吐魯番錦雞兒提取物在作為制備治療腫瘤藥物的應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明涉及中藥技術(shù)領(lǐng)域，是一種吐魯番錦雞兒提取物在作為制備治療腫瘤藥物的應(yīng)用；該吐魯番錦雞兒提取物按下述制備方法得到：第一步，選取吐魯番錦雞兒，粉碎后投入提取罐，在溫度為70℃至90℃條件下回流提取2次至3次，提取后合并提取液并濃縮至含水量不大于10%，得到吐魯番錦雞兒總浸膏；第二步，將吐魯番錦雞兒總浸膏加水稀釋得稀釋液，稀釋液用大孔樹脂柱吸附。本發(fā)明首次公開了吐魯番錦雞兒提取物具有顯著抗腫瘤細(xì)胞的活性，對人類肺腺癌細(xì)胞和人類宮頸癌細(xì)胞具有較強(qiáng)的抑制作用，說明吐魯番錦雞兒提取物對腫瘤有較好的治療作用，并且本發(fā)明為純中藥，無激素，毒副作用小，因此可以安全的用于制備抗腫瘤藥物或食品。
【專利說明】
吐魯番錦雞兒提取物在作為制備治療腫瘤藥物的應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及中藥技術(shù)領(lǐng)域，是一種吐魯番錦雞兒提取物在作為制備治療腫瘤藥物的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]惡性腫瘤是嚴(yán)重危害人民生命健康的主要疾病之一，在我國各類疾病死因中已躍居第一位，在我國腫瘤死亡占全部死因的四分之一，被稱為“新世紀(jì)人類的第一殺手”。為此，惡性腫瘤的預(yù)防及診治研究已成為醫(yī)學(xué)工作者關(guān)注的焦點(diǎn)問題。腫瘤的發(fā)生和發(fā)展與多種因素有關(guān)，與機(jī)體免疫系統(tǒng)的關(guān)系尤為密切，特別是當(dāng)機(jī)體的整體功能低下時(shí)，免疫監(jiān)視減弱，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞迅猛增殖和擴(kuò)散侵害。而當(dāng)機(jī)體免疫功能增強(qiáng)時(shí)，腫瘤細(xì)胞的生長則受到限制，消除腫瘤與增強(qiáng)機(jī)體免疫功能二者同等重要。目前對于惡性腫瘤的治療，主要以外科手術(shù)、放射線治療、化學(xué)治療等為主。但外科手術(shù)只能切除可見腫瘤，對分散的、不可見的癌細(xì)胞無法消除;放射療法在殺死癌細(xì)胞的同時(shí)也會對正常的細(xì)胞造成傷害，不能根除病因，易產(chǎn)生局部復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移;化療藥物主要是抑制核苷酸生成、干擾基因復(fù)制的一些生物免疫制劑，具有嚴(yán)重的毒副作用，選擇性差，且嚴(yán)重?fù)p害機(jī)體免疫功能。因此，目前惡性腫瘤的療效仍未達(dá)到令人滿意的效果。近年來，隨著腫瘤綜合治療意識的不斷提高，中醫(yī)藥在腫瘤治療中的作用已受到醫(yī)學(xué)界的廣泛關(guān)注，從天然植物中發(fā)掘具有抗腫瘤作用的中藥活性成分已成為尋找創(chuàng)新藥物的源泉。
