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使用Wnt途徑結(jié)合劑來(lái)治療神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤的方法_2

文檔序號(hào):8448249閱讀:來(lái)源:國(guó)知局
-18R5抗FZD抗體治療。(實(shí)施例1。)令人意外的是,其中一名病患(罹患胰 腺神經(jīng)內(nèi)分泌瘤的病患)在以0MP-18R5治療112天之后顯示腫瘤病灶大小減少,且維持接 受治療279天(至2013年1月25日)而無(wú)任何疾病惡化的證據(jù)。此外,在一名病患的病 灶中見(jiàn)到新的鈣化,這可能代表腫瘤細(xì)胞壞死及/或分化的可能征候。另外,二名具有類癌 瘤組織學(xué)的神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤病患也能持續(xù)接受治療,在OMP-18R5的治療期間令人意外地 維持長(zhǎng)期穩(wěn)定疾病狀態(tài)。(實(shí)施例1。)總結(jié)來(lái)說(shuō),這些結(jié)果顯示OMP-18R5可能特別適用于 治療多種神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤。 1.定義
[0030] 為了促進(jìn)對(duì)本發(fā)明的了解,以下定義一些用語(yǔ)及用詞。
[0031] 此處所使用的用語(yǔ)"拮抗劑"包括部分或完全阻斷、抑制或中和蛋白(例如癌干細(xì) 胞標(biāo)志)的表達(dá)或生物活性的任何分子。該阻斷、抑制及/或中和生物活性包括但不限于 抑制腫瘤生長(zhǎng)。用語(yǔ)"拮抗劑"亦包括部分或完全阻斷、抑制或中和fct途徑的生物活性的 任何分子。此處使用的用語(yǔ)"fct拮抗劑"包括部分或完全阻斷、抑制或中和該Wnt途徑的 信號(hào)傳導(dǎo)(例如典型fct信號(hào)傳導(dǎo))的任何分子,或部分或完全阻斷、抑制或中和該Wnt途 徑的成分的生物活性的任何分子。fct詰抗劑不一定與Wnt結(jié)合。舉例來(lái)說(shuō),在某些實(shí)施 方式中,Wnt詰抗劑與該Wnt途徑之一或多種其他成分諸如一或多種FZD受體結(jié)合。適當(dāng) 的Wnt拮抗劑分子包括但不限于天然FZD受體蛋白,天然FZD受體蛋白包括可溶性FZD受 體的片段及/或氨基酸序列變異體,以及可溶性卷曲相關(guān)蛋白(SFRP)的衍生物及ROR蛋白 的衍生物。適當(dāng)?shù)膄ct拮抗劑分子另包括但不限于與一或多種FZD受體特異性結(jié)合的抗體 及與一或多種Wnt多肽特異性結(jié)合的抗體。可溶性SFRP及ROR受體系描述于美國(guó)專利申 請(qǐng)案公開(kāi)號(hào)2011/030569,其以引用方式納入此處。
[0032] 用于測(cè)定劑(例如可溶性FZD受體或抗FZD抗體)是否抑制Wnt信號(hào)傳導(dǎo)的體內(nèi) 及體外測(cè)定系該領(lǐng)域所知。舉例來(lái)說(shuō),可使用以細(xì)胞為基底的熒光素酶報(bào)告試驗(yàn)測(cè)量體外 的典型Wnt信號(hào)傳導(dǎo)量,其利用含有多份TCF結(jié)合結(jié)構(gòu)域與下游螢火蟲(chóng)熒光素酶報(bào)告基因 的 TCF/Luc 報(bào)告載體(Gazit et al.,1999, Oncogene 18 ;5959-66)。在一或多種 Wnt (例 如由轉(zhuǎn)染細(xì)胞表達(dá)或由fct條件培養(yǎng)基提供的Wnt)存在且有該劑存在時(shí)的Wnt信號(hào)傳 導(dǎo)量系與無(wú)該劑存在時(shí)的信號(hào)傳導(dǎo)量比較。