專利名稱：冰片-姜黃素脂質(zhì)體及其制備方法與應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及一種抗Hiv-I相關(guān)神經(jīng)認(rèn)知障礙的藥物，特別涉及一種冰片-姜黃素脂質(zhì)體及其制備方法與其在制備抗HIV-I相關(guān)神經(jīng)認(rèn)知障礙藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
世界衛(wèi)生組織(WHO)認(rèn)為HIV (human immunodeficiency virus)疾病是目前對公眾健康最大的威脅。目前全球艾滋病感染人數(shù)約6000萬，2500萬人死于艾滋病相關(guān)疾病。依據(jù)衛(wèi)生部和聯(lián)合國艾滋病規(guī)劃署、WHO評價(jià)結(jié)果，截至2011年底，我國現(xiàn)存活感染者和病人約78萬人，其中病人約15. 4萬人，死亡約8萬人。在由HIV-I引起的全球艾滋病中，由于進(jìn)行性病毒感染的存在，約有40 60%的HIV患者發(fā)展為HIV相關(guān)神經(jīng)認(rèn)知障礙·(HIV-associated neurocognitive disorder, HAND),即認(rèn)知、運(yùn)動或行為損傷。HAND 中認(rèn)知功能障礙的相關(guān)病理特征是單核巨噬細(xì)胞的浸潤、多核巨細(xì)胞的形成、星形神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞及小神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的結(jié)節(jié)的形成、髓磷脂脫失、血腦屏障(BBB)的破壞和神經(jīng)功能缺失。神經(jīng)損傷與樹突分枝改變及核周體體積減小同時(shí)發(fā)生。這些損傷有些是可逆的。HIV-I感染早期，HIV-I就進(jìn)入大腦，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)中長期存在。所以，SP使治療控制了其它部位的HIV-I復(fù)制，病毒仍然可以在腦中繼續(xù)復(fù)制。隨著高效抗逆轉(zhuǎn)錄病毒藥物的應(yīng)用，艾滋病患者的壽命逐年延長，但由于一些抗逆轉(zhuǎn)錄病毒的藥物無法有效地通過血腦屏障進(jìn)入腦實(shí)質(zhì)，所以盡管病人用藥后可以活得更久一點(diǎn)，但他們面臨著隨后患HAND的危險(xiǎn)，且HAND是引起AIDS患者死亡的主要原因之一。于是HAND致患者生存質(zhì)量減低、死亡率升高等問題凸顯出來。如何防治HAND的發(fā)生發(fā)展已成為醫(yī)學(xué)研究的重大課題。目前，HAND患者在全球范圍內(nèi)日益增加，但是臨床并沒有有效的藥物用于治療HAND，研究指出如果HAND患者不經(jīng)任何藥物治療，將會在4個(gè)月內(nèi)死亡。臨床治療艾滋病的藥物自1987年第I個(gè)抗HIV藥物疊氮胸苷(AZT)用于治療艾滋病以來，美國食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)批準(zhǔn)上市的抗艾滋病藥物和劑型已有28種，但多為針對HIV的復(fù)制為靶點(diǎn)，對隱匿在中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)的HIV效果甚微，同時(shí)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的損傷多以HIV引起的免疫損傷為主，故目前所用的高效抗逆轉(zhuǎn)錄酶藥物(HARRT)對艾滋癡呆的防治幾乎無任何益處。且西藥作用較為單一，毒副反應(yīng)大，價(jià)格昂貴，限制了該類藥物的普及。目前，國內(nèi)外學(xué)者并沒有找到一種效果明顯且毒副作用小的抗艾滋病相關(guān)認(rèn)知障礙藥物。專利號為ZL 200710027098. X的專利業(yè)已報(bào)道中藥單體姜黃素(curcumin)在治療艾滋癡呆上的積極作用，姜黃素具有明確改善HIV-I糖蛋白gpl20所致大鼠學(xué)習(xí)記憶障礙的能力，且無任何毒副作用。但姜黃素水溶性差，體外容易被氧化，難以穿過血腦屏障進(jìn)入腦實(shí)質(zhì)，口服給藥的姜黃素大部分在腸胃道被代謝，因此給姜黃素在防治HAND的臨床應(yīng)用帶來一定難度。