集，從而與其他雜質(zhì) 類成分分離開(kāi)。該活性部位從未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道，其100 :8洗脫液的TLC分析表征如圖2, TLC 色譜條件：GF254硅膠板，展開(kāi)系統(tǒng)：石油醚：乙酸乙酯：丙酮（6:1:1)，顯色方法：香草醛-濃 硫酸顯色。
[0010] 具體，發(fā)現(xiàn)過(guò)程如下：
[0011] 1、維吾爾藥蒼術(shù)經(jīng)甲醇超聲提取物的制備
[0012] 取維吾爾藥蒼術(shù)20g，經(jīng)100mL甲醇超聲提取15min，提取液濃縮后，得提取物得提 取物 SN0135A，上樣 SN0135A :1. 8499g，留樣 SN0135A :0· 0975g。
[0013] 2、石油醚：乙酸乙酯混合溶劑梯度洗脫方法和結(jié)果
[0014] 取維吾爾藥蒼術(shù)20g，經(jīng)100mL甲醇超聲提取15min，提取液濃縮后，得提取物 SN0135A，上樣 SN0135A :1. 8499g，留樣 SN0135A :0. 0975g，甲醇溶解，拌樣硅膠 3. 0g，空白硅 膠IOg,玻璃柱內(nèi)徑2cm，石油醚-乙酸乙酯系統(tǒng)洗脫（條件見(jiàn)表1)，柱體積25ml，每個(gè)梯度 洗脫200ml，得到，各個(gè)濃度提取洗脫液的洗脫物，回收溶劑，即得，石油醚：乙酸乙酯梯度 洗脫提取物，收率見(jiàn)表1，TLC分析結(jié)果見(jiàn)圖3,圖4, TLC色譜條件：GF254硅膠板，展開(kāi)系統(tǒng)： 石油醚：乙酸乙酯：丙酮（6:1:1)，顯色方法：香草醛-濃硫酸顯色。
[0015] 表 1

[0017]
[0018] 3、抗腫瘤活性篩選方法和結(jié)果
[0019] 1)實(shí)驗(yàn)條件
[0020] a)細(xì)胞株信息
[0021] 大鼠膠質(zhì)瘤C6購(gòu)于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心細(xì)胞庫(kù)
[0022] b)藥品及試劑
[0023] 樣品無(wú)菌條件下，DMSO溶解配置成母液濃度為100mg/mL，使用時(shí)用RPMI-1640培 養(yǎng)液稀釋至所需濃度（DMSO彡1%。）。
[0024] RPMI Medium 1640培養(yǎng)基干粉購(gòu)于美國(guó)GIBCO公司。胎牛血清購(gòu)于北京元亨圣馬 生物技術(shù)研究所。Trypsin 1:250、二甲基二苯基四氮唑溴鹽（MTT)。
[0025] c)儀器
[0026] CO2培養(yǎng)箱（SANYO,日本）
[0027] 垂直層流潔凈工作臺(tái)（上海上凈凈化設(shè)備有限公司）
[0028] 倒置生物顯微鏡（重慶光電儀器有限公司）
[0029] 低/高速臺(tái)式離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）
[0030] 電子天平（奧豪斯儀器有限公司）
[0031] 酶標(biāo)儀（伯樂(lè)生命醫(yī)學(xué)產(chǎn)品有限公司）
[0032] 立式壓力蒸汽滅菌器（上海申安醫(yī)療器械廠）
[0033] 鼓風(fēng)干燥箱（上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠）
[0034] PH 計(jì)（SART0RIUS，德國(guó)）
[0035] 2)實(shí)驗(yàn)方法和過(guò)程
[0036] 大鼠膠質(zhì)瘤C6以4000/孔的密度鋪于96孔板，每孔IOOul，12h后使用。各組 分以DMSO溶解為lOOmg/mL儲(chǔ)存液，保存于-20°C待用。鋪板后12h，觀察細(xì)胞匯合率約 為40 %，加藥，濃度均為100 μ g/mL，每個(gè)組分3個(gè)復(fù)孔。每板細(xì)胞設(shè)立二個(gè)對(duì)照組（培 養(yǎng)基+細(xì)胞；含〇. 1% DMSO培養(yǎng)基+細(xì)胞），3個(gè)空白孔（只有培養(yǎng)基）。加入藥物24小 時(shí)后，加入20μ 1四甲基偶氮唑鹽化學(xué)名為3-(4,5-二甲基噻唑）-2,5-二苯基四氮唑溴 鹽（3-(4, 5-dimethyl_2thiazolyl)-2, 5-diphenyl-tetrazolium bromide, MTT),繼續(xù) 培養(yǎng)4小時(shí)。完全棄去上清液，加入100 μ I DMSO,混勻使MTT完全溶解，去氣泡。490nm 測(cè)定OD值。
[0037]
[0038] 3)實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0039] 表 2
[0044] 結(jié)果發(fā)現(xiàn)：
[0045] 本發(fā)明的優(yōu)選方案如下：維吾爾藥蒼術(shù)經(jīng)甲醇超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠柱 分離，上樣后的硅膠柱，用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑梯度洗脫（石油醚：乙酸乙酯，比例 見(jiàn)表1)，各石油醚：乙酸乙酯比例混合溶劑洗脫液，濃縮，干燥后，利用體外抗腫瘤活性篩 選體系測(cè)試其抗腫瘤活性，意外地發(fā)現(xiàn)先石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯， 100:0,體積比）洗脫，繼用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:4,體積比） 洗脫，石油醚：乙酸乙酯100:4洗脫液干燥后，具有顯著地抗腫瘤活性。即，抗腫瘤活性的化 合物，可以通過(guò)以上方法，得到富集，從而與其他雜質(zhì)類成分分離開(kāi)。該活性部位從未見(jiàn)文 獻(xiàn)報(bào)道，其TLC分析表征如圖1。