除了 TCF/luc報(bào)告子測(cè)定之外,劑(例如可 溶性FZD受體或抗FZD抗體)對(duì)典型Wnt信號(hào)傳導(dǎo)的影響可于體外或活體內(nèi)藉由測(cè)量該 劑對(duì)β-連環(huán)蛋白調(diào)芐基因表達(dá)量的影響加以測(cè)定,如c_myc(He et al. ,Science, 281: 1509-12 (1998))、細(xì)胞周期素 Dl(Tetsu et al·,Nature, 398 :422-6 (1999))及 / 或纖維黏 連蛋白(Gradl et al.Mol.Cell Biol. 19:5576-87(1999))。在某些實(shí)施方式中,該劑對(duì)Wnt 信號(hào)傳導(dǎo)的影響亦可藉由測(cè)量該劑對(duì)Dishevelled-1、Dishevelled-2、Dishevelled-3、 LRP5、LRP6及/或β -連環(huán)蛋白的磷酸化狀態(tài)的影響檢測(cè)。在仍其他實(shí)施方式中,該劑對(duì) fct信號(hào)傳導(dǎo)的影響藉由檢測(cè)該劑對(duì)Wnt標(biāo)簽基因中的一或多種基因的表達(dá)量的影響測(cè) 定。使用該些試驗(yàn)檢測(cè)典型fct信號(hào)傳導(dǎo)的抑制的非限制性實(shí)例系揭示于美國(guó)專利申請(qǐng)案[0033] 此處使用的用語(yǔ)"可溶性受體"系指受體蛋白在跨膜結(jié)構(gòu)域之前的氨基端胞外片 段,其可以可溶形式自細(xì)胞分泌。在一些實(shí)施方式中,該受體蛋白系FZD受體。在一些實(shí)施 方式中,該受體蛋白系RORl或R0R2受體。在某些實(shí)施方式中,該可溶性受體系與增加該可 溶性受體的半衰期的多肽符合讀框地連接。在某些實(shí)施方式中,該增加半衰期的多肽系人 Fc結(jié)構(gòu)域。
[0034] 此處使用的用語(yǔ)"FZD可溶性受體"系指人FZD受體蛋白在該受體的跨膜結(jié)構(gòu)域之 前的氨基端胞外片段,其可以可溶形式自細(xì)胞分泌。包含完整氨基端胞外域(ECD)(此處稱 為"FZD E⑶")的FZD可溶性受體以及包含該E⑶的較小片段的FZD可溶性受體被設(shè)想。 包含F(xiàn)ri結(jié)構(gòu)域的FZD可溶性受體(此處稱為"FZD Fri ")亦被揭示??扇苄訤ZD受體系 描述于美國(guó)專利申請(qǐng)案公開(kāi)號(hào)2011/030569,其以引用方式納入此處。
[0035] FZD Fri可溶性受體相較于包含該完整FZD E⑶的可溶性受體可顯示改變的生物 活性(例如增加蛋白半衰期)。蛋白半衰期可進(jìn)一步藉由聚乙二醇(PEG)或聚氧乙烯(PEO) 的共價(jià)修飾延長(zhǎng)。FZD可溶性受體包括與其他功能性及結(jié)構(gòu)性蛋白符合讀框地連接的FZD ECD或Fri結(jié)構(gòu)域,該等功能性及結(jié)構(gòu)性蛋白包括但不限于人Fc區(qū)(例如源自免疫球蛋白 IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgAl、IgA2、IgD、IgE 或 IgM 的人 Fe);蛋白標(biāo)簽(例如 myc、FLAG、 GST);其他內(nèi)源性蛋白或蛋白片段;或任何其他有用的蛋白序列包括在FZD ECD或Fri結(jié) 構(gòu)域與連接蛋白之間的任何連接子區(qū)。在某些實(shí)施方式中,F(xiàn)ZD受體的Fri結(jié)構(gòu)域系與人 Fe區(qū)直接相連。在某些實(shí)施方式中,F(xiàn)ZD受體的Fri結(jié)構(gòu)域系與人IgGlFc相連(此處稱為 "FZD Fri. Fc",例如"FZD8Fri. Fc")。在一些實(shí)施方式中,F(xiàn)ZD受體的Fri結(jié)構(gòu)域系與人Fe 區(qū)經(jīng)由肽連接子相連。FZD可溶性受體亦包括含有氨基酸插入、刪除、取代及/或保守性取 代的變異體蛋白。
[0036] 此處使用的用語(yǔ)"連接子"或"連接子區(qū)"系指插入第一多肽(例如FZD成分)與 第二多肽(例如Fe區(qū))之間的連接子。在一些實(shí)施方式中,該連接子系肽連接子。連接子 不應(yīng)不良影響該多肽的表達(dá)、分泌或生物活性。較佳地,連接子不具抗原性且不誘發(fā)免疫反 應(yīng)。
