長(zhǎng)BMP2處理后p-Smadl的表達(dá)時(shí)間，并促進(jìn)Idl表達(dá)；D: ChIP實(shí)驗(yàn)表明Smadl與LANA均能結(jié)合Idl啟動(dòng)子；E:ChIP實(shí)驗(yàn)表明LANA能顯著促進(jìn)Smadl 對(duì)Idl啟動(dòng)子的結(jié)合能力。
[0032] 圖4 :Id家族在KSHV轉(zhuǎn)化細(xì)胞以及在KS組織中高表達(dá)。
[0033] A，B:Id家族在KSHV轉(zhuǎn)化細(xì)胞中mRNA水平與蛋白水平均顯著上調(diào)；C:Knock-down LANA在KSHV轉(zhuǎn)化細(xì)胞中下調(diào)Id家族轉(zhuǎn)錄水平；D:Id家族在KS組織中高表達(dá)。
[0034] 圖5、Knock-downIdl表達(dá)顯著抑制KSHV轉(zhuǎn)化細(xì)胞的體外以及體內(nèi)成瘤能力。
[0035] A:建立Idlknock-down的KSHV轉(zhuǎn)化細(xì)胞株；B:Knock_downIdl表達(dá)抑制KSHV轉(zhuǎn) 化細(xì)胞株的生長(zhǎng)速度；C，D:Knock-downIdl表達(dá)顯著抑制KSHV轉(zhuǎn)化細(xì)胞株的克隆生長(zhǎng)能 力；E，F(xiàn):Kn〇Ck-d〇wnIdl表達(dá)顯著抑制KSHV轉(zhuǎn)化細(xì)胞株的錨定非依賴(lài)的生長(zhǎng)能力；G，H， I:Kn〇Ck-d〇wnIdl表達(dá)顯著抑制KSHV轉(zhuǎn)化細(xì)胞株在裸鼠體內(nèi)的成瘤能力。
[0036] 圖6、Dorsomorphin通過(guò)下調(diào)BMP-Smadl-Id信號(hào)抑制KSHV轉(zhuǎn)化細(xì)胞的成瘤能力。
[0037] A:BMP通路抑制劑WSS25與Dorsomorphin能抑制BMP激活的p-Smadl表 達(dá)；B:WSS25與Dorsomorphin顯著抑制KSHV轉(zhuǎn)化細(xì)胞株的錨定非依賴(lài)的生長(zhǎng)能力；C: Dorsomorphin對(duì)KSHV轉(zhuǎn)化細(xì)胞株具有選擇性的細(xì)胞毒性作用；D:Dorsomorphin抑制Id家 族的表達(dá)；E，F(xiàn)，G:Idl能部分拯救Dorsomorphin對(duì)KSHV轉(zhuǎn)化細(xì)胞株的G2/M停滯作用，細(xì) 胞毒性作用以及錨定非依賴(lài)的生長(zhǎng)能力的抑制作用（E中，vec表示空質(zhì)粒，對(duì)照表示不給 予Dorsomorphin) ;H:Dorsomorphin顯著抑制KSHV轉(zhuǎn)化細(xì)胞株在裸鼠體內(nèi)的成瘤能力；I: Dorsomorphin顯著抑制KSHV轉(zhuǎn)化細(xì)胞株在裸鼠體內(nèi)接種腫瘤的Idl表達(dá)，增殖（Ki67)以 及誘導(dǎo)凋亡（激活的Caspase3)。
【具體實(shí)施方式】
[0038] 本發(fā)明人經(jīng)過(guò)系統(tǒng)和深入的研究，首次揭示了LANA通過(guò)結(jié)合BMP激活的p-Smadl， 維持它的表達(dá)，并促進(jìn)它在癌基因Id啟動(dòng)子的結(jié)合，導(dǎo)致Id蛋白家族的異常高表達(dá)，通過(guò) 多種方式促進(jìn)細(xì)胞增殖，抑制凋亡。因此，BMP-Smadl-Idl通路是治療卡波氏肉瘤（KS)的 一個(gè)靶點(diǎn)。本發(fā)明還證實(shí)BMP通路抑制劑是治療卡波氏肉瘤的有效靶向藥物。
[0039] BMP信號(hào)通路抑制劑及其用途
[0040] 如本文所用，"BMP信號(hào)通路"、"BMP通路"可互換使用。所述的"BMP信號(hào)通路"。 包含 "BMP-Smadl-Id通路"。
[0041] 如本文所用，所述的"BMP信號(hào)通路蛋白"包括BMP信號(hào)通路中的任何相關(guān)蛋白；較 佳地，包括：BMP，Smadl，Id。
[0042] 本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，BMP通路的重要信號(hào)蛋白Smadl是KSHV主要潛伏期蛋白LANA的 新的相互作用蛋白。LANA通過(guò)與BMP激活的p-Smadl相互作用，維持它的表達(dá)，并促進(jìn)它在 Id啟動(dòng)子的結(jié)合，從而導(dǎo)致Id的顯著上調(diào)。
[0043] 在大鼠胚腎間充質(zhì)前體細(xì)胞（MM細(xì)胞）的KSHV轉(zhuǎn)化模型（KMM細(xì)胞）中，重要癌 基因Id家族顯著上調(diào)，并且證實(shí)它們的上調(diào)受LANA調(diào)控。同時(shí)，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)Id在10例 KS病損組織中高表達(dá)，并且Smadl呈核染色，表明BMP通路在KS組織中激活。
