專利名稱：與GLP-1和腸促胰島素類似物(exendin)有關(guān)的發(fā)明的制作方法
與GLP-1和腸促胰島素類似物(exendin)有關(guān)的發(fā)明本申請(qǐng)是2005年8月沈日提交的申請(qǐng)?zhí)枮?00580(^9760. 4，發(fā)明名稱為“與 GLP-I和腸促胰島素類似物(exendin)有關(guān)的發(fā)明”申請(qǐng)的分案申請(qǐng)。發(fā)明領(lǐng)域描述及簡(jiǎn)介在定位胃腸胰腺神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤時(shí)，生長(zhǎng)激素釋放抑制因子受體閃爍照相法 (SRS)是除了超聲之外最重要的診斷方法。其原理是在被腫瘤細(xì)胞吸收的放射性標(biāo)記的肽的幫助下，對(duì)腫瘤進(jìn)行特異性描繪。然后在伽馬射線照相機(jī)的幫助下，腫瘤組織中放射性的積累可以被目視證實(shí)。當(dāng)一種類型的腫瘤具有一種用于SRS、例如用于生長(zhǎng)激素釋放抑制因子類似物octreotide 的必需受體時(shí)，這些腫瘤的證實(shí)是沒(méi)有問(wèn)題的。但是，如果相應(yīng)的受體不表達(dá)，它們就避開(kāi)了閃爍照相法的證實(shí)。除了定位診斷之外，放射性標(biāo)記的肽也可以用于治療腫瘤的方法，其中人們可以通過(guò)用適當(dāng)?shù)姆派湫院怂?a-or β-粒子發(fā)射體)標(biāo)記生長(zhǎng)激素釋放抑制因子類似物例如octreotide ,來(lái)執(zhí)行特異性的受體指導(dǎo)的放射性肽療法。由于相應(yīng)的放射性核素被肽結(jié)合的方式(例如通過(guò)與以前結(jié)合到該肽上的金屬螯合劑形成復(fù)合物)使得它們事實(shí)上被腫瘤細(xì)胞吸收而且不再能夠被釋放，因此在腫瘤組織中導(dǎo)致了高特異性的積累。但是，一系列的神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤(NET)、其中包括胰島瘤和小細(xì)胞支氣管癌，不能表達(dá)使用生長(zhǎng)激素釋放抑制因子類似物octreotide 進(jìn)行SRS或放射性肽療法所必需的生長(zhǎng)激素釋放抑制因子受體亞型。具體來(lái)說(shuō)，有顯著比例的胰島瘤不能通過(guò)閃爍照相法診斷來(lái)檢測(cè)。在小細(xì)胞支氣管癌中SRS也不算適合的方法，因?yàn)楸M管原發(fā)的腫瘤通?？梢员豢吹?，但腫瘤的轉(zhuǎn)移由于失去了受體的表達(dá)而不能被顯示。因此，對(duì)于放射性肽療法這種代表了一種有趣的附加或替代療法的方法來(lái)說(shuō)，治療這些腫瘤是難以達(dá)成的。因此就需要適合的肽，它們能夠被上述的腫瘤吸收。腸促胰島素激素類胰高血糖素肽-1 (GLP-I)以及其類似物exendin-3和 exendin-4 (來(lái)自美洲大毒蜥蜴 Heloderma horridum 禾口 Heloderma suspectum 的唾液),是胰島瘤和小細(xì)胞支氣管癌以及許多其它種類的腫瘤為其表達(dá)受體的肽。胰島瘤起源于胰腺的Langerhans島中產(chǎn)生胰島素的β-細(xì)胞，其中GLP-1以及exendin-3和exendin-4引發(fā)飯后的胰島素分泌?，F(xiàn)有技術(shù)狀態(tài)為了在閃爍照相法中使用類胰高血糖素肽-1 (GLP-I)，需要對(duì)肽進(jìn)行標(biāo)記。其方法以及用放射性核素標(biāo)記蛋白的方法對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的專業(yè)人員來(lái)說(shuō)是熟知的，在大量的專利申請(qǐng)(例如DE 69018226T2)和科學(xué)出版物中有記錄。