一種注射用奧沙利鉑前體脂質(zhì)體的制備方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及含有雜環(huán)化合物的醫(yī)藥配制品，具體涉及奧沙利鉬脂質(zhì)體。
【背景技術】
[0002] 脂質(zhì)體（liposome)或稱類脂小球、液晶微囊，是一種革巴向藥物載體。1971年，英國 Rymen等人開始將其用作藥物載體。載藥脂質(zhì)體可通過滲透或被巨嗜細胞吞噬后載體被酶 類分解而釋放藥物，從而發(fā)揮作用。它具有類細胞結(jié)構(gòu)，進入動物體內(nèi)主要被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng) 吞噬而激活機體的自身免疫功能，并改變被包封藥物的體內(nèi)分布，使藥物主要在肝、脾、肺 和骨髓等組織器官中積蓄，從而提高藥物的治療指數(shù)，減少藥物的治療劑量和降低藥物的 毒性。
[0003] 脂質(zhì)體進入人體后可被人體網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬，主要靶向在肝、脾等含網(wǎng)狀內(nèi)皮 系統(tǒng)豐富的器官，對其它部位革巴向性差，存在易被體內(nèi)的蛋白等破壞而引起滲漏而影響療 效等問題。
[0004] 當脂質(zhì)體用鍵合的親水性聚合物修飾時，它的物理、化學、生物學穩(wěn)定性都大大提 高。在此技術中，脂質(zhì)體的組成中含有聚乙二醇衍生化磷脂（PEG-DSPE)，其作用是阻止血漿 蛋白吸附于脂質(zhì)體的表面，從而減少單核吞噬細胞的攝取，延長血循環(huán)的時間，使得脂質(zhì)體 能夠有效到達病變部位，因此可以更好的發(fā)揮療效，減輕毒性。
[0005] 奧沙利鉬（Oxaliplatin)是繼順鉬和卡鉬后的第三代鉬類抗癌藥，是一個穩(wěn)定的 水溶性的鉬類烷化劑，其化學名為[(1R，2R)-1，2-環(huán)己烷二胺-N，N i ][乙二酸（2-)-0， (V ]絡鉬，分子式為C8H14N204Pt，分子量397. 3。奧沙利鉬對治療死亡率最高的中、晚期 結(jié)（直）腸癌有很好的效果。作為進入臨床腫瘤治療尚屬不久的第三代鉬類新藥，奧沙利鉬 具有抗瘤作用確切、廣譜的特點，對第一代（順鉬）和第二代（卡鉬）無效或耐藥的腫瘤也 有一定療效，并且降低了前二代藥物所常有的一些不良反應。奧沙利鉬已在腫瘤的化療上 突現(xiàn)其重要性。奧沙利鉬難溶于一般的有機溶劑，在水中溶解度也不大。目前臨床上使用 的是其凍干粉針劑。然而，作為抗腫瘤藥物的奧沙利鉬在作用于腫瘤細胞的同時，也會殺傷 正常細胞，對機體產(chǎn)生不同程度的毒副作用。同時，由于其體內(nèi)的代謝較快、缺乏靶向性，因 此，尋找適合的載體，通過制劑學的手段，延長奧沙利鉬在體內(nèi)的滯留時間、提高靶向作用、 減少其毒副作用具有重大的臨床意義。
[0006] 前體脂質(zhì)體主要是通過冷凍干燥等形式除去脂質(zhì)體溶液中的水分，形成脂質(zhì)前 體，加水后重建成脂質(zhì)體，可明顯提高脂質(zhì)體的穩(wěn)定性，目前上市的脂質(zhì)體制劑多是前體 脂質(zhì)體。目前，對奧沙利鉬脂質(zhì)體制劑的研究并不多，對于奧沙利鉬前體脂質(zhì)體的專項 研究更少，中國專利CN1775216A公開奧沙利鉬脂質(zhì)體，其采用的處方及制備工藝均為常 規(guī)脂質(zhì)體制備所用，文中未給出所制備的脂質(zhì)體的載藥量，奧沙利鉬的包封率也較低較 低，不能滿足注射需要，文中提到冷凍干燥，但未提及重建后藥物包封率變化，未見授權； 中國專利200310124776. 6, 200710025130. 0中公開了奧沙利鉬長循環(huán)脂質(zhì)體，都是采用 PEG2000-DSPE使脂質(zhì)體具有長循環(huán)特性，制備方法未見獨特性。