4-甲氧基芐醇在制備血腦屏障保護(hù)藥物中的用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及4-甲氧基芐醇在制備血腦屏障保護(hù)藥物中的用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 血腦屏障（Blood-Brain Barrier，BBB)是由德國細(xì)菌學(xué)家Paul Ehrhch發(fā)現(xiàn)的， 是存在于血液和腦組織間的一道生理屏障，對于維持腦內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定具有重要的作用。血 腦屏障在血液與腦組織液之間物質(zhì)交換過程中起嚴(yán)格篩選作用，在生理狀態(tài)下，血腦屏障 相對不通透，主要起屏障功能，還能選擇性地將腦內(nèi)有害或過剩物質(zhì)泵出腦外，保持腦的內(nèi) 環(huán)境穩(wěn)定。
[0003] 在腦缺血性損傷過程中血腦屏障破壞是腦缺血促發(fā)腦水腫和腦梗死的重要病理 改變，也是腦缺血后病理生理改變的重要環(huán)節(jié)，及影響藥物治療效果的關(guān)鍵因素之一。在腦 缺血及腦缺血再灌注后會(huì)出現(xiàn)血腦屏障結(jié)構(gòu)的損傷和改變以及功能上的異變，在結(jié)構(gòu)上主 要表現(xiàn)為對微血管內(nèi)皮細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞足突以及基底膜的影響，如內(nèi)皮細(xì)胞固縮，毛細(xì) 血管基底膜斷裂，毛細(xì)血管管腔明顯變形狹窄，使血腦屏障的完整性遭到破壞；功能上使血 腦屏障通透性增加，最終導(dǎo)致血管源性腦水腫、甚至發(fā)生出血轉(zhuǎn)化，加重神經(jīng)損傷，從而出 現(xiàn)繼發(fā)性的腦損傷。因此，保護(hù)血腦屏障，對于缺血性腦血管病的治療及預(yù)后將有重要意 義。
[0004] 4-甲氧基芐醇，無色或微黃色液體。熔點(diǎn)23-25.5°C，沸點(diǎn)159°C，相對密度 I. 113(15/15°C )，折光率1. 5442。易溶于醇和醚，幾乎不溶于水。化學(xué)式為：C8H1(l02,結(jié)構(gòu) 式為目前4-甲氧基芐醇通常作為食用香料食用，未見4-甲氧基芐醇用于血腦屏障 保護(hù)的報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供4-甲氧基芐醇在制備血腦屏障保護(hù)藥物中的用途。
[0006] 本發(fā)明提供了 4-甲氧基芐醇在制備血腦屏障保護(hù)藥物中的用途。
[0007] 其中，所述血腦屏障保護(hù)藥物是降低血腦屏障通透性的藥物。
[0008] 其中，所述藥物是以4-甲氧基芐醇為活性成分，加上藥學(xué)上可接受的輔料制備而 成的制劑。
[0009] 其中，所述制劑為口服制劑。
[0010] 其中，所述口服制劑是膠囊劑、片劑。
[0011] 本發(fā)明還提供了抑制血腦屏障保護(hù)藥物，其特征在于：它是以4-甲氧基芐醇為活 性成分，加上藥學(xué)上可接受的輔料制備而成的制劑。其中，所述制劑為口服制劑。
[0012] 其中，所述口服制劑是膠囊劑、片劑。
[0013] 本發(fā)明4-甲氧基芐醇能降低腦缺血過程中血腦屏障的通透性，降低腦組織 NO、iNOS、nNOS的表達(dá)、下調(diào)AQP4蛋白的高表達(dá)以及減少TJ主要結(jié)構(gòu)蛋白（Occludin、 Claudin-5)，對血腦屏障有良好的保護(hù)作用，可以制備成為血腦屏障保護(hù)藥物，為臨床血腦 屏障的保護(hù)提供了一種新的選擇。
[0014] 下面通過【具體實(shí)施方式】對本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)說明，但是并不是對本發(fā)明的限 制，根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容，按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)知識和慣用手段，在不脫離本發(fā)明上述 基本技術(shù)思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。
【附圖說明】
[0015] 圖I EB標(biāo)準(zhǔn)曲線。
[0016] 圖2 4-甲氧基芐醇對大鼠神經(jīng)病學(xué)評分的影響。
[0017] 圖3 4-甲氧基芐醇對大鼠腦組織EB含量的影響。
[0018] 圖4 4-甲氧基芐醇對大鼠腦組織EB滲出情況的影響。
[0019] 圖5 BCA法測定蛋白濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
[0020] 圖6 nNOS試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)曲線R2 = 0· 9901。
[0021] 圖7 iNOS試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)曲線R2 = 0· 9969。