那里描述的用于診斷成像和在病理組織中交換治療有效分子的肽通常通過(guò)肽中的氨基插入到N末端。同時(shí)，考慮到穩(wěn)定性必須對(duì)肽進(jìn)行進(jìn)一步修飾。例如，用在US 2003/023276IAl中的GLP-1及其衍生物GLP-I (7-37)在N末端用一個(gè)氨基修飾。因此，GLP-I的N末端不再能夠與GLP-I受體鍵合，所以這些肽中的受體結(jié)合和內(nèi)化都不夠充分。因此后者不適合用于胰島瘤和小細(xì)胞支氣管癌的放射性肽療法。正如經(jīng)驗(yàn)所示，突變、例如GLP-I以及exendin-3或exendin-4的肽序列中氨基酸的取代、以及它們通過(guò)治療分子或信號(hào)分子進(jìn)行的可能修飾，經(jīng)常引起肽結(jié)構(gòu)的損壞，阻礙了與受體的任何進(jìn)一步鍵合。目前尚不知道其它修飾GLP-I而不影響N末端的方法。此外，尚不知道適合用于胰島瘤和小細(xì)胞支氣管癌的放射性療法的GLP-I衍生物，無(wú)論是標(biāo)記的還是未標(biāo)記的。任務(wù)因此，目前本發(fā)明的任務(wù)是消除現(xiàn)有技術(shù)狀態(tài)中的缺陷，制造可以被標(biāo)記并在帶有該標(biāo)記時(shí)仍能夠與GLP-I受體鍵合的肽，該肽可以用于生產(chǎn)診斷和治療疾病的藥劑，在所述疾病中GLP-I受體的表達(dá)發(fā)揮作用的。任務(wù)的解決方案該任務(wù)基于本發(fā)明的權(quán)利要求、通過(guò)GLP-1、exendin-3和exendin-4的肽衍生物得到了解決，這些衍生物在C末端被氨基修飾，并通過(guò)GLP-I受體的N末端成鍵，以及GLP-I 與exendin-3和exendin-4的嵌合肽。這些肽衍生物以及嵌合肽將是未標(biāo)記的或標(biāo)記的，以便用于生產(chǎn)良性或惡性疾病的診斷和治療的藥劑，用于其中GLP-I受體的表達(dá)發(fā)揮作用。通過(guò)這些GLP-I、exendin-3 和 exendin-4 的衍生物以及 GLP-1、exendin-3 或 exendin-4的嵌合肽，產(chǎn)生了用于閃爍照相法應(yīng)用的手段，它將被用于表達(dá)GLP-I受體的腫瘤的診斷和治療，包括NET (特別是胰島瘤)和小細(xì)胞支氣管癌。由于基于本發(fā)明的肽衍生物是在C末端被氨基修飾，因此這可能是第一次使得其 N末端可以與GLP-I受體鍵合。通過(guò)將基于本發(fā)明的肽衍生物、例如放射性標(biāo)記的GLP-I、exendin-3和 exendin-4的嵌合肽與GLP-I受體鍵合，使得表達(dá)GLP-I受體的腫瘤的描繪成為可能，因此為病人的醫(yī)療護(hù)理提供了相當(dāng)大的改善。NET、尤其是胃腸胰腺NET，例如胰島瘤，目前對(duì)于它尚沒(méi)有足夠靈敏的非侵入性方法可用，另外如位于肺部區(qū)域的小細(xì)胞支氣管癌，也不可能通過(guò)非侵入性的方法對(duì)發(fā)炎過(guò)程和腫瘤或轉(zhuǎn)移之間進(jìn)行特異性區(qū)分。此外，利用基于本發(fā)明的肽衍生物和嵌合肽，胰腺中產(chǎn)生的產(chǎn)胰島素細(xì)胞的密度以及體內(nèi)和體外GLP-I受體的表達(dá)被可視化。例如在糖尿病的情況下，表達(dá)GLP-I受體的細(xì)胞的描繪是體內(nèi)描繪，因?yàn)檫@些細(xì)胞也分泌胰島素。在患有糖尿病的病人用藥物治療期間或之后的情況下，胰腺中GLP-I受體密度的描繪是特別重要的。此外，GLP-I受體在惡性和良性組織中的分布被描繪。因此這個(gè)明確表示的問(wèn)題既具有臨床意義也具有科學(xué)意義，因?yàn)槠駷橹龟P(guān)于GLP-I受體在人類中的分布情況尚沒(méi)有完整的數(shù)據(jù)可用。