美沙拉嗪溫敏凝膠灌腸液及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種可延長(zhǎng)美沙拉嗪在結(jié)腸內(nèi)滯留時(shí)間的溫敏凝膠型灌腸液及其制備方法，該制劑由主藥美沙拉嗪、溫敏型凝膠基質(zhì)泊洛沙姆、生物粘附材料、穩(wěn)定劑及適量水組成。本發(fā)明提供的美沙拉嗪結(jié)腸用溫敏凝膠灌腸液在室溫下為自由流動(dòng)的液體，以液體形式推注到結(jié)腸，具有藥物分布均勻、鋪展性好的優(yōu)點(diǎn)；隨之在體溫條件下迅速發(fā)生相轉(zhuǎn)變，形成非化學(xué)交聯(lián)的半固體凝膠，加上生物粘附材料的黏膜粘附作用，從而延長(zhǎng)藥物在結(jié)腸內(nèi)的滯留時(shí)間。與常規(guī)美沙拉嗪灌腸液相比，該制劑能有效減少藥液泄漏而改善療效，且具有制備簡(jiǎn)單，刺激性小的優(yōu)點(diǎn)。
【專利說明】
美沙拉瞎溫敏凝膠灌腸液及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬藥物制劑領(lǐng)域，設(shè)及一種美沙拉嗦溫敏凝膠灌腸液及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 潰瘍性結(jié)腸炎化Icerative colitis, UC)是一種病因尚不十分明確的慢性非特 異性腸道炎癥，病變部位主要在結(jié)直腸的黏膜及黏膜下層，可形成肉眼可見的糜爛和潰瘍。 其病變范圍多自遠(yuǎn)端結(jié)腸開始，可逆性向近端發(fā)展，甚至累及全結(jié)腸，偶爾波及末端回腸， 呈連續(xù)性分布。該病在歐美地區(qū)發(fā)病率高，亞非國(guó)家相對(duì)較低，近年來國(guó)內(nèi)報(bào)告的病例數(shù)逐 漸增加，我國(guó)UC的發(fā)病率已呈現(xiàn)上升趨勢(shì)。由于該病的病因和發(fā)病機(jī)制尚未闡明，治療缺乏 特異性，導(dǎo)致病情遷延反復(fù)，甚至癌變，嚴(yán)重影響患者的身屯、健康，被世界衛(wèi)生組織列為疑 難病。
[0003] 藥物治療是輕中度UC的主要治療方式，目前臨床上用于UC的治療藥物主要有氨基 水楊酸類、類固醇激素、免疫抑制劑、抗生素等。美沙拉嗦(mesalamine)又稱為5-氨基水楊 酸巧-aminosalic^ic acid, 5-ASA)由于療效確切，是目前臨床上治療輕中度UC的一線藥 物。它是通過抑制前列腺素 E和白Ξ締的形成而發(fā)揮抗炎作用，其作用是局部的，即與腸黏 膜接觸及絡(luò)合時(shí)發(fā)揮作用，其治療效果與炎性腸黏膜接觸的藥物濃度和持續(xù)時(shí)間有關(guān)，與 血藥濃度關(guān)系不大。
[0004] 美沙拉嗦化學(xué)結(jié)構(gòu)式 美沙拉嗦在臨床治療UC中主要采用口服和直腸給藥兩種方式?？诜苿┒酁槟軌蛟谀c 道定位釋放的緩釋制劑，主要用于近端結(jié)腸炎的治療。對(duì)于末端和左側(cè)結(jié)腸的治療首選的 是經(jīng)直腸給藥的局部制劑。有資料顯示對(duì)于輕至中度的直腸炎、乙狀結(jié)腸炎，局部應(yīng)用美沙 拉嗦的療效優(yōu)于口服制劑。在中國(guó)直腸乙狀結(jié)腸炎或直腸炎占70%左右，UC的主要病變部位 在直腸、直一乙狀結(jié)腸、左側(cè)結(jié)腸，，通過直腸給藥成為美沙拉嗦一種非常重要的給藥方式。
[0005] 目前臨床上使用的經(jīng)直腸給藥的劑型有栓劑和灌腸液。栓劑進(jìn)入體內(nèi)的深度和與 病灶的接觸面積均有限，只能作用于直腸部位，通常僅用于直腸型潰瘍性結(jié)腸炎的治療。市 售的美沙拉嗦灌腸液主要由卡波姆組成，是一種能夠自由流動(dòng)的液體，可W到達(dá)乙狀結(jié)腸， 但幾乎沒有生物粘附性，易受腸蠕動(dòng)的影響出現(xiàn)泄漏，在病變部位停留的時(shí)間有限。因此， 開發(fā)藥物分布均勻、生物粘附性強(qiáng)的美沙拉嗦經(jīng)直腸給藥制劑，用于治療末端和左側(cè)結(jié)腸 炎具有良好的臨床應(yīng)用價(jià)值。