[0003]吐魯番錦雞兒Caraga/ja為豆科(Leguminosae)錦雞兒屬(CaraganaFabr.)植物，產(chǎn)新疆(伊犁地區(qū)、塔里木盆地、吐魯番盆地)，生于海拔2100米的山坡、河流階地、峭壁(潘蘭，賈新岳，石明輝，賈曉光，力瓦衣丁.買合蘇提，鄭承劍，陳剛.新疆產(chǎn)四種錦雞兒的民族植物學(xué)調(diào)查.中國現(xiàn)代中藥，2013，7:578-579.)。吐魯番錦雞兒的根具有活血、祛風(fēng)、利尿、消腫的功效(中國藥材公司.《中國中藥資源志要》，科學(xué)出版社，1994，559.)，但有關(guān)吐魯番錦雞兒化學(xué)成分及藥理作用未見報(bào)道，并且至今也未見吐魯番錦雞兒提取物用于制備治療腫瘤方面的報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明提供了一種吐魯番錦雞兒提取物在作為制備治療腫瘤藥物的應(yīng)用，克服了上述現(xiàn)有技術(shù)之不足，其能有效解決現(xiàn)行治療腫瘤方法副作用大以及至今也未見吐魯番錦雞兒提取物用于治療腫瘤方面的報(bào)道的問題。
[0005]本發(fā)明的技術(shù)方案是通過以下措施來實(shí)現(xiàn)的:一種吐魯番錦雞兒提取物在作為制備治療腫瘤藥物的應(yīng)用。
[0006]下面是對上述發(fā)明技術(shù)方案的進(jìn)一步優(yōu)化或/和改進(jìn):
上述吐魯番錦雞兒提取物按下述制備方法得到:第一步，選取干燥的吐魯番錦雞兒原料，粉碎后投入提取罐，在溫度為70°C至90°C條件下用乙醇水溶液回流提取2次至3次，提取后合并提取液并濃縮至含水量不大于10%，得到吐魯番錦雞兒總浸膏；第二步，將吐魯番錦雞兒總浸膏加水稀釋得稀釋液，稀釋液上樣大孔吸附樹脂，上樣后依次用水和體積百分比為30%至80%的乙醇水溶液洗脫，收集體積百分比為30%至80%乙醇水溶液洗脫液，將其濃縮干燥至含水量不大于10%，得到吐魯番錦雞兒提取物。
[0007]上述第一步中，每次回流提取時(shí)乙醇水溶液的加入量的體積為吐魯番錦雞兒原料質(zhì)量的8倍至10倍;或/和，每次提取時(shí)間為Ih至2h，每次回流提取時(shí)乙醇水溶液為體積百分比為40%至90%的乙醇水溶液。
[0008]上述第一步中用乙醇加熱提取的溫度為80°C。
[0009]上述第一步中回流提取時(shí)所用的乙醇溶液的體積濃度為80%。
[0010]上述第二步中，吐魯番錦雞兒總浸膏和水按質(zhì)量比為1:1.5至1:3稀釋后得到稀釋液。
[0011 ]上述第二步中，水的上樣量為稀釋液體積的2倍至4倍。
[0012]上述第二步中，體積百分比為30%至80%的乙醇水溶液的上樣量為稀釋液體積的3
倍至5倍。
[0013]上述大孔吸附樹脂為AB-8大孔吸附樹脂或D-101大孔吸附樹脂或ZTC-1大孔吸附樹脂或HPD-100大孔吸附樹脂或DA201大孔吸附樹脂。
[0014]本發(fā)明首次公開了吐魯番錦雞兒提取物具有顯著抗腫瘤細(xì)胞的活性，對人類肺腺癌細(xì)胞和人類宮頸癌細(xì)胞具有較強(qiáng)的抑制作用，說明吐魯番錦雞兒提取物對腫瘤有較好的治療作用，并且本發(fā)明為純中藥，無激素，毒副作用小，因此可以安全的用于制備抗腫瘤藥物或食品。
【附圖說明】
[0015]附圖1為實(shí)施例10得到的吐魯番錦雞兒提取物對A549、Hela細(xì)胞的影響0.001;**Ρ<0.01;*Ρ<0.05)。
[0016]附圖2為實(shí)施例11得到的吐魯番錦雞兒提取物對Α549、HeIa細(xì)胞的影響(***Ρ<0.001;**Ρ<0.01;*Ρ<0.05)。
