系利用固定于 Biacore芯片上的包含F(xiàn)ZD胞外域或Fri結(jié)構(gòu)域的FZD-Fc融合蛋白所測(cè)得的解離常數(shù)。
[0105] 在某些實(shí)施方式中，可用于本發(fā)明的方法中的FZD結(jié)合劑（例如抗FZD抗體）系 該劑所結(jié)合的至少一種人卷曲受體（即1、2、3、4、5、6、7、8、9或10種FZD)的拮抗劑。在某 些實(shí)施方式中，該劑抑制至少約10%、至少約20%、至少約30%、至少約50%、至少約75%、 至少約90%或約100%的該經(jīng)結(jié)合的人卷曲受體的一或多種活性。
[0106] 在某些實(shí)施方式中，該FZD結(jié)合劑（例如抗FZD抗體）抑制配體與該至少一種人 卷曲受體的結(jié)合。在某些實(shí)施方式中，該配體系人Wnt蛋白。十九種人Wnt蛋白已被識(shí)別： Wntl、Wnt2、Wnt2B/13、Wnt3、Wnt3A、Wnt4、Wnt5A、Wnt5B、Wnt6、Wnt7A、Wnt7B、Wnt8A、Wnt8B、 Wnt9A(前稱 Wntl4)、Wnt9B (前稱 Wntl5)、Wntl0A、Wntl0B、Wntll 及 Wntl6。在某些實(shí)施方 式中，該劑抑制Wnt3A與FZD8的結(jié)合。在某些實(shí)施方式中，由該FZD結(jié)合劑所提供的對(duì)特 定配體與特定人卷曲蛋白的結(jié)合的抑制系至少約10%、至少約25%、至少約50%、至少約 75%、至少約90 %或至少約95%。在某些實(shí)施方式中，抑制配體諸如Wnt與FZD結(jié)合的劑 另抑制fct信號(hào)傳導(dǎo)（例如抑制典型Wnt信號(hào)傳導(dǎo)）。
[0107] 在某些實(shí)施方式中，該FZD結(jié)合劑（例如抗FZD抗體）抑制Wnt信號(hào)傳導(dǎo)。應(yīng)了 解的是，抑制fct信號(hào)傳導(dǎo)的FZD結(jié)合劑在某些實(shí)施方式中可能抑制藉由一或多種Wnt的 信號(hào)傳導(dǎo)，但不一定抑制藉由所有fct的信號(hào)傳導(dǎo)。在某些選擇性實(shí)施方式中，藉由所有 人fct的信號(hào)傳導(dǎo)可能皆被抑制。在某些實(shí)施方式中，藉由選自Wntl、Wnt2、Wnt2B/13、 Wnt3、Wnt3A、Wnt4、Wnt5A、Wnt5B、Wnt6、Wnt7A、Wnt7B、Wnt8A、Wnt8B、Wnt9A (前稱 Wntl4)、 Wnt9B (前稱Wntl5)、1拉1(^、11^1(?、11^11及11^16之一或多種11^的信號(hào)傳導(dǎo)系經(jīng)抑制。 在某些實(shí)施方式中，該經(jīng)抑制的fct信號(hào)傳導(dǎo)系由Wntl、Wnt2、Wnt3、Wnt3A、Wnt7a、Wnt7b 及/或WntlOB信號(hào)傳導(dǎo)。在某些實(shí)施方式中，該劑抑制藉由（至少）Wntl、Wnt3A、Wnt7b& WntlOB的信號(hào)傳導(dǎo)。在特定實(shí)施方式中，該劑抑制藉由（至少）Wnt3A的信號(hào)傳導(dǎo)。在某些 實(shí)施方式中，由該FZD結(jié)合劑所提供的對(duì)藉由Wnt信號(hào)傳導(dǎo)的抑制系減少該Wnt信號(hào)傳導(dǎo) 量至少約10%、至少約25%、至少約50%、至少約75%、至少約90%或至少約95%。在某 些實(shí)施方式中，該被抑制的fct信號(hào)傳導(dǎo)系典型Wnt信號(hào)傳導(dǎo)。
[0108] 用于測(cè)定FZD結(jié)合劑（或候選FZD結(jié)合劑）是否抑制Wnt信號(hào)傳導(dǎo)的活體內(nèi)及體 外測(cè)定系該領(lǐng)域所知。見例如美國(guó)專利申請(qǐng)案公開號(hào)2012/0027778,其系以引用方式整體 納入此處。
