茚地那韋的醫(yī)藥新用圖
【專利摘要】本發(fā)明提供了茚地那韋的藥物新用途，具體涉及茚地那韋在預防或治療肥胖、II型糖尿病、糖尿病腎病和非酒精性脂肪肝的藥物中的應用。在上述應用中，其口服使用劑量范圍是50mg～2000mg；優(yōu)選50～1000mg。
【專利說明】
茚地那韋的醫(yī)藥新用途
技術領域
[0001] 本發(fā)明屬于化學醫(yī)藥領域，涉及茚地那韋的醫(yī)藥新用途;具體涉及茚地那韋通過 抑制高迀移率族蛋白Bl(high mobility group protein，HMGBl)的表達，以致于預防或治 療肥胖、II型糖尿病、糖尿病腎病和非酒精性脂肪肝等相關的代謝紊亂疾病。
【背景技術】
[0002] 2型糖尿病即成人發(fā)病型糖尿病，占糖尿病患者90%以上。2型糖尿病人多肥胖，產(chǎn) 生胰島素抵抗，導致對胰島素敏感性下降。糖尿病腎病為糖尿病的重要并發(fā)癥，糖尿病后期 近40%病人會發(fā)展為糖尿病腎病。肥胖癥是由于熱量攝入超過消耗所致的體內(nèi)脂肪堆積， 體重增加的一種非健康狀態(tài)。肥胖癥的發(fā)病率無論在發(fā)達國家還是發(fā)展中國家都迅速增 長，并呈低齡化趨勢，已成為全球性嚴重影響健康的流行病，目前我國擁有超重者至少2-3 億人，肥胖癥患者突破7000萬人。肥胖癥不僅影響人的日常生活，而且是導致2型糖尿病，冠 心病，高血壓，血脂異常，膽囊炎等疾病的主要因素。因此，肥胖癥的防治具有重要的臨床意 義。
[0003] 高迀移率族蛋白Bl(high mobility group protein，HMGBl)是一種高度保守的核 蛋白，廣泛分布于哺乳動物細胞。隨著其晚期促炎作用的發(fā)現(xiàn)，HMGB1成為近年來危重醫(yī)學 研究的熱點革￡點。高血糖可促進HMGB1的表達[Volz HCl，Seidel C，Laohachewin D，Kaya Z,Muller 0J,Pleger ST,Lasitschka F,Bianchi ME,Remppis A,Bierhaus A,Katus HA, Andrassy M.HMGB1:the missing link between diabetes mellitus and heart failure .Basic Res Cardiol .2010; 105(6): 805-820 ? LHMGB1 與肥胖關系密切，尤其脂肪 組織中的巨卩策細胞的HMGB1 高表達[Weisberg SP,McCann D，Desai M,Rosenbaum M，Leibel RL,Ferrante Aff,Jr.Obesity is associated with macrophage accumulation in adipose tissue.J Clin Invest.2003；112(12):1796-1808.；ffagner M.A dangerous duo in adipose tissue:high-mobility group box lprotein and macrophages.Yale J Biol Med.2014；87(2):127-133.]〇