[0037] 用語(yǔ)"抗體"系指免疫球蛋白分子,該免疫球蛋白分子藉由其的可變區(qū)內(nèi)的至少一 個(gè)抗原辨識(shí)區(qū)辨識(shí)標(biāo)靶且與之特異性結(jié)合,像是蛋白質(zhì)、多肽、肽、碳水化合物、多核苷酸、 脂質(zhì)或前述的組合。此處所使用的用語(yǔ)"抗體"包含完整多克隆抗體、完整單克隆抗體、抗體 片段(諸如?&13、? &13'、?(&13')2及?¥片段)、單鏈?以8(^0突變體、多特異性抗體諸如由 至少二種完整抗體生成的雙特異性抗體、嵌合抗體、人源化抗體、人抗體、包含抗體的抗原 結(jié)合部位的融合蛋白,及任何其他包含抗原識(shí)別位點(diǎn)的經(jīng)修飾的免疫球蛋白分子只要該抗 體展現(xiàn)所期望的生物活性。抗體可為下列五種主要免疫球蛋白中的任一者:IgA、IgD、IgE、 IgG及IgM或彼等的亞型(同型)(例如IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgAl及IgA2),此系根據(jù) 彼等分別被稱為α、δ、 ε、γ及μ的重鏈恒定結(jié)構(gòu)域命名。不同類型的免疫球蛋白具有 不同且廣為周知的次單位結(jié)構(gòu)及三維構(gòu)型。抗體可為未經(jīng)修飾或與其他分子如毒素、放射 性同位素等共軛。
[0038] 用語(yǔ)"抗體片段"系指完整抗體的部分且系指完整抗體的抗原性決定可變區(qū)???原片段的實(shí)例包括但不限于Fab、Fab'、F(ab')2及Fv片段、線性抗體、單鏈抗體及自抗體 片段形成的多特異性抗體。
[0039]用語(yǔ)"單克隆抗體"系指涉及高度特異性辨認(rèn)及結(jié)合單一抗原性決定簇或表位的 同源性抗體群。此與多克隆抗體相反,多克隆抗體通常包括以不同的抗原決定簇為目標(biāo)的 不同抗體。用語(yǔ)"單克隆抗體"包含完整及全長(zhǎng)單克隆抗體,也包含抗體片段(例如Fab、 Fab'、F(ab')2、Fv)、單鏈(scFv)突變體、包含抗體部分的融合蛋白及任何其他包含抗原識(shí) 別位點(diǎn)的經(jīng)修飾的免疫球蛋白分子。另外,"單克隆抗體"系指由任何數(shù)量的方式包括但不 限于雜交瘤、噬菌體選擇、重組表達(dá)及轉(zhuǎn)基因動(dòng)物制備的該等抗體。
[0040] 用語(yǔ)"人源化抗體"系指非人(例如小鼠)抗體的形式,該形式系包含最少 非人(例如鼠)序列的特定免疫球蛋白鏈、嵌合性免疫球蛋白或彼等的片段。通常, 人源化抗體系其中互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)的殘基經(jīng)具有所期望的特異性、親和性及能力 的非人物種(例如小鼠、大鼠、兔、倉(cāng)鼠)的CDR殘基取代的人免疫球蛋白(Jones et al. , 1986, Nature,321 :522-525 ;Riechmann et al. , 1988, Nature,332 :323-327 ; Verhoeyen et al. , 1988, Science, 239 :1534-1536)。在一些情況中,人免疫球蛋白的 Fv 架 構(gòu)區(qū)(FR)殘基系由具有所期望的特異性、親和性及能力的非人物種的抗體的對(duì)應(yīng)殘基取 代。該人源化抗體可進(jìn)一步藉由取代Fv架構(gòu)區(qū)及/或該經(jīng)取代的非人殘基內(nèi)的額外殘基 加以修飾,以精進(jìn)優(yōu)化抗體的特異性、親和性及/或能力。通常,該人源化抗體將包含實(shí)質(zhì) 上所有的至少一個(gè)且通常兩或三個(gè)可變結(jié)構(gòu)域,該可變結(jié)構(gòu)域包含所有或?qū)嵸|(zhì)上所有的對(duì) 應(yīng)該非人免疫球蛋白的CDR區(qū),然而所有或?qū)嵸|(zhì)上所有的FR區(qū)系具有人免疫球蛋白共同 序列的該區(qū)。該人源化抗體亦可包含至少部分的免疫球蛋白恒定區(qū)或恒定結(jié)構(gòu)域(Fe),通 常包含人免疫球蛋白的該部分。用于生成人源化抗體的方法的實(shí)例系描述于美國(guó)專利第 5, 225, 539 號(hào)。