[0109] 在某些實(shí)施方式中，可用于本發(fā)明的方法中的FZD結(jié)合劑（例如抗FZD抗體）具 有一或多種下列效應(yīng)：抑制神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤細(xì)胞增生、藉由減少神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤中的癌干 細(xì)胞的頻率以減少該神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤的腫瘤發(fā)生性、抑制神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤生長(zhǎng)、增加存活、 誘發(fā)神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞死亡、使腫瘤發(fā)生性神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤細(xì)胞分化成非腫瘤發(fā) 生性狀態(tài)或預(yù)防腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。
[0110] 在某些實(shí)施方式中，可用于本發(fā)明的方法中的FZD結(jié)合劑能抑制神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤 生長(zhǎng)。在某些實(shí)施方式中，該FZD結(jié)合劑可抑制活體內(nèi)的神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤生長(zhǎng)（例如在異 種移植小鼠模型及/或于罹患癌的人體內(nèi)）。
[0111] 在某些實(shí)施方式中，可用于本發(fā)明的方法中的FZD結(jié)合劑能減少神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤 的腫瘤發(fā)生性。在某些實(shí)施方式中，該劑或抗體可于動(dòng)物模型諸如小鼠異種移植模型中減 少包含癌干細(xì)胞的神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤的腫瘤發(fā)生性。在某些實(shí)施方式中，腫瘤中癌干細(xì)胞的 數(shù)量或頻率系減少至少約二倍、約三倍、約五倍、約十倍、約50倍、約100倍、或約1000倍。 在某些實(shí)施方式中，癌干細(xì)胞的數(shù)量或頻率減少系藉由使用動(dòng)物模型的限制稀釋試驗(yàn)測(cè) 定。用于檢測(cè)抗FZD抗體的療效的限制稀釋試驗(yàn)實(shí)例系提供于US2012/0027778的實(shí)施例 8,其系以引用方式整體納入此處。有關(guān)使用限制稀釋試驗(yàn)以測(cè)定腫瘤中癌干細(xì)胞的數(shù)量或 頻率減少的其他實(shí)例及指南可見例如國(guó)際公開號(hào)WO 2008/042236、美國(guó)專利申請(qǐng)案公開號(hào) 2008/0064049及美國(guó)專利申請(qǐng)案公開號(hào)2008/0178305,彼等各自以引用方式整體納入此 處。
[0112] 在某些實(shí)施方式中，該可用于本發(fā)明的方法中的FZD結(jié)合劑（例如抗體）系多肽。 在某些實(shí)施方式中，該劑或多肽系抗體。在某些實(shí)施方式中，該抗體系IgGl抗體或IgG2抗 體。在某些實(shí)施方式中，該抗體系單克隆抗體。在某些實(shí)施方式中，該抗體系人抗體或人源 化抗體。在某些實(shí)施方式中，該抗體系抗體片段。
[0113] 在某些實(shí)施方式中，用于本發(fā)明的方法中的抗FZD抗體包含18R5、18R8及/或 44R24人抗體的一、二、三、四、五及/或六個(gè)CDR(見下表1)，每個(gè)CDR具有最多四個(gè)（即0、 1、2、3或4個(gè)）保守性氨基酸取代。在某些實(shí)施方式中，該重鏈⑶R系包含于重鏈可變區(qū)之 內(nèi)，及/或該輕鏈⑶R系包含于輕鏈可變區(qū)之內(nèi)。 表1. 18R8、18R5 和 44R24 人抗體的 CDR
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種抑制神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤生長(zhǎng)的方法，其包含使該神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤與有效量的fct 拮抗劑接觸。
