專利名稱：治療肝素誘導(dǎo)的血小板減少癥的方法
本申請(qǐng)要求系列號(hào)為60/108，432臨時(shí)申請(qǐng)的優(yōu)先權(quán)，該臨時(shí)申請(qǐng)的申請(qǐng)日期為1998年11月13日。
本發(fā)明涉及醫(yī)藥科學(xué)，尤其是用蛋白C治療肝素誘導(dǎo)的血小板減少癥。
蛋白C是一種維生素K依賴型的絲氨酸蛋白酶，是體內(nèi)自然生成的一種凝血?jiǎng)谀^(guò)程中，它通過(guò)抑制因子Va和因子VIIIa的活性而在凝血級(jí)聯(lián)中起作用。人蛋白C以雙鏈酶原形式參與循環(huán)，但它必須先轉(zhuǎn)化成活化蛋白C，才能在內(nèi)皮細(xì)胞表面和血小板表面行使功能。活化蛋白C是通過(guò)凝血酶與凝血調(diào)節(jié)蛋白(細(xì)胞表面膜蛋白)結(jié)合成復(fù)合體后，催化雙鏈酶原的限制性水解而得到的。
在與其它蛋白聯(lián)合作用時(shí)，aPC可能起著凝血反應(yīng)中最重要的負(fù)調(diào)節(jié)因子的作用。這種負(fù)調(diào)節(jié)作用阻止了血栓的形成。除了抗凝血功能而外，aPC還可通過(guò)抑制細(xì)胞因子(如TNF和IL-1)的生成而具有抗炎癥的功效，此外，它還具有纖溶酶原的特性，使血塊更易溶解。因此，蛋白C酶系統(tǒng)代表了抗凝血、抗炎癥以及血纖維蛋白溶解作用的主要生理機(jī)制。
肝素是一種經(jīng)常使用的抗凝劑，它能催化抗凝血酶III(AT-III)發(fā)生作用，阻止血纖維蛋白的形成，從而延長(zhǎng)血液凝固的時(shí)間。肝素-抗凝血酶III復(fù)合體抑制了凝血酶和參與凝血過(guò)程的其它蛋白酶的活性。
在血管外科中，肝素的施用方式是非腸道式的，用于治療手術(shù)后的血栓形成和栓塞。在接受肝素治療的病人中，大約1％-30％(平均5％)的病人有免疫反應(yīng)，引發(fā)了肝素誘導(dǎo)的血小板減少癥(HIT)(Phillips et a1.，Annals of Pharmacotherapy，2843-45，1994)。這些副作用可能會(huì)發(fā)展成為人熟知的肝素誘導(dǎo)的血小板減少及血栓形成綜合癥(HITTS)。HITTS患者面臨著靜脈或動(dòng)脈血栓形成的危險(xiǎn)，這有可能是危及生命的。例如，下肢腫脹或局部缺血、中風(fēng)或心肌梗塞，據(jù)報(bào)道，由此引起的死亡率和主要的發(fā)病率達(dá)25％到37％(Boshkov，et al.，British Journal of Haematology，84322-328，1993)。
肝素誘導(dǎo)的血小板減少癥是一種很嚴(yán)重的由藥物誘導(dǎo)的免疫性的血小板減少病癥，這種癥狀是醫(yī)師必須應(yīng)付的。其重要性是顯而易見(jiàn)的，原因包括肝素的大量使用，血小板減少的發(fā)生頻率高，缺乏更好的抗血栓形成試劑，以及血栓形成并發(fā)癥的存在。已經(jīng)很清楚的證明肝素誘導(dǎo)的血小板減少癥是由血小板的活化和凝聚引起的，而血小板的活化和凝聚是由肝素特異性抗體誘導(dǎo)的?；罨难“寰哂泻軓?qiáng)的促凝血活性，纖維蛋白血栓(看上去是白色的，導(dǎo)致白色凝塊綜合癥)的形成正是基于這一機(jī)制(Arthur，et al.，Pathology，1782-86，1985)。