[0006] 原位凝膠為上述問題的解決提供了良好的解決方案。原位凝膠（in situ gel)是 一類W溶液狀態(tài)給藥后，響應(yīng)環(huán)境的改變，在用藥部位發(fā)生相轉(zhuǎn)變，形成非化學(xué)交聯(lián)的半固 體凝膠制劑。它融合了溶液劑與凝膠劑的優(yōu)點(diǎn)，還兼具制備工藝簡(jiǎn)單，使用方便，黏膜組織 親和力強(qiáng)，可作為藥物儲(chǔ)庫(kù)延長(zhǎng)在給藥部位的滯留時(shí)間等優(yōu)點(diǎn)。根據(jù)形成機(jī)制不同，原位凝 膠可分為溫度敏感型、pH敏感型、離子敏感型等。由于結(jié)腸部位組織液少，腸道的緩沖能力 有限，將灌腸液制成抑敏感型或離子敏感型的凝膠并不適宜，而將灌腸液制成溫度敏感型 則是一個(gè)不錯(cuò)的選擇。
[0007] Bostan等將殼聚糖與聚N-異丙基丙締酷胺交聯(lián)，W交聯(lián)化產(chǎn)物為凝膠材料制備了 一種美沙拉嗦溫度和pH雙重敏感型凝膠（Bostan MS，et al. Int J Biol Macromol， 2013，52:177-83.)，該項(xiàng)研究尚未設(shè)及藥效學(xué)及刺激性評(píng)價(jià)等內(nèi)容，從制備工藝看，交聯(lián)化 反應(yīng)過程復(fù)雜，引入的有機(jī)溶劑在一定程度上影響了制劑的安全性。Ramadass等采用膠原 為凝膠基質(zhì)制備美沙拉嗦直腸給藥原位凝膠，該凝膠亦兼具pH和溫度敏感性(Ramadass SK，et al. Eur J Pharm Sci, 2013，48(1-2) :104-10.),由于載體材料膠原蛋白穩(wěn)定性 較差的原因，該凝膠體系必須保存在l〇°CW下，運(yùn)為制劑的儲(chǔ)存帶來不便。上述兩種雙敏凝 膠體系的抑均設(shè)計(jì)在4~5,發(fā)生相轉(zhuǎn)變的pH在7~8,由于腸道緩沖能力十分有限，再加上一次 灌腸的體積較大，實(shí)際用藥時(shí)制劑抑很難在短時(shí)間內(nèi)達(dá)到相轉(zhuǎn)變所需pH，因此抑敏感性可 能難W體現(xiàn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 針對(duì)現(xiàn)有美沙拉嗦直腸給藥制劑的不足，本發(fā)明目的在于提供一種新型的美沙拉 嗦溫敏凝膠灌腸液。本發(fā)明的另一目的是提供一種所述制劑的制備方法。
[0009] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案如下： 本發(fā)明提供的美沙拉嗦結(jié)腸用溫敏凝膠，成分包括:主藥、溫敏型凝膠基質(zhì)、生物粘附 材料、穩(wěn)定劑及適量水組成，其中主藥為美沙拉嗦，在處方中的質(zhì)量百分比為6.7%。
[0010] 所述的溫敏型凝膠基質(zhì)為泊洛沙姆407、泊洛沙姆188及其混合物。泊洛沙姆 (poloxamer)是一種非離子型表面活性劑，為聚氧乙締(PE0)和聚氧丙締(PP0)組成的ΑΒΑ型 嵌段共聚物，是目前研究較為深入的一類溫敏型凝膠高分子材料，其中W泊洛沙姆407和泊 洛沙姆188最為常用。泊洛沙姆相對(duì)分子質(zhì)量大，化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，且在體內(nèi)不會(huì)發(fā)生代謝轉(zhuǎn) 化，生物相容性好。通過調(diào)節(jié)處方中泊洛沙姆407和泊洛沙姆188的比例，可W將體系膠凝化 溫度控制在體溫附近。按質(zhì)量百分比計(jì)，泊洛沙姆407的含量為16%~19%;泊洛沙姆188的含 量為3%~1^)。
[0011] 所述的美沙拉嗦溫敏凝膠灌腸液，是將美沙拉嗦混懸在溫敏凝膠溶液中，而凝膠 基質(zhì)泊洛沙姆本身具有的助懸特性，有利于體系的穩(wěn)定。
[0012] 所述的美沙拉嗦溫敏凝膠灌腸液中，美沙拉嗦化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下：
從結(jié)構(gòu)上看一OH和一N出處于對(duì)位，不穩(wěn)定，易氧化降解。經(jīng)過試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，美沙拉嗦穩(wěn)定 性與抑有關(guān)，在抑4~5的溶液中穩(wěn)定性較好。因此，將凝膠體系的抑控制在4~5之間。
[0013] 所述生物粘附材料為殼聚糖、透明質(zhì)酸鋼、徑丙甲基纖維素、黃原膠、魔芋膠、白巧 膠或聚卡波非中的一種或其組合。