[0017]附圖3為實(shí)施例12得到的吐魯番錦雞兒提取物對A549、Hela細(xì)胞的影響0.001;**Ρ<0.01;*Ρ<0.05)。
【具體實(shí)施方式】
[0018]本發(fā)明不受下述實(shí)施例的限制，可根據(jù)本發(fā)明的技術(shù)方案與實(shí)際情況來確定具體的實(shí)施方式。本發(fā)明中所提到各種化學(xué)試劑和化學(xué)用品如無特殊說明，均為現(xiàn)技術(shù)中公知公用的化學(xué)試劑和化學(xué)用品;本發(fā)明中的百分?jǐn)?shù)如沒有特殊說明，均為質(zhì)量百分?jǐn)?shù);本發(fā)明中的水如沒有特殊說明，為自來水或純凈水;本發(fā)明中的溶液若沒有特殊說明，均為溶劑為水的水溶液，例如，鹽酸溶液即為鹽酸水溶液。本實(shí)施例所用的吐魯番錦雞兒Caraganaturfanensis為豆科(Leguminosae)錦雞兒屬(Caragana Fabr.)植物，植物采集于新疆烏恰縣，曬干備用，作為本發(fā)明中的吐魯番錦雞兒原料;本發(fā)明中的體積質(zhì)量比的標(biāo)準(zhǔn)為2升配比一公斤的固體物質(zhì)。
[0019]下面結(jié)合實(shí)施例及附圖對本發(fā)明作進(jìn)一步描述:
實(shí)施例1，吐魯番錦雞兒提取物在作為制備治療腫瘤藥物的應(yīng)用。
[0020]實(shí)施例2，作為上述實(shí)施例的優(yōu)化，該吐魯番錦雞兒提取物按下述制備方法得到:第一步，選取干燥的吐魯番錦雞兒原料，粉碎后投入提取罐，在溫度為70°C至90°C條件下用乙醇水溶液回流提取2次至3次，提取后合并提取液并濃縮至含水量不大于10%，得到吐魯番錦雞兒總浸膏;第二步，將吐魯番錦雞兒總浸膏加水稀釋得稀釋液，稀釋液上樣大孔吸附樹脂，上樣后依次用水和體積百分比為30%至80%的乙醇水溶液洗脫，收集體積百分比為30%至80%乙醇水溶液洗脫液，將其濃縮干燥至含水量不大于10%，得到吐魯番錦雞兒提取物。
[0021 ]實(shí)施例3，作為上述實(shí)施例的優(yōu)化，第一步中，每次回流提取時(shí)乙醇水溶液的加入量的體積為吐魯番錦雞兒原料質(zhì)量的8倍至10倍;或/和，每次提取時(shí)間為Ih至2h，每次回流提取時(shí)乙醇水溶液為體積百分比為40%至90%的乙醇水溶液。
[0022]實(shí)施例4，作為上述實(shí)施例的優(yōu)化，第一步中用乙醇加熱提取的溫度為80°C。
[0023]實(shí)施例5，作為上述實(shí)施例的優(yōu)化，第一步中回流提取時(shí)所用的乙醇溶液的體積濃度為80%。
[0024]實(shí)施例6，作為上述實(shí)施例的優(yōu)化，第二步中，吐魯番錦雞兒總浸膏和水按質(zhì)量比為1: 1.5至1:3稀釋后得到稀釋液。
[0025]實(shí)施例7，作為上述實(shí)施例的優(yōu)化，第二步中，水的上樣量為稀釋液體積的2倍至4倍。
[0026]實(shí)施例8，作為上述實(shí)施例的優(yōu)化，第二步中，體積百分比為30%至80%的乙醇水溶液的上樣量為稀釋液體積的3倍至5倍。
[0027]實(shí)施例9，作為上述實(shí)施例的優(yōu)化，大孔吸附樹脂為AB-8大孔吸附樹脂或D-101大孔吸附樹脂或ZTC-1大孔吸附樹脂或HPD-100大孔吸附樹脂或DA201大孔吸附樹脂。