因此，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是GLP-I (類胰高血糖素肽-1)、exendin-3和exendin-4的肽衍生物以及GLP-1、exendin-3和exendin-4的嵌合肽可用于生產(chǎn)藥劑，特別是用于受體定向的特異性描繪和治療，特別是NET、尤其特別的是胰島瘤和小細(xì)胞支氣管癌的描繪和治療。GLP-I受體閃爍照相法特別適用于小細(xì)胞支氣管癌的診斷，這第一次允許了對(duì)淋巴結(jié)中的轉(zhuǎn)移進(jìn)行特異性檢測(cè)(區(qū)分淋巴結(jié)由于炎癥發(fā)生變化與淋巴結(jié)受到腫瘤轉(zhuǎn)移的襲擊發(fā)生的變化)。使用本發(fā)明的來(lái)自GLP-I (類胰高血糖素肽-1)、exendin-3和exendin-4的肽衍生物以及來(lái)自GLP-I、exendin-3和exendin-4的嵌合肽，最終為所有GLP-I受體的表達(dá)在其中發(fā)揮作用的惡性和良性疾病留下了診斷和治療藥劑，具體如下在磁共振成像(MRI) 中作為造影劑；在閃爍照相術(shù)(SPECT，單光子發(fā)射計(jì)算機(jī)斷層照相)以及放射性肽療法、 PET(正電子發(fā)射斷層照相)、受體介導(dǎo)的化學(xué)療法以及光學(xué)診斷中用作放射活性試劑。這里的光學(xué)診斷是指通過(guò)特定的波長(zhǎng)激發(fā)熒光分子，誘導(dǎo)出不同波長(zhǎng)的連續(xù)的光發(fā)射。被檢測(cè)的是發(fā)射出的波長(zhǎng)。專業(yè)人員可以根據(jù)所需的應(yīng)用容易地選擇來(lái)自GLP-I (類胰高血糖素肽-1)、 exendin-3和exendin-4的肽衍生物以及來(lái)自GLP-l、exendin_3和exendin-4的嵌合肽的 C末端的標(biāo)記種類例如對(duì)于閃爍照相術(shù)或放療選擇放射性核素；對(duì)于磁共振成像(MRI)中的造影劑選擇釓；對(duì)于內(nèi)窺鏡檢查或科學(xué)檢查選擇熒光色素。根據(jù)本發(fā)明，惡性疾病是指那些與健康組織相比，被影響的組織顯示出分化水平上的變化、侵入性的生長(zhǎng)或?qū)⑵浣M織擴(kuò)散到血流或淋巴系統(tǒng)中的疾病。所有的神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤都?xì)w于這個(gè)范疇，特別是那些胃腸道的腫瘤，特別是胰島瘤、支氣管癌、胰腺癌以及所有其它與GLP-I受體的過(guò)量表達(dá)相關(guān)的惡性疾病。根據(jù)本發(fā)明，良性疾病是指那些其特征為被影響的組織沒(méi)有明顯地失去其分化水平、不顯示出侵入性生長(zhǎng)、沒(méi)有任何組織轉(zhuǎn)移到血流或淋巴系統(tǒng)中的疾病。這包括例如糖尿病以及飲食紊亂或精神紊亂。肽衍生物和嵌合肽的特征來(lái)自GLP-I、exendin-3 禾Π exendin-4 的肽衍生物以及來(lái)自 GLP-1、exendin-3 或exendin-4的嵌合肽的發(fā)現(xiàn)是令人吃驚的，它們?cè)贑末端通過(guò)氨基被修飾，在N末端與 GLP-I受體鍵合。它們甚至顯示出與GLP-I受體的高度親和性，如同天然的肽一樣。使用荷瘤的無(wú)毛小鼠進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)顯示出在陽(yáng)性腫瘤組織的GLP-I受體中有特異性吸收。本發(fā)明的肽衍生物以及嵌合肽可以是未標(biāo)記的，也可以在C末端的氨基通過(guò)螯合劑被標(biāo)記為用于良性和惡性疾病的診斷和治療的藥劑，GLP-I受體的表達(dá)在其上述疾病中發(fā)揮作用。這里標(biāo)記的類型主要包括放射性金屬、MRI造影劑、熒光發(fā)色團(tuán)或化療劑。