-12(IL-12)是又稱為自然殺傷細(xì)胞刺激因子（NKSF)或細(xì)胞毒 性淋巴細(xì)胞成熟因子的一種促炎性Thl細(xì)胞因子。在培養(yǎng)基中，在存在或不存在10μg/mL 0ΡΝ的情況下進(jìn)行離體細(xì)胞培養(yǎng)。添加0ΡΝ對(duì)所測(cè)定的細(xì)胞因子的分泌不具有顯著影響，因 此合并來(lái)自0ΡΝ處理的細(xì)胞和未處理的細(xì)胞的數(shù)據(jù)。對(duì)于PBMC和脾的所有處理的具有細(xì) 胞因子濃度（pg/mL)的數(shù)據(jù)對(duì)應(yīng)地概述于表4和表5中。然后基于統(tǒng)計(jì)學(xué)差異合并統(tǒng)計(jì)學(xué) 顯著的數(shù)據(jù)，并且示于圖10-17中。
[0152] 外周血單核細(xì)朐:在未刺激的PBMC中，IL-6和IL-10的濃度在檢測(cè)水平以下（表 4)。在未刺激的細(xì)胞的上清液中檢測(cè)到IL-12們并且膳食和疫苗接種這兩者的作用都是統(tǒng) 計(jì)學(xué)顯著的（P〈〇. 05)(圖10)。在0PNV組的PBMC中，IL-12相對(duì)于所有其他處理組是最高 的。在PBMC中PHA刺激細(xì)胞因子不受疫苗接種影響。然而，膳食對(duì)IL-12分泌的影響是統(tǒng) 計(jì)學(xué)顯著的，其中在0PNV中觀察到最高分泌（圖11A)。IL-10分泌趨向于在膳食組之中不 同，其中獲自0ΡΝ組的細(xì)胞趨向于高于來(lái)自來(lái)自SR和FF小豬的細(xì)胞（圖11B)。
[0153] 在來(lái)源于0ΡΝ喂養(yǎng)的小豬的LPS刺激的PBMC中，IL-6和IL-12的濃度相對(duì)于SR 組和FF組顯著更高（p〈0. 05)，無(wú)論是否疫苗接種（對(duì)應(yīng)地圖12A和圖12B)。在LPS刺激 IL-10分泌中觀察到類似的模式，其中暴露于OPN引起IL-10的濃度更高。另外，疫苗接種 在0PN組和SR組中引起更高的IL-10水平（圖12C)。
[0154] 流感病毒疫苗對(duì)IL-12的作用是疫苗接種依賴性的，其中在膳食與疫苗接種之間 具有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的相互作用（圖13A)。疫苗接種在SRV和FFV中導(dǎo)致IL-12分泌減少，而 0ΡΝ組保持不變。與SR和FF相比，在流感病毒疫苗刺激的細(xì)胞中的IL-10分泌高于在0ΡΝ 喂養(yǎng)的組中，而接種疫苗的小豬具有更低的IL-10濃度（圖13B)。
[0155] 脾免痔細(xì)朐:用PHA、LPS和流感病毒疫苗刺激從脾中分離的細(xì)胞，并且在72小時(shí) 孵育之后所收集的上清液中測(cè)量細(xì)胞因子產(chǎn)生（表5)。脾細(xì)胞不產(chǎn)生對(duì)用于本研究的刺激 物有響應(yīng)的任何IL-6。另一方面，在未刺激的細(xì)胞的上清液中發(fā)現(xiàn)IL-12(圖14A)。來(lái)自 SR組和FF組的細(xì)胞分泌更高量的IL-12,而膳食0ΡΝ和疫苗接種趨向于（p= 0. 07)降低 IL-12濃度。未刺激的細(xì)胞的上清液中的IL-10濃度在SRV組中最高（圖14B)。對(duì)PHA刺 激有響應(yīng)的由脾細(xì)胞產(chǎn)生的IL-12和IL-10分泌是類似的。當(dāng)與在未接種疫苗的組中發(fā)現(xiàn) 的水平相比時(shí)，疫苗接種降低IL_12(圖15A)和IL-10 (圖15B)的濃度。此外，0ΡΝ組具有 比SR組和FF組顯著更低的這兩種細(xì)胞因子的水平。