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的首要目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)與不足，提供一種冰片-姜黃素脂質(zhì)體。本發(fā)明的另一目的在于提供上述冰片-姜黃素脂質(zhì)體的制備方法。本發(fā)明的再一目的在于提供上述冰片-姜黃素脂質(zhì)體的應(yīng)用。本發(fā)明的目的通過下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)一種冰片-姜黃素脂質(zhì)體，包括如下按質(zhì)量份數(shù)計(jì)的組分卵磷脂270 330份、膽固醇90 110份、姜黃素O. 9 I. I份和冰片
O.09 O. 11 份。 優(yōu)選的，所述的冰片-姜黃素脂質(zhì)體包括如下按質(zhì)量份數(shù)計(jì)的組分卵磷脂300份、膽固醇100份、姜黃素I份和冰片O. I份。優(yōu)選的，所述的冰片-姜黃素脂質(zhì)體還包括O 11質(zhì)量份氧化保護(hù)劑，更優(yōu)選的，氧化保護(hù)劑的量為10質(zhì)量份；所述的氧化保護(hù)劑優(yōu)選為維生素E。上述冰片-姜黃素脂質(zhì)體的制備方法，包括如下步驟(I)取270 330質(zhì)量份卵磷脂、90 110質(zhì)量份膽固醇、O. 9 I. I質(zhì)量份姜黃素、O. 09 O. 11質(zhì)量份冰片和O 11質(zhì)量份氧化保護(hù)劑用無水乙醇溶解，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上旋蒸至無水乙醇完全揮發(fā)后形成均勻薄膜。(2)按每3g卵磷脂加5mL PBS (磷酸鹽緩沖液)的比例加PBS至步驟(I)所形成的薄膜中，孵育3h以上，再通過水合反應(yīng)使薄膜和PBS形成乳狀液。(3)將步驟(2)所得的乳狀液超聲處理后，再通過0.45 μ m微孔濾膜整粒即得到冰片-姜黃素脂質(zhì)體。步驟(I)中所述的氧化保護(hù)劑的量優(yōu)選為9 11質(zhì)量份；所述的氧化保護(hù)劑優(yōu)選為維生素E。步驟(I)中所述的旋蒸優(yōu)選為35°C水浴條件下進(jìn)行。步驟(2)中所述的PBS 優(yōu)選為 pH 7. 0、0· 03mol/L 的 PBS。步驟(2)中所述的孵育優(yōu)選為35°C下進(jìn)行。步驟(2)中所述的水合反應(yīng)優(yōu)選為35°C水浴條件下在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上旋轉(zhuǎn)進(jìn)行。步驟(3)中所述的超聲處理優(yōu)選為80KHz超聲處理lOmin。上述冰片-姜黃素脂質(zhì)體在制備抗HIV相關(guān)神經(jīng)認(rèn)知障礙藥物中的應(yīng)用，冰片-姜黃素脂質(zhì)體是一種新型的抗HIV相關(guān)神經(jīng)認(rèn)知障礙的藥物，其可制備成適合口服的任何劑型，如片劑、膠囊劑、沖劑、口服液、咀嚼片等。本發(fā)明相對于現(xiàn)有技術(shù)具有如下的優(yōu)點(diǎn)及效果(I)本發(fā)明提供的冰片-姜黃素脂質(zhì)體無毒副作用且含有氧化保護(hù)劑，可通過血腦屏障，提高了姜黃素的中樞藥效作用和生物利用度，對治療HAND針對性強(qiáng)，效果好。(2)本發(fā)明提供的冰片-姜黃素脂質(zhì)體所需原料藥材藥源豐富、價(jià)格低廉，生產(chǎn)可行，適合制備成任何可口服劑型。


圖I是不同組SD大鼠血液中姜黃素濃度-時(shí)間曲線圖。圖2是不同組SD大鼠腦吸收的姜黃素含量高效液相色譜峰圖。