[0046] 維吾爾藥蒼術(shù)經(jīng)甲醇超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱， 用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑梯度洗脫（石油醚：乙酸乙酯，比例見(jiàn)表1)，各石油醚：乙酸 乙酯比例混合溶劑洗脫液，濃縮，干燥后，利用體外抗腫瘤活性篩選體系測(cè)試其抗腫瘤活 性，意外地發(fā)現(xiàn)先用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:6,體積比）洗脫， 繼用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:8,體積比）洗脫，石油醚：乙酸乙 酯100:8洗脫液干燥后，具有顯著地抗腫瘤活性，即，抗腫瘤活性的化合物，可以通過(guò)以上 方法，得到富集，從而與其他雜質(zhì)類成分分離開(kāi)。該活性部位從未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道，其TLC分析 表征如圖2。
[0047] 4、抗腫瘤有效提取物的提取方法研究
[0048] 1)提取溶劑的種類研究
[0049] 分別用甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶劑、乙醇水混合溶劑等有 機(jī)溶劑提取，并測(cè)試提取物對(duì)C6細(xì)胞的抗腫瘤活性，結(jié)果如下：
[0050] 表 3
[0052] 研究結(jié)果表明：提取用有機(jī)溶劑可以為甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水 混合溶劑、乙醇水混合溶劑。
[0053] 2)提取溶劑的用量研究
[0054] 分別用1、2、5、10、20、30、40、50倍（重量/體積比）有機(jī)溶劑提取，并測(cè)試提取物 的抗腫瘤活性，結(jié)果如下：
[0055] 表 4
[0056]
[0058] 提取物提取用有機(jī)溶劑用量為藥材重量的2-50倍（重量/體積比）。
[0059] 3)干燥方法的研究
[0060] 分別用真空干燥法、冷凍干燥法、鼓風(fēng)干燥、離心干燥、旋蒸干燥法等方法，對(duì)得到 的抗腫瘤活性部位進(jìn)行干燥，以含水量、TLC、活性測(cè)試為指標(biāo)，發(fā)現(xiàn)真空干燥法、冷凍干燥 法、鼓風(fēng)干燥、離心干燥、旋蒸干燥法適用于對(duì)C6細(xì)胞抗腫瘤活性提取物進(jìn)行干燥，其中， 最優(yōu)為真空干燥法、冷凍干燥法。
[0061]表 5
LUUbJj 囚見(jiàn)，世小饑胛熘泥枓乂哪的刺食刀達(dá)刃：
[0064] 維吾爾藥蒼術(shù)經(jīng)有機(jī)溶劑超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠 柱，先用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，1〇〇:〇,體積比）洗脫2-50倍柱體 積，繼用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:4,體積比）洗脫2-50倍柱體 積。石油醚：乙酸乙酯100:4洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，干燥，即為該提取物。其中最優(yōu)為先 用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:4,體積比）洗脫10倍柱體積，繼用 石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:4,體積比）洗脫15倍柱體積。
[0065]其中，
[0066] 1)提取物提取用溶劑可以為甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶劑、 乙醇水混合溶劑，最優(yōu)條件為甲醇和95%乙醇。提取物提取用有機(jī)溶劑用量為藥材重量的 2-50倍（重量/體積比）。
[0067] 2)提取物干燥方法可以為真空干燥法、冷凍干燥法、鼓風(fēng)干燥、離心干燥、旋蒸干 燥法等，最優(yōu)為真空干燥法、冷凍干燥法。
[0068] 維吾爾藥蒼術(shù)經(jīng)甲醇超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱， 用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:6,體積比）洗脫洗脫2-50倍柱體 積，繼用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:8,體積比）洗脫洗脫2-50倍 柱體積。石油醚：乙酸乙酯100 :8洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，干燥，即為該提取物。以上條件 最優(yōu)為先用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:6,體積比）洗脫10倍柱 體積，繼用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100 :8,體積比）洗脫15倍柱體 積。其中，