標(biāo)記的過(guò)程和方法對(duì)于專業(yè)人員來(lái)說(shuō)是熟知的(例如DE 69018226T2)，它可以通過(guò)例如結(jié)合放射性核素、無(wú)磁性的金屬和其它MRI造影劑或熒光染料來(lái)進(jìn)行；這意味著本發(fā)明的肽衍生物以及嵌合肽與受體的鍵合或內(nèi)化沒(méi)有受到損壞，與GLP-I受體鍵合的N末端保持游離(未連接)。原始的肽的氨基酸序列GLP-I H-His-Asp-Glu-Phe-Glu-Arg-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly-OH 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37Exendin-3 H-His-Ser-Asp-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-
19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37Pro-Ser-NH2 38 39Exendin-4 H-His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 Pro-Ser-NH2
38 39根據(jù)本發(fā)明，產(chǎn)生了下列的GLP-I (1-37)、exendin-3和exendin-4肽衍生物GLP-I (x-y) A卜37Exendin-3 (z-k) A1"40Exendin-4 (z-k) A 卜40其中χ表示GLP-I氨基酸序列的1-36位氨基酸y表示GLP-I氨基酸序列的2-37位氨基酸ζ表示exendin-3或exendin-4氨基酸序列的1_38位氨基酸k表示exendin-3或exendin-4氨基酸序列的2_39位氨基酸A表示由一個(gè)或多個(gè)氨基酸或其衍生物組成的連接基團(tuán)，作為信號(hào)分子或與信號(hào)分子鍵合或穩(wěn)定它們。對(duì)于A來(lái)說(shuō)，優(yōu)選位于C末端，氨基酸優(yōu)選為賴氨酸或另一個(gè)具有游離氨基的氨基酸例如鳥(niǎo)氨酸、或者是具有游離氨基的有機(jī)基團(tuán)，其上結(jié)合有螯合劑，用于用放射性核素或MRI造影劑、熒光色素或化療劑進(jìn)行標(biāo)記?？梢允褂玫尿蟿┌―TPA( 二亞乙基三胺五乙酸)、或N，N-雙[雙(羧甲基)氨基]-乙基)甘氨酸)、或D0TA(1，4，7，10-四氮雜環(huán)十二烷_(kāi)1，4，7，10-四乙酸)、 HYNIC (6-吡啶胼-3-碳酸)、MAG3(巰基乙?；?甘氨酰甘氨酰甘氨酸)、N4 (1，4，8，11-四氮雜十一烷)以及上述螯合劑的所有已知的衍生物。指數(shù)表示在氨基酸序列中連接基團(tuán)可以被發(fā)現(xiàn)的可選位置。GLP-I (x-y) A卜37這里包含了不同長(zhǎng)度的GLP-I衍生物，其中χ可以取1到36的數(shù)目，y可以取2 到37的數(shù)目，χ總是小于y。A是可以放在任何位置的連接基團(tuán)，但是優(yōu)選位于C末端并比 y前1位。優(yōu)選情況下，連接基團(tuán)是氨基賴氨酸。Exendin-3 (z_k) A1-40這里包含了不同長(zhǎng)度的exendin-3衍生物，其中ζ可以取1到38的數(shù)目，k可以取2到39的數(shù)目，ζ總是小于k。A是可以放在任何位置的連接基團(tuán)，但是優(yōu)選位于C末端并比k前1位。優(yōu)選情況下，連接基團(tuán)是氨基賴氨酸。Exendin-4 (z-k) A 卜40這里包含了不同長(zhǎng)度的exendin-4衍生物，其中ζ可以取1到38的數(shù)目，k可以取2到39的數(shù)目，ζ總是小于k。A是可以放在任何位置的連接基團(tuán)，但是優(yōu)選位于C末端并比k前1位。優(yōu)選情況下，連接基團(tuán)是氨基賴氨酸。
