特異性免疫應(yīng)答，并且從而提高它們對(duì)疫苗接種的特異性免疫 應(yīng)答。本發(fā)明是基于證明口服給予0ΡΝ能夠用來通過疫苗接種增強(qiáng)在哺乳動(dòng)物受試者中誘 導(dǎo)的特異性免疫應(yīng)答的第一研究。
[0033] 本發(fā)明提供了用作用于在哺乳動(dòng)物中增強(qiáng)對(duì)感染性疾病的免疫抵抗力的藥劑的 哺乳動(dòng)物乳0ΡΝ和/或其活性截短物，例如通過增強(qiáng)由對(duì)抗該疾病的疫苗接種誘導(dǎo)的免疫 抵抗力，其中該0ΡΝ和/或其活性截短物是用于口服給予。根據(jù)一個(gè)實(shí)施例，該活性截短的 0ΡΝ包含通過蛋白水解裂解可來源于哺乳動(dòng)物乳0ΡΝ的至少一種活性0ΡΝ肽。該0ΡΝ或其 活性截短物可以用于在對(duì)該哺乳動(dòng)物進(jìn)行疫苗接種之前、同時(shí)、或之后、或其組合進(jìn)行口服 給予。
[0034] 該哺乳動(dòng)物乳0ΡΝ和/或其活性截短物能夠在該哺乳動(dòng)物中加強(qiáng)體液免疫。
[0035] 該哺乳動(dòng)物乳0ΡΝ和/或其活性截短物可以來源于以下各項(xiàng)中的任何一種：牛、山 羊、綿羊、駱駝、水牛、單峰駱駝、美洲駝以及其任何組合。
[0036] 根據(jù)一個(gè)實(shí)施例，該哺乳動(dòng)物乳0ΡΝ和/或其活性截短物是用于在哺乳動(dòng)物中 增強(qiáng)對(duì)感染性疾病的免疫抵抗力，其中該哺乳動(dòng)物是人。根據(jù)一個(gè)實(shí)施例，該人屬于一個(gè) 年齡組，該年齡組選自以下各項(xiàng)之中：〇 - 5歲、6 - 11歲、12 - 18歲、19 - 34歲、35 - 44歲、 45 - 54歲、55 - 64歲、65 - 74歲、75 - 84歲、以及大于84歲。
[0037] 根據(jù)一個(gè)實(shí)施例，該感染性疾病是選自以下各項(xiàng)之中：流感；白喉、破傷風(fēng)、百日 咳、脊髓灰質(zhì)炎、麻疹、腮腺炎和風(fēng)疹、結(jié)核病、乙型肝炎、丙型腦膜炎；人乳頭瘤病毒；輪狀 病毒；甲型流感、乙型流感、肺炎球菌感染和帶狀皰疹。
[0038] 本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種疫苗系統(tǒng)，該疫苗系統(tǒng)包含用于在哺乳動(dòng)物中預(yù)防性或 治療性治療感染性疾病的一種疫苗和一種哺乳動(dòng)物乳0ΡΝ和/或其活性截短物，其中該哺 乳動(dòng)物乳0ΡΝ和/或活性截短物是用于例如在對(duì)該哺乳動(dòng)物進(jìn)行疫苗接種之前、同時(shí)、或之 后、或其組合進(jìn)行口服給予。口服給予該哺乳動(dòng)物乳0ΡΝ和/或活性截短物可在哺乳動(dòng)物 中增強(qiáng)由疫苗接種誘導(dǎo)的對(duì)感染性疾病的免疫抵抗力。該哺乳動(dòng)物乳骨橋蛋白和/或活性 截短物能夠在接種疫苗的哺乳動(dòng)物中加強(qiáng)體液免疫。
[0039] 根據(jù)一個(gè)實(shí)施例，該疫苗系統(tǒng)包含來源于以下各項(xiàng)的0ΡΝ和/或其活性截短物： 牛、山羊、綿羊、駱駝、水牛、單峰駱駝、美洲駝、或其任何組合。
[0040] 根據(jù)該疫苗系統(tǒng)的一個(gè)實(shí)施例，該哺乳動(dòng)物是人。
[0041] 根據(jù)該疫苗系統(tǒng)的一個(gè)實(shí)施例，該感染性疾病是選自以下各項(xiàng)之中：流感、白喉、 破傷風(fēng)、百日咳、脊髓灰質(zhì)炎、麻疹、腮腺炎和風(fēng)疹、結(jié)核病、乙型肝炎、丙型腦膜炎、輪狀病 毒、人乳頭瘤病毒、甲型流感、乙型流感、肺炎球菌感染以及帶狀皰疹。
