專(zhuān)利名稱(chēng)：：rLZ-8在治療血小板減少癥中的應(yīng)用及其制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種重組靈芝免疫調(diào)節(jié)蛋白(rLZ-8)對(duì)血小板減少癥的治療用途。背錄技術(shù)1989年，由日本Kino等人第一次從赤靈芝菌絲體提取物中分離得到了一種免疫調(diào)節(jié)蛋白，即靈芝免疫調(diào)節(jié)蛋白ImmunoregulatoryProteinfromGanodermaLucidum，LZ-8)，命名為L(zhǎng)Z-8，并測(cè)定了其基因序列、氨基酸順序和免疫生理活性。蛋白質(zhì)測(cè)序表明LZ-8由IIO個(gè)氨基酸殘基組成，氨基端乙酰化。分子量為12.4kD，等電點(diǎn)為4.4。發(fā)明人之一已在另一專(zhuān)利申請(qǐng)中公開(kāi)了基因重組靈芝免疫調(diào)節(jié)蛋白的晶體空間結(jié)構(gòu)，其結(jié)構(gòu)的主要特征為包括一個(gè)N-端的形成二聚體所需的重要結(jié)構(gòu)域和一個(gè)C端的FNIII結(jié)構(gòu)域，N-端結(jié)構(gòu)域由一個(gè)a-helix(序列為2-SDTA-LIFRLAWDVK-15,14個(gè)氨基酸組成)和P-strand(序列為16-KLSFD-20,5個(gè)氨基酸組成)，其中在a-helix上的Ser的殘基被乙?；忾]。LZ-8單體上的N端a-helix和P-strand與另一單體上相同的結(jié)構(gòu)域通過(guò)空間交換形成了重要的二聚體結(jié)合結(jié)構(gòu)域，呈啞鈴狀。C-端的FNIII結(jié)構(gòu)域?qū)儆诿庖咔虻鞍兹闹谓Y(jié)構(gòu)，包含e-sheetIandP-sheetII兩個(gè)結(jié)構(gòu)，二者分別由P-strandsA-B-Eand0-strandsG-F-C-D形成。研究結(jié)果表明基因重組靈芝免疫蛋白的本質(zhì)作用可能是通過(guò)N端a螺旋A形成同源二聚體(研究表明，其N(xiāo)端13個(gè)氨基酸殘基對(duì)FIP形成有功能的同源二聚體十分必要)。血小板減少癥可能源于造血干細(xì)胞損傷引起的血小板產(chǎn)生不足，血小板減少癥通常伴隨著貧血和白細(xì)胞減少癥。血小板減少癥也可能是由于使用一些特殊藥物引起的，如奎寧、奎尼丁、肝素、非甾類(lèi)抗炎藥物、還有一些化學(xué)試劑等，尤其是一些臨床使用的化療藥物會(huì)抑制巨核細(xì)胞的產(chǎn)生。目前，臨床上常用的藥物以基因工程重組類(lèi)藥物為主，主要為血小板生成素CThrombopoietin,THPO)和白介素-11(IL-ll)。THPO是作用于巨核細(xì)胞系分化發(fā)育的特異性造血因子，是最早階段巨核細(xì)胞和血小板分化發(fā)育最重要的生理性調(diào)節(jié)因子。THPO長(zhǎng)期或大劑量應(yīng)用存在以下潛在的毒副作用，如刺激腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、與其他細(xì)胞因子產(chǎn)生競(jìng)爭(zhēng)性相互作用、骨髓纖維化、肝脾腫大等，故THPO使用的安全性問(wèn)題仍有待進(jìn)一步研究，所出現(xiàn)的不良反應(yīng)為注射部位疼痛、紅腫、硬結(jié)、結(jié)膜充血、水腫、心悸、乏力等。IL-11可用于預(yù)防非血液系統(tǒng)惡性腫瘤化療所致的重度血小板減少癥,降低化療導(dǎo)致的重度血小板減少的發(fā)生率,減少血小板成分輸血的次數(shù)。重組人IL-11最常見(jiàn)的副作用是輕度的可逆性貧血，其發(fā)生與液體潴留產(chǎn)生的血液稀釋有關(guān)，在治療中水腫約占20%，心律失常約占15%。中醫(yī)中藥在血小板減少癥的治療中也有應(yīng)用的報(bào)道，其中單味中藥和復(fù)方制劑主要有人參、當(dāng)歸、補(bǔ)骨脂、地黃、白術(shù)、黃芪、阿膠、刺五加等，盡管中醫(yī)藥對(duì)放化療所造成的造血及免疫功能抑制有較好的調(diào)節(jié)作用，但目前療效評(píng)價(jià)只停留在有效、無(wú)效的水平上,且由于各地療效標(biāo)準(zhǔn)不一，不少報(bào)道未設(shè)對(duì)照組，療程長(zhǎng)短相差大,影響療效的說(shuō)服力。本發(fā)明結(jié)果表明，基因重組靈芝免疫調(diào)節(jié)蛋白具有明顯的治療及預(yù)防由多種原因?qū)е碌难“鍦p少癥，在臨床應(yīng)用劑量、治療效果及臨床不適癥等方面均優(yōu)于現(xiàn)有的臨床應(yīng)用藥物。