類似地，對(duì)LPS有響應(yīng)的IL-12分泌 在來(lái)源于未接種疫苗的小豬的細(xì)胞上清液中顯著高于接種疫苗的小豬（p〈〇. 05)(圖16A)。 獲自0ΡΝ組的細(xì)胞相對(duì)于SR組和FF組分泌最低量的IL-12。在LPS刺激的細(xì)胞中的IL-10 分泌不受疫苗接種影響，但在SR組中高于FF組和0ΡΝ組（圖16B)。當(dāng)流感病毒疫苗刺激 時(shí)，IL-12和IL-10分泌在接種疫苗的組中最低（p〈0. 05)，并且從0ΡΝ動(dòng)物中分離的細(xì)胞比 SR和FF分泌更少的IL-12 (圖17)。
[0156] 總之，當(dāng)小豬接受用0ΡΝ補(bǔ)充的配方膳食時(shí)，它們的胃細(xì)胞暴露于恒定的0ΡΝ濃度 中。這與大母豬養(yǎng)育的小豬相反，在這些大母豬養(yǎng)育的小豬中，它們接受的0ΡΝ水平將隨 著用大母豬乳替代大母豬初乳的供應(yīng)而下降，并且將低于在0ΡΝ補(bǔ)充的配方膳食中提供的 140mg/L。當(dāng)在不存在和存在免疫刺激劑這兩種情況下離體孵育時(shí)，當(dāng)與來(lái)源于配方喂養(yǎng) 的小豬或大母豬養(yǎng)育的小豬的細(xì)胞相比時(shí)，接受0ΡΝ補(bǔ)充的配方的小豬特征在于分泌更多 IL-12和IL-10的免疫細(xì)胞（PBMC)。這提供了以下證據(jù)：膳食0ΡΝ具有引發(fā)PBMC細(xì)胞分泌 IL-12和IL-10的作用。當(dāng)用PHA(T細(xì)胞活化）和LPS(B細(xì)胞活化）刺激時(shí)，來(lái)自0ΡΝ-配 方喂養(yǎng)的小豬的PBMC分泌IL-12 (促炎性）和IL-10 (抗炎性）的能力表明免疫機(jī)制推向 免疫平衡。
[0157] 實(shí)例 2
[0158] 使用向嬰兒給予的Lacprodaiv? 0PN-10進(jìn)行的臨床試驗(yàn)
[0159] 2.1試驗(yàn)設(shè)計(jì)
[0160] 在中國(guó)上海進(jìn)行雙盲隨機(jī)臨床試驗(yàn)以便評(píng)估將牛0ΡΝ添加到配方中的作用。母親 選擇母乳喂養(yǎng)或者配方喂養(yǎng)她們的從1至6月齡的嬰兒。分組如下（η= 60/組）：
[0161] 1)母乳喂養(yǎng)的嬰兒
[0162] 2)用沒有0ΡΝ添加的常規(guī)配方（RF) (F0)喂養(yǎng)的嬰兒
[0163] 3)用添加大約 65mg0PN/L的牛 0ΡΝ的RF(F65)
[0164] 4)用添加大約 130mg0PN/L的牛 0ΡΝ的RF(F130)
[0165] *在（未補(bǔ)充的）常規(guī)配方中發(fā)現(xiàn)的0ΡΝ的基礎(chǔ)水平是大約15mg0PN/L。
[0166] 按月登記人體測(cè)量學(xué)，并且在1月齡、4月齡和6月齡時(shí)通過(guò)靜脈穿刺取得靜脈血 液樣品。分析血液學(xué)、免疫參數(shù)、血漿氨基酸類和血液尿素氮（BUN)。
[0167] 2. 2試驗(yàn)結(jié)果
[0168] 與母乳喂養(yǎng)的嬰兒相比，在接受常規(guī)配方（F0)的嬰兒中，對(duì)感染（諸如病毒、細(xì) 菌、真菌或變形蟲感染）有響應(yīng)的嬰兒中的發(fā)熱發(fā)病率顯著增加（圖18)。以65mg0ΡΝ/ L或130mg0PN/L的量將0ΡΝ添加到常規(guī)配方中可使在用常規(guī)配方喂養(yǎng)時(shí)所見到的高發(fā)熱 發(fā)病率降到極為接近在母乳喂養(yǎng)的嬰兒中見到的低發(fā)病率水平。當(dāng)與母乳喂養(yǎng)的嬰兒相比 時(shí)，接受常規(guī)配方（F0)的嬰兒組是僅有的顯示發(fā)熱發(fā)病率統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著增加的組。