[0042] 根據(jù)該疫苗系統(tǒng)的一個(gè)實(shí)施例，該疫苗是選自以下各項(xiàng)之中：白喉疫苗、破傷風(fēng)疫 苗、百日咳疫苗、脊髓灰質(zhì)炎疫苗、或組合的疫苗（例如TaP/IPV疫苗）；組合的麻疹、腮腺 炎和風(fēng)疹疫苗（例如MMR疫苗）；結(jié)核病疫苗（例如BCG疫苗）；乙型肝炎疫苗；丙型腦膜 炎疫苗；輪狀病毒（輪狀病毒疫苗）；人乳頭瘤病毒（HPV)疫苗；甲型流感和乙型流感疫苗 (例如流感疫苗）；肺炎球菌疫苗；以及帶狀皰疹疫苗。
[0043] 根據(jù)該疫苗系統(tǒng)的一個(gè)實(shí)施例，該人屬于一個(gè)年齡組，該年齡組選自以下各項(xiàng)之 中：0-5 歲、6- 11 歲、12- 18 歲、19-34 歲、35 - 44 歲、45 - 54 歲、55 - 64 歲、65 - 74 歲、 75 - 84歲、以及大于84歲。
[0044] 本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種在哺乳動(dòng)物中增強(qiáng)對(duì)感染性疾病的免疫抵抗力的方法， 該方法包括向該哺乳動(dòng)物給予一種疫苗和哺乳動(dòng)物乳0ΡΝ和/或其一種或多種活性截短 物，其中該0ΡΝ和/或其活性截短物被口服給予。該哺乳動(dòng)物乳0ΡΝ和/或活性截短物能 夠在接種疫苗的哺乳動(dòng)物中加強(qiáng)體液免疫。
[0045] 根據(jù)在哺乳動(dòng)物中增強(qiáng)對(duì)感染性疾病的免疫抵抗力的該方法的一個(gè)實(shí)施例，該哺 乳動(dòng)物是人。
[0046] 根據(jù)該方法的一個(gè)實(shí)施例，該0ΡΝ或其活性截短物在對(duì)該哺乳動(dòng)物進(jìn)行疫苗接種 之前、同時(shí)、或之后、或其組合進(jìn)行給予。
[0047] 根據(jù)該方法的一個(gè)實(shí)施例中，該0ΡΝ或其活性截短物以在約0. 05mg/kg所治療的 受試者體重至約5g/kg所治療的受試者體重的范圍內(nèi)的每日劑量來給予。
[0048] 根據(jù)在人中增強(qiáng)對(duì)感染性疾病的免疫抵抗力的該方法的一個(gè)實(shí)施例，該人屬于一 個(gè)年齡組，該年齡組選自以下各項(xiàng)之中：〇 - 5歲、6 - 11歲、12 - 18歲、19 - 34歲、35 -44 歲、45 - 54歲、55 - 64歲、65 - 74歲、75 - 84歲、以及大于84歲。
[0049] 根據(jù)該方法的一個(gè)實(shí)施例，該0ΡΝ或其活性截短物具有哺乳動(dòng)物來源，選自牛、山 羊、綿羊、駱駝、水牛、單峰駱駝、美洲駝、以及其任何組合。
[0050] 根據(jù)該方法的一個(gè)實(shí)施例，該感染性疾病是選自以下各項(xiàng)之中：流感、白喉、破傷 風(fēng)、百日咳、脊髓灰質(zhì)炎、麻疹、腮腺炎和風(fēng)疹、結(jié)核病、乙型肝炎、丙型腦膜炎、輪狀病毒、人 乳頭瘤病毒；甲型流感、乙型流感、肺炎球菌感染以及帶狀皰疹。
[0051] 根據(jù)該方法的一個(gè)實(shí)施例，該疫苗是選自以下各項(xiàng)之中：白喉疫苗、破傷風(fēng)疫苗、 百日咳疫苗、脊髓灰質(zhì)炎疫苗、或組合的疫苗（例如TaP/IPV疫苗）；組合的麻疹、腮腺炎和 風(fēng)疹疫苗（例如MMR疫苗）；結(jié)核病疫苗（例如BCG疫苗）；乙型肝炎疫苗；丙型腦膜炎疫 苗；輪狀病毒（輪狀病毒疫苗）；人乳頭瘤病毒（HPV)疫苗；甲型流感和乙型流感疫苗（例 如流感疫苗）；肺炎球菌疫苗；以及帶狀皰疹疫苗。