[0028]實(shí)施例10，該吐魯番錦雞兒提取物按下述制備方法得到:第一步，選取干燥的吐魯番錦雞兒，粉碎后投入提取罐，在溫度為80°C條件下用體積濃度為80%乙醇水溶液回流提取3次，乙醇水溶液加入量的體積為吐魯番錦雞兒質(zhì)量的10倍，每次回流提取2h，提取后合并提取液并濃縮至含水量不大于10%，得到吐魯番錦雞兒總浸膏;第二步，將吐魯番錦雞兒總浸膏和水按質(zhì)量比為I: 1.5稀釋后得到稀釋液，稀釋液上樣AB-8大孔吸附樹脂，上樣后用稀釋液體積3倍的水進(jìn)行洗脫，然后用稀釋液體積4倍的體積百分比為30%、50%和80%的乙醇水溶液洗脫，收集體積百分比為50%乙醇水溶液和80%乙醇水溶液洗脫液，將其混合后濃縮干燥至含水量不大于10%，得到吐魯番錦雞兒提取物。
[0029]實(shí)施例11，該吐魯番錦雞兒提取物按下述制備方法得到:第一步，選取干燥的吐魯番錦雞兒，粉碎后投入提取罐，在溫度為80°C條件下用體積濃度為80%乙醇水溶液回流提取3次，乙醇水溶液加入量的體積為吐魯番錦雞兒質(zhì)量的10倍，每次回流提取2h，提取后合并提取液并濃縮至含水量不大于10%，得到吐魯番錦雞兒總浸膏;第二步，將吐魯番錦雞兒總浸膏和水按質(zhì)量比為1:2稀釋后得到稀釋液，稀釋液上樣HPD-100大孔吸附樹脂，上樣后用稀釋液體積2倍的水進(jìn)行洗脫，然后用稀釋液體積5倍的體積百分比為30%、50%和80%的乙醇水溶液洗脫，收集體積百分比為50%乙醇水溶液和80%乙醇水溶液洗脫液，將其混合后濃縮干燥至含水量不大于10%，得到吐魯番錦雞兒提取物。
[0030]實(shí)施例12，該吐魯番錦雞兒提取物按下述制備方法得到:第一步，選取干燥的吐魯番錦雞兒，粉碎后投入提取罐，在溫度為80°C條件下用體積濃度為80%乙醇水溶液回流提取3次，乙醇水溶液加入量的體積為吐魯番錦雞兒質(zhì)量的10倍，每次回流提取2h，提取后合并提取液并濃縮至含水量不大于10%，得到吐魯番錦雞兒總浸膏;第二步，將吐魯番錦雞兒總浸膏和水按質(zhì)量比為1:3稀釋后得到稀釋液，稀釋液上樣AB-8大孔吸附樹脂，上樣后用稀釋液體積4倍的水進(jìn)行洗脫，然后用稀釋液體積3倍的體積百分比為30%、50%和80%的乙醇水溶液洗脫，收集體積百分比為50%乙醇水溶液和80%乙醇水溶液洗脫液，將其混合后濃縮干燥至含水量不大于10%，得到吐魯番錦雞兒提取物。
[0031 ]吐魯番錦雞兒提取物的抗腫瘤藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)
1、實(shí)驗(yàn)材料
細(xì)胞系A(chǔ)549(人類肺腺癌細(xì)胞)、Hela(人類宮頸癌細(xì)胞)均采購于美國菌種保藏中心(ATCF,Manassas,VA1USA)0
[0032]主要儀器:細(xì)胞培養(yǎng)箱、酶標(biāo)儀(Thermo Scientific)，凈化工作臺(上海新苗醫(yī)療器械)，倒置生物顯微鏡(廈門Motic公司)。
[0033]DMSO (美國S i gma公司)、乙醇、甲醇、石油醚、乙酸乙酯、二氯甲烷(試劑均為國產(chǎn)分析純);胎牛血清、0.25%胰蛋白酶、青霉素100U/mL，鏈霉素100yg/mL(美國Gibco公司產(chǎn)品)，DMEM培養(yǎng)液(Themor公司產(chǎn)品)，MTT(美國Sigma公司)，阿霉素(doxorubicinHOyMC上海源葉生物科技有限公司)。