肝素誘導(dǎo)的血小板減少癥的治療方法包括停止使用肝素而代之以其它的抗血栓形成藥物。不幸的是，患者之所以接受肝素治療是因?yàn)樗麄兓加醒ㄋㄈ蛴泻艽蟮幕佳ㄋㄈ目赡?，停止使用肝素就意味著他們失去了抗凝能力。停止使用肝素后，給患者施用另外的藥物，如低分子量的肝素、肝素類藥物Org 10172、蛭素或者warfarin(Ratnoff，et al.，Disorders of Hemostasis，Chapter 8，W.B.Sanders Company，Philadelphia；Laposata etal.，Arch Pathol Lab Med，22799-807，1998)。然而，因?yàn)镺rg10172和低分子量肝素與一些肝素誘導(dǎo)的血小板減少癥患者體內(nèi)的肝素特異性抗體發(fā)生交叉反應(yīng)，所以，對(duì)于許多患者來(lái)說(shuō)，這些療法都不是很有效。此外，Warfarin發(fā)揮作用需要幾天時(shí)間，而且給肝素誘導(dǎo)的血小板減少癥患者施用Warfarin會(huì)引發(fā)靜脈性下肢壞死(Warkentin et al.，Ann Intern Med.，127804-812，1997)。因此，有必要發(fā)展一種有效的治療肝素誘導(dǎo)的血小板減少癥的方法。
本發(fā)明首次描述了用蛋白C治療肝素誘導(dǎo)的血小板減少癥的方法。蛋白C，具有抗凝血活性和纖溶酶原活性，可有效治療肝素誘導(dǎo)的血小板減少癥患者體內(nèi)動(dòng)脈和靜脈血栓的形成，包括富含纖維蛋白的“白色凝塊綜合癥”。
本發(fā)明提供了一種治療肝素誘導(dǎo)的血小板減少癥的方法，該方法包括給所說(shuō)的患者施用藥學(xué)上有效量的蛋白C。
此外，本發(fā)明還提供了一種治療肝素誘導(dǎo)的血小板減少癥的方法，該方法包括給所說(shuō)的患者施用藥學(xué)上有效量的活化蛋白C，使活化蛋白C在患者血漿中的水平達(dá)到大約2ng/mL到大約300ng/mL。
正如本發(fā)明所公開(kāi)和要求保護(hù)的，為了本發(fā)明的目的，下面將對(duì)一些術(shù)語(yǔ)給予定義。
蛋白C指的是一種維生素K依賴型的絲氨酸蛋白酶，它具有抗凝血、抗炎癥的功效，并具有纖溶酶原的特性。包括從血漿中分離得到的蛋白C和人工重組制得的蛋白C，但不僅限于這些。盡管蛋白C還可以包括其它物種的或其它來(lái)源的蛋白C，這些蛋白C也具有蛋白水解活性、氨基水解活性、酯水解活性和生物活性(抗凝血、抗炎癥和纖溶酶原特性)，但是，我們?nèi)匀粌?yōu)選人蛋白C。關(guān)于蛋白C來(lái)源的實(shí)例在Gerlitz等的美國(guó)專利5,453,373和Foster等的美國(guó)專利5,516,650中有過(guò)描述，所有的教導(dǎo)都在此引入作為參考。
酶原是蛋白水解酶的非活性前體，本文中所用的蛋白C酶原指的是蛋白C的分泌型的非活性形式，不管是單鏈還是雙鏈。
活化的蛋白C或aPC指的是已經(jīng)經(jīng)過(guò)限制性蛋白水解轉(zhuǎn)化成活化形式的蛋白C酶原。盡管aPC還可以包括其它物種的或其它來(lái)源的aPC，這些aPC也具有蛋白水解活性、氨基水解活性、酯水解活性和生物活性(抗凝血、抗炎癥和纖溶酶原特性)，但是，我們?nèi)匀粌?yōu)選人蛋白C。關(guān)于蛋白C來(lái)源的實(shí)例已在上文關(guān)于蛋白C的描述中提及。
