200g吐溫-80完全 溶解于14mL無水乙醇中，在45°C水浴條件下真空旋轉(zhuǎn)除去乙醇，形成均勻薄膜。加入50mL pH 6. 5濃度為0.05M的磷酸鹽緩沖溶液（PBS)洗膜，形成的均勻懸濁液即為粗脂質(zhì)體。將 粗脂質(zhì)體加入到DHPM中，于120MPa條件下微流化處理2次，即制備得到姜黃素納米脂質(zhì) 體。
[0036] (3)稱取0. 030g步驟（1)所得葉酸-殼聚糖復(fù)合物溶于6mLl %的冰醋酸溶液中， 200r/min持續(xù)攪拌至溶液清澈透明，得到葉酸-殼聚糖復(fù)合物溶液。取36mL步驟（2)所 得姜黃素納米脂質(zhì)體緩慢滴加至6mL葉酸-殼聚糖復(fù)合物溶液中，300r/min持續(xù)攪拌反應(yīng) 2h，得到葉酸-殼聚糖修飾姜黃素納米脂質(zhì)體。制得的葉酸-殼聚糖修飾姜黃素納米脂質(zhì) 體為透明黃色溶液，載藥量為35. 9mg/g磷脂，平均粒徑為103. lnm，zeta電位為16. 27mv， 分散系數(shù)為0. 383 ;葉酸-殼聚糖修飾姜黃素納米脂質(zhì)體在pH 7. 4環(huán)境下24h姜黃素釋放 量為18. 3%，在pH 5. 5環(huán)境下24h姜黃素釋放量為26.9% ;25°C儲(chǔ)存一個(gè)月，葉酸-殼聚 糖修飾姜黃素納米脂質(zhì)體的粒徑、表面點(diǎn)位以及姜黃素含量無顯著變化。
[0037] 實(shí)施例3
[0038] (1)稱取0.653g N-羥基琥珀酰亞胺、0.863g 1-(3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳乙 二胺鹽酸鹽和1. 324g葉酸，完全溶于溶于10mL二甲基亞砜中，放置活化4h。稱取0. 73g殼 聚糖加入30mL 0. 3%的冰醋酸溶液中，200以11^11持續(xù)攪拌至完全溶解。將殼聚糖溶液緩慢 加入活化的葉酸溶液中，同時(shí)以200r/min持續(xù)攪拌反應(yīng)16h。用0. 1M氫氧化鈉溶液將所 得反應(yīng)產(chǎn)物調(diào)至pH 9. 0,并轉(zhuǎn)移至3. 5KDa的透析袋中，于pH 7. 4的磷酸鹽緩沖溶液（PBS) 中透析2天，再于蒸餾水中透析2天，除去雜質(zhì)。將透析后所得樣品冷凍干燥，得到黃色海 綿狀葉酸-殼聚糖復(fù)合物。
[0039] (2)稱取0· 030g姜黃素、0· 840g大豆磷脂、0· 132g膽固醇、0· 240g吐溫-80完全 溶解于18mL無水乙醇中，在45°C水浴條件下真空旋轉(zhuǎn)除去乙醇，形成均勻薄膜。加入60mL pH 6. 5濃度為0.05M的磷酸鹽緩沖溶液（PBS)洗膜，形成的均勻懸濁液即為粗脂質(zhì)體。將 粗脂質(zhì)體加入到DHPM中，于120MPa條件下微流化處理2次，即制備得到姜黃素納米脂質(zhì) 體。
[0040] (3)稱取0. 035g步驟（1)所得葉酸-殼聚糖復(fù)合物溶于7mLl %的冰醋酸溶液中， 200r/min持續(xù)攪拌至溶液清澈透明，得到葉酸-殼聚糖復(fù)合物溶液。取42mL步驟（2)所 得姜黃素納米脂質(zhì)體緩慢滴加至7mL葉酸-殼聚糖復(fù)合物溶液中，300r/min持續(xù)攪拌反應(yīng) 2h，得到葉酸-殼聚糖修飾姜黃素納米脂質(zhì)體。制得的葉酸-殼聚糖修飾姜黃素納米脂質(zhì) 體為透明黃色溶液，載藥量為35. 6mg/g磷脂，平均粒徑為101. 7nm，zeta電位為16. 27mv， 分散系數(shù)為〇. 401 ;葉酸-殼聚糖修飾姜黃素納米脂質(zhì)體在pH 7. 4環(huán)境下24h姜黃素釋放 量為17. 9%，在pH 5. 5環(huán)境下24h姜黃素釋放量為27.8% ;25°C儲(chǔ)存一個(gè)月，葉酸-殼聚 糖修飾姜黃素納米脂質(zhì)體的粒徑、表面點(diǎn)位以及姜黃素含量無顯著變化。