圖3是Morris水迷宮檢測不同制劑藥物對SD大鼠定位航行實(shí)驗(yàn)的影響圖。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例及附圖對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的描述，但本發(fā)明的實(shí)施方式不限于此。實(shí)施例I冰片-姜黃素脂質(zhì)體的制備取3g卵磷脂、Ig膽固醇、IOmg姜黃素、Img冰片和IOOmg維生素E溶于無水乙醇中，于35°C恒溫水浴條件下在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上旋蒸至無水乙醇完全揮發(fā)后形成均勻薄膜；力口入5mL O. 03mol/L的PBS (pH 7. O), 35°C孵育3h，于35°C恒溫水浴條件下在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上旋轉(zhuǎn)水合至形成乳狀溶液；將乳狀溶液80KHz超聲處理lOmin，再通過O. 45 μ m微孔濾膜整粒即得到冰片-姜黃素脂質(zhì)體。通過分光光度法(檢測波長為424nm)測定所得冰片-姜黃素脂質(zhì)體的包封率為75%左右。
實(shí)施例2不同制劑藥物進(jìn)入SD大鼠血液和腦組織速度的比較將Spraugue-Dawley (SD )成年雌雄大鼠分為姜黃素組、姜黃素脂質(zhì)體組和冰片-姜黃素脂質(zhì)體組，每組8只雌雄各半，分別灌胃給藥姜黃素單體(IOmg姜黃素溶于5mLpH 7. 0、0. 03mol/L的PBS得到姜黃素)、姜黃素脂質(zhì)體(按實(shí)施例I的條件不加冰片制備得到姜黃素脂質(zhì)體)、冰片-姜黃素脂質(zhì)體(由實(shí)施例I制備得到)，5mL/只。給藥后15、30、45、60、90、120、150min斷尾取血并通過高效液相色譜測定血液中姜黃素的濃度，以時(shí)間為橫坐標(biāo)，血液中姜黃素濃度為縱坐標(biāo)，制備藥濃度-時(shí)間曲線。結(jié)果如圖I所示姜黃素脂質(zhì)體及冰片-姜黃素脂質(zhì)體組的入血速度明顯快于姜黃素，在O. 25h即出現(xiàn)血藥濃度最大值，而姜黃素組在O. 75h才出現(xiàn)血藥濃度最大值。灌胃給藥一周后將大鼠處死取腦組織，通過高效液相色譜測定腦組織中姜黃素的含量；大鼠腦組織樣品處理方法為大鼠斷頭處死后，迅速取出250±50mg腦組織，放入冰中冷凍，加入O. lmol/L的乙酸乙酯4mL,冰浴下研磨成勻衆(zhòng)；4°C > 12000r/min離心20min,收集上層有機(jī)相，下層繼續(xù)用乙酸乙酯4mL提取兩次，合并三次收集的有機(jī)相層；氮?dú)膺^夜吹干后，殘?jiān)眉状糏mL溶解，3000r/min離心IOmin后，吸取上清液，4°C保存?zhèn)溆?；進(jìn)樣前需經(jīng)O. 45 μ m微孔濾膜濾過。結(jié)果如圖2和表I所示姜黃素脂質(zhì)體組SD大鼠腦內(nèi)姜黃素的含量多于姜黃素組(P < O. 05)，表明制備成脂質(zhì)體后，有利于姜黃素的吸收；冰片-姜黃素脂質(zhì)體組SD大鼠腦內(nèi)姜黃素的含量與姜黃素脂質(zhì)體組相比明顯提高(P < O. 05)，表明冰片可起到促進(jìn)藥物通過血腦屏障的作用。表I各組樣品腦吸收含量的比較(n=3)
分組N吸光度(1(Τ3)
姜黃素組31.57±0.82
姜黃素脂質(zhì)體組30.98 ±0.30*
冰片-姜黃素脂質(zhì)體組30.70±0.24*#*Ρ < O. 05與姜黃素組比較，flP < O. 05與姜黃素脂質(zhì)體組比較。
實(shí)施例3不同制劑藥物對gpl20所致大鼠學(xué)習(xí)記憶障礙的影響用Morris水迷宮檢測各組大鼠的空間學(xué)習(xí)能力，實(shí)驗(yàn)動物為SD成年雌雄大鼠，每組15只，隨機(jī)抽取，分組如下 對照組側(cè)腦室不插管+雙蒸水灌胃；假手術(shù)組側(cè)腦室插管+人工大鼠腦脊液+雙蒸水灌胃；模型組(gpl20):側(cè)腦室插管+gpl20+雙蒸水灌胃；gpl20+姜黃素單體組側(cè)腦室插管+gpl20+姜黃素單體灌胃；gpl20+姜黃素脂質(zhì)體組側(cè)腦室插管+gpl20+姜黃素脂質(zhì)體灌胃；
gpl20+冰片-姜黃素脂質(zhì)體組側(cè)腦室插管+gpl20+冰片-姜黃素脂質(zhì)體灌胃。將除對照組大鼠外其它各組大鼠進(jìn)行側(cè)腦室插管固定術(shù)。腹腔注射1%戊巴比妥鈉40 60mg/kg，大鼠完全麻醉后，超凈工作臺內(nèi)操作，將其頭部固定于立體定位儀耳桿處，顱頂區(qū)備皮，碘酒、醫(yī)用酒精消毒手術(shù)區(qū)皮膚。沿顱頂中線作2. 5cm切口，在前顱向后