下列的肽衍生物是特別優(yōu)選的1.MC 10 (DTPA-Lys37)GLPl (7-36)酰胺2. MC 13 (DTPA-Lys40) exendin-3 酰胺3. MC 11: (DTPA-Lys40) exendin-4 酰胺合成是在例如 P印tide Specialty Laboratories GmbH 公司按照 Merrifield 的方法進(jìn)行的，并通過(guò)HPLC純化。MC 10 (DTPA-Lys37) GLPl (7-36)酰胺由 GLP-1 的 7-36 位氨基酸，在 C 末端帶有具有游離氨基的氨基酸、優(yōu)選為37位的賴氨酸以及螯合劑DTPA組成。MC 13 (DTPA-Lys40) exendin-3酰胺由exendin-3完整的氨基酸，在C末端帶有具有游離氨基的氨基酸、優(yōu)選為40位的賴氨酸以及螯合劑DTPA組成。MC 11 (DTPA-Lys4。) exendin-4酰胺由exendin-4完整的氨基酸，在C末端帶有具有游離氨基的氨基酸、優(yōu)選為40位的賴氨酸以及螯合劑DTPA組成。按照本發(fā)明產(chǎn)生了下列來(lái)自GLP-I (1-37)和exendin-3或exendin-4的嵌合肽GLP-I (x-y) exendin-3 (z_k) A1-75GLP-I (x-y) exendin-4 (z_k) A1-75Exendin-3 (z_k) GLP-I (χ-y) A1-75Exendin-4 (z_k) GLP-I (χ-y) A1-75說(shuō)明如下 χ表示GLP-I氨基酸序列的1-36位氨基酸y表示GLP-I氨基酸序列的2_37位氨基酸ζ表示exendin-3或exendin-4氨基酸序列的1_38位氨基酸k表示exendin-3或exendin-4氨基酸序列的2_39位氨基酸A表示由一個(gè)或多個(gè)氨基酸或其衍生物組成的連接基團(tuán)，作為信號(hào)分子或與信號(hào)分子鍵合或穩(wěn)定它們。對(duì)于A來(lái)說(shuō)，優(yōu)選位于C末端，氨基酸優(yōu)選為賴氨酸或另一個(gè)具有游離氨基的氨基酸例如鳥(niǎo)氨酸、或者是具有游離氨基的有機(jī)基團(tuán)，其上結(jié)合有螯合劑，用于用放射性核素或MRI造影劑、熒光染料或化療劑進(jìn)行標(biāo)記?？梢允褂玫尿蟿┌―TPA( 二亞乙基三胺五乙酸)、或N，N-雙[雙(羧甲基)氨基]-乙基)甘氨酸)、或D0TA(1，4，7，10-四氮雜環(huán)十二烷_(kāi)1，4，7，10-四乙酸)、 HYNIC (6-吡啶胼-3-碳酸)、MAG3(巰基乙?；?甘氨酰甘氨酰甘氨酸)、N4 (1，4，8，11-四氮雜十一烷)以及上述螯合劑的所有已知的衍生物。指數(shù)表示在氨基酸序列中連接基團(tuán)可以被發(fā)現(xiàn)的可選位置。GLP-I (x-y) exendin-3 (z_k) A1-75這里包含了來(lái)自GLP-I和exendin-3的嵌合肽，其中1_36位氨基酸來(lái)自GLP-1，其后的氨基酸來(lái)自exendin-3的1_39位氨基酸。A是可以放在任何位置的連接基團(tuán)，但是優(yōu)選位于C末端并比來(lái)自GLP-I和exendin-3的氨基酸數(shù)目靠前1位，優(yōu)選情況下，連接基團(tuán)
是氨基賴氨酸。GLP-I (x-y) exendin-4 (z_k) A1-75這里包含了來(lái)自GLP-I和exendin-4的嵌合肽，其中1_36位氨基酸來(lái)自GLP-1，其后的氨基酸來(lái)自exendin-4的1_39位氨基酸。A是可以放在任何位置的連接基團(tuán)，但是優(yōu)選位于C末端并比來(lái)自GLP-I和exendin-4的氨基酸數(shù)目前1位，優(yōu)選情況下，連接基團(tuán)是