[0041] 實(shí)施例4
[0042] (1)稱取1.036g N-羥基琥珀酰亞胺、1.725g 1-(3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳乙 二胺鹽酸鹽和2. 648g葉酸，完全溶于溶于10mL二甲基亞砜中，放置活化4h。稱取1. 46g殼 聚糖加入15mL 0. 3%的冰醋酸溶液中，200以11^11持續(xù)攪拌至完全溶解。將殼聚糖溶液緩慢 加入活化的葉酸溶液中，同時(shí)以200r/min持續(xù)攪拌反應(yīng)16h。用0. 1M氫氧化鈉溶液將所 得反應(yīng)產(chǎn)物調(diào)至pH 9. 0,并轉(zhuǎn)移至3. 5KDa的透析袋中，于pH 7. 4的磷酸鹽緩沖溶液（PBS) 中透析2天，再于蒸餾水中透析2天，除去雜質(zhì)。將透析后所得樣品冷凍干燥，得到黃色海 綿狀葉酸-殼聚糖復(fù)合物。
[0043] (2)稱取0· 030g姜黃素、0· 840g大豆磷脂、0· 132g膽固醇、0· 240g吐溫-80完全 溶解于18mL無水乙醇中，在45°C水浴條件下真空旋轉(zhuǎn)除去乙醇，形成均勻薄膜。加入60mL pH 6. 5濃度為0.05M的磷酸鹽緩沖溶液（PBS)洗膜，形成的均勻懸濁液即為粗脂質(zhì)體。將 粗脂質(zhì)體加入到DHPM中，于120MPa條件下微流化處理2次，即制備得到姜黃素納米脂質(zhì) 體。
[0044] (3)稱取0. 035g步驟（1)所得葉酸-殼聚糖復(fù)合物溶于7mLl %的冰醋酸溶液中， 200r/min持續(xù)攪拌至溶液清澈透明，得到葉酸-殼聚糖復(fù)合物溶液。取42mL步驟（2)所 得姜黃素納米脂質(zhì)體緩慢滴加至7mL葉酸-殼聚糖復(fù)合物溶液中，300r/min持續(xù)攪拌反應(yīng) 2h，得到葉酸-殼聚糖修飾姜黃素納米脂質(zhì)體。制得的葉酸-殼聚糖修飾姜黃素納米脂質(zhì) 體為透明黃色溶液，載藥量為35. 8mg/g磷脂，平均粒徑為99. 3nm，zeta電位為16. 81mv，分 散系數(shù)為0. 392 ;葉酸-殼聚糖修飾姜黃素納米脂質(zhì)體在pH 7. 4環(huán)境下24h姜黃素釋放量 為16. 2%，在pH 5. 5環(huán)境下24h姜黃素釋放量為28.6% ;25°C儲(chǔ)存一個(gè)月，葉酸-殼聚糖 修飾姜黃素納米脂質(zhì)體的粒徑、表面點(diǎn)位以及姜黃素含量無顯著變化。
[0045] 表1葉酸-殼聚糖修飾姜黃素納米脂質(zhì)體（FA-CS-NLs-Cur)的儲(chǔ)存穩(wěn)定性
[0047] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果上方標(biāo)有不同字母者（P < 0. 05)表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；標(biāo)有相同小寫 字母者（P > 0. 05)表示差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種葉酸-殼聚糖修飾姜黃素納米脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于： (一） 葉酸-殼聚糖復(fù)合物的合成 (1)所用催化劑和各原料及其摩爾比為：N-羥基琥珀酰亞胺/1-(3-二甲氨基丙 基）-3-乙基碳乙二胺鹽酸鹽/葉酸/殼聚糖中氨基量=6:9:9:10,按上述摩爾比分別稱取 N-羥基琥珀酰亞胺、1-(3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳乙二胺鹽酸鹽和葉酸，將0. 