HPC--人蛋白C酶原。
r-hPC--重組人蛋白C酶原。
R-aPC--重組人活化蛋白C，通過(guò)離體活化r-hPC制得，或直接從原核細(xì)胞、真核細(xì)胞和轉(zhuǎn)基因動(dòng)物或植物中分泌得到活化形式的蛋白質(zhì)C，包括，例如從人腎293細(xì)胞中獲得酶原形式的分泌物，然后純化并活化。所需技術(shù)都是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的，在Yan的美國(guó)專利4,981,952和Cottingham，WO97/20043中都有陳述，所有教導(dǎo)都在本文引入作為參考。
從血漿分離的活化蛋白C指的是通過(guò)活化血漿HPC制得的活化蛋白C，該技術(shù)在Eibl的美國(guó)專利5,478,558中有過(guò)描述，所有的教導(dǎo)都在此引入作為參考。
連續(xù)輸注-指在一特定階段將某種溶液連續(xù)注入靜脈。
藥團(tuán)注射-指在大約120分鐘的一段時(shí)間內(nèi)注射一確定量(稱之為藥團(tuán))的藥物。
適宜的用藥形式-以低溫凍干形式或溶液形式作為治療用藥物。
單位劑量形式-指物理上離散的單位，該單位以完整的劑量形式適合于人，每一單位所含有的活性物質(zhì)的量是預(yù)先確定的，這一定量的活性物質(zhì)與適宜的藥學(xué)上的賦形劑聯(lián)用，可以達(dá)到理想的治療效果。
藥學(xué)上有劑量的-指的是本發(fā)明的一種化合物的用量，它能抑制人膿毒癥的發(fā)生。當(dāng)然，根據(jù)本發(fā)明，化合物的具體施用劑量由參與治療的醫(yī)師對(duì)具體病例的分析來(lái)確定。
本發(fā)明提供了用活化蛋白C治療肝素誘導(dǎo)的血小板減少癥的方法。蛋白C，具有抗凝血活性和纖溶酶原活性，可有效治療肝素誘導(dǎo)的血小板減少癥患者體內(nèi)動(dòng)脈和靜脈血栓的形成，包括富含纖維蛋白的“白色凝塊綜合癥”。
根據(jù)本發(fā)明，施用的蛋白C可通過(guò)本領(lǐng)域的任意一種方法或美國(guó)專利4,981,952和5,550,036中描述的方法生成或分離而得，在此引入作為參考。例如，可以從一種細(xì)胞分泌的全長(zhǎng)可溶蛋白C或具有生物活性的蛋白C的多肽變體中制得蛋白C，包括(a)構(gòu)建一個(gè)含有編碼蛋白C的DNA的載體；(b)用該載體轉(zhuǎn)染細(xì)胞；(c)在一定條件下培養(yǎng)轉(zhuǎn)染細(xì)胞，使其分泌出全長(zhǎng)可溶蛋白C或具有生物活性的蛋白C的多肽變體。而且，該細(xì)胞應(yīng)該是真核細(xì)胞。例如，哺乳動(dòng)物細(xì)胞。例如，金黃倉(cāng)鼠AV12細(xì)胞，人胚胎293細(xì)胞，或小倉(cāng)鼠腎細(xì)胞。
用于治療肝素誘導(dǎo)的血小板減少癥的蛋白質(zhì)C可以根據(jù)已知的制備藥學(xué)上有效的組合物的方法配制。例如，一個(gè)理想的制劑應(yīng)該是一種穩(wěn)定的、高純度的凍干制備物，包填充劑，如蔗糖、鹽(如氯化鈉)、緩沖液(如檸檬酸鈉)和蛋白質(zhì)C或aPC。
蛋白C以非腸道式施用，確保蛋白C以有效形式傳送到血液。施用方法是在約1小時(shí)到240小時(shí)的時(shí)間內(nèi)連續(xù)注入適當(dāng)劑量的蛋白C。