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，基因重組靈芝免疫調(diào)節(jié)蛋白的副作用遠(yuǎn)低于IL-ll和THPO。綜上所述，發(fā)明人利用畢赤酵母真核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)了靈芝免疫調(diào)節(jié)蛋白；在國(guó)際同類(lèi)研究中，發(fā)明人首次實(shí)現(xiàn)了工業(yè)級(jí)30克生產(chǎn)規(guī)模的rLZ-8生產(chǎn)，并且建立了完整的生產(chǎn)及純化工藝方案；完成了rLZ-8空間結(jié)構(gòu)的測(cè)定工作。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)了rLZ-8可以提升實(shí)驗(yàn)動(dòng)物血小板低下模型的血小板數(shù)量，且藥效學(xué)作用明顯強(qiáng)于THPO;安全性實(shí)驗(yàn)表明，rLZ-8對(duì)大鼠血細(xì)胞無(wú)明顯毒性；對(duì)主動(dòng)脈、主靜脈血管壁未見(jiàn)病理性破壞作用；骨髓涂片結(jié)果表明對(duì)造血機(jī)能也無(wú)病變作用。本發(fā)明首次公開(kāi)了LZ-8對(duì)預(yù)防及治療多種原因?qū)е碌难“鍦p少癥的新用途。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的內(nèi)容為重組靈芝免疫調(diào)節(jié)蛋白(rLZ-8)在血小板減少癥的治療領(lǐng)域中的應(yīng)用。本發(fā)明公開(kāi)了rLZ-8具有預(yù)防和治療血小板減少癥的作用。在環(huán)磷酰胺所致小鼠和犬血小板減少癥的預(yù)防和治療實(shí)驗(yàn)中，將生理鹽水配制的rLZ-8對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物血小板低下模型進(jìn)行給藥，用THPO和IL-6為陽(yáng)性藥物，連續(xù)給藥，檢測(cè)血液中血小板數(shù)量，對(duì)比治療前后血小板數(shù)變化，分析藥物療效。與模型組比較，在給藥初期(第3-5天)rLZ-8藥物組已明顯刺激小鼠、豚鼠和犬的血小板增生，差異極其顯著，在給藥中期(第7-10天)時(shí)恢復(fù)到正常水平，在治療由注射抗血小板血清導(dǎo)致的血小板減少癥豚鼠實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型也取得了很好的效果。具體實(shí)施例方式實(shí)施例1.rLZ-8預(yù)防環(huán)砩酰胺引起的犬血小板減少癥的藥效學(xué)試驗(yàn)1.藥物配制試驗(yàn)用藥重組靈芝免疫調(diào)節(jié)蛋白(rLZ-8)無(wú)菌生理鹽水配制成3.85ng'kg—1、1.925叱kg"劑量組，lml/只。陽(yáng)性對(duì)照藥血小板生成素(THPO),沈陽(yáng)三生制藥股份有限公司生產(chǎn)，20ng'kg"/d，lml/只。化療藥物環(huán)磷酰胺(Cy)，江蘇恒瑞制藥有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號(hào)08112121:200mg/支。用電子秤準(zhǔn)確稱(chēng)取7mg'kg"/只。血小板稀釋液尿素:1.3g、枸櫞酸鈉0.5g、甲醛O.lml，加蒸餾水至100ml混合，過(guò)濾備用。2.實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分成5組，分別為正常對(duì)照組、模型組(CP)、陽(yáng)性藥物對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)藥物組，每組2只犬，雌雄各半。除正常對(duì)照組(給予等體積生理鹽水)外，每只犬均給予口服環(huán)磷酰胺(7mgAg"/只/d)，連續(xù)5天。rLZ-8和陽(yáng)性藥物對(duì)照組于第一次口服環(huán)磷酰胺的同時(shí)給藥，連續(xù)皮下注射11天。按上述分組分別給予rLZ-8(3.85嗎-kg4、1.925ng-kg"，lml/只/d)、陽(yáng)性藥(THPO20嗎'kg-、lml/只/d)，藥后第一天開(kāi)始隔Fl采集靜脈血于顯微鏡下進(jìn)行血小板計(jì)數(shù)。