[0069] 1)提取物提取用溶劑可以為甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶劑、 乙醇水混合溶劑，最優(yōu)條件為甲醇和95%乙醇。提取物提取用有機(jī)溶劑用量為藥材重量的 2-50倍（重量/體積比）。
[0070] 2)提取物干燥方法可以為真空干燥法、冷凍干燥法、鼓風(fēng)干燥、離心干燥、旋蒸干 燥法等，最優(yōu)為真空干燥法、冷凍干燥法。
[0071] 5.蒼術(shù)抗腫瘤有效提取物（先用100 :0的石油醚：乙酸乙酯洗脫，再用100 :4的 石油醚：乙酸乙酯洗脫后得到的提取物）的抗腫瘤活性研究
[0072] 利用各種腫瘤細(xì)胞，如乳腺癌、肺癌、胃癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、宮頸癌、腦膠質(zhì)瘤、肝 癌等惡性腫瘤細(xì)胞株，分別測(cè)試蒼術(shù)抗腫瘤提取物的抗腫瘤活性，IC 5。結(jié)果如下：
[0073] 表 6
[0076] 因此，我們發(fā)現(xiàn)，蒼術(shù)抗腫瘤提取物具備抗腫瘤活性，可望用于各種腫瘤如肝癌、 肺癌、胃癌、腸癌、腦膠質(zhì)瘤等惡性腫瘤的預(yù)防及治療。
[0077] 6、蒼術(shù)抗腫瘤有效提取物的組合物及其制備方法研究
[0078] 1)固體分散體
[0079] 處方
[0081] 制備方法：
[0082] 稱取蒼術(shù)提取物和載體聚乙烯吡咯烷酮（PVP)按比例、1:2、1:4、1:6的質(zhì)量比分 別放入燒杯中，加入無(wú)水乙醇，磁力攪拌器攪拌至蒼術(shù)提取物和載體完全溶解，轉(zhuǎn)入旋蒸儀 中除去有機(jī)溶劑，干燥，粉碎過(guò)80目篩，即得蒼術(shù)提取物PVP包合物。
[0083] 2)環(huán)糊精包合物
[0084] 處方：
[0086] 制備方法：
[0087] 將β -環(huán)糊精與1~5倍水研勻，加蒼術(shù)提取物（水難溶性的應(yīng)先溶于少量有機(jī) 溶劑中）充分研磨至成糊狀物，低溫干燥即得。
[0088] 3)分散片處方：
[0089] 蒼術(shù)提取物 十二烷基硫酸鈉 t 預(yù)膠化淀粉 10 可洛性淀粉 100 交聯(lián)聚維酮 1.0: 微晶纖維素 m 微分硅膠 3
[0090] 制備方法：
[0091] 1.蒼術(shù)提取物淀粉分散體的制備，精密稱取蒼術(shù)提取物提取物，加入適量的十二 烷基硫酸鈉，用70 %的乙醇溶解加入等比例的可溶性淀粉混合均勻后，在70°C的溫度下蒸 干，粉碎，過(guò)100目篩；
[0092] 2.稱取處方量，蒼術(shù)提取物淀粉分散體，交聯(lián)聚維酮，預(yù)膠化淀粉，用70%乙醇做 濕潤(rùn)劑，邊加入邊攪拌，制成濕顆粒過(guò)14目篩，室溫下放置15min后，60°C烘箱烘干45min， 16目篩整粒，加入滑石粉和微分硅膠，混合均勻后，壓片。
[0093] 7、蒼術(shù)抗腫瘤有效提取物的檢測(cè)方法研究
[0094] 我們發(fā)現(xiàn)，可以用薄層色譜的方法，很好地檢測(cè)和標(biāo)示蒼術(shù)抗腫瘤提取物的特征， 見(jiàn)圖1，圖2。
[0095] 具體條件為：GF254硅膠板，展開(kāi)系統(tǒng)：石油醚：乙酸乙酯：丙酮（6:1:1)顯色方法： 香草醛-濃硫酸顯色。
【附圖說(shuō)明】：
[0096] 圖1蒼術(shù)活性提取物的TLC色譜圖；
[0097] 圖2蒼術(shù)活性提取物的TLC色譜圖；
[0098] 圖3蒼術(shù)得到的化學(xué)組分的TLC色譜圖；
[0099] 圖4蒼術(shù)得到的化學(xué)組分的TLC色譜圖。
[0100] 具體實(shí)例
[0101] 以下實(shí)施例表示本發(fā)明的實(shí)用性，本發(fā)明不受此限制。
[0102] 實(shí)施例1 :
[0103] 維吾爾藥蒼術(shù)20g，經(jīng)100mL甲醇超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離， 上樣后的硅膠柱（2. Ocm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯， 100:0,體積比）洗脫10倍柱體積，繼用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯， 100:0,體積比）洗脫15倍柱體積。石油醚：丙酮100 :4洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，真空干燥， 即為該提取物。
[0104] 實(shí)施例2 :
[0105] 維吾爾藥蒼術(shù)20g，經(jīng)100mL乙醇超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離， 上樣后的硅膠柱（2. Ocm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯， 100:0,體積比）洗脫10倍柱體積，繼用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯， 100:0,體積比）洗脫15倍柱體積。石油醚：丙酮100 :4洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，冷凍干燥， 即為該提取物。