氨基賴氨酸。Exendin-3 (z_k) GLP-I (χ-y) A1-75這里包含了來(lái)自exendin-3和GLP-I的嵌合肽，其中ζ可以取1-38的數(shù)目，k可以取2-39的數(shù)目，而ζ總是小于k。A是可以放在任何位置的連接基團(tuán)，但是優(yōu)選位于C末端并比y前1位。優(yōu)選情況下，連接基團(tuán)是氨基賴氨酸。Exendin-4 (z_k) GLP-I (χ-y) A1-75這里包含了來(lái)自exendin-4和GLP-I的嵌合肽，其中ζ可以取1-38的數(shù)目，k可以取2-39的數(shù)目，而ζ總是小于k。A是可以放在任何位置的連接基團(tuán)，但是優(yōu)選位于C末端并比y前1位。優(yōu)選情況下，連接基團(tuán)是氨基賴氨酸。嵌合的GLP-I (χ-y) exendin-3 (z-k) A卜75 或 GLP-1 (χ-y) exendin-4 (z_k) A卜75 肽的例子是 MC12,由 GLP-I (7-36) exendin (33-39) Lys 酰胺(由 P印tide Specialty Laboratories GmbH公司按照Merrifield的方法進(jìn)行合成，并通過(guò)HPLC純化。)組成。MC 12 (Ser37, Gly38, Ala39, Pro40, Pro41，Pro42，Ser43, DTPA-Lys44 酰胺)GLPl (7-36)MC12由GLP-I (7-36)完整的氨基酸序列，在C末端帶有一個(gè)氨基，優(yōu)選在44位帶有賴氨酸以及螯合劑DTPA，以及來(lái)自exendin (33-39) Lys酰胺的7個(gè)氨基酸的鏈組成。因此產(chǎn)生了嵌合肽 GLP-I (7-36) exendin (33-39) Lys 酰胺。對(duì)于專業(yè)技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，顯然存在不同長(zhǎng)度的來(lái)自GLP-1、exendin-3和 exendin-4的肽衍生物，以及不同長(zhǎng)度的來(lái)自GLP-l、exendin_3和exendin-4的嵌合肽，它們含有它們所基于的GLP-I、exendin-3和exendin-4的氨基酸序列的各種不同組合?；诒景l(fā)明的、在C末端被氨基所修飾并通過(guò)N末端鍵合在GLP-I受體上的、來(lái)自 GLP-I、exendin-3 和 exendin-4 的肽衍生物以及來(lái)自 GLP-l、exendin_3 和 exendin-4 的嵌合肽，也包括在一個(gè)或多個(gè)位置上可以與上述的肽GLP-I、exendin-3和exendin-4區(qū)分開(kāi)的、并與這些序列具有高度同源性的分子。此處的同源性是指至少40%的序列一致性、特別是60%的序列一致性、優(yōu)選超過(guò)80%、特別優(yōu)選超過(guò)90%的序列一致性。與上述氨基酸序列的偏差可能通過(guò)刪除、取代和/或插入產(chǎn)生。 此外，本發(fā)明的來(lái)自GLP-I、exendin-3或exendin-4的嵌合肽也可以被生產(chǎn)成在 C末端沒(méi)有任何修飾。它們被特別用于生產(chǎn)治療糖尿病的藥劑。GLP-I (χ-y) exendin-3 (z_k)GLP-I (χ-y) exendin-4 (z_k)Exendin-3(z_k)GLP-I(χ-y)Exendin-4 (z_k) GLP-I (x-y)MC 20 (Ser33, Gly34, Ala35, Pro36, Pro37, Pro38, Ser39) exendin GLPl (7-36)MC20由GLP-I (7-36)完整的氨基酸序列，在C末端帶有來(lái)自exendin (33-39)的7 個(gè)氨基酸的鏈組成。因此產(chǎn)生了未修飾的嵌合肽GLP-I (7-36) exendin (33-39)。肽衍生物和嵌合肽的標(biāo)記將本發(fā)明的肽衍生物以及嵌合肽溶解在適當(dāng)?shù)姆€(wěn)定緩沖液中以穩(wěn)定金屬，例如優(yōu)選以大約IO3M的濃度溶解在pH 5.4的0. 5M乙酸鈉中。此外，為了穩(wěn)定熒光色素優(yōu)選使用乙酸銨緩沖液；為了穩(wěn)定化療劑和造影劑優(yōu)選使用生理緩沖液。