[0014] 所述的生物粘附材料按質(zhì)量百分比計(jì)，其在所述美沙拉嗦溫敏凝膠灌腸液中含量 (質(zhì)量百分比）為0.1%~0.4%，優(yōu)選為0.2%。優(yōu)選地，所述生物粘附材料由聚卡波非和透明質(zhì) 酸鋼組成，聚卡波非和透明質(zhì)酸鋼的質(zhì)量比為1:3~3:1，最優(yōu)選為3:1。
[0015] 聚卡波非(polycarbo地i 1，PCP)為交聯(lián)聚丙締酸類聚合物，能與黏膜糖蛋白相互 作用，形成物理性連接，產(chǎn)生較強(qiáng)的粘液凝膠網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，使黏膜粘附系統(tǒng)保持較長(zhǎng)的粘附時(shí) 間，且不會(huì)對(duì)黏膜產(chǎn)生刺激，具有良好的生物粘附性和生物相容性。此外PCP為弱酸性物質(zhì)， 具有良好的緩沖能力，PCP的加入可W為凝膠體系提供弱酸性環(huán)境。透明質(zhì)酸鋼是一種酸性 粘多糖，它W獨(dú)特的分子結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)在機(jī)體內(nèi)顯示出多種重要的生理功能，能夠調(diào)節(jié) 血管壁的通透性，還具有促進(jìn)創(chuàng)傷愈合的作用等。也有少量文獻(xiàn)報(bào)道透明質(zhì)酸鋼具有一定 的生物粘附性。本發(fā)明W聚卡波菲和透明質(zhì)酸鋼作為生物粘附劑，能夠發(fā)揮協(xié)同作用增加 制劑的粘附力，同時(shí)還兼有促進(jìn)創(chuàng)面愈合的作用。
[0016] 所述的美沙拉嗦溫敏凝膠灌腸液，其特征在于所述的穩(wěn)定劑主要由水溶性抗氧 劑、金屬絡(luò)合劑和防腐劑組成，其中水溶性抗氧劑優(yōu)選為焦亞硫酸鹽，其在處方中的質(zhì)量百 分比為0.8%~1.2%;金屬絡(luò)合劑優(yōu)選依地酸二鋼，在處方中的質(zhì)量百分比為0.1%~0.2%。
[0017] 所述的美沙拉嗦溫敏凝膠灌腸液中，溶劑為水。凝膠體系pH 4~5的弱酸性環(huán)境可 由聚卡波非和焦亞硫酸鐘提供，因此直接選用水作為溶劑，簡(jiǎn)化了制備工藝。
[0018] 所述的美沙拉嗦溫敏凝膠灌腸液在25°C±0.5°C時(shí)的動(dòng)力黏度為小于500mPa · S， 可滿足制劑在室溫條件下為自由流動(dòng)的液體，具有良好的可推注性，藥物易于腸道內(nèi)鋪展； 膠凝溫度控制在30~38°C，可保證制劑在體內(nèi)迅速膠凝，減少滲漏;粘附力大于70mNcnf2,可 進(jìn)一步延長(zhǎng)制劑在病變部位的滯留時(shí)間。
[0019] 本發(fā)明的美沙拉嗦溫敏凝膠灌腸液W溫敏凝膠作為美沙拉嗦經(jīng)直腸局部給藥制 劑的載體，該凝膠在室溫下為自由流動(dòng)的液體，W液體形式推注到結(jié)腸，具有藥物分布均 勻、鋪展性好的優(yōu)點(diǎn);在體溫條件下迅速發(fā)生相轉(zhuǎn)變，形成非化學(xué)交聯(lián)的半固體凝膠，再加 上生物粘附材料的黏膜粘附作用，可延長(zhǎng)藥物在結(jié)腸內(nèi)的滯留時(shí)間。處方中的泊洛沙姆既 作為溫敏凝膠材料，又可充當(dāng)助懸劑，起到維持體系穩(wěn)定的作用。W聚卡波菲和具有一定促 進(jìn)傷口愈合作用的透明質(zhì)酸鋼配伍作為生物粘附性材料，可W進(jìn)一步提高制劑的生物粘附 性。初步藥效學(xué)證實(shí)本發(fā)明優(yōu)于普通的美沙拉嗦灌腸液。此外，本發(fā)明所述的美沙拉嗦溫敏 凝膠灌腸液與已有的相關(guān)研究比較，還具有w下優(yōu)勢(shì)： (1)與已報(bào)道的美沙拉嗦溫敏液體栓相比，本發(fā)明具有載藥量大，膠凝溫度適宜，生物 粘附性和穩(wěn)定性良好的優(yōu)點(diǎn)。①本發(fā)明所述的溫敏凝膠美沙拉嗦灌腸液主藥W混懸的形式 分散在凝膠體系中，相對(duì)于將藥物完全溶解，所需凝膠基質(zhì)量更少，能保證制劑W適宜的體 積進(jìn)行灌腸給藥，并在局部維持較高的藥物濃度;②本發(fā)明所述的溫敏凝膠美沙拉嗦灌腸 液的膠凝溫度在30~38°C，稍低于體溫，能保證灌腸液在體溫下迅速膠凝;③本發(fā)明制劑中 除添加了較常用的生物粘附材料聚卡波非外，還添加了透明質(zhì)酸鋼，透明質(zhì)酸鋼是一種可 促進(jìn)創(chuàng)面愈合的粘附材料，其與聚卡波菲配伍，，在保證制劑常溫下具有良好流動(dòng)性同時(shí)， 進(jìn)一步提高了制劑的粘附性能，本發(fā)明所述的美沙拉嗦溫敏凝膠灌腸液體外粘附力可大于 70 mN · cnf2,可持續(xù)釋藥化;④穩(wěn)定性良好 (3)相對(duì)于8〇31日11等和1?日1]1日(1日33等制備的溫度/9昭^重敏感凝膠，本發(fā)明制備工藝簡(jiǎn) 單，未使用任何有機(jī)溶劑。同時(shí)，還避免了由于腸道緩沖能力有限導(dǎo)致的pH敏感性難W實(shí) 現(xiàn)，影響相轉(zhuǎn)變過程的問題。
