使用Wnt途徑結(jié)合劑來(lái)治療神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤的方法
【專利說(shuō)明】使用Wnt途徑結(jié)合劑來(lái)治療神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤的方法 相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用
[0001] 本申請(qǐng)案主張于2012年10月23日提出的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)案第61/717, 294號(hào)及 2013年2月4日提出的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)案第61/760, 529號(hào)的優(yōu)先權(quán)，各案以引用方式整體納 入此處。
技術(shù)領(lǐng)域
[0002] 本發(fā)明的領(lǐng)域大抵關(guān)于治療神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤的方法。在一實(shí)施方式中，該方法包 含對(duì)需要治療神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤的個(gè)體投予治療有效劑量的Wnt拮抗劑。
【背景技術(shù)】
[0003] 癌癥是發(fā)達(dá)國(guó)家的主要死因之一，光是在美國(guó)每年就有超過一百萬(wàn)人被診斷出癌 癥而且有500, 000例死亡。一般預(yù)期每3人中超過1人會(huì)在有生之年發(fā)展出某些形式的癌。 癌癥有超過200種不同的種類，其中四種一乳癌、肺癌、結(jié)直腸癌及前列腺癌一占所有新病 例的一半以上（Jemal et al.，2003, Cancer J. Clin. 53 :5_26) 〇
[0004] fct信號(hào)傳導(dǎo)途徑已被認(rèn)為是有效的癌治療標(biāo)靶。Wnt信號(hào)傳導(dǎo)途徑是胚胎模式 形成、后胚胎組織維持及干細(xì)胞生物學(xué)的重要調(diào)節(jié)因子之一。更特別地，fct信號(hào)在細(xì)胞 極性的產(chǎn)生和細(xì)胞命運(yùn)決定包括干細(xì)胞族群自我更新扮演重要角色。未經(jīng)調(diào)節(jié)的fct途 徑活化與多種人癌癥有關(guān)，其可改變腫瘤細(xì)胞的發(fā)育命運(yùn)以使彼等維持在未經(jīng)分化及增 生狀態(tài)。因此癌的發(fā)生可藉由篡奪控制干細(xì)胞正常發(fā)育及組織修復(fù)的穩(wěn)態(tài)機(jī)制進(jìn)行（于 Reya&Clevers, 2005, Nature, 434 :843 ;Beachy et al.，2004, Nature, 432 :324 中回顧）〇
[0005] Wnt信號(hào)傳導(dǎo)途徑首先在果幡發(fā)育突變無(wú)翅（wg)以及小鼠原致癌基因 int-1 (現(xiàn) 稱Wntl)中闡述（Nusse&Varmus, 1982, Cell, 31 :99-109 ;Van Ooyen&Nusse, 1984, Cell, 39 : 233-40 ;Cabrera et al.，1987, Cell，50 :659-63 ;Rijsewijk et al.，1987, Cell，50 : 649-57)。Wnt基因編碼分泌型脂肪修飾糖蛋白，其中19種已在哺乳動(dòng)物中識(shí)別。這些 分泌型配體活化由卷曲（Fzd)受體家族成員及低密度脂蛋白（LDL)受體相關(guān)蛋白5或 6(LPR5/6)組成的受體復(fù)合體。該等Fzd受體為G蛋白偶合受體（GPCR)超家族的七個(gè) 跨膜結(jié)構(gòu)域蛋白，且包含具有10個(gè)保守性半胱胺酸的大型胞外N端配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域，稱 為多半胱氨酸區(qū)（CRD)或Fri結(jié)構(gòu)域。共有十種人FZD受體：FZDl至10。不同的FZD CRD 對(duì)特定 Wnt 有不同的結(jié)合親和性（Wu&Nusse, 2002, J. Biol. Chem. 277 :41762-9)，F(xiàn)zd 受體已被分成活化下述的典型β-連環(huán)蛋白途徑者及活化非典型途徑者（Miller et al.，1999, Oncogene, 18 :7860-72)。為了形成與該FZD配體結(jié)合的受體復(fù)合物，F(xiàn)ZD受體與 LRP5/6交互作用，LRP5/6為具有被六個(gè)YWTD氨基酸重復(fù)分開的四個(gè)EGF樣胞外域的單次 穿膜跨膜蛋白（Johnson et al·，2004, J. Bone Mineral Res. 19 :1749) 〇