標(biāo)記發(fā)生在連接基團(tuán)A上，通過(guò)結(jié)合放射性核素、MRI造影劑、熒光色素或化療劑來(lái)進(jìn)行。根據(jù)應(yīng)用是體內(nèi)的還是體外的來(lái)使用不同的方法。下面是用于共價(jià)或復(fù)合結(jié)合的放射性核素
權(quán)利要求
1.exendin-3的肽衍生物，其中在C末端有氨基修飾，并且其中在N端與GLP-I受體鍵口 O
2.權(quán)利要求1中的exendin-3的肽衍生物，與以下的肽exendin-3的氨基酸序列有 80%以上的序列同一性H-His-Ser-Asp-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17A Ia-Val-Arg-Leu-Phe-IIe-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-GIy-GIy-Pro-Ser-Ser-GIy-Al a-18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35Pro-Pro-Pro-Ser-NH236 37 38 39。
3.權(quán)利要求2的exendin-3的肽衍生物，其中的肽衍生物含有連接基團(tuán)A或其衍生物， 所述連接基團(tuán)A位于C末端并且包含具有游離氨基的氨基酸。
4.權(quán)利要求1中的exendin-3的肽衍生物，其中它們基于exendin-3(z_k) A14q 其中χ ζ表示exendin-3氨基酸序列的1_38位氨基酸， k表示exendin-3氨基酸序列的2_39位氨基酸，A表示包含一個(gè)或多個(gè)氨基酸或其衍生物的連接基團(tuán)，作為信號(hào)分子或與信號(hào)分子鍵合或穩(wěn)定它們，其中冪表示在氨基酸序列中連接基團(tuán)可以被發(fā)現(xiàn)的位置。
5.權(quán)利要求4中的exendin-3的肽衍生物，其中連接基團(tuán)A優(yōu)選位于C末端并代表氨基。
6.權(quán)利要求3到5中的exendin-3的肽衍生物，其中連接基團(tuán)A優(yōu)選為賴氨酸。
7.權(quán)利要求3到6中的exendin-3的肽衍生物，其中連接基團(tuán)A是氨基酸例如鳥(niǎo)氨酸， 或具有游離胺的有機(jī)基團(tuán)。
8.權(quán)利要求3到7中的exendin-3的肽衍生物，其中螯合劑與連接基團(tuán)A結(jié)合，以便用放射性核素或MRI造影劑、熒光色素或化療劑標(biāo)記。
9.上面提到的權(quán)利要求中的exendin-3的肽衍生物，其中螯合劑是N，N-雙[雙 (羧甲基)氨基]-乙基)甘氨酸)、0(^(1，4，7，10-四氮雜環(huán)十二烷-1，4，7，10-四乙酸)、 HYNIC (6-吡啶胼-3-碳酸)、MAG3(巰基乙?；?甘氨酰甘氨酰甘氨酸)、N4 (1，4，8，11-四氮雜十一烷)以及所有已知的衍生物，優(yōu)選為DTPA( 二亞乙基三胺五乙酸)。
10.上面提到的權(quán)利要求中的exendin-3的肽衍生物，其中標(biāo)記是結(jié)合核素、MRI造影劑、熒光色素和/或化療劑。
11.上面提到的權(quán)利要求中的exendin-3的肽衍生物，其中所選的熒光色素具體來(lái)說(shuō)來(lái)自熒光素、羅丹明、香豆素、B0DIPY、嵌二萘(級(jí)聯(lián)藍(lán))、熒光黃、藻膽蛋白、花青苷、 AlexaFluoro、俄勒R綠、德克薩斯紅及其衍生物。
12.上面提到的權(quán)利要求中的exendin-3的肽衍生物，其中所選的核素具體來(lái)說(shuō)來(lái)自 F-18、Cu-64、Cu-67、Ga_67、Ga_68、Y—86、Y—90、Tc_99m、In—Ill、1—123、1—124、1—131、 Lu-177、Re-186、Re-188、Pt_193m、Pt_195m、Ac-225、At-211、Bi-213、Sm-153 或 Er-169。