I.Omm,中線左或右旁開I. 4±0. Imm處，用牙科鉆鉆開顱骨，將消毒好的聚乙烯塑料管插入顱骨以下3. 2±0. 2mm處，用502膠及牙托粉充分固定，夾閉塑料管，縫合切口皮膚，使其與外界隔離，6. 25X IO6UAg青霉素鈉腹腔注射；之后每天注射青霉素鈉治療。手術(shù)三天恢復(fù)后，進(jìn)行側(cè)腦室灌注給藥。乙醚麻醉術(shù)后大鼠，微量進(jìn)樣器垂直插入已固定于大鼠頭部的聚乙烯塑料管4. 0mm。假手術(shù)組給予人工腦脊液5 μ L，模型組及各姜黃素治療組(gpl20+姜黃素單體組、gpl20+姜黃素脂質(zhì)體組和gpl20+冰片-姜黃素脂質(zhì)體組)給予5 μ LlOng/ μ L的gpl20，均注入大鼠側(cè)腦室，給藥速度< O. 5μ L/min，留針5min，確保藥物能充分彌散，緩慢撤針后，夾閉塑料管；連續(xù)給藥3天，每天I次。第四天姜黃素單體組、姜黃素脂質(zhì)體組和冰片-姜黃素脂質(zhì)體組分別灌胃給藥2mL (姜黃素單體IOmg姜黃素溶于5mL pH 7.0、O. 03mol/L的PBS得到姜黃素；姜黃素脂質(zhì)體按實(shí)施例I的條件不加冰片制備得到姜黃素脂質(zhì)體；冰片-姜黃素脂質(zhì)體由實(shí)施例I制備得到。)，對照組、假手術(shù)組和模型組則用2mL蒸餾水進(jìn)行灌胃，每天2次，連續(xù)灌胃14天。然后用Morris水迷宮檢測各組大鼠的空間學(xué)習(xí)能力。Morris水迷宮檢測所得數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)用重復(fù)測量設(shè)計(jì)、配對檢驗(yàn)或單因素方差分析。從圖3看出，各組大鼠尋找平臺所耗費(fèi)的時(shí)間(即逃避潛伏期)隨著實(shí)驗(yàn)天數(shù)的增加而減少，可說明各組大鼠對于尋找平臺均具備一定的學(xué)習(xí)記憶能力，但此學(xué)習(xí)記憶能力有組間差異。組間兩兩比較顯示，五天的訓(xùn)練測試中，對照組和假手術(shù)組大鼠的逃避潛伏期明顯短于模型組(P <0.05)，模型組大鼠尋找平臺時(shí)間最長，說明造模成功。姜黃素單體、姜黃素脂質(zhì)體、冰片-姜黃素脂質(zhì)體與模型組相比，逃避潛伏期縮短(P < O. 05)，說明姜黃素具有一定的治療作用。冰片-姜黃素脂質(zhì)體組大鼠與姜黃素單體組和姜黃素脂質(zhì)體組相比，所耗時(shí)間減退較為明顯，說明冰片-姜黃素脂質(zhì)體組的學(xué)習(xí)記憶能力優(yōu)于姜黃素單體、姜黃素脂質(zhì)體組(P < O. 05)。從表2中可以看出，模型組大鼠在目標(biāo)象限停留時(shí)間明顯短于對照組和假手術(shù)組(P < 0.01)，說明模型組大鼠的記憶能力明顯降低；姜黃素單體、姜黃素脂質(zhì)體及冰片-姜黃素脂質(zhì)體治療組大鼠在目標(biāo)象限停留時(shí)間均長于模型組大鼠(P < O. 05)，其中冰片-姜黃素脂質(zhì)體治療組的效果優(yōu)于另外兩組治療組(P < O. 05)。模型組大鼠穿越目標(biāo)象限次數(shù)少于對照組和假手術(shù)組(P < O. 01)，說明模型組大鼠的記憶能力不如對照組及假手術(shù)組；姜黃素單體、姜黃素脂質(zhì)體及冰片-姜黃素脂質(zhì)體治療組大鼠穿越目標(biāo)象限的次數(shù)均多于
模型組大鼠(P < O. 05)，其中冰片-姜黃素脂質(zhì)體治療組的效最好(P < O. 05)。表2各組大鼠在目標(biāo)象限停留的時(shí)間和穿過目標(biāo)象限的次數(shù)比較(I± S n=15)
權(quán)利要求
1.一種冰片-姜黃素脂質(zhì)體，其特征在于包括如下按質(zhì)量份數(shù)計(jì)的組分卵磷脂270 330份、膽固醇90 110份、姜黃素O. 9 I. I份和冰片O. 09 O. 11份。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的冰片-姜黃素脂質(zhì)體，其特征在于所述的冰片-姜黃素脂質(zhì)體包括如下按質(zhì)量份數(shù)計(jì)的組分卵磷脂300份、膽固醇100份、姜黃素I份和冰片O. I份。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的冰片-姜黃素脂質(zhì)體，其特征在于所述的冰片-姜黃素脂質(zhì)體還包括O 11質(zhì)量份氧化保護(hù)劑，所述的氧化保護(hù)劑為維生素E。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的冰片-姜黃素脂質(zhì)體，其特征在于所述的氧化保護(hù)劑的量為10質(zhì)量份。