[0020] (4)本發(fā)明所選擇的溫敏凝膠材料泊洛沙姆和生物粘附材料聚卡波非均具有良好 的生物相容性，對(duì)黏膜幾乎無刺激性，被美國(guó)FDA收錄為藥用輔料安全的一類，輔料的安全 性和可獲得性也為本項(xiàng)目未來的推廣應(yīng)用提供了重要保障。
【附圖說明】
[0021 ]圖1:美沙拉嗦溫敏凝膠灌腸液的制備工藝流程圖。
[0022] 圖2:美沙拉嗦結(jié)腸用溫敏凝膠的體外釋放曲線。
[0023] 圖3:試驗(yàn)期間各組小鼠體重變化曲線。
[0024] 圖4:試驗(yàn)期間各組小鼠大便性狀評(píng)分。
[0025] 圖5:試驗(yàn)期間各組小鼠糞便隱血評(píng)分。 圖6:給藥7天后各組大鼠結(jié)腸病理學(xué)觀察。
[0026] A:生理鹽水組;B:空白凝膠組;C:實(shí)施例1。
【具體實(shí)施方式】
[0027] 下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明，W使本領(lǐng)域的技術(shù)人員可W更好地 理解本發(fā)明并能予W實(shí)施，但所舉實(shí)施例不作為對(duì)本發(fā)明的限定。
[0028] 本發(fā)明W下實(shí)施例中美沙拉嗦溫敏凝膠灌腸液的成分(余量為水)及其在美沙拉 嗦溫敏凝膠灌腸液中所占的質(zhì)量百分比如下表：

如圖1所示，上述實(shí)施例的美沙拉嗦溫敏凝膠灌腸液的帶備方法，步驟如下： (1) 將生物粘附材料置于水中，攬拌至分散均勻，制得第一種混合物； (2) 在攬拌下緩慢向第一種混合物中加入溫敏型凝膠基質(zhì)，使其充分潤(rùn)濕，于4 °C下放 置24小時(shí)，至溫敏型凝膠基質(zhì)完全溶脹為無團(tuán)塊的澄明溶液，攬拌使之均勻，制得第二種混 合物； (3) 取穩(wěn)定劑在攬拌下緩慢加入到第二種混合物中，攬拌至完全溶解，最后加入主藥美 沙拉嗦并補(bǔ)加水至足量，避光繼續(xù)攬拌直至藥物均勻混懸即得。
[0029] 對(duì)上述實(shí)施例制得的美沙拉嗦溫敏凝膠灌腸液的性質(zhì)進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果如下： 一、評(píng)價(jià)指標(biāo) 膠凝溫度(Tgel)的測(cè)定:采用倒置試管法測(cè)定Tgel，取凝膠溶液2mL于試管中，置于恒溫 水浴中緩慢升溫，升溫速率約為0.2°C ·mirfi，每升高0.2°C，迅速倒置試管，觀察溶液的流動(dòng) 情況，定義試管內(nèi)溶液不再流動(dòng)時(shí)的溫度為膠凝溫度，每個(gè)樣品測(cè)定3次，取平均值。
[0030] 成膠前黏度的測(cè)定:使用旋轉(zhuǎn)黏度計(jì)測(cè)定樣品成膠前黏度，每個(gè)樣品測(cè)定3次，取 平均值。
[0031 ] 沉降體積比的測(cè)定：用具塞量筒取含藥凝膠溶液25mL，密塞，用力振搖1分鐘，記下 混懸物的開始高化，靜置化，記下混懸物的最終高度H，按下式計(jì)算:沉降體積比=Η/?ο。
[0032]粘附力的測(cè)定:參考文獻(xiàn)粘附力測(cè)定方法并稍作改進(jìn)考察制劑的粘附性能。將直 徑6cm的玻璃表面皿裝滿水，裝蓋后置于37 °C水浴中，頂部高出水面約0.5cm，平衡一段時(shí) 間。將適量樣品加入到表面皿頂端，完全化凝后，將預(yù)熱的玻片（2.5cm X 2.5cm)置于樣品 上，并用50g破碼壓制3min使玻片與凝膠緊密貼合，安裝小鉤、細(xì)線、小杯和滴流裝置，打開 滴流控制閥向小杯中勻速滴加水巧mLmirTi)直至玻片開始移動(dòng)，取下小杯稱重。單位面積粘 附力計(jì)算公式:f=9.8m/s，m為小杯質(zhì)量，S為玻片的面積。