2. -種抑制神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤細(xì)胞增生的方法，其包含使該神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤細(xì)胞與有效 量的fct拮抗劑接觸。
3. -種減少神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤細(xì)胞的腫瘤發(fā)生性的方法，其包含使該神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤細(xì) 胞與有效量的Wnt拮抗劑接觸。
4. 一種誘導(dǎo)神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤細(xì)胞分化的方法，其包含使該神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤細(xì)胞與有效 量的fct拮抗劑接觸。
5. -種抑制神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤生長(zhǎng)的方法，其包含對(duì)需要抑制神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤生長(zhǎng)的個(gè) 體投予治療有效量的fct拮抗劑。
6. -種抑制神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤細(xì)胞增生的方法，其包含對(duì)需要抑制神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤細(xì)胞 增生的個(gè)體投予治療有效量的fct拮抗劑。
7. -種治療神經(jīng)內(nèi)分泌癌的方法，其包含對(duì)需要治療神經(jīng)內(nèi)分泌癌的個(gè)體投予治療有 效量的fct拮抗劑。
8. 如權(quán)利要求第5至7項(xiàng)中任一項(xiàng)的方法，其中該個(gè)體系人個(gè)體。
9. 如權(quán)利要求第1至8項(xiàng)中任一項(xiàng)的方法，其中該神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤是低惡性度、中惡性 度或高惡性度神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤。
10. 如權(quán)利要求第1至8項(xiàng)中任一項(xiàng)的方法，其中該神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤是功能性神經(jīng)內(nèi)分 泌腫瘤或非功能性神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤。
11. 如權(quán)利要求第1至8項(xiàng)中任一項(xiàng)的方法，其中該神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤系選自胃腸胰腺神 經(jīng)內(nèi)分泌瘤、胰腺神經(jīng)內(nèi)分泌瘤、類癌瘤、嗜鉻細(xì)胞瘤、副神經(jīng)節(jié)瘤、甲狀腺髓質(zhì)癌、肺神經(jīng) 內(nèi)分泌瘤及胸腺神經(jīng)內(nèi)分泌瘤。
12. 如權(quán)利要求第11項(xiàng)的方法，其中該神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤是類癌瘤或胰腺神經(jīng)內(nèi)分泌 瘤。
13. 如權(quán)利要求第1至12項(xiàng)中任一項(xiàng)的方法，其中該Wnt拮抗劑是抗體。
14. 如權(quán)利要求第13項(xiàng)的方法，其中該Wnt拮抗劑是與至少一種人Wnt特異性結(jié)合的 抗體。
15. 如權(quán)利要求第13項(xiàng)的方法，其中該Wnt拮抗劑是與至少一種人卷曲受體（FZD)特 異性結(jié)合的抗體。
16. 如權(quán)利要求第15項(xiàng)的方法，其中該抗體與至少一種人FZD的胞外域特異性結(jié)合。
17. 如權(quán)利要求第15或16項(xiàng)的方法，其中該抗體與選自FZDI、FZD2、FZD5、FZD7及FZD8 的人FZD特異性結(jié)合。