150g/mL 濃度的葉酸溶于二甲基亞砜中，活化4h; (2 )將濃度為0. 025g/mL的殼聚糖加入0. 3%的冰醋酸溶液中，200r/min持續(xù)攪拌至 溶液清澈透明； (3 )將步驟（1)所得到的葉酸溶液緩慢加入到步驟（2 )所得到的殼聚糖溶液中，同時(shí)以 200r/min持續(xù)攪拌反應(yīng)16h; (4) 用0. 1Μ氫氧化鈉溶液將步驟（3)所得反應(yīng)產(chǎn)物調(diào)至pH9. 0,并轉(zhuǎn)移至3. 5KDa的 透析袋中，于pH7. 4的磷酸鹽緩沖溶液即PBS中透析2天，再于蒸餾水中透析2天； (5) 將步驟（4)所得溶液冷凍干燥，得到黃色海綿狀葉酸-殼聚糖復(fù)合物； 全部操作均在避光環(huán)境下進(jìn)行； (二） 薄膜分散一動(dòng)態(tài)高壓微射流法制備姜黃素納米脂質(zhì)體 (1) 脂質(zhì)體原材料各組分及其重量百分比為：姜黃素〇. 05% - 0. 2%，大豆磷脂1. 4% - 5. 6%，膽固醇0.22% - 0.88%，吐溫-80 0.4% - 1.6%，其余的是pH6. 5濃度為0.05Μ的磷 酸鹽緩沖溶液即PBS，為91. 7% - 97. 9%;按上述重量百分比分別稱取姜黃素、大豆磷脂、膽 固醇和吐溫-80,在45 °C水浴條件下，按1g大豆磷脂溶于15mL無水乙醇，使得各組分完 全溶解； (2) 將步驟（1)所得溶液于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓除去無水乙醇，形成均勻薄膜； (3) 加入pH6. 5濃度為0. 05Μ的磷酸鹽緩沖溶液（PBS)洗膜，形成黃色粗脂質(zhì)體懸濁 液； (4) 用高壓微射流均質(zhì)機(jī)處理步驟（3)得到的脂質(zhì)體懸濁液，壓力為120MPa，處理次 數(shù)為2次，得到黃色透亮的姜黃素納米脂質(zhì)體溶液； (三） 葉酸-殼聚糖修飾姜黃素納米脂質(zhì)體的制備 (1) 葉酸-殼聚糖復(fù)合物與磷脂的重量比為1:16. 8 ;將步驟(一）得到的葉酸-殼聚糖 復(fù)合物按5mg/mL溶于1%的冰醋酸溶液中，200r/min持續(xù)攪拌至溶液清澈透明； (2) 按上述質(zhì)量比將步驟（1)所得溶液緩慢加入到步驟(二）所得姜黃素納米脂質(zhì)體溶 液中，300r/min持續(xù)攪拌反應(yīng)2h，得到葉酸-殼聚糖修飾姜黃素納米脂質(zhì)體。
【專利摘要】一種葉酸-殼聚糖修飾姜黃素納米脂質(zhì)體的制備方法，采用納米脂質(zhì)體包埋姜黃素，并將葉酸-殼聚糖復(fù)合物修飾在脂質(zhì)體表面，得到葉酸-殼聚糖修飾姜黃素納米脂質(zhì)體。本發(fā)明制備的葉酸-殼聚糖修飾姜黃素納米脂質(zhì)體平均粒徑為103.6±4.1nm，zeta電位為16.35±3.54mv，分散系數(shù)為0.378±0.01，載藥量達(dá)到了35.7mg/g磷脂，在25℃儲(chǔ)存穩(wěn)定性良好。它還表現(xiàn)出良好的緩釋性，且在弱酸性環(huán)境中釋放速率較弱堿性更快。24h后，在pH7.4和pH5.5的環(huán)境下分別僅有17.4%和27.7%的姜黃素釋放出來。
【IPC分類】A61K9/127, A61K47/12, A23L33/10, A61K47/36, A61K31/12
【公開號(hào)】CN105287382
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510671604
【發(fā)明人】劉偉, 陳興, 鄒立強(qiáng), 彭盛峰
【申請(qǐng)人】南昌大學(xué)
【公開日】2016年2月3日
【申請(qǐng)日】2015年12月10日