[0006] Wnt/β -連環(huán)蛋白信號(hào)傳導(dǎo)途徑已知與胃腸類癌瘤的發(fā)生有關(guān)。Fujimori et al.，Cancer Res. 61(18) :6656-9(2001)。也在胃腸類癌瘤中觀察到β-連環(huán)蛋白的核轉(zhuǎn)位 但不見 β-連環(huán)蛋白及APC突變。Su et al·，Ann. Surg. Oncol. 13 (12) :1604-9 (2006)。以免 疫組織化學(xué)及直接定序兩種方法研宄72例胃腸類癌瘤的β -連環(huán)蛋白。在57例（79. 2 % ) 中觀察到β-連環(huán)蛋白累積于細(xì)胞質(zhì)及/或細(xì)胞核。亦于27例（37.5% )檢測(cè)到β-連 環(huán)蛋白的外顯子3突變，及1例（1.4%)的APC突變。Su等亦報(bào)告對(duì)于91例胃腸類癌瘤 的調(diào)查，為了比較起見，26例胃腸外類癌瘤藉由免疫組織化學(xué)檢測(cè)β -連環(huán)蛋白及直接定 序該連環(huán)蛋白基因的外顯子3及該APC基因的外顯子15。β-連環(huán)蛋白的細(xì)胞質(zhì)累積 及/或核轉(zhuǎn)位被發(fā)現(xiàn)于27例胃腸類癌瘤（29.7%)但不見于任何胃腸外類癌瘤。不論是 β -連環(huán)蛋白或APC基因突變皆未于β -連環(huán)蛋白的核表達(dá)的任何病例中檢測(cè)到。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明提供治療神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤的方法。因此在一態(tài)樣中，本發(fā)明提供抑制神經(jīng) 內(nèi)分泌腫瘤生長(zhǎng)的方法，其包含使該神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤與有效量的fct拮抗劑接觸。在另一 態(tài)樣中，本發(fā)明提供抑制神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤細(xì)胞增生的方法，其包含使該神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤細(xì) 胞與有效量的Wnt拮抗劑接觸。在另一態(tài)樣中，本發(fā)明提供減少神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤細(xì)胞的腫 瘤發(fā)生性的方法，其包含使該神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤細(xì)胞與有效量的fct拮抗劑接觸。在另一態(tài) 樣中，本發(fā)明提供誘導(dǎo)神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤細(xì)胞分化的方法，其包含使該神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤細(xì)胞 與有效量的fct拮抗劑接觸。在另一態(tài)樣中，本發(fā)明提供抑制神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤生長(zhǎng)的方法， 其包含對(duì)需要抑制神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤生長(zhǎng)的個(gè)體投予治療有效量的fct拮抗劑。在另一態(tài)樣 中，本發(fā)明提供抑制神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤細(xì)胞增生的方法，其包含對(duì)需要抑制神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤 細(xì)胞增生的個(gè)體投予治療有效量的fct拮抗劑。在另一態(tài)樣中，本發(fā)明提供治療神經(jīng)內(nèi)分 泌癌的方法，其包含對(duì)需要治療神經(jīng)內(nèi)分泌癌的個(gè)體投予治療有效量的fct拮抗劑。在某 些實(shí)施方式中，該個(gè)體系人個(gè)體。