[0106] 實(shí)施例3 :
[0107] 維吾爾藥蒼術(shù)20g，經(jīng)100mL丙酮超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離， 上樣后的硅膠柱（2. Ocm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯， 100:0,體積比）洗脫10倍柱體積，繼用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯， 100:0,體積比）洗脫15倍柱體積。石油醚：丙酮100 :4洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，鼓風(fēng)干燥， 即為該提取物。
[0108] 實(shí)施例4:
[0109] 維吾爾藥蒼術(shù)20g，經(jīng)100mL氯仿超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離， 上樣后的硅膠柱（2. Ocm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯， 100:0,體積比）洗脫10倍柱體積，繼用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯， 100:0,體積比）洗脫15倍柱體積。石油醚：丙酮100 :4洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，離心干燥， 即為該提取物。
[0110] 實(shí)施例5:
[0111] 維吾爾藥蒼術(shù)20g，經(jīng)100mL乙酸乙酯超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分 離，上樣后的硅膠柱（2. Ocm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙 酯，100:0,體積比）洗脫10倍柱體積，繼用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯， 100:0,體積比）洗脫15倍柱體積。石油醚：丙酮100 :4洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，旋蒸干燥， 即為該提取物。
[0112] 實(shí)施例6:
[0113] 維吾爾藥蒼術(shù)20g，經(jīng)100mL甲醇水混合溶劑（甲醇：水=1:1)超聲提取15min， 提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（2. Ocm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：乙酸乙酯 混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，1〇〇:〇,體積比）洗脫10倍柱體積，繼用石油醚：乙酸乙酯混 合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，1〇〇:〇,體積比）洗脫15倍柱體積。石油醚：丙酮100 :4洗脫 液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，冷凍干燥，即為該提取物。
[0114] 實(shí)施例7:
[0115] 維吾爾藥蒼術(shù)20g，經(jīng)100mL乙醇水混合溶劑（乙醇：水=1:1)超聲提取15min， 提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（2. Ocm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：乙酸乙酯 混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，1〇〇:〇,體積比）洗脫10倍柱體積，繼用石油醚：乙酸乙酯混 合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，1〇〇:〇,體積比）洗脫15倍柱體積。石油醚：丙酮100 :4洗脫 液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，真空干燥，即為該提取物。
[0116] 實(shí)施例8:
[0117] 維吾爾藥蒼術(shù)20g，經(jīng)100mL乙醇水混合溶劑（乙醇：水=90:10)超聲提取15min， 提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（2. Ocm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：乙酸乙酯 混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，1〇〇:〇,體積比）洗脫10倍柱體積，繼用石油醚：乙酸乙酯混 合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，1〇〇:〇,體積比）洗脫15倍柱體積。石油醚：丙酮100 :4洗脫 液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，冷凍干燥，即為該提取物。
[0118] 實(shí)施例9:
[0119] 取維吾爾藥蒼術(shù)20g，經(jīng)100mL甲醇超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分 離，上樣后的硅膠柱（2. Ocm內(nèi)徑小柱），用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯， 100:6,體積比）洗脫20倍柱體積，繼用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯， 100:8,體積比）洗脫15倍柱體積。石油醚：丙酮100 :8洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，真空干燥， 即為該提取物。
[0120] 實(shí)施例10 :
[0121] 取維吾爾藥蒼術(shù)20g，經(jīng)100mL乙醇超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分 離，上樣后的硅膠柱（2. Ocm內(nèi)徑小柱），用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯， 100:6,體積比）洗脫20倍柱體積，繼用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯， 100:8,體積比）洗脫15倍柱體積。石油醚：丙酮100 :8洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，冷凍干燥， 即為該提取物。
[0122] 實(shí)施例11 :
[0123] 取維吾爾藥蒼術(shù)20g，經(jīng)100mL丙酮超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分 離，上樣后的硅膠柱（2. Ocm內(nèi)徑小柱），用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯， 100:6,體積比）洗脫20倍柱體積，繼用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯， 100:8,體積比）洗脫15倍柱體積。石油醚：丙酮100 :8洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，鼓風(fēng)干燥， 即為該提取物。
[0124] 實(shí)施例12 :
[0125] 取維吾爾藥蒼術(shù)20g，經(jīng)100mL氯仿超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分 離，上樣后的硅膠柱（2. Ocm內(nèi)徑小柱），用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯， 100:6,體積比）洗脫20倍柱體積，繼用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯， 100:8,體積比）洗脫15倍柱體積。石油醚：丙酮100 :8洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，離心干燥， 即為該提取物。
[0126] 實(shí)施例13 :
[0127] 取維吾爾藥蒼術(shù)20g，經(jīng)100mL乙酸乙酯超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱 分離，上樣后的硅膠柱（2. Ocm內(nèi)徑小柱），用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙 酯，100:6,體積比）洗脫20倍柱體積，繼用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯， 100:8,體積比）洗脫15倍柱體積。石油醚：丙酮100 :8洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，旋蒸干燥， 即為該提取物。
[0128] 實(shí)施例14:
[0129] 取維吾爾藥蒼術(shù)20g，經(jīng)100mL甲醇水混合溶劑（甲醇：水=1:1)超聲提取15min， 提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（2. Ocm內(nèi)徑小柱），用石油醚：乙酸乙酯混 合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:6,體積比）洗脫20倍柱體積，繼用石油醚：乙酸乙酯混合 溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:8,體積比）洗脫15倍柱體積。石油醚：丙酮100 :8洗脫液 經(jīng)回收有機(jī)溶劑，冷凍干燥，即為該提取物。
[0130] 實(shí)施例15 :
[0131] 取維吾爾藥蒼術(shù)20g，經(jīng)100mL乙醇水混合溶劑（乙醇：水=1:1)超聲提取15min， 提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（2. Ocm內(nèi)徑小柱），用石油醚：乙酸乙酯混 合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:6,體積比）洗脫20倍柱體積，繼用石油醚：乙酸乙酯混合 溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:8,體積比）洗脫15倍柱體積。石油醚：丙酮100 :8洗脫液 經(jīng)回收有機(jī)溶劑，真空干燥，即為該提取物。