3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)先進(jìn)行檢驗(yàn)方差齊性，再進(jìn)行獨(dú)立樣本的組間f檢驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)軟件采用SPSS16.0。與模型組比較，各藥物劑量組每只犬在口服給藥環(huán)磷酰胺第7天血小板明顯下降，第ll天降至最低值；與模型組比較，各藥物劑量組血小板數(shù)明顯高于模型組，具有顯著性差異0^0.05)。表l,rLZ-8預(yù)防犬白細(xì)胞減少癥每只犬血小板結(jié)果(單位*109/L)分組治療前3rd大5lh大7lh天9lh天llLh天"正常對(duì)照組2652702612622642202"d正常對(duì)照組2782612542742492463rdCP2751981635562104thCP1741942049444105山THP021925514015545366thTHPO29524725018635257thrLZ-8283325213208107808thrLZ-8238229313393163789[hrLZ-8222329236317937010thrLZ-831737226130210080表2.rLZ-8預(yù)防犬血小板減少癥血小板數(shù)試驗(yàn)結(jié)果(F±S,,n=2)(單位*109/L)分組治療前3rd天5[h天7th天9th天11th天下降率正常對(duì)照組271±2.91265±1.75257±2.52268±2.69256±1.87233±0.76模型組224±0.12196±0.25183±0.4774±0.1453±0.4010±0.1495%THPO257±0.20251±0.53210±0.31170±0.31*40±0.2I30±0.4788%rLZ-8(1.925嗎'kg-)260±0.11277±0.11263±0.24300±0.1]'135±0.40*79±0.14*69%rLZ-8(3.85(ig.kg勺269±0.11350±0.18248±0.79309±0.25'96±0.78*75±0.82*72%與模型組比較存在顯著性差異，*p<0.05實(shí)施例2.rLZ-8治療環(huán)磷酰胺引起的犬血小板減少癥的藥效學(xué)試驗(yàn)1.藥物配制試驗(yàn)用藥重組靈芝免疫調(diào)節(jié)蛋白(rLZ-8)無(wú)菌生理鹽水配制成3.85ng.kg—、1.925ng'kg—1劑量組，lml/只。陽(yáng)性對(duì)照藥血小板生成素(THPO)，沈陽(yáng)三生制藥股份有限公司生產(chǎn)，20嗎'kg—Vd，lml/只?；熕幬锃h(huán)磷酰胺(Cy)，江蘇恒瑞制藥有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號(hào)08112121;200mg/支。用電子秤準(zhǔn)確稱(chēng)取7mg-kg—V只。血小板稀釋液尿素:1.3g、枸櫞酸鈉0.5g、甲醛O.lml，加蒸餾水至100ml混合，過(guò)濾備用。2.實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分成5組，分別為正常對(duì)照組、模型組(CP)、陽(yáng)性藥物對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，每組2只犬，雌雄各半。除正常對(duì)照組(給予等體積生理鹽水)外，每只犬均給予口服環(huán)磷酰胺(7mg.kg1/只/d),連續(xù)5天。于第11天，血小板下降至最低值時(shí)，按上述分組分別皮下注射給予rLZ-8(3.85ng.kg1、1.925ng.kg",lml/只/d)、陽(yáng)性藥(THPO20嗎'kg—1、lml/只/d)治療，連續(xù)給藥7天，并于造模前、造模后、給藥第3天、7天、14天采集靜脈血于顯微鏡下進(jìn)行血小板計(jì)數(shù)。3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)先進(jìn)行檢驗(yàn)方差齊性，再進(jìn)行獨(dú)立樣本的組間f檢驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)軟件采用SPSS16.0。與模型組比較，各藥物劑量組每只犬給藥第3天血小板數(shù)已明顯升高,在給藥第7天基木達(dá)到正常，且有顯著性差異(^<0.05)。