本領(lǐng)域的技術(shù)人員，根據(jù)每個(gè)病人的臨床癥狀和臨床實(shí)踐，能很容易的優(yōu)化藥學(xué)上的有效劑量和包含蛋白C的用于治療的組合物的施用方法。一般來(lái)說(shuō)，蛋白C的施用量大約為5.0μg/kg/hr-250μg/kg/hr。優(yōu)選的，用于治療HIT的蛋白C是活化蛋白C。活化蛋白C的用量大約為1.0μg/kg/hr-96μg/kg/hr。更優(yōu)選的活化蛋白C的用量大約為1.0μg/kg/hr-50μg/kg/hr。更優(yōu)選的活化蛋白C的用量大約為1.0μg/kg/hr-35μg/kg/hr。更優(yōu)選的活化蛋白C的用量大約為5.0μg/kg/hr-30μg/kg/hr。更優(yōu)選的活化蛋白C的用量大約為15μg/kg/hr-30μg/kg/hr。更優(yōu)選的活化蛋白C的用量大約為20μg/kg/hr-30μg/kg/hr。優(yōu)選的活化蛋白C的用量大約為24μg/kg/hr。最優(yōu)選的活化蛋白C的用量大約為48μg/kg/hr。適宜劑量的活化蛋白C的施用會(huì)減少與HIT相關(guān)的血栓復(fù)合物的形成。
施用的活化蛋白C在血漿中的濃度范圍大約為2ng/mL-300ng/mL，優(yōu)選濃度范圍大約為2ng/mL-200ng/mL，更優(yōu)選的濃度范圍大約為30ng/mL-150ng/mL，最優(yōu)選的濃度大約為100ng/mL。
活化蛋白C的另一種施用方式為將每小時(shí)劑量的1/3以藥團(tuán)注射的方式注入，剩下的2/3劑量以連續(xù)輸注的方式在1小時(shí)內(nèi)注入，接下來(lái)的23小時(shí)仍按每小時(shí)劑量連續(xù)注入，這樣，一天注入的劑量仍為24小時(shí)的劑量。此外，通過(guò)靜脈內(nèi)袋狀滴泵(intravenous bagdrip pump)或注射器泵以兩倍于正常速率的速率藥團(tuán)注射15分鐘，然后，以1.5倍于正常速率的速率藥團(tuán)注射45分鐘。正常速率是指已確定的每一時(shí)間段內(nèi)注入適當(dāng)劑量的治療試劑的速率，以此速率保持240小時(shí)。
本發(fā)明中蛋白C用于治療HIT就在于它為潛在的、嚴(yán)重的、逐漸變?nèi)醯奈蓙y提供了一種必需的治療方法。蛋白C的施用是很有效的，而且避免了并發(fā)癥的發(fā)生，例如，出血，中毒以及當(dāng)前使用的抗凝試劑的副作用。
下面提供的實(shí)施例僅僅是為了對(duì)發(fā)明做進(jìn)一步的闡述。本發(fā)明的范圍不應(yīng)該理解為僅僅由下面的實(shí)施例組成。
制備物1人蛋白質(zhì)C的制備重組人蛋白質(zhì)C(r-hPC)在人腎臟293細(xì)胞中產(chǎn)生，本領(lǐng)域的技術(shù)人員都應(yīng)熟悉這一技術(shù)。該技術(shù)由Yan在美國(guó)專利4,981,952中提出，全部?jī)?nèi)容在此引入作為參考。編碼蛋白質(zhì)C的基因在Bang等人的美國(guó)專利4,775,624中公開(kāi)和要求保護(hù)，全部?jī)?nèi)容在此引入作為參考。用于在293細(xì)胞中表達(dá)蛋白質(zhì)C的質(zhì)粒是在Bang等人的美國(guó)專利4,992,373中公開(kāi)的質(zhì)拉PLPC，全部?jī)?nèi)容在此引入作為參考。