[0034]2、實(shí)驗(yàn)方法
MTT法測試吐魯番錦雞兒提取物的活性。
[0035]上述實(shí)施例10、實(shí)施例11和實(shí)施例12得到的吐魯番錦雞兒提取物用DMSO溶解，用DMEM培養(yǎng)液稀釋至終濃度為12.5、25、50、100、200yg/ml得到待測樣品，采用待測樣品進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。陽性對照物為阿霉素(doxorubicin)，濃度為10μΜ。取對數(shù)生長期的A549、Hela細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度為5 X 14個(gè)/mL，接種于96孔培養(yǎng)板中，200yL/孔，培養(yǎng)于37°C、5%C02的培養(yǎng)箱內(nèi)，24h后加入待測樣品和阿霉素。分別設(shè)空白組、給藥組和陽性對照組，每組設(shè)3個(gè)復(fù)孔，待測樣品和阿霉素干預(yù)24h后每孔加MTT溶液(終濃度為0.5mg/ml)，繼續(xù)培養(yǎng)4h后吸棄上清液，振搖10 min充分溶解紫色甲臜結(jié)晶，經(jīng)酶標(biāo)檢測儀在570nm波長處測定吸光度OD值，以空白組為細(xì)胞存活率100%，抑制率為0，計(jì)算各組細(xì)胞的抑制率。
[0036]細(xì)胞抑制率=(1-藥物組OD值/正常對照組OD值)X 100%
實(shí)施例10得到的吐魯番錦雞兒提取物對A549、Hela細(xì)胞顯示較強(qiáng)的抑制，如圖1所示，10μΜ阿霉素對A549、Hela細(xì)胞抑制率分別為84.61%、76.36%，與對照組相比具有顯著性差異(**仲<0.001)。10如8/1111的吐魯番錦雞兒提取物對4549、拖1&細(xì)胞抑制率分別為53.69%、58.52%，與對照組相比具有顯著性差異(撲<0.05;*仲<0.01);而50此/1111的吐魯番錦雞兒提取物即可顯著抑制Hela細(xì)胞生長(*P<0.05)。
[0037]實(shí)施例11得到的吐魯番錦雞兒提取物對A549、Hela細(xì)胞顯示較強(qiáng)的抑制，如圖2所示，1yM阿霉素對A549、Hela細(xì)胞抑制率分別為84.61%、76.36%，與對照組相比具有顯著性差異(***?<0.001)。100 yg/ml的吐魯番錦雞兒提取物對A549、Hela細(xì)胞抑制率分別為50.53%、53.27%，與對照組相比具有顯著性差異(*P<0.05; #P<0.01)。
[0038]實(shí)施例12得到的吐魯番錦雞兒提取物對A549、Hela細(xì)胞顯示較強(qiáng)的抑制，如圖3所示。1yM阿霉素對A549、Hela細(xì)胞抑制率分別為84.61%、76.36%，與對照組相比具有顯著性差異(***?<0.001)。100 yg/ml的吐魯番錦雞兒提取物對A549、Hela細(xì)胞抑制率分別為42.73%、39.64%，與對照組相比具有顯著性差異(*P < 0.05; #P < 0.0I)。
[0039]綜上所述，本發(fā)明得到的吐魯番錦雞兒提取物對A549、Hela細(xì)胞有較強(qiáng)的抑制作用，具有顯著抗腫瘤細(xì)胞的活性，進(jìn)一步說明吐魯番錦雞兒提取物對腫瘤有較好的治療作用，且本發(fā)明為純中藥，無毒副作用，可作為制備抗腫瘤藥物或食品。