表3.rLZ-8治療犬白細(xì)胞減少癥每只犬血小拔結(jié)果(單位*109/L)分組造模前造模后3rd天7th天14lh天Ist正常對(duì)照組2452312542382282"d正常對(duì)照組251240228246239dCP265416174804thCP248316877855thTHPO26190921762456thTHPO25145951622397thrLZ-8217351012142678thrLZ-8245401062232759thrLZ-82383511021128910thrLZ-824140186187252表4.rLZ-8治療犬血小板減少癥血小板數(shù)試驗(yàn)結(jié)果(F"±S，n=2)(單位::*109/L)分組造模前造模后3rd天7th天14[h天下降率Normalcontrolgroup248±0.15235±0.28241±0.1S242±0.19233±0.54CPcontrolgroup256±0.4536±0.7464.5±0.4775.5±0.]882.5±CU256%THPO256±03467±0.2493.5±0.54*169±0.39*242±0.65*72%rLZ-8(9.625嗎.kg-1)231±0.5437.5±0.41103.5±0.78*271±0，86%rLZ-8(19.25iig.kg1)239±0.4137.5±0.94148土0,89^199土0,43^270±0.4"72%與模型組比較存在顯著性差異，*p<0.05實(shí)施例3.rLZ-8預(yù)防環(huán)碟酰胺引起的小鼠血小板減少癥的藥效學(xué)試驗(yàn)1.藥物配制試驗(yàn)用藥重組靈芝免疫調(diào)節(jié)蛋白(rLZ-8)無(wú)菌注射用水配制成19.25嗎-kg4、9.625嗎.kg—1劑量組，0.2ml/只。陽(yáng)性對(duì)照藥血小板生成素(THPO),沈陽(yáng)三生制藥股份有限公司生產(chǎn)，770嗎.kg-Vd，0.2ml/只?；熕幬锃h(huán)磷酰胺(Cy),江蘇恒瑞制藥有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號(hào)08112121;200mg/支。無(wú)菌注射用水配制成lOOmg.kg-1,0.2ml/只。血小板稀釋液尿素:1.3g、枸櫞酸鈉0.5g、甲醛O.lml，加蒸餾水至100ml混合，過(guò)濾備用。2.實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分成5組，每組10只小鼠，雌雄各半。除正常對(duì)照組(給予等體積生理鹽水)外，每組小鼠均腹腔注射環(huán)磷酰胺，100mg-kg—1，0.2ml/只/d，連續(xù)3天。rLZ-8和陽(yáng)性藥物對(duì)照組于第一次注射環(huán)磷酰胺的同時(shí)給藥，連續(xù)11天。按上述分組分別皮下給予11^-8(19.25嗎']^-1、9.625嗎.]^10,2ml/只/d)、陽(yáng)性藥(THPOTTOng-kg^0.2ml/只/d)，藥后第一天開(kāi)始隔日采集靜脈血于顯微鏡下進(jìn)行血小板計(jì)數(shù)。3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)先進(jìn)行檢驗(yàn)方差齊性，再進(jìn)行獨(dú)立樣本的組間f檢驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)軟件釆用SPSS16.0。與模型組比較，各藥物劑量組每組鼠在給藥環(huán)磷酰胺第7天血小板明顯下降，第ll天降至最低值；與模型組比較，各藥物劑量組血小板數(shù)明顯高于模型組，具有顯著性差異(<0.05)。表5.rLZ-8預(yù)防小鼠血小板減少癥血小板數(shù)試驗(yàn)結(jié)果(ir±S,n=10)(單位*109/L)<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>實(shí)施例4.rLZ-8治療環(huán)雜酰胺引起的小鼠血小板減少癥的藥效學(xué)試驗(yàn)1.藥物配制試驗(yàn)用藥重組靈芝免疫調(diào)節(jié)蛋白(rLZ-8)無(wú)菌注射用水配制成19.25ng.kg—1、9.625ng.kg"劑量組，0.2ml/只。陽(yáng)性對(duì)照藥血小板生成素(THPO)，沈陽(yáng)三生制藥股份有限公司生產(chǎn)，770ng.kg々d,0.2ml/只?；熕幬锃h(huán)磷酰胺(Cy),江蘇恒瑞制藥有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號(hào)08112121;200mg/支。無(wú)菌注射用水配制成100mg'kg-1，0.2ml/只。血小板稀釋液尿素:1.3g、枸櫞酸鈉0.5g、甲醛O.lml，加蒸餾水至100ml混合，過(guò)濾備用。2.實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分成5組，每組10只小鼠，雌雄各半。