在歐洲專利申請(qǐng)0,445,939和Grinnell等，1987，Bio/Technology51189-1192中對(duì)質(zhì)粒pLPC的結(jié)構(gòu)也做了描述，在此引入供參考。簡(jiǎn)要的說(shuō)來(lái)，質(zhì)粒經(jīng)轉(zhuǎn)染進(jìn)入293細(xì)胞，鑒別出穩(wěn)定的轉(zhuǎn)化體，在無(wú)血清培養(yǎng)液中傳代培養(yǎng)并生長(zhǎng)。發(fā)酵之后，經(jīng)微過(guò)濾就可得到無(wú)細(xì)胞的培養(yǎng)液。
對(duì)Yan在美國(guó)專利4,981,952中提出方法稍做改進(jìn)，就可從培養(yǎng)液中分離出人蛋白質(zhì)C。在EDTA溶液中，調(diào)節(jié)澄清培養(yǎng)液的濃度，使之達(dá)到4mM，再用陰離子交換樹(shù)脂(Fast-Flow Q，pharmacia)吸附。接著用4倍體積的20mM Tris，200mM NaCl，pH7.4的溶液洗滌，再用2倍體積的20mM Tris，150mM NaCl，pH7.4的溶液洗滌，然后，用20mM Tris，150mM NaCl，10mM CaCl2，pH7.4的溶液洗脫。經(jīng)SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定，洗脫出的蛋白質(zhì)純度達(dá)95％以上。
蛋白質(zhì)的進(jìn)一步純化通過(guò)下述步驟完成在NaCl溶液中調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)濃度，使之達(dá)到3M，用疏水樹(shù)脂(Toyopearl Phenyl 650M，TosoHaas)吸收，該樹(shù)脂需用20mM Tris，3M NaCl，10mM CaCl2，pH7.4的溶液平衡。然后用2倍體積沒(méi)有CaCl2的平衡緩沖液洗滌，最后用20mM Tris，pH7.4的溶液洗脫重組蛋白質(zhì)C。
洗脫后的蛋白質(zhì)通過(guò)去除殘存的鈣而活化。重組人蛋白質(zhì)C通過(guò)金屬親和柱(Chelex-100，Bio-Rad)去除殘存的鈣，然后再次經(jīng)陰離子交換樹(shù)脂(Fast Flow Q，pharmacia)純化。這兩個(gè)柱子要按順序排列，并在20mM Tris，150mM NaCl，5mM EDTA，pH7.4的溶液中平衡。加入蛋白質(zhì)，在將Chelex-100親和柱與系統(tǒng)斷開(kāi)之前，應(yīng)用1倍體積的相同緩沖液洗滌。陰離子交換樹(shù)脂柱也應(yīng)用3倍體積的平衡緩沖液洗滌，然后再用0.4M NaCl，20mM Tris-乙酸，pH6.5的溶液洗脫。重組人蛋白質(zhì)C的濃度和重組活化蛋白質(zhì)C的濃度分別在紫外280nm(激發(fā)E0.1％＝1.81或者1.85)處檢測(cè)。