[0008] 在前述各種態(tài)樣或?qū)嵤┓绞降奶囟▽?shí)施方式以及本說(shuō)明書中他處所述的其他態(tài) 樣及/或?qū)嵤┓绞街校撋窠?jīng)內(nèi)分泌腫瘤系低惡性度、中惡性度或高惡性度神經(jīng)內(nèi)分泌腫 瘤。在其他實(shí)施方式中，該神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤系功能性神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤或非功能性神經(jīng)內(nèi)分 泌腫瘤。在其他實(shí)施方式中，該神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤系選自胃腸胰腺神經(jīng)內(nèi)分泌瘤、類癌瘤、嗜 鉻細(xì)胞瘤、副神經(jīng)節(jié)瘤、甲狀腺髓質(zhì)癌、肺神經(jīng)內(nèi)分泌瘤及胸腺神經(jīng)內(nèi)分泌瘤。在其他實(shí)施 方式中，該神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤系類癌瘤或胰腺神經(jīng)內(nèi)分泌瘤。
[0009] 在前述各種態(tài)樣或?qū)嵤┓绞降奶囟▽?shí)施方式以及本說(shuō)明書中他處所述的其他態(tài) 樣及/或?qū)嵤┓绞街校揥nt詰抗劑系抗體。在其他實(shí)施方式中，該Wnt詰抗劑系與至少一 種人Wnt特異性結(jié)合的抗體。在其他實(shí)施方式中，該Wnt拮抗劑系與至少一種人卷曲受體 (FZD)特異性結(jié)合的抗體。在其他實(shí)施方式中，該Wnt拮抗劑系可溶性FZD受體。
[0010] 在前述各種態(tài)樣或?qū)嵤┓绞降奶囟▽?shí)施方式以及本說(shuō)明書中他處所述的其他態(tài) 樣及/或?qū)嵤┓绞街?，該fct拮抗劑系與至少一種人卷曲受體（FZD)特異性結(jié)合的抗體。在 其他實(shí)施方式中，該抗體與至少一種人FZD的胞外域特異性結(jié)合。在其他實(shí)施方式中，該抗 體與選自？201、？202、？205、？207或？208的人？20特異性結(jié)合。在其他實(shí)施方式中，該抗體 與FZD7特異性結(jié)合。在其他實(shí)施方式中，該抗體與超過一種人FZD特異性結(jié)合。在其他實(shí) 施方式中，該抗體與選自FZD1、FZD2、FZD5、FZD7或FZD8中三種或超過三種人FZD特異性 結(jié)合。在其他實(shí)施方式中，該抗體與選自FZD1、FZD2、FZD5、FZD7或FZD8中超過一種人FZD 特異性結(jié)合。在其他實(shí)施方式中，該抗體與FZDI、FZD2、FZD5、FZD7及FZD8特異性結(jié)合。
[0011] 在其他實(shí)施方式中，該抗體阻斷配體與FZD結(jié)合。在其他實(shí)施方式中，該抗體阻斷 Wnt與FZD結(jié)合。在其他實(shí)施方式中，該抗體阻斷FZD的活化。
[0012] 在其他實(shí)施方式中，該抗體包含：（1)包含GFTFSHYTLS(SEQ ID N0:31)的重鏈 CDR1、包含 VIS⑶GSYTYYADSVKG(SEQ ID N0:32)的重鏈 CDR2 及包含 NFIKYVFAN(SEQ ID N0:33)的重鏈 CDR3,及 / 或（2)(a)包含 S⑶NIGSFYVH(SEQ ID N0:34)的輕鏈 CDR1、包含 DKSNRPSG(SEQ ID N0:35)的輕鏈 CDR2 及包含 QSYANTLSL(SEQ ID N0:36)的輕鏈 CDR3;或 (b)包含 S⑶KLGKKYAS(SEQ ID N0:41)的輕鏈 CDR1、包含 EKDNRPSG(SEQ ID N0:42)的輕 鏈⑶R2及包含SSFAGNSLE(SEQ ID N0:43)的輕鏈⑶R3。在其他實(shí)施方式中，該抗體包含： 包含SEQ ID NO :37的氨基酸序列的VH ;及/或包含SEQ ID NO :38或44的氨基酸序列的 VL。在其他實(shí)施方式中，該抗體包含：包含SEQ ID NO :39的氨基酸序列的重鏈；及/或包 含SEQ ID NO :40或45的氨基酸序列的輕鏈。