除正常對(duì)照組(給予等體積生理鹽水)外，每組小鼠均腹腔注射環(huán)磷酰胺，lOOmg'kg.1，0.2ml/只/d,連續(xù)3天。血小板數(shù)降到300X109/L以下時(shí)，按上述分組分別皮下給予相應(yīng)劑量rLZ-8(19.25ng'kg-1、9,625ng'kg"0.2ml/只/d)及陽(yáng)性藥(THPO770嗎.kg-'、0.2ml/只/d)治療，正常對(duì)照組和模型組(CP)組給予等體積生理鹽水，于治療第3d和第7d、14d分別小鼠尾靜脈取血，高倍鏡下血小板't卜數(shù)。3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)先進(jìn)行檢驗(yàn)方差齊性，再進(jìn)行獨(dú)立樣本的組間f檢驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)軟件采用SPSS16.0。與模型組比較，各藥物劑量組每只小鼠給藥第3天血小板數(shù)已明顯升高，在給藥第7天基本込到正常，且有顯著性差異(p<0.05)。表6.rLZ-8治療小鼠血小板減少癥血小板數(shù)試驗(yàn)結(jié)果(]T土S,n=10)(單位*109/L)<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>與模型組比較存在顯著性差異，*p<0.05實(shí)施例5.rLZ-8治療豚鼠血小板減少癥的藥效學(xué)試驗(yàn)1.藥物配制試驗(yàn)用藥重組靈芝免疫調(diào)節(jié)蛋白(rLZ-8)無(wú)菌注射用水配制成40嗎'kg—、2f^g'kg—i劑量組，0.2ml/只。陽(yáng)性對(duì)照藥重組白介素6(rhIL-6)，40wkg々d，0.2ml/只。造模藥物豚鼠血小板抗血清，lmhkg-1。血小板稀釋液尿素:L3g、枸櫞酸鈉0.5g、甲醛O.lml,加蒸餾水至100ml混合，過(guò)濾備用。2.實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分成5組，每組10只豚鼠，雌雄各半。除止常對(duì)照組(給予等體積生理鹽水)外，每組豚鼠均注射血小板抗血清(lmHig—1),24h后，各組血小板均降至最低值。于給藥4h后，按上述分組分別肌注給予相應(yīng)劑量rLZ-8WOng'kg-1,20ug'kg—10.2ml/只/d)及陽(yáng)性藥(rhIL-6^ng'kg-1,0.2ml/只/d)治療，正常對(duì)照組和模型組給予等體積生理鹽水，于治療第3d和第7d、14d分別豚鼠足墊采血，高倍鏡下血小板計(jì)數(shù)。3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)先進(jìn)行檢驗(yàn)方差齊性，再進(jìn)行獨(dú)立樣本的組間f檢驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)軟件采用SPSS16.0。與模型組比較，各藥物劑量組豚鼠在給藥第3天血小板數(shù)已明顯升高,在給藥第7天基本達(dá)到正常，且有顯著性差異(p〈0.05)。表7.rLZ-8治療豚鼠血小板減少癥血小板數(shù)試驗(yàn)結(jié)果(F土S，n-lO)(單位*109/L)分組造模前造模后3rd天7th天14'h天正常對(duì)照組728±031740±0.13760±0.73861±0.41867±0.71模型組751±0.39217±0.19269±0.92379±0.70387±0.66THPO842±0.14244±0.39295±0.37582±0.41*639士0.23'rLZ-8(20吸kg-1)831±0.50237±0.21420±0.25'712土0.74'881土0.63'rLZ-8(40吸kg-1)843±0.41243±0.28414±0.38*790土0.18'845±0.11'與模型組比較存在顯著性差異，*;<0.05實(shí)施例6.rLZ-8治療環(huán)磷酰胺引起的小鼠血小板減少癥的藥效學(xué)試驗(yàn)(鼻腔給藥途徑)1.藥物配制試驗(yàn)用藥重組靈芝免疫調(diào)節(jié)蛋白(rLZ-8)無(wú)菌注射用水配制成9,625嗎'kg"、4.81嗎'kg入2.40嗎'kg—1劑量組，10ul/只。陽(yáng)性對(duì)照藥血小板生成素(THPO)，沈陽(yáng)三生制藥股份有限公司生產(chǎn)，770嗎'kg—Vd，10ul/只?；熕幬锃h(huán)磷酰胺(Cy)，江蘇恒瑞制藥有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號(hào)08112121;200mg/支。