13.上面提到的權(quán)利要求中的來(lái)自exendin-3的肽衍生物，其中所選的MRI造影劑具體來(lái)說(shuō)來(lái)自釓、錳、鐵、銪、銅、鎳、鉻、鐠、鏑或鈥或其化合物或全氟化碳、或F-19、H-1、P-31、 Na-19。
14.上面提到的權(quán)利要求中的來(lái)自exendin-3的肽衍生物，其中所選的化療劑具體來(lái)說(shuō)來(lái)自烷基化試劑、乙基亞胺、亞硝化單胞菌素(N.ureae)、氮芥子氣衍生物、葉酸類似物、嘌呤類似物、嘧啶類似物、鬼臼素衍生物、紫杉烷(taxane)、vincaalcaloide、蒽環(huán)霉素 (anthracycline)、其它抑制細(xì)胞的抗生素、鉬化合物、喜樹(shù)堿(campthotecin)衍生物、激素、生長(zhǎng)因子、干擾素或白介素或細(xì)胞抑制物質(zhì)或細(xì)胞毒性物質(zhì)。
15.上面提到的權(quán)利要求中的exendin-3的肽衍生物，其中經(jīng)由結(jié)合核素為體外應(yīng)用而標(biāo)記是通過(guò)用nInCL3飽和鍵合位點(diǎn)來(lái)進(jìn)行的。
16.上面的權(quán)利要求中提到的exendin-3的肽衍生物在生產(chǎn)診斷和治療良性和惡性疾病的藥劑中的應(yīng)用，所述疾病中GLP-I受體的表達(dá)發(fā)揮作用。
17.權(quán)利要求1到15中的exendin-3的肽衍生物在確定組織中產(chǎn)胰島素細(xì)胞的密度中的應(yīng)用。
18.權(quán)利要求1到15中的來(lái)自exendin-3的肽衍生物在確定GLP-I受體的表達(dá)或它們的密度中的應(yīng)用。
19.用于良性和惡性疾病的診斷和治療的藥劑，所述疾病中GLP-I受體的表達(dá)發(fā)揮作用，其特征是其中含有標(biāo)記的權(quán)利要求1的exendin-3的肽衍生物。
20.用于良性和惡性疾病的診斷和治療的藥劑，所述疾病中GLP-I受體的表達(dá)發(fā)揮作用，其中其含有未標(biāo)記的權(quán)利要求1的exendin-3的肽衍生物。
21.權(quán)利要求19的藥劑，其中標(biāo)記包括結(jié)合核素、MRI造影劑、熒光色素和/或化療劑。
22.權(quán)利要求19和20中的藥劑用于體外良性和惡性疾病的診斷和治療的應(yīng)用，所述疾病中GLP-I受體的表達(dá)發(fā)揮作用。
23.權(quán)利要求19和20中的藥劑用于體外神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤(NET)、特別是胰島瘤和小細(xì)胞支氣管癌的診斷和治療的應(yīng)用。
24.權(quán)利要求19中的藥劑用于體外閃爍照相術(shù)、PET、SPECT,MRI、光學(xué)診斷、受體介導(dǎo)的化學(xué)療法、受體介導(dǎo)的細(xì)胞抑制或細(xì)胞毒性療法和放射性肽療法的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及與GLP-1和腸促胰島素類似物(exendin)有關(guān)的發(fā)明。具體而言，本發(fā)明涉及衍生自GLP-1(類胰高血糖素肽1)和exendin-3和/或exendin-4的肽，其結(jié)合GLP-1受體并可以在標(biāo)記或未標(biāo)記的情況下用于生產(chǎn)惡性和致命疾病的診斷和治療裝置，在上述疾病中GLP-1受體的表達(dá)起著作用。
文檔編號(hào)A61P35/00GK102358752SQ20111011484
公開(kāi)日2012年2月22日 申請(qǐng)日期2005年8月26日 優(yōu)先權(quán)日2004年9月3日
發(fā)明者布克哈德·J·戈克, 托馬斯·貝爾, 馬丁·戈特哈特, 馬丁·貝埃 申請(qǐng)人:菲利普斯大學(xué)馬爾堡