[0004]臨床上硫酸茚地那韋主治成人HIV-I感染，可與抗逆轉錄病制劑（如：核苷和非核 苷類逆轉錄酶抑制劑)合用治療成人的HIV-I感染。單獨應用治療臨床上不適宜用核苷或非 核苷類逆轉錄酶抑制劑治療的成年患者，但茚地那韋在預防或治療肥胖、II型糖尿病、糖尿 病腎病和非酒精性脂肪肝的藥理作用未見報道。本發(fā)明人通過大量的研究發(fā)現(xiàn)茚地那韋可 以通過抑制HMGB1表達從而預防或治療肥胖、II型糖尿病、糖尿病腎病和非酒精性脂肪肝。 基于此，本發(fā)明人發(fā)明了茚地那韋通過抑制IHMGB1表達，從而抑制肥胖、II型糖尿病、糖尿 病腎病和非酒精性脂肪肝的發(fā)生發(fā)展，以致于預防或治療肥胖、II型糖尿病、糖尿病腎病 和非酒精性脂肪肝。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明提供了茚地那韋在制備預防或治療肥胖、II型糖尿病、糖尿病腎病和非酒 精性脂肪肝的藥物中的應用。
[0006] 本發(fā)明提供了茚地那韋在制備預防或治療肥胖的藥物中的應用。
[0007] 本發(fā)明提供了茚地那韋在制備預防或治療II型糖尿病的藥物中的應用。
[0008] 本發(fā)明提供了茚地那韋在制備預防或治療糖尿病腎病的藥物中的應用。
[0009] 本發(fā)明提供了茚地那韋在制備預防或治療非酒精性脂肪肝的藥物中的應用。
[0010]本發(fā)明提供了茚地那韋通過抑制HMGB1的表達在肥胖、II型糖尿病、糖尿病腎病和 非酒精性脂肪肝中的藥物中的應用。
[0011] 本發(fā)明提供的茚地那韋可以以硫酸鹽、鹽酸鹽等存在。優(yōu)選硫酸鹽。茚地那韋和藥 學上可接受的載體或輔料組成的藥物，該藥物可以以藥學常規(guī)方法制備成片劑、膠囊劑、滴 丸劑，優(yōu)選以膠囊形式存在。
[0012] 本發(fā)明提供的茚地那韋在用于肥胖、II型糖尿病、糖尿病腎病和非酒精性脂肪肝 時，其口服使用劑量范圍是50mg~2000mg;優(yōu)選50~lOOOmg。
【具體實施方式】
[0013] 實施例1硫酸茚地那韋膠囊制備
[0014] 稱取50.0g硫酸茚地那韋、和150.0g羧甲基淀粉鈉充分混合均勻后過100目篩，加 入適量的3%PVPK3Q水溶液適量制軟材，20目篩制粒，60°C干燥3小時，18目篩整粒，加入2.0g 硬脂酸鎂，混合均勻后裝膠囊，調(diào)節(jié)膠囊重約200mg，即得。
[0015] 具體實施例
[0016] 試驗例1硫酸茚地那韋對ob/ob肥胖小鼠的影響
[0017] 1.1實驗材料
[0018] 糖化血紅蛋白測定試劑盒，批號:0590072; HMGB1-抗購買于sigma公司；硫酸茚地 那韋（純度99.5%，購買于大連美侖生物科技有限公司）；高密度脂蛋白（HDL)試劑盒(北京 中生科技公司，批號：130706)、低密度脂蛋白（LDL)試劑盒（北京中生科技公司，批號： 130806)和甘油三酯（TG)試劑盒(北京中生科技公司，批號：130406)。ob/ob小鼠，雄性50 只，10周齡，體重50~55g;購買于南京模式動物研究所。
[0019] 1.2實驗方法與結果
[0020] ob/ob小鼠50只，隨機分為5組，即模型組、硫酸茚地那韋灌胃給藥10mg/kg、20mg/ kg、200mg/kg、400mg/kg組。另外取10只正常ob/ob小鼠作為對照組。各組給予相應藥物，連 續(xù)給藥4周。稱重和計算攝食量，測定糖化血紅蛋白（HbAlc)、血糖，高密度脂蛋白（HDL)、低 密度脂蛋白（LDL)和甘油三酯(TG)。取脂肪組織，均漿，BCA蛋白測定試劑盒(Pierce公司）測 定蛋白濃度后，取50yg樣品蛋白進行10%的十二烷基磺酸鈉2聚丙烯酰胺（SDS-PAGE)凝膠 變性電泳、然后轉至聚偏二氟乙?。≒VDF)膜，加入HMGB1-抗，0-act in作內(nèi)參，Western blot檢測脂肪組織HMGB1蛋白的表達。比較各給藥組與模型組的差異。組間進行T檢驗。 [0021] 表1硫酸茚地那韋給藥4周對ob/ob小鼠的影響(n = 10)