[0169] 參考文獻(xiàn)：
[0170] 阿爾伯斯等人2013通過(guò)普通群體中的營(yíng)養(yǎng)學(xué)監(jiān)測(cè)免疫調(diào)制：對(duì)人健康的 鑒定和持續(xù)作用（Monitoringimmunemodulationbynutritioninthegeneral population:identifyingandsubstantiatingeffectsonhumanhealth).英國(guó)營(yíng)養(yǎng)學(xué) 雜志（BritishJNutrition) 110 (2): 1-22。
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【主權(quán)項(xiàng)】
1. 哺乳動(dòng)物乳骨橋蛋白和/或其一種或多種活性截短物，用作用于在哺乳動(dòng)物中增強(qiáng) 對(duì)感染性疾病的免疫抵抗力的藥劑，其中該骨橋蛋白和/或其活性截短物是用于口服給予 的。2. 用于根據(jù)權(quán)利要求1所述使用的哺乳動(dòng)物乳骨橋蛋白和/或其活性截短物，其中該 哺乳動(dòng)物乳是選自以下各項(xiàng)之中：牛、山羊、綿羊、駱駝、水牛、單峰駱駝、美洲駝以及其任何 組合。3. 用于根據(jù)權(quán)利要求1或2所述使用的哺乳動(dòng)物乳骨橋蛋白和/或其活性截短物，其 中該骨橋蛋白和/或其活性截短物在該哺乳動(dòng)物中加強(qiáng)體液免疫。4. 用于根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述使用的哺乳動(dòng)物乳骨橋蛋白和/或其活性截 短物，其中該哺乳動(dòng)物是人。5. 用于根據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述使用的哺乳動(dòng)物乳骨橋蛋白和/或其活性 截短物，其中該人屬于一個(gè)年齡組，該年齡組選自以下各項(xiàng)之中：〇 - 5歲、6 - 11歲、12 - 18 歲、19 - 34 歲、35 - 44 歲、45 - 54 歲、55 - 64 歲、65 - 74 歲、75 - 84 歲、以及大于 84 歲。6. 用于根據(jù)權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)所述使用的哺乳動(dòng)物乳和/或其活性截短物，其 中在哺乳動(dòng)物中對(duì)感染性疾病的免疫抵抗力是通過(guò)疫苗接種來(lái)誘導(dǎo)的。7. 用于根據(jù)權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)所述使用的哺乳動(dòng)物乳和/或其活性截短物，其 中該感染性疾病是選自以下各項(xiàng)之中：流感、白喉、破傷風(fēng)、百日咳、脊髓灰質(zhì)炎、麻疹、腮腺 炎和風(fēng)疹、結(jié)核病、乙型肝炎、丙型腦膜炎、輪狀病毒、人乳頭瘤病毒、甲型流感、乙型流感、 肺炎球菌感染以及帶狀皰疹。8. -種營(yíng)養(yǎng)組合物，包含根據(jù)權(quán)利要求1至7中任一項(xiàng)所述的哺乳動(dòng)物乳和/或其一 種或多種活性截短物。9. 