制備物2重組人蛋白C的活化在4℃，50mM HEPES，pH7.5的環(huán)境中，牛凝血酶與活化的CH-Sepharose 4B(Pharmacia)結(jié)合，該偶聯(lián)反應(yīng)在已經(jīng)準(zhǔn)備好的大約每毫升5000單位凝血酶的樹(shù)脂柱中進(jìn)行。凝血酶溶液循環(huán)過(guò)柱大約3小時(shí)，然后加入2-氨基-乙醇(MEA)，至終濃度為0.6mL/L，再循環(huán)過(guò)柱10～12小時(shí)，以確保完全阻斷樹(shù)脂上未反應(yīng)的胺。阻斷之后，用10倍體積的1M NaCl，20mM Tris，pH6.5的溶液洗滌結(jié)合了凝血酶的樹(shù)脂，以去除所有非特異性的雜蛋白，在活化緩沖液中平衡之后，進(jìn)行活化反應(yīng)。
在EDTA溶液中調(diào)節(jié)純的重組人蛋白C(r-hPC)，以螯合所有殘存的鈣，然后用20mM Tris，pH7.4的溶液或20mM Tris-乙酸，pH6.5的溶液調(diào)至濃度為2mg/mL。將該溶液通過(guò)37℃時(shí)用50mM NaCl，20mMTris，pH7.4的溶液或50mM NaCl，20mM Tris-乙酸，pH6.5的溶液平衡過(guò)的凝血酶樹(shù)脂柱。調(diào)節(jié)流速，使重組人蛋白C與凝血酶樹(shù)脂柱的接觸時(shí)間大約為20分鐘。收集洗脫液，并立即做氨基水解活性分析。如果收集到的物質(zhì)與標(biāo)準(zhǔn)的蛋白C相比沒(méi)有特異的氨基水解活性，那么讓其再過(guò)一次凝血酶樹(shù)脂柱，以激活重組人蛋白C。然后用20mM Tris，pH7.4的溶液或20mM Tris-乙酸，pH6.5的溶液將其稀釋至1∶1，以保證蛋白C在下一步使用之前維持在較低的濃度水平。
凝血酶與蛋白C的分離是通過(guò)蛋白C與陰離子交換樹(shù)脂結(jié)合來(lái)實(shí)現(xiàn)的，該陰離子交換樹(shù)脂需在活化緩沖液(20mM Tris，pH7.4的緩沖液或20mM Tris-乙酸，pH6.5的緩沖液)中用150mM NaCl平衡。在此條件下，凝血酶不與陰離子交換樹(shù)脂發(fā)生反應(yīng)，而只是通過(guò)樹(shù)脂柱流出。一旦蛋白C結(jié)合在樹(shù)脂柱上，就可用2～6倍體積的20mM平衡緩沖液洗滌，然后在5mM Tris-乙酸，pH6.5的緩沖液中或20mMTris，pH7.4的緩沖液中用0.4M NaCl一步洗脫蛋白C。用于沖洗的緩沖液越多，十二肽的去除也就越完全。從樹(shù)脂柱上洗脫下來(lái)的蛋白C可在-20℃冷凍保存，或以低壓凍干粉末的形式保存。
活化的蛋白C的抗凝活性是通過(guò)測(cè)定凝血時(shí)間的延長(zhǎng)來(lái)確定的，而凝血時(shí)間的延長(zhǎng)是激活部分凝血因子III時(shí)間的延長(zhǎng)引起的。將樣品用稀釋緩沖液(1mg/mL放射免疫分析純的牛血清白蛋白，20mMTris，pH7.4，150mM NaCl，0.02％NaN3)按梯度稀釋，使蛋白C的濃度達(dá)到125-1000ng/mL，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。在每個(gè)樣品管中，加入50μl預(yù)冷的馬血漿和50μl重組的APTT試劑(Sigma)，37℃溫育5分鐘。溫育后，向每個(gè)樣品管中加入50μl的相應(yīng)的樣品或標(biāo)準(zhǔn)物。用稀釋緩沖液代替樣品或標(biāo)準(zhǔn)物來(lái)確定基本的凝血時(shí)間，在每一樣品管中加入50μl，37℃的30mM CaCl2后，立即開(kāi)始計(jì)時(shí)。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性回歸方程計(jì)算樣品中活化蛋白C的濃度。這兒所報(bào)導(dǎo)的凝血時(shí)間是至少三次重復(fù)實(shí)驗(yàn)的平均值，包括標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。