[0023] *，p〈0.05，**，p〈0.01，與模型組比較
[0024] 表2硫酸茚地那韋給藥4周對ob/〇M、鼠的血生化指標影響(n = 10)
[0026] *，p〈0.05，**，p〈0.01，與模型組比較
[0027] 表1、表2結果顯不硫酸諱地那韋灌胃給藥10mg/kg、20mg/kg、200mg/kg和400mg/kg 組明顯降低體重和攝食量，降低血漿HbA 1 c、LDL和TG水平，抑制血糖升高，抑制脂肪組織 HMGB1表達下降，升高HDL水平(p〈0.05或p〈0.01)。硫酸茚地那韋200mg/kg組降低體重和攝 食量，降低血漿HbAlc、LDL和TG水平，抑制血糖升高，抑制脂肪組織HMGB1表達下降，升高HDL 水平與硫酸茚地那韋400mg/kg組比較無顯著性差異。
[0028] 試驗例2硫酸茚地那韋對db/db II型糖尿病小鼠的影響
[0029] 2.1實驗材料
[0030] 糖化血紅蛋白測定試劑盒，批號：0590072 -抗購買于sigma公司；硫酸茚地 那韋（純度99.5%，購買于大連美侖生物科技有限公司）；db/db小鼠，雄性60只，10周齡，體 重50~55g;購買于南京模式動物研究所。
[0031] 2.2實驗方法與結果
[0032] db/db小鼠50只，隨機分為5組，即模型組、硫酸茚地那韋灌胃給藥10mg/kg、20mg/ kg，200mg/kg、400mg/kg組。另外取10只正常db/db小鼠作為對照組。各組給予相應藥物，連 續(xù)給藥4周。稱重，測定糖化血紅蛋白（HbAlc)、血糖。取脂肪組織，均漿，BCA蛋白測定試劑盒 (Pierce公司）測定蛋白濃度后，取50yg樣品蛋白進行10%的十二烷基磺酸鈉2聚丙烯酰胺 (SDS-PAGE)凝膠變性電泳、然后轉至聚偏二氟乙烯(PVDF)膜，加入HMGB1-抗，P-actin作內(nèi) 參，Western blot檢測脂肪組織HMGB1蛋白的表達。比較各給藥組與模型組的差異。組間進 行T檢驗。
[0033] 表3硫酸茚地那韋給藥4周對db/db糖尿病小鼠的影響(n = 10)
[0035] *，p〈0.05，'p〈0.01，與模型組比較
[0036] 表3結果顯不硫酸諱地那韋灌胃給藥10mg/kg、20mg/kg、200mg/kg和400mg/kg組明 顯降低體重，降低血漿HbAlc水平，抑制血糖升高，抑制脂肪組織HMGB1表達下降(p〈0.05或p 〈0.01)。硫酸茚地那韋200mg/kg組降低體重，降低血漿HbAlc水平，抑制血糖升高，抑制脂肪 組織HMGB1表達下降與硫酸茚地那韋400mg/kg組比較無顯著性差異。
[0037] 試驗例3硫酸茚地那韋對糖尿病腎病大鼠的影響
[0038] 3.1實驗材料
[0039]硫酸茚地那韋（純度99.5%，購買于大連美侖生物科技有限公司）苯那普利，北京 諾華制藥有限公司生產(chǎn)，批號：130106;鏈脲佐菌素（Sigma公司），血糖測定試劑盒(北京中 生試劑有限公司批號：130503);肌酐和尿素氮試劑盒(北京中生科技公司，批號：130606)。 [0040] 實驗動物：SPF級Sprague Dawley大鼠，雄性，體重150g_200g，山東綠葉制藥股份 有限公司實驗動物中心提供，動物合格證號為:SYXK (魯)20030020。
