聚苯乙烯板或珠，等等。 該術(shù)語還涵蓋Fab'、Fv、F(ab'） 2、和或保留對抗原的特異性結(jié)合的其它抗體片段，和單克隆 抗體?？贵w可以是單價的或二價的。
[0084] 如本文中使用的，術(shù)語"人源化免疫球蛋白"指包含不同起源的免疫球蛋白部分 的免疫球蛋白，其中至少一個部分包含人起源的氨基酸序列。例如，人源化抗體可以包含 從具有需要特異性的非人起源（諸如小鼠）的免疫球蛋白衍生的部分和從人起源的免疫 球蛋白序列衍生的部分（例如嵌合免疫球蛋白），它們通過常規(guī)技術(shù)（例如合成）化學(xué)連 接在一起或者或者使用遺傳工程技術(shù)以連續(xù)多肽制備（例如，可以表達(dá)編碼嵌合蛋白的蛋 白質(zhì)部分的DNA以生成連續(xù)的多肽鏈）。人源化免疫球蛋白的另一個例子是含有一個或多 個免疫球蛋白鏈的免疫球蛋白，所述免疫球蛋白鏈包含自非人起源的抗體衍生的CDR和自 人起源的輕鏈和/或重鏈衍生的框架區(qū)（例如具有或沒有框架變化的CDR嫁接抗體）。術(shù) 語人源化免疫球蛋白也涵蓋嵌合或CDR嫁接的單鏈抗體。參見例如Cabilly等，美國專利 No. 4, 816, 567 ;Cabilly 等，歐洲專利 No. 0, 125, 023B1 ;Boss 等，美國專利 No. 4, 816, 397 ; Boss 等，歐洲專利 No. 0, 120, 694B1 ;Neuberger, M. S.等，WO 86/01533 ;Neuberger，M. S.等，歐洲專利 No. 0, 194, 276B1 ;Winter,美國專利 No. 5, 225, 539 ;Winter,歐洲專利 No. 0,239,400B1 ;Padlan,E.A.等，歐洲專利申請No. 0,519,596A1。關(guān)于單鏈抗體，還可參 見 Ladner 等，美國專利 No. 4, 946, 778 ;Huston,美國專利 No. 5, 476, 786 ;及 Bird, R. E.等 ，Science, 242:423-426(1988))〇
[0085] 例如，可以使用合成和/或重組核酸制備編碼期望的人源化鏈的基因（例如 cDNA)來生成人源化免疫球蛋白。例如，可以使用PCR誘變法改變編碼人的或人源化的 鏈的DNA序列，諸如來自先前人源化的可變區(qū)的DNA模板來構(gòu)建編碼人源化可變區(qū)的 核酸（例如 DNA)序列（參見例如 Kamman, M.，等，Nucl. Acids Res.，17:5404 (1989)); Sato，K·，等，Cancer Research, 53:851-856(1993) ;Daugherty，B.L.等，Nucleic Acids Res.，19(9) :2471-2476(1991);及Lewis, A. P. and J. S. Crowe, Gene, 101:297-302(1991)) 〇 使用這些或其它合適的方法，也可以容易地生成變體。例如，可以誘變克隆的可變區(qū)，并 且可以選擇編碼具有期望特異性的變體的序列（例如從噬菌體文庫中；參見例如Krebber 等，美國專利 No. 5, 514, 548 ;Hoogenboom 等，WO 93/06213, 1993 年 4 月 1 日公布））。 [0086] "抗體片段"包含完整抗體的部分，例如，完整抗體的抗原結(jié)合或可變區(qū)?？贵w 片段的例子包括Fab、Fab'、F(ab'）2、和Fv片段；雙抗體（diabody);線性抗體（Zapata 等，Protein Eng. 8 (10) :1057-1062(1995));單鏈抗體分子；和自抗體片段形成的多特異 性抗體。木瓜蛋白酶對抗體的消化生成兩個各具有單個抗原結(jié)合位點的相同抗原結(jié)合片段 (稱作"Fab"片段）和殘留的"Fc"片段（反映容易結(jié)晶的能力的名稱）。胃蛋白酶處理生 成F (ab'）2片段，其具有兩個抗原結(jié)合位點，并且仍能夠交聯(lián)抗原。