[0052] 發(fā)明詳細(xì)說明
[0053] 本發(fā)明解決了對(duì)在哺乳動(dòng)物受試者，具體地配方喂養(yǎng)的嬰幼兒；具有下降的免疫 能力的成年人（例如免疫受損受試者）；以及老年人中增強(qiáng)免疫應(yīng)答的需要。發(fā)明人已經(jīng) 發(fā)現(xiàn)，當(dāng)向受試者口服給予時(shí)哺乳動(dòng)物乳0ΡΝ和/或其活性截短物可在該哺乳動(dòng)物中增強(qiáng) 免疫應(yīng)答，從而提高對(duì)該哺乳動(dòng)物進(jìn)行疫苗接種的功效。
[0054] I哺乳動(dòng)物乳骨橋蛋白（0ΡΝ)和/或其活性截短物
[0055] I.i哺乳動(dòng)物乳0ΡΝ的結(jié)構(gòu)
[0056] 根據(jù)一個(gè)第一實(shí)施例，本發(fā)明提供了用于增強(qiáng)對(duì)感染性疾病的免疫應(yīng)答，并且具 體地在哺乳動(dòng)物中增強(qiáng)對(duì)感染性疾病的疫苗誘導(dǎo)的免疫抵抗力的哺乳動(dòng)物乳0ΡΝ和/或其 活性截短物。
[0057] 哺乳動(dòng)物乳0ΡΝ是通過從乳腺中分泌所產(chǎn)生的可溶性乳蛋白質(zhì)。雖然哺乳動(dòng)物乳 0ΡΝ作為具有大約60kDa分子量（如通過SDS-PAGE所確定）的多肽被分泌，但通常發(fā)現(xiàn)它 與0ΡΝ的截短形式一起共存于乳中。與在其他組織中表達(dá)的可變（轉(zhuǎn)錄）剪接0ΡΝ同工型 相反，哺乳動(dòng)物乳0ΡΝ僅以一種剪接同工型存在；而乳0ΡΝ的截短形式是這種分泌性多肽同 工型的蛋白水解裂解的結(jié)果。乳0ΡΝ(全長多肽和其截短形式兩者）是高度磷酸化和糖基 化的多肽。已知0ΡΝ的磷酸化和糖基化的翻譯后模式是組織特異性的并且可調(diào)節(jié)它的生理 特性。乳0ΡΝ多肽同工型的磷酸化和糖基化的高水平和模式是對(duì)于它的功能特性重要的特 定（比松內(nèi)特等人2012)。
[0058] 根據(jù)本發(fā)明的該乳0ΡΝ具有哺乳動(dòng)物來源，并且可以例如來源于牛、山羊、綿羊、 駱駝、水牛、單峰駱駝或美洲駝乳。乳0ΡΝ多肽包含多個(gè)其特征在于α-整聯(lián)蛋白結(jié)合特性 的高度保守序列基序，具體地RGD基序。在哺乳動(dòng)物乳0ΡΝ多肽之中保守的這些基序的位 置是關(guān)于牛0ΡΝ來鑒定的，牛0ΡΝ的主要翻譯產(chǎn)物氨基酸序列在表1中列出。
[0059]
[0060]
[0061] 當(dāng)該哺乳動(dòng)物乳0ΡΝ來源于牛乳時(shí)，該0ΡΝ典型地包含除了成熟的全長0ΡΝ多肽 以外的至少一種活性截短的0ΡΝ多肽。典型地，該一種或多種活性截短的0ΡΝ多肽具有大約 40kDa的分子量（如通過SDS-PAGE所確定）。典型地，該一種或多種活性截短的0ΡΝ多肽 來源于通過在作為RGD基序的C末端的位置處體內(nèi)肽鍵裂解所得到的全長0ΡΝ多肽。典型 地，該至少一種或多種活性截短的牛乳0ΡΝ來源于全長成熟的0ΡΝ多肽，其中該成熟的0ΡΝ 具有與SEQIDNO: 1的殘基17 - 278具有確定的序列一致性的氨基酸序列。牛乳0ΡΝ是具 有信號(hào)肽（相應(yīng)于SEQIDNO: 1的氨基酸殘基1-16)的分泌性多肽，該信號(hào)肽被共翻譯去 除以得到成熟的全長多肽。當(dāng)該牛乳0ΡΝ包含全長0ΡΝ多肽時(shí)，它典型地具有SEQIDN0:1 的殘基17 - 278的氨基酸序列。一種活性截短的牛乳0ΡΝ被預(yù)測通過處于或接近凝血酶裂 解位點(diǎn)（表1)處的肽裂解而來源于牛0ΡΝ多肽（SEQIDNO: 1)，從而得到保留RGD基序的 具有大約40kDa分子量（如通過SDS-PAGE所確定）的C末端截短的0ΡΝ多肽。