[00411 3.2試驗方法與結果
[0042] 雄性SD大鼠100只，適應性喂養(yǎng)1周后，所有的大鼠在10%水合氯醛(0.35mL/100g， ip)麻醉，行左腎摘除術，一周后單次靜脈注射1%的鏈脲佐菌素溶液60mg/kg，鏈脲佐菌素 以0.1mol/L、pH為4.5枸椽酸緩沖溶液溶解，7211后眼眶采血，血糖測定試劑盒測定，血糖2 16.7mmol/L確定為造模成功，4周后隨機分為6組，即模型組、苯那普利2mg/kg組，硫酸諱地 那韋灌胃5mg/kg組，硫酸茚地那韋灌胃10mg/kg組，硫酸茚地那韋灌胃100mg/kg組，硫酸茚 地那韋灌胃200mg/kg組，另外取10只作為正常對照組。各組連續(xù)給藥8周，采血測定血清肌 酐和尿素氮及各組大鼠24h尿蛋白排泄量。
[0043]取腎組織，均漿，BCA蛋白測定試劑盒(Pierce公司）測定蛋白濃度后，取50yg樣品 蛋白進行10%的十二烷基磺酸鈉2聚丙烯酰胺(SDS-PAGE)凝膠變性電泳、然后轉至聚偏二 氟乙烯(PVDF)膜，加入HMGB1-抗，0-actin作內(nèi)參，Western blot檢測腎組織HMGB1蛋白的 表達。比較各給藥組與模型組的差異，同時對腎臟作病理切片進行顯微檢查。
[0044] 表4硫酸茚地那韋給藥8周對糖尿病腎病大鼠的影響(n = 10)
[0046] *，p〈0.05，**，p〈0.01，與模型組比較
[0047] 表5硫酸茚地那韋給藥8周對糖尿病腎病大鼠腎系數(shù)和HMGB1的影響(n = 10)
[0049] *，p〈0.05，'p〈0.01，與模型組比較
[0050] 表4、表5結果表明苯那普利2mg/kg組，硫酸茚地那韋灌胃5mg/kg組，硫酸茚地那韋 灌胃l〇mg/kg組，硫酸茚地那韋灌胃100mg/kg組，硫酸茚地那韋灌胃200mg/kg組給藥8周明 顯降低血清肌酐和尿素氮24h尿蛋白排泄量，減少腎組織HMGB1的表達(與模型對照組比較， p〈0.05或0.01);硫酸茚地那韋灌胃100mg/kg組降低血清肌酐和尿素氮及24h尿蛋白排泄 量，減少腎組織HMGB1的表達與硫酸茚地那韋灌胃200mg/kg組比較，無顯著性差異。
[0051 ]病理檢查：正常對照組大鼠腎小球基底膜正常，未見增寬，足突排列整齊。模型對 照組大鼠腎小球基底膜顯著增寬，足突排列紊亂、融合，系膜細胞和基質(zhì)輕度節(jié)段性增生。 硫酸茚地那韋各給藥組較模型組病變輕，且隨劑量的增加病理損傷逐步減輕。
[0052] 試驗例4硫酸茚地那韋對非酒精性脂肪肝大鼠的影響
[0053] 4.1實驗材料
[0054] 硫酸茚地那韋（純度99.5%，購買大連美侖生物科技有限公司）二甲雙胍片（上海 信誼藥廠有限公司，批號：1307231);游離脂肪酸(FFA)檢測試劑盒，購自南京建成生物工程 有限公司，批號20130715;甘油三酯TG(酶學終點法)檢測試劑盒，威特曼生物科技(南京)有 限公司，批號ZGY13307;總膽固醇(TC試劑盒(北京中生科技公司，批號：130506)
[0055] 實驗動物：SPF級Sprague Dawley大鼠，雄性，體重150g_200g，山東綠葉制藥股份 有限公司實驗動物中心提供，動物合格證號為:SYXK (魯)20030020。
[0056] 3.2試驗方法與結果