以上的描述已足以使一個(gè)本領(lǐng)域的技術(shù)人員制備用以治療肝素誘導(dǎo)的血細(xì)胞減少癥的蛋白C。
制備物3活化蛋白C的配制活化蛋白C的穩(wěn)定凍干溶液按下述方法制備凍干含有大約2.5mg/mL活化蛋白C、15mg/mL蔗糖、20mg/mL氯化鈉和pH值介于5.5～6.5之間的檸檬酸鈉緩沖液的溶液。此外，再低溫冷凍含有大約5mg/mL活化蛋白C、30mg/mL蔗糖、38mg/mL氯化鈉和pH值介于5.5～6.5之間的檸檬酸鈉緩沖液的溶液。
蛋白C、鹽和填充劑三者的重量之比是該過(guò)程中與冷凍干燥相關(guān)的重要因子。這一比值的變化取決于蛋白C的濃度、鹽的種類和濃度，以及填充劑的種類和濃度。優(yōu)選比例為大約1份活化蛋白C、7.6份鹽和6份填充劑。
適于通過(guò)連續(xù)注入的方法使用的單位劑量的活化蛋白C溶液按下述方法配制將活化蛋白C、氯化鈉、蔗糖和檸檬酸鈉緩沖液混勻，然后取4mL該溶液轉(zhuǎn)移到單位劑量容器中并凍干，密封，儲(chǔ)存?zhèn)溆?。該單位劑量容器中?yīng)含有5～20mg的活化蛋白C，按大約0.01～0.05mg/kg/hr的劑量輸入病人體內(nèi)。
實(shí)施例1用安慰劑作對(duì)照的雙盲試驗(yàn)LY 203038用重組人活化蛋白C(rhAPC)治療肝素誘導(dǎo)的血小板減少癥(HIT)接受過(guò)肝素處理的病人中，7天內(nèi)有1％的病人患有肝素誘導(dǎo)的血小板減少癥，14天內(nèi)有3％的病人患有肝素誘導(dǎo)的血小板減少癥。即使不再接收肝素，仍有50％的患肝素誘導(dǎo)的血小板減少癥的病人出現(xiàn)靜脈血栓，偶兒也出現(xiàn)動(dòng)脈血栓。對(duì)于患肝素誘導(dǎo)的血小板減少癥的病人，肝素會(huì)導(dǎo)致血小板釋放血小板因子IV。肝素與血小板因子IV形成的復(fù)合體引發(fā)HIT-IgG的釋放，而HIT-IgG與肝素和血小板因子IV形成的復(fù)合體與血小板Fc感受器結(jié)合，從而激活了血小板。
通過(guò)釋放更多的血小板因子IV，血小板的激活能導(dǎo)致凝血酶的形成。HIT-IgG識(shí)別血小板因子IV與內(nèi)皮細(xì)胞上的硫肝素硫酸形成的復(fù)合體，引發(fā)內(nèi)皮細(xì)胞表面組織因子的表達(dá)，并引發(fā)凝血過(guò)程。血小板因子IV則通過(guò)中和肝素，不斷的形成凝血酶。
治療肝素誘導(dǎo)的血小板減少癥，不僅要停用肝素，還要防止形成血栓的后遺癥。能阻斷凝血酶合成的物質(zhì)通常都能起到這一作用，重組活化蛋白C(r-aPC)就是一種阻斷凝血酶合成的阻斷劑，它通過(guò)抑制凝血過(guò)程中因子Va和因子VIIIa的活性而阻斷凝血酶的合成。輸入重組活化蛋白C將導(dǎo)致激活部分凝血因子III的時(shí)間延長(zhǎng)，當(dāng)然，這也取決于所用重組蛋白C的劑量大小。重組蛋白C就是這樣起作用的。