[0040]以上技術(shù)特征構(gòu)成了本發(fā)明的實(shí)施例，其具有較強(qiáng)的適應(yīng)性和實(shí)施效果，可根據(jù)實(shí)際需要增減非必要的技術(shù)特征，來滿足不同情況的需求。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種吐魯番錦雞兒提取物在作為制備治療腫瘤藥物的應(yīng)用。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的吐魯番錦雞兒提取物在作為制備治療腫瘤藥物的應(yīng)用，其特征在于吐魯番錦雞兒提取物按下述制備方法得到:第一步，選取干燥的吐魯番錦雞兒原料，粉碎后投入提取罐，在溫度為70°C至90°C條件下用乙醇水溶液回流提取2次至3次，提取后合并提取液并濃縮至含水量不大于10%，得到吐魯番錦雞兒總浸膏;第二步，將吐魯番錦雞兒總浸膏加水稀釋得稀釋液，稀釋液上樣大孔吸附樹脂，上樣后依次用水和體積百分比為30%至80%的乙醇水溶液洗脫，收集體積百分比為30%至80%乙醇水溶液洗脫液，將其濃縮干燥至含水量不大于10%，得到吐魯番錦雞兒提取物。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的吐魯番錦雞兒提取物在作為制備治療腫瘤藥物的應(yīng)用，其特征在于第一步中，每次回流提取時(shí)乙醇水溶液的加入量的體積為吐魯番錦雞兒原料質(zhì)量的8倍至10倍；或/和，每次提取時(shí)間為Ih至2h，每次回流提取時(shí)乙醇水溶液為體積百分比為40%至90%的乙醇水溶液。4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的吐魯番錦雞兒提取物在作為制備治療腫瘤藥物的應(yīng)用，其特征在于第一步中用乙醇加熱提取的溫度為80°C。5.根據(jù)權(quán)利要求2或3或4所述的吐魯番錦雞兒提取物在作為制備治療腫瘤藥物的應(yīng)用，其特征在于第一步中回流提取時(shí)所用的乙醇溶液的體積濃度為80%。6.根據(jù)權(quán)利要求2或3或4或5所述的吐魯番錦雞兒提取物在作為制備治療腫瘤藥物的應(yīng)用，其特征在于第二步中，吐魯番錦雞兒總浸膏和水按質(zhì)量比為1: 1.5至1:3稀釋后得到稀釋液。7.根據(jù)權(quán)利要求2或3或4或5或6所述的吐魯番錦雞兒提取物在作為制備治療腫瘤藥物的應(yīng)用，其特征在于第二步中，水的上樣量為稀釋液體積的2倍至4倍。8.根據(jù)權(quán)利要求2或3或4或5或6或7所述的吐魯番錦雞兒提取物在作為制備治療腫瘤藥物的應(yīng)用，其特征在于第二步中，體積百分比為30%至80%的乙醇水溶液的上樣量為稀釋液體積的3倍至5倍。9.根據(jù)權(quán)利要求2或3或4或5或6或7或8所述的吐魯番錦雞兒提取物在作為制備治療腫瘤藥物的應(yīng)用，其特征在于大孔吸附樹脂為AB-8大孔吸附樹脂或D-101大孔吸附樹脂或ZTC-1大孔吸附樹脂或HPD-100大孔吸附樹脂或DA201大孔吸附樹脂。
【文檔編號】A61K36/48GK105943593SQ201610457873
【公開日】2016年9月21日
【申請日】2016年6月22日
【發(fā)明人】賈曉光, 潘蘭, 賈新岳, 石明輝, 秦路平, 李雪征, 賈月梅
【申請人】新疆維吾爾自治區(qū)中藥民族藥研究所