[0062] 根據(jù)一個(gè)實(shí)施例，該哺乳動(dòng)物乳0ΡΝ包含與SEQIDN0:1具有至少66%、68%、 70%、72%、74%、76%、78%、80%、82%、84%、88%、90%、92%、94%、96%、98%、100%氨 基酸序列一致性的成熟全長0ΡΝ多肽；和/或與一種多肽具有至少66%、68%、70%、72%、 74%、76%、78%、80%、82%、84%、88%、90%、92%、94%、96%、98%、100%氨基酸序列一 致性的一種或多種活性截短的0ΡΝ多肽，該多肽具有選自以下各項(xiàng)中的任何一種之中的序 列：SEQIDNO: 1的氨基酸殘基17-161 ;氨基酸殘基17-162 ;氨基酸殘基17-163 ;氨基酸殘 基17-164和氨基酸殘基17-165。
[0063] 在本發(fā)明的上下文中，術(shù)語"序列一致性"涉及兩個(gè)氨基酸序列之間或兩個(gè)核酸 序列之間（優(yōu)選地具有相等長度）的一致性程度的定量度量。如果有待比較的兩個(gè)序 列不具有相等長度，必須將它們比對(duì)以盡可能最好地配合。該序列一致性可以被計(jì)算為 (Nref-Ndif)*100)/(Nref)，其中Ndif是當(dāng)比對(duì)時(shí)在兩個(gè)序列中不一致的殘基的總數(shù)，并 且其中Nref是參照序列的殘基數(shù)。因此，DNA序列AGTCAGTC將與序列AATCAATC具有75% 的序列一致性（Ndif= 2并且Nref= 8)?？瘴槐凰阕魈囟ǖ囊粋€(gè)（多個(gè)）殘基的不一致 性，S卩DNA序列AGTGTC將與DNA序列AGTCAGTC具有75%的序列一致性（Ndif=2并且 Nref= 8)?？梢岳缡褂眠m當(dāng)?shù)腂LAST程序，諸如由美國國家生物技術(shù)信息中心（NCBI) 提供的BLASTp算法來計(jì)算序列一致性。
[0064]該哺乳動(dòng)物乳0ΡΝ可以包含活性截短的0ΡΝ多肽（tOPN)或全長0ΡΝ多肽（f10PN)、 或可以不同比率存在的這兩種形式。例如，tOPN/flOPN的比率可以在從0:100至100:0 之間的范圍內(nèi)；更優(yōu)選地，該比率是以下各項(xiàng)中的任何一種：5:95 ;10:90 ;15:85 ;20:80 ; 25:75 ；30:70 ；35:65 ；40:60 ；45:55 ；50:50 ；55:45 ；60:40 ；65:35 ；70:30 ；75:35 ；80:20 ； 85:15 ;90:10 ;以及95:5。典型地，牛乳中的該比率是75%tOP比25%flOPN，其中該tOPN 具有大約40kDa的分子量（如通過SDS-PAGE所確定）。
[0065] 根據(jù)一個(gè)另外的實(shí)施例，該哺乳動(dòng)物乳0ΡΝ是一種截短的0ΡΝ，其中該截短的0ΡΝ 包含通過蛋白水解裂解可來源于哺乳動(dòng)物乳0ΡΝ(例如具有SEQIDNo. 1的牛乳0ΡΝ)的至 少一種活性0ΡΝ肽。在穿過哺乳動(dòng)物受試者的消化道過程中，哺乳動(dòng)物0ΡΝ被暴露于蛋白 水解酶中，具體地內(nèi)切蛋白酶胃蛋白酶、胰朊胸以及糜蛋白酶。根據(jù)本發(fā)明的活性0ΡΝ肽是 在暴露于典型地存在于哺乳動(dòng)物消化道中的蛋白酶之后保留活性的肽?；钚?ΡΝ肽可以典 型地包括包含整聯(lián)蛋白結(jié)合基序的部分或全部，典型地具有從5至16個(gè)氨基酸殘基的長度