[0022] 圖8 eNOS試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)曲線R2 = 0. 9983。
[0023] 圖9 BCA法測定蛋白濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線R2= 0. 9955。
[0024] 圖10 nNOS試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)曲線R2= 0· 9971。
[0025] 圖11 iNOS試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)曲線R2= 0· 9960。
[0026] 圖12 eNOS試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)曲線R2= 0· 9920。
[0027] 圖13 4-甲氧基芐醇對大鼠缺血側(cè)腦組織NO及NOS表達(dá)的影響。
[0028] 圖14 4-甲氧基芐醇對大鼠缺血側(cè)腦組織AQP-4表達(dá)的影響。
[0029] 圖15 4-甲氧基節(jié)醇對大鼠缺血側(cè)腦組織Occludin表達(dá)的影響。
[0030] 圖16 4-甲氧基芐醇對大鼠缺血側(cè)腦組織Claudin-5表達(dá)的影響。
【具體實(shí)施方式】
[0031] 實(shí)驗(yàn)例1 4-甲氧基芐醇的血腦屏障保護(hù)作用
[0032] 1.實(shí)驗(yàn)材料
[0033] I. 1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
[0034] 成年健康雄性SD大鼠，體重250-300g，SPF級，由四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研 宄所提供，生產(chǎn)許可證號：SCXK (川）2013-12,生產(chǎn)批號：0016729。
[0035] L 2實(shí)驗(yàn)藥品
[0036] 4-甲氧基節(jié)醇，購自美國Sigma公司。
[0037] L 3實(shí)驗(yàn)試劑
[0038] 伊文思藍(lán) Sigma公司 甲酰胺 Sigma公司 肝素注射液 上海第一生化藥業(yè)有限公司 磷酸鹽緩沖液(PBS)干粉 Bio Basic Inc 氯化鈉(NaCL) 天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司 直徑0.26mm的尼龍線 日本Prodo公司
[0039] L 4實(shí)驗(yàn)儀器
[0040] 酶標(biāo)儀(Infinite M200 PRO) 瑞士 Tecan 臺式離心機(jī)(KA-1000) 上海安亭科學(xué)儀器廠 數(shù)顯恒溫水浴鍋(HH-S24) 金壇市大地自動(dòng)化儀器廠 分析天平(XS125A) 瑞士普利賽斯 分體熱泵型落地式房間空調(diào) 江蘇春蘭制冷設(shè)備股份有限公司
[0041] 1.5主要試劑配制
[0042] 1.5.10.9%生理鹽水的配置：氯化鈉4.58，加雙蒸水至50〇!^，充分搖勻放4°〇冰 箱備用。
[0043] 1. 5. 2生理鹽水（0. 9% )加肝素（5單位/ml)溶液的配制：氯化鈉4. 5g，加雙蒸 水至500mL，滴加肝素400uL，充分搖勻放4°C冰箱備用。
[0044] 1. 5. 3 2% EB溶液的配置：精密稱取EB2g，加入生理鹽水容量瓶中定容至100mL， 攪拌至完全溶解。
[0045] 1. 5. 4肝素化生理鹽水灌注液：氯化鈉（分析純）9g，注射用肝素鈉25000U以蒸餾 水800mL完全混溶后以定容瓶定容至1000mL，分裝于500mL無菌瓶中備用。
[0046] 1. 5. 5電鏡心臟灌流固定液的配置（4%多聚甲醛+0. 5%戊二醛）：溶解2g多聚甲 醛于25mL雙蒸水中，80°C水浴，搖動(dòng)使之溶化后加1-3滴NaOH(IM)，使溶液澄清。冷卻后加 ImL 25 %戊二醛（電鏡專用），再加24mL的PBS (0· 2M)，調(diào)pH備用。
[0047] L 6藥物配置
[0048] 4-甲氧基芐醇（20mg/kg)的配置：精密稱取4-甲氧基芐醇適量，先加入吐溫適量 使其溶解，完全溶解后用蒸餾水定容；大鼠的灌胃劑量為lmL/kg，可預(yù)先配置成高濃度的 溶液（2mg/mL)，4°C密封保存，使用前根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要稀釋到合適的濃度。
[0049] 2.實(shí)驗(yàn)方法
[0050] 2. 1動(dòng)物分組及給藥方法
[0051] 將體重在250_300g的雄性（Sprague DawLey，SD)大鼠，SPF級，隨機(jī)分組，即 假手術(shù)組、模型組、4-甲氧基芐醇高劑量組（20mg/kg)、低劑量組（10mg/kg)，每只大鼠按 lmL/lOOg體積灌胃給藥，假手術(shù)組和模型組灌胃給予等體積溶媒（含吐溫-80的蒸餾水）， 給藥組分別灌胃給予所給藥物（lmL/lOOg)，每天一次，連續(xù)給藥5天，手術(shù)當(dāng)天，于