[0132] 實(shí)施例16 :
[0133] 取維吾爾藥蒼術(shù)20g，經(jīng)100mL乙醇水混合溶劑（乙醇：水=90:10)超聲提取 15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（2. Ocm內(nèi)徑小柱），用石油醚：乙酸 乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:6,體積比）洗脫20倍柱體積，繼用石油醚：乙酸乙 酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:8,體積比）洗脫15倍柱體積。石油醚：丙酮100 :8洗 脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，冷凍干燥，即為該提取物。
[0134] 實(shí)施例17 :固體分散體
[0135] 稱取蒼術(shù)提取物和載體聚乙烯吡咯烷酮（PVP)按比例、1:2、1:4、1:6的質(zhì)量比分 別放入燒杯中，加入無(wú)水乙醇，磁力攪拌器攪拌至蒼術(shù)提取物和載體完全溶解，轉(zhuǎn)入旋蒸儀 中除去有機(jī)溶劑，干燥，粉碎過(guò)80目篩，即得蒼術(shù)提取物PVP包合物。
[0136] 實(shí)施例18 :環(huán)糊精包合物
[0137] 將β -環(huán)糊精與1~5倍水研勻，加蒼術(shù)提取物（水難溶性的應(yīng)先溶于少量有機(jī) 溶劑中）充分研磨至成糊狀物，低溫干燥即得。
[0138] 實(shí)施例19 :分散片
[0139] 1.稱取干燥的蒼術(shù)提取物，加入適量的十二烷基硫酸鈉，使用70%的乙醇充分溶 解，加入水溶性淀粉與蒼術(shù)提取物（I : 1)，攪拌混合均勻，在70°C下干燥，粉碎，過(guò)100目篩， 得蒼術(shù)提取物分散體。
[0140] 2.精密稱取處方量，蒼術(shù)提取物分散體，交聯(lián)聚維酮，可壓性淀粉，用70%乙醇做 濕潤(rùn)劑，邊加入邊攪拌，14目篩制成濕顆粒，室溫下放置15min后，70°C烘箱烘干45min，16 目篩整粒，加入滑石粉和微分硅膠，混合均勻后，壓片。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種維吾爾藥蒼術(shù)提取物，其特征為，維吾爾藥蒼術(shù)經(jīng)有機(jī)溶劑超聲提取，提取液 濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱，先用體積比100:0的石油醚：乙酸乙酯混合溶劑 洗脫，繼用體積比100 :1-100:4的石油醚：乙酸乙酯混合溶劑洗脫，石油醚：乙酸乙酯100 : 1-100:4洗脫液干燥即得； 或先用體積比1〇〇 =0-100:6的石油醚：乙酸乙酯混合溶劑洗脫，繼用體積比100:8的 石油醚：丙酮混合溶劑洗脫，石油醚：乙酸乙酯100:8洗脫液干燥即得。2. 如權(quán)利要求1所述的維吾爾藥蒼術(shù)提取物，其特征為，先用體積比100:0的石油醚： 乙酸乙酯混合溶劑洗脫，繼用體積比100 :4的石油醚：乙酸乙酯混合溶劑洗脫，石油醚：乙 酸乙酯100:4洗脫液干燥； 或先用體積比1〇〇: 6的石油醚：乙酸乙酯混合溶劑梯度洗脫洗脫，繼用體積比100:8的 石油醚：乙酸乙酯混合溶劑洗脫，石油醚：乙酸乙酯100:8洗脫液干燥。3. 如權(quán)利要求1或2所述的維吾爾藥蒼術(shù)提取物，其特征為，提取用溶劑為甲醇、乙醇、 丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶劑或乙醇水混合溶劑。4. 如權(quán)利要求1-3任何一項(xiàng)所述的維吾爾藥蒼術(shù)提取物，其特征為，石油醚：乙 酸乙酯混合溶劑的洗脫體積為2-50倍柱體積。5. 如權(quán)利要求1-4任何一項(xiàng)所述的維吾爾藥蒼術(shù)提取物，其特征為，先用石油醚：乙酸 乙酯混合溶劑洗脫10倍柱體積，再用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑15倍柱體積。6. -種藥物組合物，其特征在于，包含權(quán)利要求1-5任何一項(xiàng)所述的提取物和藥學(xué)上 可接受的載體。7. -種藥物制劑，其特征在于，包含權(quán)利要求1-5任何一項(xiàng)所述的蒼術(shù)提取物或權(quán)利 要求6所述的藥物組合物。8. 權(quán)利要求1-5任何一項(xiàng)所述的蒼術(shù)提取物或權(quán)利要求6所述的組合物或權(quán)利要求7 所述的藥物制劑在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。9. 如權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征為，所述的腫瘤為乳腺癌、肺癌、胃癌、結(jié)腸癌、胰 腺癌、宮頸癌、腦膠質(zhì)瘤或肝癌。10. 如權(quán)利要求1-5任何一項(xiàng)所述的蒼術(shù)提取物，其特征在于，用TLC法檢測(cè)，其色譜條 件為：GF254硅膠板，展開(kāi)系統(tǒng)：石油醚：乙酸乙酯：丙酮（6:1:1)顯色方法：香草醛-濃硫酸 顯色。
【文檔編號(hào)】A61P35/00GK105982937SQ201510079852
【公開(kāi)日】2016年10月5日
【申請(qǐng)日】2015年2月15日
【發(fā)明人】王金輝, 黃健, 李理
【申請(qǐng)人】沈陽(yáng)藥科大學(xué)