[0033] 從上表中，綜合分析各實(shí)施例的粘附力、凝膠溫度和凝膠前的粘度等數(shù)據(jù)： 1、對(duì)比實(shí)施例^3可看出，泊洛沙姆407在所述美沙拉嗦溫敏凝膠灌腸液中所占的質(zhì)量 百分比最佳為17.6%，泊洛沙姆188在所述美沙拉嗦溫敏凝膠灌腸液中所占的質(zhì)量百分比最 佳為 8.〇〇/〇。
[0034] 2、對(duì)比實(shí)施例1、4、5可看出，生物粘附材料的加入能夠提高體系的粘附力，隨著生 物粘附材料濃度的升高，粘附力逐漸增大，隨著生物粘附材料濃度的升高，膠凝溫度有所升 高，但升高幅度不大;成膠前黏度和沉降體積比均隨生物粘附材料濃度的升高而增大;生物 粘附材料對(duì)凝膠體系抑略有影響，隨著生物粘附材料濃度升高，體系抑逐漸降低。當(dāng)生物粘 附材料的比例大于增加至0.4%時(shí)，粘附力最大，但是此時(shí)成交前粘度已經(jīng)超過1000m化.S， 在室溫下不能自由流動(dòng)。
[0035] 3、對(duì)比實(shí)施例1、6和7可看出，生物粘附材料為聚卡波非和透明質(zhì)酸鋼的質(zhì)量比為 1:3~3:1的混合物時(shí)，美沙拉嗦溫敏凝膠灌腸液的粘附力、凝膠溫度和凝膠前的粘度均較適 宜，而生物粘附材料的最佳為聚卡波非和透明質(zhì)酸質(zhì)量比3:1的混合物。
[0036] 4、對(duì)比實(shí)施例1、8和9,實(shí)施例1的生物粘附材料為聚卡波非和透明質(zhì)酸鋼的質(zhì)量 比為3:1的混合物，實(shí)施例1美沙拉嗦溫敏凝膠灌腸液的粘附力性能明顯優(yōu)于生物粘附材料 選擇透明質(zhì)酸鋼或聚卡波非的實(shí)施例9和10。
[0037] 5、對(duì)比實(shí)施例1和10~13,抗氧劑、金屬絡(luò)合劑和防腐劑的加入對(duì)美沙拉嗦溫敏凝 膠灌腸液的粘附力、凝膠溫度、成膠前粘度和沉降體積比幾乎沒有影響，隨著抗氧劑焦亞硫 酸鐘用量的增加，pH略有降低。
[003引6.對(duì)比實(shí)施例1和對(duì)比例1、2，生物粘附材料的添加能夠增加體系的粘附力，而添 加量過多則會(huì)導(dǎo)致體系粘度過高，不適宜美沙拉嗦溫敏凝膠灌腸液的應(yīng)用。
[0039] 二體外釋放 采用動(dòng)態(tài)透析法測(cè)定美沙拉嗦從溫敏凝膠中的釋放。取實(shí)施例1中制備的美沙拉嗦溫 敏凝膠灌腸液2g置于經(jīng)過預(yù)處理的透析袋中，透析袋兩端用線系緊W防止泄露，37°C條件 下充分膠凝后將透析袋放入lOOmL 37°C PH7.4憐酸鹽緩沖溶液中，于37.0°C±0.5°C恒溫 振蕩器中W100 rmin-1 速率振蕩，分別于0.25、0.5、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0、6.0、8.0、10.0、 12.化取樣5血，并立即補(bǔ)加等量37°C PH7.4憐酸鹽緩沖溶液。樣品經(jīng)合理稀釋后，316nm處 測(cè)定吸光度，然后計(jì)算累積釋放度，每個(gè)樣品測(cè)定3次，取平均值。同法測(cè)定市售美沙拉嗦灌 腸液體外釋放度，結(jié)果見圖2。
[0040] 由圖2可知，市售美沙拉嗦灌腸液藥物在化約釋放79.0%，4h內(nèi)釋放完全;而實(shí)施例 1的美沙拉嗦溫敏凝膠灌腸液中美沙拉嗦巧-ASA)在化的累積釋放率為42.8%，4h時(shí)釋放達(dá) 到74.2%，化內(nèi)釋放完全，說明實(shí)施例1的5-ASA溫敏凝膠灌腸液具有一定緩釋作用。
[OOW S、穩(wěn)定性測(cè)試 1.影響因素試驗(yàn) 取實(shí)施例1和10~13的美沙拉嗦溫敏凝膠灌腸液在高溫(60°C)條件放置5d和lOd的穩(wěn)定 性數(shù)據(jù)如下。結(jié)果顯示與初始狀態(tài)(0時(shí))相比，第5d主藥含量都有非常明顯的降低。
[0042] 對(duì)比實(shí)施例1，10~12和實(shí)施例13,美沙拉嗦穩(wěn)定性有了大幅提高，說明在處方中加 入焦亞硫酸鐘是非常有必要的。
[0043] 對(duì)比實(shí)施例1、10和11，隨著抗氧劑焦亞硫酸鐘在處方中的用量增加，穩(wěn)定性略有 提高，但當(dāng)焦亞硫酸鐘在處方中的用量達(dá)到0.8%后，再繼續(xù)增加焦亞硫酸鋼的用量，對(duì)美沙 拉嗦穩(wěn)定性的貢獻(xiàn)不大。
[0044] 對(duì)比實(shí)施例1和實(shí)施例12，說明在處方中加入金屬絡(luò)合劑邸TA有助于提高穩(wěn)定性。