W0/2007/099377是用反 相膠束法提高奧沙利鉬脂質(zhì)體的包封率：先將陽離子型藥物奧沙利鉬與帶負電荷的酸性 磷脂一二棕稠酞磷脂酞廿油（DPPG)制成共扼物反相膠束，進一步與空白脂質(zhì)體混合，通 過膜融合，將藥物一磷脂共扼物反相膠束包封于脂質(zhì)體內(nèi)，減少藥物向外水相滲漏。制備 工藝復雜，難以重現(xiàn)；專利CN101897668也是采用反向膠束法制備奧沙利鉬脂質(zhì)體，且制 備材料采用天然蛋黃磷脂及膽固醇，一定程度上克服了 W0/2007/099377所采用的酸性磷 脂為合成磷脂，價格昂貴的缺點，包封率也較高；但是專利中采用的特定磷脂（磷脂以其 總重量計，其中磷脂酞膽堿或稱卵磷脂，，簡稱PC的重量百分含量為75-90%，磷脂酞甘 油，簡稱PG和磷脂酸簡稱PA的重量百分含量之和為10-25)比較難以控制質(zhì)量；美國專利 US2004022842A1中制備了奧沙利鉬脂質(zhì)體，并接上了 PEG-2000和配基運鐵蛋白，提高了脂 質(zhì)體的穩(wěn)定性和靶向性；此外，楊美燕的博士論文《奧沙利鉬長循環(huán)熱敏脂質(zhì)體研究》采用 凍融循環(huán)工藝試圖提高脂質(zhì)體的包封率，但結(jié)果僅將包封率提高至30,未能很好的解決包 封率低的問題；這些發(fā)明中都存在或是載藥量、藥物包封率低、或是工藝不具有可操作性所 導致的難以工業(yè)化生產(chǎn)的問題，尤其是以上所發(fā)明的均是脂質(zhì)體液體制劑，由于藥物易于 滲漏，其穩(wěn)定性差的問題，難以滿足臨床要求。因此，本領域迫切需要提供一種價廉、工藝簡 單、載藥量、包封率、穩(wěn)定性好的制備奧沙利鉬脂質(zhì)體的方法，開發(fā)高質(zhì)量的奧沙利鉬前體 脂質(zhì)體可較好的解決以上問題。
[0007] 對于奧沙利鉬，因其水溶性不好，且在一般常用的有機溶劑中不溶，在采用常規(guī)處 方及制備方法時，存在載藥量低、包封率低、制成脂質(zhì)體不穩(wěn)定的缺點。制備的脂質(zhì)體中藥 物在存放過程中會滲漏出來，無法保證質(zhì)量，難以滿足臨床要求。透過冷凍干燥制成前體脂 質(zhì)體是解決穩(wěn)定性的有效方法。但是，由于奧沙利鉬水中溶解度較高，制備成的脂質(zhì)體冷凍 干燥之后，藥物以微晶的形式存在于前體脂質(zhì)體中，在復溶重建過程中，藥物往往會大量泄 漏到外水相去，使得復溶后脂質(zhì)體的包封率急劇下降，往往重建后的藥物包封率在50%以 下。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明所要解決的技術問題是提供一種注射用奧沙利鉬前體脂質(zhì)體的制備方法， 該方法所得到的奧沙利鉬前體脂質(zhì)體具有復溶后包封率高的優(yōu)點。
[0009] 本發(fā)明解決上述問題的技術方案如下所述：
[0010] -種注射用奧沙利鉬前體脂質(zhì)體的制備方法，該方法由以下步驟組成：
[0011] a)將奧沙利鉬溶于含有輔助溶劑的水溶液中，并使奧沙利鉬在所述水溶液中的重 量濃度為〇. 8~1 %，得水相；其中，所述的助溶劑為丙二醇或甘油，該助溶劑在水液中的體 積濃度為30% ;
[0012] b)將磷脂類膜材和兩親膜穩(wěn)定材料按3 : 1~5 : 1的重量比混合，再加入磷脂類 膜材重量〇~100%的膜流動調(diào)節(jié)劑膽固醇，得總膜材，將所得總膜材溶解于有機溶劑中， 得到所述總膜材在機溶劑中的重量濃度為1~4%的油相；其中，所述的兩親膜穩(wěn)定材料為 膽固醇硫酸酯鈉、膽固醇磷酸鈉、膽固醇磺酸鈉和十二烷基磺酸鈉中的一種或兩種以上；所 述的磷脂膜材為蛋黃磷脂、大豆卵磷脂、磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺和氫化卵磷脂中的一種 或兩種以上；所述的有機述溶劑為二氯甲烷、氯仿、乙醚或乙酸乙酯；
[0013] C)按按水相：油相=1:2~1:4體積比將步驟b)所得油相加入到步驟a)所得水 相中制成w/ο型乳劑；