[0041] 用語(yǔ)"人抗體"系指由人體產(chǎn)生的抗體或利用該領(lǐng)域已知的任何技術(shù)制備的具有 對(duì)應(yīng)由人體產(chǎn)生的抗體的氨基酸序列的抗體。此定義的人抗體包括完整或全長(zhǎng)抗體、彼等 的片段及/或包含至少一個(gè)人重鏈及/或輕鏈多肽的抗體,諸如包含鼠輕鏈及人重鏈多肽 的抗體。
[0042] 用語(yǔ)"表位"或"抗原決定簇"在此處可交換使用,系指可被特定抗體辨識(shí)且特異 性結(jié)合的抗原部分。當(dāng)抗原系多肽時(shí),表位可自連續(xù)氨基酸或藉由蛋白質(zhì)的三級(jí)折疊并列 的非連續(xù)氨基酸形成。自連續(xù)氨基酸形成的表位在蛋白變性時(shí)通常仍被保留,然而藉由三 級(jí)折疊形成的表位通常在蛋白變性時(shí)消失。表位通常包括至少3個(gè)及更常地至少5或8至 10個(gè)呈獨(dú)特空間構(gòu)形的氨基酸。
[0043]多肽或其他劑(例如抗體或可溶性受體)與蛋白"特異性結(jié)合"系指該多肽或其 他劑相較于選擇性物質(zhì)(包括不相關(guān)的蛋白)以更頻繁、更快速、更長(zhǎng)期、更高親和性或以 上述某些特性的組合與該蛋白反應(yīng)或相連。在某些實(shí)施方式中,"特異性結(jié)合"系指例如劑 (如抗體或可溶性受體)以大約〇. ImM或更低,但通常低于大約ΙμΜ的Kd與蛋白結(jié)合。在 某些實(shí)施方式中,"特異性結(jié)合"系指劑(例如抗體或可溶性受體)有時(shí)以至少約〇. 1 μ M或 更低,至少約0. 01 μΜ或更低,且有時(shí)以至少約InM或更低的Kd與蛋白結(jié)合。由于不同物種 的同源性蛋白之間具有序列一致性,特異性結(jié)合可包括辨識(shí)超過(guò)一種物種中的特定蛋白諸 如fct蛋白或卷曲受體的劑(例如抗體或可溶性受體)。同樣地,由于不同的旁系同源基因 (例如不同的人fct蛋白或人卷曲蛋白)在彼等的序列的特定區(qū)域內(nèi)具有同源性,特異性結(jié) 合可包括辨識(shí)超過(guò)一種旁系同源基因(例如超過(guò)一種人fct蛋白或超過(guò)一種人卷曲蛋白) 的多肽或劑(例如抗體或可溶性受體)。應(yīng)了解的是,與第一標(biāo)靶特異性結(jié)合的劑(例如抗 體或可溶性受體)可能與或可能不與第二標(biāo)靶特異性結(jié)合。因此,"特異性結(jié)合"不一定表 示(雖然可包括)排他性結(jié)合(即與單一標(biāo)靶結(jié)合)。因此,劑(例如抗體或可溶性受體) 在某些實(shí)施方式中可能特異性地與超過(guò)一種標(biāo)靶(例如多種不同的人fct蛋白或多種不同 的卷曲蛋白,諸如?201、?202{205、?207及/或?208)結(jié)合。在某些實(shí)施方式中,抗體的多 重標(biāo)靶可能由該抗體上的相同的抗原結(jié)合部位結(jié)合。舉例來(lái)說(shuō),在某些情況下,抗體可能包 含二個(gè)完全相同的抗原結(jié)合部位,該二個(gè)抗原結(jié)合部位各自與二或多種人卷曲受體(例如 人卩201、?2024205、?207及/或?208)特異性結(jié)合。在某些可供選擇的實(shí)施方式中,抗體 可能為雙特異性且包含至少二個(gè)具有不同特異性的抗原結(jié)合部位。以非限制性實(shí)例而言, 雙特異性抗體可包含一個(gè)辨識(shí)第一卷曲受體(例如人FZD5)上的表位的抗原結(jié)合部位,還 包含第二個(gè)辨識(shí)第二卷曲受體(例如人FZD8)上的不同表位的不同抗原結(jié)合部位。一般來(lái) 說(shuō)(但不必然),所謂的結(jié)合系指特異性結(jié)合。