[0045] 穩(wěn)定試驗(yàn) 取實(shí)施例1的5-ASA溫敏凝膠灌腸液供試品Ξ批，模擬市售包裝，置于溫度40°C ±2°C、 相對(duì)濕度25%±5%條件下放置6個(gè)月，試驗(yàn)期間分別于第0、1、2、3、6個(gè)月取樣一次，觀察并記 錄供試品外觀性狀，測(cè)定膠凝溫度、pH、黏度、沉降體積比、5-ASA含量及有關(guān)物質(zhì)。
[0046] 結(jié)果見下表：
與初始狀態(tài)(ο時(shí))相比，混懸液顏色由乳白色逐漸變?yōu)榈瓧澤琾H無明顯變化均控制在 4.0~5.0范圍內(nèi)；主藥含量略有降低，但降低幅度在3%W內(nèi)，仍在標(biāo)示范圍內(nèi)，有關(guān)物質(zhì)符合 要求;膠凝溫度、黏度和沉降體積比無明顯變化。因此各項(xiàng)指標(biāo)性質(zhì)穩(wěn)定。
[0047] 四、動(dòng)物實(shí)驗(yàn) 選取健康雌性BALB/c小鼠40只，6~8周齡，體重20~22g，隨機(jī)分為4組，分別為A:正常組； B:生理鹽水組;C:美沙拉嗦灌腸液組(簡(jiǎn)稱:市售組）;D:實(shí)施例1的5-ASA溫敏凝膠灌腸液組 (簡(jiǎn)稱:實(shí)施例1)。
[0048] 急性潰瘍性結(jié)腸炎模型的制備與給藥方法 采用自由飲用DSS水溶液的方式制備小鼠急性潰瘍性結(jié)腸炎模型，除A組外，其他Ξ組 均造模，自由飲用3.5%DSS水溶液5天，每天更換新鮮的DSS溶液，A組給予正常飲用水5天。模 型建立成功的標(biāo)志為小鼠出現(xiàn)半稀便、腹瀉、糞便隱血陽(yáng)性和肉眼血便中的任一癥狀。造模 成功次日灌腸給予相應(yīng)藥物，C、D兩組給藥劑量為人每日灌腸劑量折算成小鼠等效劑量為 520mg/kg(按5-ASA計(jì)），連續(xù)7天;B組劑量為相對(duì)于D組劑量計(jì)算的與含藥凝膠等量的生理 鹽水，連續(xù)7天;A組正常飲食，不做任何處理。
[0049] 疾病活動(dòng)指數(shù)(disease activity index,DAI)評(píng)估 自試驗(yàn)開始每天觀察小鼠一般活動(dòng)情況，記錄體重變化、大便性狀及糞便隱血情況，參 考文獻(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)并做適當(dāng)修改進(jìn)行DAI評(píng)分，見下表。
[0050] ~*正常大便:成形大便;松散大便:不粘附于肛口的糊狀、半成形大便;稀便:可粘附胃 于肛口的稀水樣大便。
[0051] 從圖3可看出，給藥期間，生理鹽水組小鼠體重減輕趨勢(shì)逐漸減緩，市售組與實(shí)施 例1組小鼠于第8天開始體重不再減輕，隨著給藥天數(shù)增加，一些小鼠體重出現(xiàn)回升;給藥結(jié) 束后，市售組與實(shí)施例1組小鼠體重均明顯高于生理鹽水組(P<〇.05)，但兩組之間無顯著 性差異(P>〇.05)。通過每天觀測(cè)各組小鼠大便性狀和糞便隱血情況發(fā)現(xiàn)，正常組小鼠大便 正常，評(píng)分始終維持在零水平;經(jīng)過造模的Ξ組小鼠在第3天開始逐漸出現(xiàn)大便松散、稀便， 嚴(yán)重者可見肉眼血便，墊料上可見血跡，便隱血呈不同程度陽(yáng)性;給藥期間，隨著給藥天數(shù) 的增加，Ξ組小鼠大便性狀與糞便隱血評(píng)分均呈下降趨勢(shì)，實(shí)施例1組的評(píng)分值顯著低于其 他兩組。結(jié)果見圖4~5。
[0052] 結(jié)腸外觀形態(tài)損傷及組織學(xué)損傷評(píng)估 小鼠末次給藥后，禁食2地，麻醉處死，解剖，取出肛口端至盲腸末端的整個(gè)腸段，觀察 各組結(jié)腸外觀形態(tài)變化，參照下表標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)分。_
[0053] ~將小鼠結(jié)腸沿腸系膜邊緣縱向剖開
，冰生理鹽水清洗腸內(nèi)容物，于有嚴(yán)重炎癥或' 潰瘍處取組織標(biāo)本經(jīng)4%多聚甲醒固定后，常規(guī)脫水及石蠟包埋，5WI1切片后，進(jìn)行常規(guī)皿染 色，光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行結(jié)腸組織病理學(xué)檢查，參照下表標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)分。_^