本試驗(yàn)旨在表明對(duì)于肝素誘導(dǎo)的血小板減少癥患者，使用重組活化蛋白C治療，比起使用安慰劑治療，在死亡、新血栓形成以及截肢三個(gè)方面都有統(tǒng)計(jì)意義上的顯著降低。
本試驗(yàn)適用于那些通過(guò)下述方法確診的肝素誘導(dǎo)的血小板減少癥患者1)使用肝素5天或更多之后，血小板數(shù)量低于基線的50％或以于150000；2)通過(guò)分析血小板上14C標(biāo)記的5-羥色胺的釋放，對(duì)肝素依賴型的IgG進(jìn)行陽(yáng)性檢測(cè)。
服合入選HIT以及沒(méi)有例外標(biāo)準(zhǔn)的患者停止使用肝素。除了接受warfarin治療外，患者還接受90小時(shí)的安慰劑或r-aPC治療。r-aPC的用量為48μg/kg/hr，先前的試驗(yàn)證明該劑量能將aPTT提高到基線的2倍。
本研究的第一終點(diǎn)是在30天內(nèi)發(fā)生了死亡、下肢截肢和新的血栓形成的聯(lián)合終點(diǎn)。使用安慰劑的(患者)比例假定為50％。將r-aPC和安慰劑在安全性方面相對(duì)比，將發(fā)生臨床上的顯著出血作為另外的第一終點(diǎn)。本試驗(yàn)的第二終點(diǎn)為血小板恢復(fù)的時(shí)間點(diǎn)。
權(quán)利要求
1.一種治療肝素誘導(dǎo)的血小板減少癥(HIT)患者的方法，包括給所說(shuō)的患者施用藥學(xué)上有效量的蛋白C。
2.權(quán)利要求1的方法，其中蛋白質(zhì)C是人蛋白質(zhì)C酶原。
3.權(quán)利要求1的方法，其中蛋白C是活化的人蛋白C。
4.權(quán)利要求3的方法，其中活化的人蛋白C的量大約是1μg/kg/hr-96μg/kg/hr。
5.權(quán)利要求4的方法，其中活化的人蛋白C的用藥方式是連續(xù)輸注大約1-240小時(shí)。
6.一種治療有需要的患者中肝素誘導(dǎo)的血小板減少癥的方法，包括給所說(shuō)的患者施用藥學(xué)上有效量的活化蛋白C，使血漿中活化蛋白C的濃度達(dá)到大約2ng/mL-300ng/mL。
7.權(quán)利要求6的方法，其中活化蛋白C的施用方式是藥團(tuán)注射。
8.權(quán)利要求6的方法，其中活化蛋白C的施用方式是連續(xù)輸注大約1—240小時(shí)。
9.權(quán)利要求6的方法，其中活化蛋白C的施用方式是首先藥團(tuán)注射，后連續(xù)輸注。
10.權(quán)利要求9的方法，其中1/3量的活化蛋白C以藥團(tuán)注射方式給藥，使血漿中的活化蛋白C的濃度達(dá)到大約2ng/mL-300ng/mL，接下來(lái)，剩余的2/3劑量的活化蛋白C以連續(xù)輸注方式給藥。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種通過(guò)蛋白C治療肝素清導(dǎo)的血小板減少癥的方法。所要求保護(hù)的本發(fā)明提供了對(duì)潛在的嚴(yán)重的衰弱的疾病所需的治療而避免了一些并發(fā)癥如出血,毒性和現(xiàn)在所用的抗凝劑的通常的副作用。
文檔編號(hào)A61P37/06GK1326355SQ9981325
公開(kāi)日2001年12月12日 申請(qǐng)日期1999年11月10日 優(yōu)先權(quán)日1998年11月13日
發(fā)明者C·J·菲舍爾, S·C·B·顏 申請(qǐng)人:伊萊利利公司