無(wú)菌注射用水配制成100mgkg—、0.2ml/只。血小板稀釋液尿素1.3g、枸櫞酸鈉0.5g、甲醛0.lml，加蒸餾水至100ml混合，過(guò)濾備用。2.實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分成6組，每組10只小鼠，雌雄各半。除正常對(duì)照組(給予等體積生理鹽水)外，每組小鼠均腹腔注射環(huán)磷酰胺，100mg'kg—、0.2ml/只/d，連續(xù)3天。血小板數(shù)降到300X109/L以下時(shí)，按上述分組分別鼻腔途徑給予相應(yīng)劑量rLZ-8(9.eSSng'kg-1,4.81嗎4^、2.40嗎'kg"、10ul/只/d)及陽(yáng)性藥(THPO770嗎'kg-Vd，10ul/只/天)治療，正常對(duì)照組和模型組(CP)組給予等體積生理鹽水，于治療第3d和第7d、14d分別小鼠尾靜脈取血，高倍鏡下血小板計(jì)數(shù)。3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)先進(jìn)行檢驗(yàn)方差齊性，再進(jìn)行獨(dú)立樣本的組間f檢驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)軟件采用SPSS16.0。進(jìn)行比較與模型組比較，各藥物劑量每組小鼠給藥第3天血小板數(shù)已明顯升高，在給藥第7天基本達(dá)到正常，且有顯著性差異(p〈0.05)。表8.rLZ-8治療小鼠血小板減少癥血小板數(shù)試驗(yàn)結(jié)果(F±S,n=10)(單位*109/L)分組造模前造模后3rd天7th天14th天正常對(duì)照組838±0.11946±0.18870±0.23760±0.31965±0.70模型組850±0.34239±0.12256±0.93301±0.30323±0.67THPO851±0.34284±0.19360±0.38401±0.32689±0.65*rLZ-8(2.40嗎'kg—1)839±0.40251±0.41683±0.45'785±0.78*998士0.61'rLZ-8(4.81嗎'kg—1)946±0.45296±0.78541±0.48*870土0.28'1021±0.31*rLZ-8(9.625嗎'kg.1)916±0.45246±0.45520土0.45'906土0.45'992土0.45'與模型組比較存在顯著性差異，=><0.0權(quán)利要求本發(fā)明的權(quán)利要求如下1.一種重組靈芝免疫調(diào)節(jié)蛋白(rLZ-8)，該蛋白被用于治療血小板減少癥。1.一種重組靈芝免疫調(diào)節(jié)蛋白GLZ-8)，該蛋白被用于治療血小板減少癥。2.根據(jù)權(quán)利要求l所述，重組靈芝免疫調(diào)節(jié)蛋白(rLZ-8)治療血小板減少癥的有效劑量為10,10mg/m1.3.根據(jù)權(quán)利要求l所述，一種靈芝免疫調(diào)節(jié)蛋白藥物制劑可選用任何的藥學(xué)可接受的輔劑。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述重組靈芝免疫調(diào)節(jié)蛋白藥物制劑可以通過(guò)口服和非腸道給藥，口服藥包括口服液、片劑、丸劑和膠囊；非腸道用包括外用藥、吸入制劑、栓劑和注射劑。全文摘要本發(fā)明提供了重組靈芝免疫調(diào)節(jié)蛋白(rLZ-8)用于治療血小板減少癥的一種新用途。在環(huán)磷酰胺所致小鼠和犬血小板減少癥的預(yù)防和治療實(shí)驗(yàn)中，將生理鹽水配制的rLZ-8對(duì)血小板低下的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型進(jìn)行給藥，用THPO和IL-6為陽(yáng)性藥物，連續(xù)給藥，檢測(cè)血液中血小板數(shù)量，對(duì)比治療前后血小板數(shù)變化，分析藥效。與模型組比較，在給藥初期(第3-5天)rLZ-8藥物組已明顯刺激小鼠、豚鼠和犬的血小板增生，差異極其顯著，在給藥中期(第7-10天)時(shí)恢復(fù)到正常水平，在治療由注射抗血小板血清導(dǎo)致的血小板減少癥豚鼠實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型也取得了很好的效果。文檔編號(hào)A61K38/16GK101612385SQ20091014342公開(kāi)日2009年12月30日申請(qǐng)日期2009年5月25日優(yōu)先權(quán)日2009年5月25日發(fā)明者非孫,張喜田,梁重陽(yáng)申請(qǐng)人:張喜田