[0054] 采用SPSS19.0軟件對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料均用mean±SD表示，方差齊 性檢驗(yàn)后，各組間差異的比較采用單因素方差分析(One-way AN0VA)，WP<0.05為差異具 有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
[0055] 結(jié)果見下表：
a與正常組比較，P<0.05 ;b與生理鹽水組比較，p<0.05 ;e與市售組比較，p<0.05 肉眼觀察各組小鼠結(jié)腸外觀形態(tài)，正常組小鼠結(jié)腸黏膜光滑，腸壁薄，黏膜下血管紋理 清晰，無充血、水腫，無糜爛及潰瘍；生理鹽水組小鼠結(jié)腸表面粗糖呈顆粒狀，腸壁增厚，扭 曲變形，腸黏膜充血、水腫，可見輕至重度糜爛及潰瘍；市售組小鼠結(jié)腸腸壁增厚，腸粘膜充 血、水腫，輕度糜爛，少數(shù)可見小潰瘍?cè)?實(shí)施例1組小鼠結(jié)腸腸壁增厚，腸粘膜輕度充血、水 月中，僅有2只小鼠可見輕度糜爛，但未見潰瘍?cè)?。市售組和實(shí)施例1組小鼠的結(jié)腸外觀形態(tài)損 傷評(píng)分明顯低于生理鹽水組(P<〇.05);實(shí)施例1組與市售組相比，具有更低的結(jié)腸外觀形 態(tài)損傷評(píng)分，且兩者差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<〇.05)。小鼠結(jié)腸組織學(xué)損傷評(píng)分結(jié)果表明， 市售組和實(shí)施例1組的評(píng)分顯著低于生理鹽水組(P<〇.05)，實(shí)施例1組評(píng)分最低，與市售組 相比，兩者差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<〇.05)。
[0化6] 綜上所述，與生理鹽水組和市售組相比，實(shí)施例1組(實(shí)施例1的美沙拉嗦溫敏凝膠 灌腸液）的療效更優(yōu)。同時(shí)給藥期間還發(fā)現(xiàn)，生理鹽水組和市售組小鼠灌腸給藥后，幾乎都 出現(xiàn)了不同程度的泄露，而實(shí)施例1組則偶有小鼠出現(xiàn)泄露，說明W溫敏凝膠作為美沙拉嗦 載體，再輔W生物粘附材料，能有效延長(zhǎng)美沙拉嗦在結(jié)腸部位的滯留時(shí)間，從而改善療效。 [0化7] 五、病理學(xué) 選取雌性SD大鼠9只，體重200~250g，隨機(jī)分為3組，分別為A:生理鹽水組;B:空白實(shí)施 例1組;C:美沙拉嗦結(jié)腸用溫敏實(shí)施例1組。C組每天灌腸給予美沙拉嗦結(jié)腸用溫敏凝膠（按 照實(shí)施例3制備），劑量為360mg/kg(按美沙拉嗦計(jì)），連續(xù)7天;A組和B組每天給予生理鹽水 和不含美沙拉嗦的空白凝膠，劑量為相對(duì)于C組劑量計(jì)算出的與含藥凝膠等量的相應(yīng)藥物， 連續(xù)7天。每天觀察各組大鼠體重、精神狀態(tài)和活動(dòng)情況。于末次給藥后，大鼠禁食2地，麻醉 處死。解剖，取出肛口端至盲腸末端的整個(gè)腸段，肉眼觀察各組結(jié)腸外觀形態(tài)變化。將結(jié)腸 沿腸系膜緣剪開，冰生理鹽水沖洗糞便，為避免因灌腸給藥過程中機(jī)械刺激引起的炎性干 擾試驗(yàn)結(jié)果，組織標(biāo)本取距灌腸深度上端1cm左右結(jié)腸標(biāo)本經(jīng)4%多聚甲醒固定后，常規(guī)脫水 及石蠟包埋，切片巧皿），常規(guī)肥染色，光學(xué)顯微下進(jìn)行結(jié)腸組織病理學(xué)檢查。
[005引結(jié)果顯示，用藥期間各組大鼠體重、攝食、大便性狀均正常，解剖后肉眼觀察各組 結(jié)腸外觀形態(tài)，均未見明顯充血、水腫或黏膜下出血等現(xiàn)象。光學(xué)顯微鏡下觀察結(jié)腸組織病 理切片，見圖6，Ξ組結(jié)腸粘膜上皮細(xì)胞均無變性、壞死，固有層腺體分布正常，未見充血、水 腫和炎細(xì)胞浸潤(rùn)，黏膜下層、黏膜肌層與外膜組織結(jié)構(gòu)完整，未見異常改變。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明 美沙拉嗦結(jié)腸用溫敏凝膠具有良好的體內(nèi)生物相容性。