[0057]大鼠適應性飼養(yǎng)1周后，大鼠按體重編號，完全隨機分為正常組10只和高脂造模組 60只。正常組予普通飼料喂養(yǎng)，基礎飼料配方:面粉20 %、米粉10 %、玉米20 %、鼓皮25 %、豆 料20 %、魚粉2 %、骨粉2 %。高脂造模組予高脂飼料喂養(yǎng)，高脂飼料配方:基礎飼料77.6 %、 豬油10%、膽固醇2.0 %、膽鹽0.2%、丙硫氧嚓嚨0.2%、蛋黃粉5%、蔗糖5 %。均自由飲水。 連續(xù)造模8周，根據(jù)體重大鼠分為模型組、二甲雙胍10mg/kg、硫酸茚地那韋灌胃給藥5mg/ kg、10mg/kg、100mg/kg、200mg/kg組，各組繼續(xù)給予高脂飼料地同時給予上述相應藥物，至 16周時處死大鼠，測定體重，計算肝系數(shù)，收集血樣，測定血清六1^^51'、16、總膽固醇(1'〇、 游離脂肪酸(FFA)。取肝組織，均漿，BCA蛋白測定試劑盒(Pierce公司）測定蛋白濃度后，取 50yg樣品蛋白進行10 %的十二烷基磺酸鈉2聚丙烯酰胺（SDS-PAGE)凝膠變性電泳、然后轉 至聚偏二氟乙?。≒VDF)膜，加入HMGB1-抗，0-act in作內(nèi)參，We stern blot檢測肝組織 HMGB1蛋白的表達。比較各給藥組與模型組的差異。
[0058]表6硫酸茚地那韋給藥8周對非酒精性脂肪肝大鼠的影響(n = 10)
[0060] *，p〈0.05，'p〈0.01，與模型組比較
[0061] 表7硫酸茚地那韋給藥8周對非酒精性脂肪肝大鼠的影響(n = 10)
[0063] *，p〈0.05，'p〈0.01，與模型組比較
[0064] 表6、表7結果表明二甲雙胍10mg/kg組，硫酸茚地那韋灌胃5mg/kg組，硫酸茚地那 韋灌胃10mg/kg組，硫酸茚地那韋灌胃100mg/kg組，硫酸茚地那韋灌胃200mg/kg組給藥8周 明顯降低體重、肝系數(shù)和肝組織HMGB1表達，降低血清ALT、AST、TG、TC和FFA(與模型對照組 比較，p〈〇.〇5或0.01);硫酸茚地那韋灌胃100mg/kg組降低體重、肝系數(shù)和肝組織HMGB1表 達，降低血清41^^31'、了6、1'(^^^\與硫酸茚地那韋灌胃20〇11^/1^組比較，無顯著性差異。
【主權項】
1. 一種茚地那韋的醫(yī)藥新用途，具體涉及茚地那韋在預防或治療肥胖、II型糖尿病、糖 尿病腎病和非酒精性脂肪肝的藥物中的應用。2. 根據(jù)權利要求1所述的應用，其特征在于，茚地那韋可預防或治療肥胖。3. 根據(jù)權利要求1所述的應用，其特征在于，茚地那韋可預防或治療II型糖尿病。4. 根據(jù)權利要求1所述的應用，其特征在于，茚地那韋可預防或治療糖尿病腎病。5. 根據(jù)權利要求1所述的應用，其特征在于，茚地那韋可預防或治療非酒精性脂肪肝。6. 根據(jù)權利要求2-5任一權利要求所述的應用，其特征在于，茚地那韋用的使用劑量范 圍是 50mg ~2000mg。7. 根據(jù)權利要求6所述的應用，其特征在于，茚地那韋用的使用劑量范圍是優(yōu)選50~ 1000mg〇8. 根據(jù)權利要求2-5任一權利要求所述的應用，茚地那韋以硫酸鹽、鹽酸鹽形式存在。9. 根據(jù)權利要求8所述的應用，茚地那韋以硫酸鹽形式存在。
【文檔編號】A61P13/12GK105853432SQ201610286810
【公開日】2016年8月17日
【申請日】2016年5月3日
【發(fā)明人】蔣王林, 張廣華, 紀云霞, 呂長俊
【申請人】濱州醫(yī)學院