18. 如權(quán)利要求第15至17項(xiàng)中任一項(xiàng)的方法，其中該抗體與FZD7特異性結(jié)合。
19. 如權(quán)利要求第15至18項(xiàng)中任一項(xiàng)的方法，其中該抗體與超過一種人FZD特異性結(jié) 合。
20. 如權(quán)利要求第15至19項(xiàng)中任一項(xiàng)的方法，其中該抗體與選自FZD1、FZD2、FZD5、 FZD7及FZD8中超過一種人FZD特異性結(jié)合。
21. 如權(quán)利要求第15至20項(xiàng)中任一項(xiàng)的方法，其中該抗體與選自FZD1、FZD2、FZD5、 FZD7及FZD8中三種或超過三種人FZD特異性結(jié)合。
22. 如權(quán)利要求第15至21項(xiàng)中任一項(xiàng)的方法，其中該抗體與FZD1、FZD2、FZD5、FZD7 及FZD8特異性結(jié)合。
23. 如權(quán)利要求第15至22項(xiàng)中任一項(xiàng)的方法，其中該抗體阻斷配體與FZD結(jié)合。
24. 如權(quán)利要求第23項(xiàng)的方法，其中該抗體阻斷Wnt與FZD結(jié)合。
25. 如權(quán)利要求第15至22項(xiàng)中任一項(xiàng)的方法，其中該抗體阻斷FZD的活化。
26. 如權(quán)利要求第15至25項(xiàng)中任一項(xiàng)的方法，其中該抗體包含：（a)重鏈⑶R1、重 鏈CDR2及重鏈CDR3,該重鏈CDRl包含GFTFSHYTLS(SEQIDN0:31)，該重鏈CDR2包含 VIS⑶GSYTYYADSVKG(SEQIDN0:32)且該重鏈CDR3 包含NFIKYVFAN(SEQIDN0:33);及 / 或（b)輕鏈CDR1、輕鏈CDR2 及輕鏈CDR3,該輕鏈CDRl包含S⑶NIGSFYVH(SEQIDNO:34)， 該輕鏈CDR2 包含DKSNRPSG(SEQIDNO:35)且該輕鏈CDR3 包含QSYANTLSL(SEQIDNO: 36);或該輕鏈CDRl包含S⑶KLGKKYAS(SEQIDN0:41)，該輕鏈CDR2 包含EKDNRPSG(SEQID NO:42)且該輕鏈CDR3 包含SSFAGNSLE(SEQIDNO:43)。
27. 如權(quán)利要求第26項(xiàng)的方法，其中該抗體包含：(a)包含SEQIDNO:37的氨基酸序 列的重鏈可變區(qū)；及/或（b)包含SEQIDNO:38或SEQIDNO:44的氨基酸序列的輕鏈可 變區(qū)。
28. 如權(quán)利要求第26項(xiàng)的方法，其中該抗體包含：(a)包含SEQIDNO:39的氨基酸序 列的重鏈；及/或（b)包含SEQIDNO:40或SEQIDNO:45的氨基酸序列的輕鏈。
29. 如權(quán)利要求第13至28項(xiàng)中任一項(xiàng)的方法，其中該抗體是單克隆抗體。
30. 如權(quán)利要求第13至29項(xiàng)中任一項(xiàng)的方法，其中該抗體是重組抗體、嵌合抗體、人源 化抗體、人抗體或抗體片段。
31. 如權(quán)利要求第13至30項(xiàng)中任一項(xiàng)的方法，其中該抗體說單特異性抗體或雙特異性 抗體。
32. 如權(quán)利要求第13至31項(xiàng)中任一項(xiàng)的方法，其中該抗體是IgA、IgD、IgE、IgG或IgM 抗體。
33. 如權(quán)利要求第32項(xiàng)的方法，其中該抗體是IgGl或IgG2抗體。
34. 如權(quán)利要求第1至12項(xiàng)中任一項(xiàng)的方法，其中該Wnt拮抗劑是可溶性FZD受體。
35. 如權(quán)利要求第34項(xiàng)的方法，其中該可溶性FZD受體與Wnt結(jié)合。
36. 如權(quán)利要求第34或35項(xiàng)中任一項(xiàng)的方法，其中該可溶性受體包含人FZD受體的胞 外域的片段。
37. 如權(quán)利要求第36項(xiàng)的方法，其中該人FZD受體的胞外域的片段包含該人FZD受體 的Fri結(jié)構(gòu)域。
38. 如權(quán)利要求第36或37項(xiàng)中任一項(xiàng)的方法，其中該人FZD受體系選自FZD4、FZD5及 FZD8〇
39. 如權(quán)利要求第38項(xiàng)的方法，其中該人FZD受體是FZD8。