[0044]shldl可以顯著減慢KMM的生長(zhǎng)速度，顯著抑制它在正常培養(yǎng)時(shí)的集落形成能力， 顯著抑制它在軟瓊脂中錨定非依賴(lài)的生長(zhǎng)，以及顯著抑制它在裸鼠體內(nèi)成瘤能力。因此，Id 對(duì)于維持KMM成瘤能力是必須的。
[0045] 單獨(dú)過(guò)表達(dá)Idl本身，不能直接使麗細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)化，但是在KMM細(xì)胞中過(guò)表達(dá) Idl，能進(jìn)一步促進(jìn)KMM的生長(zhǎng)速度，促進(jìn)它在正常培養(yǎng)時(shí)的集落形成能力，促進(jìn)它在軟瓊 脂中錨定非依賴(lài)的生長(zhǎng)。結(jié)合以上實(shí)驗(yàn)，證實(shí)Id是KSHV轉(zhuǎn)化細(xì)胞不可或缺的驅(qū)動(dòng)力。
[0046]Dorsomorphin是I型BMP受體抑制劑，WSS25可以抑制BMP與BMP受體結(jié)合，本發(fā) 明人發(fā)現(xiàn)二者均可以顯著抑制P-Smadl表達(dá)，并顯著抑制KMM在軟瓊脂中錨定非依賴(lài)的生 長(zhǎng)能力。
[0047] 其中，Dorsomorphin的結(jié)構(gòu)式如下：
【主權(quán)項(xiàng)】
1. BMP信號(hào)通路抑制劑在制備改善或治療卡波氏肉瘤病毒感染疾病的組合物中的用 途。
2. 如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述卡波氏肉瘤病毒感染疾病包括：卡波氏 肉瘤，原發(fā)性滲出性淋巴瘤，多中心性卡斯特曼病。
3. 如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述的BMP信號(hào)通路抑制劑包括： Dorsomorphin和WSS25 ;或它們的類(lèi)似物。 4. BMP信號(hào)通路或其通路蛋白的用途，其特征在于，用于篩選改善或治療卡波氏肉瘤病 毒感染疾病的潛在物質(zhì)。
5. -種篩選改善或治療卡波氏肉瘤病毒感染疾病的潛在物質(zhì)的方法，所述方法包括： (1) 用候選物質(zhì)處理包含BMP信號(hào)通路或其通路蛋白的體系； (2) 檢測(cè)所述體系中BMP信號(hào)通路蛋白的表達(dá)量或活性； 其中，若所述候選物質(zhì)可降低BMP信號(hào)通路蛋白的表達(dá)量或活性，則表明該候選物質(zhì) 是改善或治療卡波氏肉瘤病毒感染疾病的潛在物質(zhì)。
6. 如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，步驟（1)包括：在測(cè)試組中，將候選物質(zhì)加 入到包含BMP信號(hào)通路的體系中；和/或 步驟（2)包括：檢測(cè)測(cè)試組的體系中BMP信號(hào)通路蛋白的表達(dá)量或活性，并與對(duì)照組比 較，其中所述的對(duì)照組是不添加所述候選物質(zhì)的包含BMP信號(hào)通路的體系； 如果測(cè)試組中BMP信號(hào)通路蛋白的表達(dá)量或活性在統(tǒng)計(jì)學(xué)上低于對(duì)照組，就表明該候 選物是改善或治療卡波氏肉瘤病毒感染疾病的潛在物質(zhì)。
7. 如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述的BMP信號(hào)通路是BMP-Smadl-Id通路， 所述的BMP信號(hào)通路蛋白包括：BMP，Smadl，Id。
8. 如權(quán)利要求5-7任一所述的方法，其特征在于，所述的體系是細(xì)胞體系。
9. 如權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述的體系是內(nèi)源存在BMP信號(hào)通路的細(xì) 胞。
10. -種用于改善或治療卡波氏肉瘤病毒感染疾病的組合物，其特征在于，所述的組合 物含有： (1) BMP通路抑制劑；較佳地是Dorsomorphin，WSS25,或它們的類(lèi)似物；和 (2) 藥學(xué)上可接受的載體。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及BMP通路抑制劑在制備卡波氏肉瘤病毒感染疾病治療藥物中的用途。首次揭示BMP信號(hào)通路是治療卡波氏肉瘤的一個(gè)靶點(diǎn)。本發(fā)明還揭示了BMP信號(hào)通路抑制劑是治療卡波氏肉瘤的有效靶向藥物。
【IPC分類(lèi)】G01N33-68, A61K45-00, A61P35-00, A61P31-22
【公開(kāi)號(hào)】CN104800847
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201410043666
【發(fā)明人】藍(lán)柯, 梁德光
【申請(qǐng)人】中國(guó)科學(xué)院上海巴斯德研究所
【公開(kāi)日】2015年7月29日
【申請(qǐng)日】2014年1月29日