[0013] 在其他實(shí)施方式中，該抗體系單克隆抗體。在其他實(shí)施方式中，該抗體系重組抗 體、嵌合抗體、人源化抗體、人抗體或抗體片段。在其他實(shí)施方式中，該抗體系單特異性抗體 或雙特異性抗體。在其他實(shí)施方式中，該抗體系IgA、IgD、IgE、IgG或IgM抗體。在其他實(shí) 施方式中，該抗體系IgGl或IgG2抗體。
[0014] 在其他實(shí)施方式中，該Wnt詰抗劑系0MP-18R5 (又稱為vantictumab)。
[0015] 在前述各種態(tài)樣或?qū)嵤┓绞降奶囟▽?shí)施方式以及本說(shuō)明書中他處所述的其他態(tài) 樣及/或?qū)嵤┓绞街?，該Wnt拮抗劑系可溶性FZD受體。在其他實(shí)施方式中，該可溶性FZD 受體與Wnt結(jié)合。在其他實(shí)施方式中，該可溶性受體包含人FZD受體的胞外域的片段。在 其他實(shí)施方式中，該人FZD受體的胞外域的片段包含該人FZD受體的Fri結(jié)構(gòu)域。
[0016] 在其他實(shí)施方式中，該人FZD受體系選自FZD4、FZD5或FZD8。在其他實(shí)施方式中， 該人FZD受體系FZD8。在其他實(shí)施方式中，該FZD8Fri結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID NO :28的氨基 酸序列。
[0017] 在其他實(shí)施方式中，該可溶性受體另包含人Fc結(jié)構(gòu)域。在其他實(shí)施方式中，該人 Fc結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID NO :95的氨基酸序列。
[0018] 在其他實(shí)施方式中，該Wnt拮抗劑系0MP-54F28。
[0019] 在前述各種態(tài)樣或?qū)嵤┓绞降奶囟▽?shí)施方式以及本說(shuō)明書中他處所述的其他態(tài) 樣及/或?qū)嵤┓绞街校摲椒戆乖撃[瘤或腫瘤細(xì)胞與第二治療劑接觸，或?qū)υ搨€(gè)體 投予第二治療劑。在其他實(shí)施方式中，該第二治療劑系化學(xué)治療劑。在其他實(shí)施方式中，該 第二治療劑系激酶抑制劑、生長(zhǎng)抑素類似物或mTOR途徑抑制劑。在其他實(shí)施方式中，該第 二治療劑系舒尼替尼（sunitinib)、奧曲肽（octreotide)或依維莫司（everolimus)。在 其他實(shí)施方式中，該第二治療劑系抗體。在其他實(shí)施方式中，該第二治療劑系血管生成抑制 劑。
[0020] 本發(fā)明的態(tài)樣或?qū)嵤┓绞较狄择R庫(kù)什群組或其他選擇性形式的群組描述，本發(fā)明 不僅包含被標(biāo)示為整體的整個(gè)群組，但亦包含該群組的個(gè)別成員及該主要群組中所有可能 的亞群，且亦包含不含其中一或多個(gè)群組成員的主要群組。本發(fā)明亦設(shè)想明確排除該申請(qǐng) 專利的發(fā)明中任何群組成員之一或多者。 附圖簡(jiǎn)要說(shuō)明
[0021] 圖1A。Wnt抑制劑對(duì)神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤生長(zhǎng)的影響。在投予0MP-18R5抗FZD7抗體 之后，胰腺神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤病患的腫瘤病灶大小減少。目標(biāo)（T)及非目標(biāo)（NT)病灶大小在 0MP-18R5抗FZD7抗體治療第56天及第112天經(jīng)放射線學(xué)評(píng)估。BL表示在投予0MP-18R5 之前的病灶基準(zhǔn)期大小。
[0022] 圖IB。Wnt抑制劑對(duì)神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤生長(zhǎng)的影響。在0MP-18R5投予之前（基準(zhǔn) 期）與112天后的腫瘤病灶CT影像。
[0023] 圖1C。Wnt抑制劑對(duì)神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤生長(zhǎng)的影響。在0MP-18R5投予之前（基準(zhǔn) 期）與112天后的腫瘤病灶CT影像。第112天的腫瘤病灶顯示鈣化的放射線征候。