[0087] "Fv"是含有完整的抗原識別和結(jié)合位點的最小限度抗體片段。此區(qū)域由緊密的 非共價連接的一個重鏈可變域和一個輕鏈可變域的二聚體組成。每個可變域的3個⑶R正 是在此構(gòu)造中相互作用以限定Vh-'二聚體的表面上的抗原結(jié)合位點。6個⑶R共同對抗 體賦予抗原結(jié)合特異性。然而，即使單個可變域（或Fv的一半，其僅包含對抗原特異性的 3個CDR)也具有識別并結(jié)合抗原的能力，盡管親和力比完整的結(jié)合位點低。
[0088] "Fab"片段也含有輕鏈的恒定域和重鏈的第一恒定域（CH1)。Fab片段與Fab'片 段的差異在于重鏈(^域的羧基端的幾個殘基的添加，包括來自抗體鉸鏈區(qū)的一個或多個 半胱氨酸。Fab' -SH是本文中Fab'的名稱，其中恒定域的半胱氨酸殘基攜帶游離的硫醇基 團。F(ab'）2抗體片段最初以成對的Fab'片段生成，所述Fab'片段具有它們之間的鉸鏈 半胱氨酸?？贵w片段的其它化學(xué)偶聯(lián)也是已知的。
[0089] 來自任何脊椎動物物種的抗體（免疫球蛋白）的"輕鏈"基于其恒定域的氨基酸 序列可以歸入兩個明顯不同的類型（稱作kappa和lambda)之一。根據(jù)其重鏈的恒定域的 氨基酸序列，免疫球蛋白可以歸入不同的類別。存在有主要的5類免疫球蛋白：IgA、IgD、 IgE、IgG、和IgM，并且這些中的幾種可以進一步分成亞類（同種型），例如IgGl、IgG2、IgG3、 IgG4、IgA 和 IgA2。
[0090] "單鏈Fv"或"sFv"抗體片段包含抗體的Vh和八域，其中這些域存在于單一多 肽鏈中。在一些實施方案中，F(xiàn)v多肽進一步包含VjP V d或之間的多肽接頭，其使sFv能 夠形成抗原結(jié)合的期望結(jié)構(gòu)。關(guān)于sFv的綜述，參見Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds. , Springer-Verlag, New York, pp. 269-315(1994) 〇
[0091] 術(shù)語"雙抗體"指具有兩個抗原結(jié)合位點的小抗體片段，該片段包含在同一多肽鏈 (Vh-VJ中相連的重鏈可變域（V h)和輕鏈可變域（')。通過使用太短以至于不能容許同一 鏈上的兩個域間配對的接頭，迫使所述域與另一條鏈的互補域配對，并且創(chuàng)建兩個抗原結(jié) 合位點。雙抗體更完整記載于例如EP404, 097 ;W0 93/11161 ;及Hollinger等（1993)?1"〇(：· Natl. Acad. Sci. USA90:6444-6448。
[0092] 如本文中使用的，術(shù)語"親和力"指兩種藥劑（例如抗體和抗原）的可逆結(jié)合的平 衡常數(shù)，并且表示為解離常數(shù)（Kd)。親和力可以比抗體對無關(guān)氨基酸序列的親和力大至少 1倍，大至少2倍，大至少3倍，大至少4倍，大至少5倍，大至少6倍，大至少7倍，大至少8 倍，大至少9倍，大至少10倍，大至少20倍，大至少30倍，大至少40倍，大至少50倍，大至 少60倍，大至少70倍，大至少80倍，大至少90倍，大至少100倍，或大至少1000倍，或更 多?？贵w對靶蛋白的親和力可以是例如約100納摩爾（nM)至約0.1 nM，約IOOnM至約1皮 摩爾（PM)，或約IOOnM至約1飛摩爾（fM)或更多。如本文中使用的，術(shù)語"親合力"指兩個 或更多個藥劑的復(fù)合物對稀釋后解離的抗性。術(shù)語"免疫反應(yīng)性"和"優(yōu)先結(jié)合"就抗體和 /或抗原結(jié)合片段而言在本文中可互換使用。
[0093] 術(shù)語"結(jié)合"指由于例如共價、靜電、疏水、和離子和/或氫鍵相互作用，包括諸如 鹽橋和水橋等相互作用引起的兩個分子間的直接聯(lián)合。主題的抗Tau抗體特異性結(jié)合Tau 多肽內(nèi)的表位。非特異性結(jié)合會指以小于約KT7M的親和力結(jié)合，例如以10-6Μ，10- 5Μ，KT4M 等的親和力結(jié)合。