一種用于在哺乳動(dòng)物中預(yù)防性或治療性治療感染性疾病的疫苗系統(tǒng)，該疫苗系統(tǒng)包 含一種疫苗和一種哺乳動(dòng)物乳骨橋蛋白和/或其一種或多種活性截短物，其中該骨橋蛋白 和/或其活性截短物是用于口服給予的；其中給予該骨橋蛋白和/或其活性截短物增強(qiáng)由 該疫苗誘導(dǎo)的免疫抵抗力。10. 用于根據(jù)權(quán)利要求9所述使用的疫苗系統(tǒng)，其中該哺乳動(dòng)物乳骨橋蛋白和/或其活 性截短物在該哺乳動(dòng)物中加強(qiáng)體液免疫。11. 用于根據(jù)權(quán)利要求9或10所述使用的疫苗系統(tǒng)，其中該骨橋蛋白和/或其活性截 短物是選自以下各項(xiàng)之中：牛、山羊、綿羊、駱駝、水牛、單峰駱駝、美洲駝、以及其任何組合。12. 用于根據(jù)權(quán)利要求9至11中任一項(xiàng)所述使用的疫苗系統(tǒng)，其中該骨橋蛋白和/或 其活性截短物是用于在對(duì)該哺乳動(dòng)物進(jìn)行疫苗接種之前、同時(shí)、或之后、或其組合進(jìn)行口服 給予的。13. 用于根據(jù)權(quán)利要求9至12中任一項(xiàng)所述使用的疫苗系統(tǒng)，其中該哺乳動(dòng)物是人。14. 用于根據(jù)權(quán)利要求9至13中任一項(xiàng)所述使用的疫苗系統(tǒng)，其中該感染性疾病是選 自以下各項(xiàng)之中：流感；白喉、破傷風(fēng)、百日咳、脊髓灰質(zhì)炎、麻疹、腮腺炎和風(fēng)疹、結(jié)核病、 乙型肝炎、丙型腦膜炎；輪狀病毒、人乳頭瘤病毒；甲型流感、乙型流感、肺炎球菌感染以及 帶狀皰疹。15. 用于根據(jù)權(quán)利要求9至14中任一項(xiàng)所述使用的疫苗系統(tǒng)，其中該人屬于一個(gè)年 齡組，該年齡組選自以下各項(xiàng)之中：〇 - 5歲、6 - 11歲、12 - 18歲、19 - 34歲、35 - 44歲、 45 - 54歲、55 - 64歲、65 - 74歲、75 - 84歲、以及大于84歲。
【專利摘要】所披露的發(fā)明提供了哺乳動(dòng)物乳骨橋蛋白和/或其活性截短物或活性肽，用于在哺乳動(dòng)物例如人受試者中提高對(duì)感染性疾病的免疫應(yīng)答，以及在哺乳動(dòng)物諸如人中增強(qiáng)用于預(yù)防性或治療性治療感染性疾病的疫苗接種的功效。本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種用于在哺乳動(dòng)物中預(yù)防性或治療性治療感染性疾病的疫苗系統(tǒng)，該疫苗系統(tǒng)包含用于向哺乳動(dòng)物口服給予的一種疫苗和一種哺乳動(dòng)物乳骨橋蛋白和/或其活性截短物或活性肽，以及通過(guò)給予一種疫苗和一種哺乳動(dòng)物乳骨橋蛋白和/或其活性截短物來(lái)在哺乳動(dòng)物中增強(qiáng)對(duì)感染性疾病的免疫抵抗力的方法。
【IPC分類】A61P37/02, A61K38/17
【公開號(hào)】CN105407910
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201480038124
【發(fā)明人】安妮·施陶特·科維斯特加德, 彼得·朗堡·魏謝, 莎倫·多諾萬(wàn), 瑪西亞·H·毛納科·西格爾, 莎拉·S·康斯托克
【申請(qǐng)人】阿拉食品公司
【公開日】2016年3月16日
【申請(qǐng)日】2014年7月4日
【公告號(hào)】CA2916821A1, EP3016673A1, US20160136268, WO2015001092A1