[0014] d)揮去有機溶劑并采用透析方法除去游離藥物，然后，加入粉針所需的輔料，且， 先在-5~5°C的條件下放置至奧沙利鉬以結(jié)晶形態(tài)析出后，再冷凍干燥制得奧沙利鉬前體 脂質(zhì)體。
[0015] 本發(fā)明所述注射用奧沙利鉬前體脂質(zhì)體的制備方法，其中，所述的磷脂膜材優(yōu)選 大豆卵磷脂；所述的有機述溶劑優(yōu)選二氯甲烷。
[0016] 本發(fā)明所述方法得到的注射用奧沙利鉬前體脂質(zhì)體在使用時可用注射用水復溶， 也可用5%葡萄糖注射液進一步分散。
[0017] 所選冷凍干燥工藝特點是與常規(guī)冷凍干燥條件不同，冷凍前，將溫度控制在-5~ 5°C 5小時以上，是使制劑中的奧沙利鉬以結(jié)晶析出，這是根據(jù)奧沙利鉬的溶解特性所設計 的。由于奧沙利鉬在水中的溶解度較大，因此，盡管將其包封于脂質(zhì)體內(nèi)，采用冷凍干燥的 手段保證脂質(zhì)體的穩(wěn)定性，但是復溶時仍然會有藥物從脂質(zhì)體中擴散到外水相，從而使包 封率明顯下降。為解決上述技術能題，本發(fā)明巧妙地利用奧沙利鉬結(jié)晶水中溶解較慢的特 性，在冷凍干燥前先讓揮去有機溶劑并除去游離藥物的W/0型乳劑在-5°C~5°C溫度下放 置至奧沙利鉬以結(jié)晶形態(tài)析出，可將復溶后奧沙利鉬的包封率提高到80%以上。
【附圖說明】
[0018] 圖1~3分別為實施例1的冷凍干燥步驟中所采用的三個不同冷凍干燥曲線，三 幅圖中，縱坐標均表示溫度，橫坐標均表示時間。
[0019] 圖4為實施例3的冷凍干燥步驟中所采用的冷凍干燥曲線，圖中，縱坐標均表示溫 度，橫坐標均表示時間。
[0020] 圖5為實施例4的冷凍干燥步驟中所采用的冷凍干燥曲線，圖中，縱坐標均表示溫 度，橫坐標均表示時間。
[0021] 圖6為實施例5的冷凍干燥步驟中所采用的冷凍干燥曲線，圖中，縱坐標均表示溫 度，橫坐標均表示時間。
[0022] 圖7奧沙利鉬注射液組血藥濃度-時間曲線。
[0023] 圖8為奧沙利鉬脂質(zhì)體注射液組血藥濃度-時間曲線。
【具體實施方式】
[0024] 實施例1
[0025] 1、處方：
[0026] 大豆卵磷脂 3,60 g 奧沙利怕 1 00 g 膽固醇 MO.g 膽固醇硫酸酯鈉 LOOg 乳瑭 u)0()g 1:，2-丙二醇 30 mL
[0027] 2、奧沙利鉬前體脂質(zhì)體的制備：
[0028] a)將1，2-丙二醇與70ml水混合均勻，得濃度為30%的1，2-丙二醇的水溶液，再 將奧沙利鉬加入以上溶液中超聲溶解，得水相；
[0029] b)將大豆卵磷脂與膽固醇和膽固醇硫酸酯鈉混合均勻，再將所得混合物溶解于 300mL的二氯甲烷中，得油相；
[0030] c)將步驟b)所得油相加入到步驟a)所得水相中超聲乳化制成W/0型乳劑；
[0031] d)把制成的W/0型乳劑轉(zhuǎn)移至梨形瓶中，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上于40°C下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除 去二氯甲烷，再通過擠壓的方式過孔徑為IOOnm的聚碳酸酯膜，然后把擠出后的脂質(zhì)體進 行透析，得到藍色乳光透明脂質(zhì)體溶液；然后，加入乳糖混均，并且，先在-5~5°C的條件下 放置至奧沙利鉬以結(jié)晶形態(tài)析出后，再裝入西林瓶并采用圖1所示的冷凍干燥曲線進行冷 凍干燥，即得奧沙利鉬前體脂質(zhì)體。
[0032] 3、冷凍干燥曲線對加水重建后包封率影響的實驗
[0033] (1)將上述奧沙利鉬前體脂質(zhì)體的制備中的冷凍干燥過程分別按圖1、圖2和圖3 所示的冷凍干燥曲線進行冷凍干燥，得到采用曲線1、曲線2和曲線3所對應的奧沙利鉬前 體脂質(zhì)體；
[0034] (2)實驗結(jié)果曲線1、曲線2和曲線3所對應的奧沙利鉬前體脂質(zhì)體分別加水重建 檢測包封率，結(jié)果分別如下表1~3所示。
[0035] 表1奧沙利鉬脂質(zhì)體樣品按照曲線1冷凍干燥所得樣品加水重建后指標