[0094] 如本文中使用的，術(shù)語"⑶R"或"互補決定區(qū)"意圖指重鏈和輕鏈多 肽兩者的可變區(qū)內(nèi)找到的非連續(xù)的抗原結(jié)合位點。⑶R已經(jīng)由Kabat等，J. Biol. Chem. 252:6609-6616 (1977) ;Kabat 等，U.S. Dept, of Health and Human Services, "Sequences of proteins of immunological interest" （1991) ；by Chothia 等，J. Mol. Biol. 196:901-917(1987);及 MacCallum 等，J. Mol. Biol. 262:732-745(1996) 描述，其中限定包括在彼此比較時氨基酸殘基的重疊或子集。不過，任一限定指抗體或嫁接 抗體或其變體的CDR的應(yīng)用意圖在本文中限定并使用的術(shù)語的范圍內(nèi)。涵蓋如通過每篇上 文引用的參考文獻限定的CDR的氨基酸殘基在下文表1中列出作為比較。
[0095] 表1 :CDR 限定
[0096]
【主權(quán)項】
1. 一種分離的人源化單克隆抗體或其片段，其特異性結(jié)合Tau多肽的N端區(qū)中的表位。
2. 權(quán)利要求1的分離的人源化單克隆抗體或片段，其中所述表位是線性表位。
3. 權(quán)利要求1或2的分離的人源化單克隆抗體或片段，其中所述表位在Tau多肽的氨 基酸2-176內(nèi)。
4. 權(quán)利要求1或2的分離的人源化單克隆抗體或片段，其中所述表位在Tau多肽的氨 基酸15-24內(nèi)。
5. 前述權(quán)利要求中任一項的分離的人源化單克隆抗體或片段，其以不依賴于所述表位 內(nèi)氨基酸的磷酸化的方式特異性結(jié)合所述表位。
6. 權(quán)利要求1至4中任一項的分離的人源化單克隆抗體或片段，其中所述表位不包含 磷酸化的氨基酸。
7. 權(quán)利要求1至4中任一項的分離的人源化單克隆抗體或片段，其中所述表位不包含 硝化的氨基酸。
8. 權(quán)利要求1至4中任一項的分離的人源化單克隆抗體或片段，其中所述表位包含磷 酸化的氨基酸、硝化的氨基酸、或磷酸化的氨基酸和硝化的氨基酸兩者。
9. 一種分離的抗體，其包含人源化輕鏈框架區(qū)；和人源化重鏈框架區(qū)，其中所述分離 的抗體與包含以下的抗體競爭對Tau多肽的N端區(qū)中的表位的結(jié)合： a) 輕鏈區(qū)，其包含： i)包含SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 7的氨基酸序列的VL CDRl ; (ii) 包含SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:8的氨基酸序列的VL CDR2 ;和 (iii) 包含SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:9的氨基酸序列的VL CDR3 ;和 b) 重鏈區(qū)，其包含： (i) 包含SEQ ID NO:4或SEQ ID NO: 10的氨基酸序列的VH CDRl ; (ii) 包含SEQ ID NO:5或SEQ ID NO: 11的氨基酸序列的VH CDR2 ;和 (iii) 包含 SEQ ID NO:6 或 SEQ ID NO: 12 的氨基酸序列的 VH CDR3。
10. 權(quán)利要求9的分離的抗體，其中所述輕鏈區(qū)和所述重鏈區(qū)存在于不同的多肽中。
11. 權(quán)利要求9的分離的抗體，其中所述輕鏈區(qū)和所述重鏈區(qū)存在于單一多肽中。
12. 權(quán)利要求9至11中任一項的分離的抗體，其中所述重鏈區(qū)是同種型IgGl、IgG2、 IgG3 或 IgG4 的。
13. 權(quán)利要求9至12中任一項的分離的抗體，其中所述抗體是Fv、scFv、Fab、F(ab'）2 或 Fab'