5.權(quán)利要求I 4任一項(xiàng)所述的冰片-姜黃素脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于包括如下步驟 (1)取270 330質(zhì)量份卵磷脂、90 110質(zhì)量份膽固醇、O.9 I. I質(zhì)量份姜黃素、O.09 O. 11質(zhì)量份冰片和O 11質(zhì)量份氧化保護(hù)劑用無水乙醇溶解，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上旋蒸至無水乙醇完全揮發(fā)后形成均勻薄膜； (2)按每3g卵磷脂加5mLPBS的比例加PBS至步驟(I)所形成的薄膜中，孵育3h以上，再通過水合反應(yīng)使薄膜和PBS形成乳狀液； (3)將步驟(2)所得的乳狀液超聲處理后，再通過O.45 μ m微孔濾膜整粒即得到冰片-姜黃素脂質(zhì)體。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的冰片-姜黃素脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于 步驟(I)中所述的氧化保護(hù)劑的量為9 11質(zhì)量份；所述的氧化保護(hù)劑為維生素E ; 步驟(I)中所述的旋蒸為35°C水浴條件下進(jìn)行。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的冰片-姜黃素脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于 步驟(2)中所述的 PBS 為 pH 7. 0、0· 03mol/L 的 PBS ； 步驟(2)中所述的孵育為35°C下進(jìn)行； 步驟(2)中所述的水合反應(yīng)為35°C水浴條件下在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上旋轉(zhuǎn)進(jìn)行。
8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的冰片-姜黃素脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于 步驟(3)中所述的超聲處理為80KHz超聲處理lOmin。
9.權(quán)利要求I 4任一項(xiàng)所述的冰片-姜黃素脂質(zhì)體的在制備抗HIV相關(guān)神經(jīng)認(rèn)知障礙藥物中的應(yīng)用。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的冰片-姜黃素脂質(zhì)體的在制備抗HIV相關(guān)神經(jīng)認(rèn)知障礙藥物中的應(yīng)用，其特征在于所述的冰片-姜黃素脂質(zhì)體制備成適合口服的任何劑型的抗HIV相關(guān)神經(jīng)認(rèn)知障礙的藥物。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種冰片-姜黃素脂質(zhì)體及其制備方法與其在制備抗HIV-1相關(guān)神經(jīng)認(rèn)知障礙藥物中的應(yīng)用，屬于醫(yī)藥領(lǐng)域。冰片-姜黃素脂質(zhì)體主要由270～330質(zhì)量份卵磷脂、90～110質(zhì)量份膽固醇、0.9～1.1質(zhì)量份姜黃素和0.09～0.11質(zhì)量份冰片制備得到。通過將上述質(zhì)量份組分及0～11質(zhì)量份氧化保護(hù)劑用無水乙醇溶解，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上旋蒸至乙醇揮發(fā)形成均勻薄膜；再加入適量PBS孵育3h，再通過水合反應(yīng)形成乳狀液；然后超聲10min，過0.45μm微孔濾膜整粒，即得到冰片-姜黃素脂質(zhì)體。冰片-姜黃素脂質(zhì)體可制備成適合口服的任何劑型的抗HAND的藥物，對治療HAND針對性強(qiáng)，效果好。
文檔編號A61K47/28GK102895188SQ20121036279
公開日2013年1月30日 申請日期2012年9月24日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月24日
發(fā)明者董軍, 鄧欽瑩 申請人:暨南大學(xué)