[0059] W上所述實(shí)施例僅是為充分說明本發(fā)明而所舉的較佳的實(shí)施例，本發(fā)明的保護(hù)范 圍不限于此。本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員在本發(fā)明基礎(chǔ)上所作的等同替代或變換，均在本發(fā)明 的保護(hù)范圍之內(nèi)。本發(fā)明的保護(hù)范圍W權(quán)利要求書為準(zhǔn)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種美沙拉嗪溫敏凝膠灌腸液，其特征在于，其成分包括:主藥、溫敏型凝膠基質(zhì)、生 物粘附材料和水， 其中所述主藥為美沙拉嗪，其在所述美沙拉嗪溫敏凝膠灌腸液中所占的質(zhì)量百分比為 6.7% ； 所述溫敏型凝膠基質(zhì)由泊洛沙姆407和泊洛沙姆188組成，泊洛沙姆407在所述美沙拉 嗪溫敏凝膠灌腸液中所占的質(zhì)量百分比為16%~19%，泊洛沙姆188在在所述美沙拉嗪溫 敏凝膠灌腸液中所占的質(zhì)量百分比為3%~12% ; 所述述生物粘附材料為殼聚糖、透明質(zhì)酸鈉、羥丙甲基纖維素、黃原膠、魔芋膠、白芨膠 或聚卡波非中的一種或其組合，所述生物粘附材在所述美沙拉嗪溫敏凝膠灌腸液中所占的 質(zhì)量百分比為0.1 %~0.4%，優(yōu)選0.2%。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的美沙拉嗪溫敏凝膠灌腸液，其特征在于，所述生物粘附材料由 聚卡波非和透明質(zhì)酸鈉組成，聚卡波非和透明質(zhì)酸鈉的質(zhì)量比為1:3~3:1。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的美沙拉嗪溫敏凝膠灌腸液，其特征在于，所述生物粘附材料由 聚卡波非和透明質(zhì)酸鈉組成，聚卡波非和透明質(zhì)酸鈉的質(zhì)量比為3:1。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的美沙拉嗪溫敏凝膠灌腸液，其特征在于，泊洛沙姆407在所述 美沙拉嗪溫敏凝膠灌腸液中所占的質(zhì)量百分比為17.6% ;泊洛沙姆188在所述美沙拉嗪溫 敏凝膠灌腸液中所占的質(zhì)量百分比為8.0%。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的美沙拉嗪溫敏凝膠灌腸液，其特征在于，還包括穩(wěn)定劑，所述 的穩(wěn)定劑包括:金屬絡(luò)合劑、防腐劑和抗氧劑。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的美沙拉嗪溫敏凝膠灌腸液，其特征在于，所述抗氧劑為焦亞硫 酸鉀。7. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的美沙拉嗪溫敏凝膠灌腸液，其特征在于，所述金屬絡(luò)合劑為依 地酸二鈉。8. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的美沙拉嗪溫敏凝膠灌腸液，其特征在于，所述防腐劑為苯甲酸 鈉。9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的美沙拉嗪溫敏凝膠灌腸液，其特征在于，所述美沙拉嗪溫敏凝 膠灌腸液的pH值為4.0~5.0。10. 權(quán)利要求1~9任一項(xiàng)所述的美沙拉嗪結(jié)腸用溫敏凝膠的制備方法，其特征在于，包 括以下步驟： (1) 將生物粘附材料置于水中，攪拌至分散均勻，制得第一種混合物； (2) 在攪拌下向第一種混合物中加入溫敏型凝膠基質(zhì)，使其充分潤(rùn)濕，于0~5°C下放 置，至溫敏型凝膠基質(zhì)完全溶脹為無團(tuán)塊的澄明溶液，攪拌使之均勻，制得第二種混合物； (3) 取穩(wěn)定劑在攪拌下加入到第二種混合物中，攪拌至完全溶解，最后加入主藥并補(bǔ)加 水至足量，避光繼續(xù)攪拌直至藥物均勻混懸即得。
【文檔編號(hào)】A61K9/06GK105878177SQ201610310802
【公開日】2016年8月24日
【申請(qǐng)日】2016年5月12日
【發(fā)明人】符旭東, 羅夢(mèng)穎, 劉宏, 彭麗君
【申請(qǐng)人】中國(guó)人民解放軍廣州軍區(qū)武漢總醫(yī)院