40. 如權(quán)利要求第39項(xiàng)的方法，其中該FZD8Fri結(jié)構(gòu)域包含SEQIDNO:28的氨基酸 序列。
41. 如權(quán)利要求第34至40項(xiàng)中任一項(xiàng)的方法，其中該可溶性受體另包含人Fc結(jié)構(gòu)域。
42. 如權(quán)利要求第41項(xiàng)的方法，其中該人Fc結(jié)構(gòu)域包含SEQIDNO:95的氨基酸序列。
43. 如權(quán)利要求第1至42項(xiàng)中任一項(xiàng)的方法，其另包含使該腫瘤或腫瘤細(xì)胞與第二治 療劑接觸，或?qū)υ搨€(gè)體投予第二治療劑。
44. 如權(quán)利要求第43項(xiàng)的方法，其中該第二治療劑是化學(xué)治療劑。
45. 如權(quán)利要求第44項(xiàng)的方法，其中該第二治療劑是激酶抑制劑、生長(zhǎng)抑素類似物或 mTOR途徑抑制劑。
46. 如權(quán)利要求第45項(xiàng)的方法，其中該第二治療劑是舒尼替尼、奧曲肽或依維莫司。
47. 如權(quán)利要求第43項(xiàng)的方法，其中該第二治療劑是抗體。
48. 如權(quán)利要求第43項(xiàng)的方法，其中該第二治療劑為血管生成抑制劑。
49. 如權(quán)利要求第1至13或43至48項(xiàng)中任一項(xiàng)的方法，其中該Wnt拮抗劑是 0MP-18R5。
50. 如權(quán)利要求第49項(xiàng)的方法，其中0MP-18R5是經(jīng)靜脈投予至需要該劑的個(gè)體，劑量 為（a)約每一至二周至少約0. 5mg/kg，或（b)約每三周至少約I.Omg/kg。
51. 如權(quán)利要求第50項(xiàng)的方法，其中0MP-18R5是以約每一至二周約0. 5mg/kg至約 I.Omg/kg的劑量投予。
52. 如權(quán)利要求第50項(xiàng)的方法，其中0MP-18R5系以約每三周約I.Omg/kg至約5.Omg/ kg的劑量投予。
53. 如權(quán)利要求第1至12或43至48項(xiàng)中任一項(xiàng)的方法，其中該Wnt拮抗劑是 0MP-54F28。
54. 如權(quán)利要求第1至10或13至53項(xiàng)中任一項(xiàng)的方法，其中該神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤不是 小細(xì)胞肺腫瘤（SCLC)。
55. 如權(quán)利要求第1至53項(xiàng)中任一項(xiàng)的方法，其中該神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤是類癌瘤。
56. 如權(quán)利要求第1至53項(xiàng)中任一項(xiàng)的方法，其中該神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤是胰腺神經(jīng)內(nèi)分 泌瘤。
【專利摘要】本發(fā)明提供治療神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤的新穎方法。在一實(shí)施方式中，該方法包含對(duì)需要治療神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤的個(gè)體投予治療有效劑量的Wnt拮抗劑。在一實(shí)施方式中，該Wnt拮抗劑系抗FZD抗體。在另一實(shí)施方式中，該Wnt拮抗劑系可溶性FZD受體多肽。在又一實(shí)施方式中，該Wnt拮抗劑系抗Wnt抗體。PTA-1031120090826 PTA-954120080929 PTA-1030920090826 PTA-1030720090826 PTA-954020080929
【IPC分類】C12N15-11, A61K39-395
【公開號(hào)】CN104768579
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201380055630
【發(fā)明人】羅伯特·約瑟夫·斯塔格, 雅各布·杜邦特
【申請(qǐng)人】昂科梅德制藥有限公司
【公開日】2015年7月8日
【申請(qǐng)日】2013年10月22日
【公告號(hào)】CA2887711A1, EP2911691A1, US20140134159, WO2014066328A1