[0024] 圖2A。病患參與0MP-18R5第Ia期試驗(yàn)的天數(shù)。到2013年1月25日止，每位參 與0MP-18R5第Ia期試驗(yàn)的病患（η = 18)參加試驗(yàn)的天數(shù)，如該圖所示。箭頭顯示在2013 年1月25日時(shí)仍參加試驗(yàn)的病患。直線表示試驗(yàn)中的腫瘤評(píng)估日期。神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤病 患為病患003 (實(shí)施例1中的病患3)、010(實(shí)施例1中的病患10)及012 (實(shí)施例1中的病 患12)。其他參與試驗(yàn)的病患有其他類型的末期實(shí)質(zhì)腫瘤，如結(jié)直腸癌、乳癌、黑色素瘤及胰 腺癌。
[0025] 圖2Β。病患參與0MP-18R5第Ia期試驗(yàn)的天數(shù)。到2013年10月4日止，每位參 與0MP-18R5第Ia期試驗(yàn)的病患（η = 29)參加試驗(yàn)的天數(shù)，如該圖所示。箭頭顯示在2013 年10月4日時(shí)仍參加試驗(yàn)的病患。直線表示試驗(yàn)中的腫瘤評(píng)估日期。神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤病 患為病患003 (實(shí)施例1中的病患3)、010(實(shí)施例1中的病患10)、012(實(shí)施例1中的病患 12)、025及026。其他參與試驗(yàn)的病患有其他類型的末期實(shí)質(zhì)腫瘤。
[0026] 圖3Α。神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤病患參與0MP-18R5第Ia期試驗(yàn)的天數(shù)與先前治療的天 數(shù)比較。病患10 (69歲女性罹患胰腺神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤）的疾病穩(wěn)定持續(xù)參與試驗(yàn)共279天 (到2013年1月25日）。病患12 (77歲女性罹患類癌瘤）的疾病穩(wěn)定持續(xù)參與試驗(yàn)共210 天（到2〇13年1月 25日）。
[0027] 圖3Β。神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤病患參與0MP-18R5第Ia期試驗(yàn)的天數(shù)與先前治療的天數(shù) 比較。病患10在第448天退出試驗(yàn)。病患12的疾病穩(wěn)定持續(xù)參與試驗(yàn)共465天（到2013 年10月4日）。（一些先前治療的天數(shù)數(shù)據(jù)已經(jīng)校正圖3Α的稍早數(shù)據(jù)）。
【具體實(shí)施方式】
[0028] 本發(fā)明提供抑制神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤生長(zhǎng)的方法、抑制神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤細(xì)胞增生的方 法、治療神經(jīng)內(nèi)分泌癌的方法、抑制神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤轉(zhuǎn)移的方法、誘導(dǎo)神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤細(xì)胞 分化的方法、減少神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤細(xì)胞的腫瘤發(fā)生性的方法及減少癌干細(xì)胞或腫瘤起始細(xì) 胞于神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤中的頻率的方法。在一些實(shí)施方式中，此處提供的方法包含對(duì)個(gè)體投 予fct拮抗劑。在一些實(shí)施方式中，該Wnt拮抗劑系與一或多種人FZD受體特異性結(jié)合的 FZD結(jié)合劑。在其他實(shí)施方式中，該FZD結(jié)合劑系與一種人FZD受體特異性結(jié)合或與一或多 種人FZD受體結(jié)合的抗體。在一些實(shí)施方式中，該Wnt拮抗劑系與一或多種人Wnt多肽特 異性結(jié)合的fct結(jié)合劑。在一些實(shí)施方式中，該Wnt結(jié)合劑系可溶性FZD受體。在一些實(shí) 施方式中，該Wnt結(jié)合劑系抗Wnt抗體。
[0029] 具有末期神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤的人病患在末期實(shí)質(zhì)腫瘤病患的第一期臨床試驗(yàn)中經(jīng) 低劑量的0MP