[0044] 用語(yǔ)"癌"及"癌性"系指稱或描述哺乳動(dòng)物的生理狀況,其中細(xì)胞群具有未受調(diào) 節(jié)的細(xì)胞生長(zhǎng)的特征。一般了解用語(yǔ)"癌"包含fct依賴性癌。癌的實(shí)例包括但不限于癌、 淋巴瘤、胚細(xì)胞瘤、肉瘤及白血病。
[0045] 用語(yǔ)"腫瘤"及"瘤(neoplasm) "系指任何由過(guò)度細(xì)胞生長(zhǎng)或增生所導(dǎo)致的組織團(tuán) 塊,不論是良性(非癌性)或包括癌前性病灶的惡性(癌性)。
[0046] 用語(yǔ)"癌干細(xì)胞"、"腫瘤干細(xì)胞"或"實(shí)質(zhì)腫瘤干細(xì)胞"在此處可交換使用,系指具 有下列特性的實(shí)質(zhì)腫瘤的細(xì)胞群:(1)具有廣泛增生能力,(2)能進(jìn)行不對(duì)稱細(xì)胞分裂以產(chǎn) 生一或多種類型的經(jīng)分化的細(xì)胞后代,該經(jīng)分化的細(xì)胞具有減少的增生或發(fā)育能力,及(3) 能進(jìn)行對(duì)稱細(xì)胞分裂以自我更新或自我維持。"癌干細(xì)胞"、"腫瘤干細(xì)胞"或"實(shí)質(zhì)腫瘤干 細(xì)胞"的這些特性授予這些癌干細(xì)胞在連續(xù)移植至免疫不全小鼠時(shí)形成明顯可見(jiàn)的腫瘤的 能力,相較之下大部分腫瘤細(xì)胞則無(wú)法形成腫瘤。癌干細(xì)胞以混亂方式進(jìn)行自我更新及分 化以形成具有異常且可在將來(lái)突變發(fā)生時(shí)改變的細(xì)胞類型的腫瘤。
[0047] 用語(yǔ)"癌細(xì)胞"、"腫瘤細(xì)胞"及文法相同用語(yǔ)系指源自腫瘤或癌前病灶的整體細(xì)胞 族群,包括非腫瘤發(fā)生性細(xì)胞(其包含大部分的腫瘤細(xì)胞族群)及腫瘤發(fā)生性干細(xì)胞(癌 干細(xì)胞)。此處使用的用語(yǔ)"腫瘤細(xì)胞"僅用于指稱該些缺乏更新及分化能力的腫瘤細(xì)胞 時(shí),將由用語(yǔ)"非腫瘤發(fā)生性"修飾以區(qū)別該些腫瘤細(xì)胞與癌干細(xì)胞。
[0048]用語(yǔ)"腫瘤發(fā)生性"系指實(shí)質(zhì)腫瘤干細(xì)胞的功能特性,包括自我更新(導(dǎo)致額外的 腫瘤發(fā)生性癌干細(xì)胞)及增生以產(chǎn)生所有其他腫瘤細(xì)胞(導(dǎo)致經(jīng)分化及因此非腫瘤發(fā)生 性腫瘤細(xì)胞)以允許實(shí)質(zhì)腫瘤干細(xì)胞形成腫瘤的特性。這些自我更新及增生以產(chǎn)生所有其 他腫瘤細(xì)胞的特性,授予癌干細(xì)胞在連續(xù)移植至免疫不全小鼠時(shí)形成明顯可見(jiàn)的腫瘤的能 力,相較之下非腫瘤發(fā)生性腫瘤細(xì)胞在連續(xù)移植時(shí)無(wú)法形成腫瘤。已經(jīng)觀察到,自實(shí)質(zhì)腫瘤 獲得的非腫瘤發(fā)生性腫瘤細(xì)胞,在經(jīng)初代移植至免疫不全小鼠時(shí)可能形成腫瘤,但該些非 腫瘤發(fā)生性腫瘤細(xì)胞在經(jīng)連續(xù)移植后不會(huì)形成腫瘤。
[0049] 用語(yǔ)"個(gè)體"系指任何動(dòng)物(例如哺乳動(dòng)物),包括但不限于人、非人靈長(zhǎng)動(dòng)物、嚙 齒動(dòng)物及該類似動(dòng)物,該動(dòng)物將成為特定治療的接受者。通常,用語(yǔ)"個(gè)體"及"病患"在此 處可交換使用以指稱人個(gè)體。
[0050] 用語(yǔ)"治療有效量"系指有效"治療"個(gè)體或哺乳動(dòng)物的疾病或疾患的劑(例如抗 體、可溶性受體、多肽、多核苷酸、小型有機(jī)分子或其他藥物)的量。以癌而言,治療有效量 的劑可減少癌細(xì)胞的數(shù)量;減少腫瘤大?。灰种苹蛲V拱┘?xì)胞浸潤(rùn)至周邊器官包括例如癌 擴(kuò)散至軟組織及骨骼;抑制及
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