專(zhuān)利名稱(chēng)：一種中藥降血糖藥及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥新藥研發(fā)領(lǐng)域。涉及利用傳統(tǒng)中藥制備降血糖藥及其制備方法， 尤其涉及采用現(xiàn)代提取分離、技術(shù)，從中藥柞樹(shù)葉中獲得具有降血糖作用的有效組分，制備 降血糖藥。
背景技術(shù)：
糖尿病為一種常見(jiàn)病，全世界現(xiàn)有糖尿病患者1. 5億，據(jù)預(yù)測(cè)到2025年患者人數(shù) 將增加到3. 33億.糖尿病中醫(yī)辨證屬于“消渴”病范疇。究其病機(jī)主要在于陰津虧損，燥熱 偏甚，而以陰虛為本，燥熱為標(biāo)。燥熱內(nèi)生，津干液枯，氣血澀滯，久而為瘀。近幾年新的防治 技術(shù)主要有胰島細(xì)胞移植、胰腺移植、胰島素泵代替胰島素注射以及糖尿病的免疫療法等， 臨床常用的治療藥物有雙胍類(lèi)降糖藥物-鹽酸二甲雙胍和降糖靈(苯乙雙胍)。降糖靈主 要副作用是胃腸道反應(yīng)，有厭食、口苦、惡心、嘔吐、腹瀉等癥狀，因經(jīng)肝臟代謝，易誘發(fā)乳酸 中毒。雖然二甲雙胍誘乳酸酸中毒的可能性比降糖靈顯著減少，但仍然有此副作用。最近， 美國(guó)已根據(jù)受體學(xué)說(shuō)，開(kāi)發(fā)出第三代治療糖尿病的藥物——曲格列酮，據(jù)目前報(bào)道來(lái)看，遠(yuǎn) 期療效穩(wěn)定，但有一定的副作用，仍未大面積推廣。因此，如何使糖尿病病人的血糖長(zhǎng)期保 持穩(wěn)定，需要研發(fā)療效好、副作用少且小、標(biāo)本兼治的降糖中藥現(xiàn)代制劑。柞樹(shù)葉為殼斗科植物蒙櫟Quercus mongolica Fisch的樹(shù)葉，味微苦、澀、性平，清 熱止痢，止咳，解毒消腫。主治痢疾，腸炎，消化不良，支氣管炎，癰腫，痔瘡。國(guó)內(nèi)外關(guān)于其化 學(xué)成分研究?jī)H見(jiàn)谷留醇、羽扇豆醇、粘霉烯醇及脂肪烴類(lèi)成分。參見(jiàn)《中華本草》(第 2 卷，438-440 頁(yè))

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是從柞樹(shù)葉中，研究開(kāi)發(fā)降血糖的有效組分的中藥現(xiàn)代 制劑。副作用顯著減少并降低，使其便于患者長(zhǎng)期服用仍相當(dāng)安全。能夠減輕或抑制糖尿 病并發(fā)癥的發(fā)生和發(fā)展。本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題還包括研究制備上述降血糖中藥組合物 的提取分離方法，該方法應(yīng)重現(xiàn)性好，能夠用于工業(yè)化生產(chǎn)。為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明研究制定了如下技術(shù)方案本發(fā)明提供了一種具有降血糖作用的柞樹(shù)葉有效組分。該組合物的制備方法，包括如下步驟(1)取柞樹(shù)葉藥材，用水和/或低級(jí)醇提取，得到提取液，將所得提取液濃縮，干 燥，即為有效組分；或者，(2)將步驟1)提取液直接上大孔吸附樹(shù)脂柱，或者將步驟1)提取液先濃縮再分散 后，上大孔吸附樹(shù)脂柱；依次用0-95%低級(jí)醇對(duì)大孔吸附樹(shù)脂柱進(jìn)行梯度洗脫，分別收集 各洗脫物；將其中45-55%低級(jí)醇洗脫物和/或85-99%低級(jí)醇洗脫物，濃縮干燥后即為有 效組分；或者，(3)取步驟2)中45-55%低級(jí)醇洗脫物和/或85_99%低級(jí)醇洗脫物濃縮后，用15-60目聚酰胺進(jìn)行層析，用0-95%低級(jí)醇進(jìn)行梯度洗脫，收集其30%和/或50%低級(jí)醇 濃度的洗脫物，濃縮干燥得到有效組分。所述提取物制備方法中，提取或者梯度洗脫時(shí)，所用的低級(jí)醇是指碳數(shù)為C1-C5 的直鏈或支鏈低級(jí)醇(所述低級(jí)醇優(yōu)選甲醇、乙醇、丙醇或正丁醇)；水和低級(jí)醇是V/V混 合(例如，在一定毫升數(shù)的低級(jí)醇中，加入一定毫升數(shù)的水)。步驟⑴提取中低級(jí)醇濃度為0-95% ；用回流、浸漬、滲漉或水煎方法提?。徊襟E2)中所述大孔樹(shù)脂為聚苯乙烯型、聚丙烯酸酯型或聚甲基丙烯酸酯型 中的任意一種或幾種為骨架材料的樹(shù)脂；步驟2)中大孔吸附樹(shù)脂柱梯度洗脫較好的方法 是先用5%以下的低級(jí)醇除去雜質(zhì)，再用5-95%低級(jí)醇洗脫；收集50%低級(jí)醇洗脫物和/ 或95%低級(jí)醇洗脫物，濃縮，即得柞樹(shù)葉有效組分；步驟3)中聚酰胺層析梯度洗脫優(yōu)選用濃度為低于5%的低級(jí)醇除去雜質(zhì)，再用濃度5-95%低級(jí)醇；收集30%和/或50%低級(jí)醇濃度的洗脫物，濃縮，即得 柞樹(shù)葉有效組分；前述制備方法中優(yōu)選提取所用溶劑是0-95%乙醇；提取溶劑用量為藥材用量的10-12倍；提取時(shí)間為2h/次；共提取3次；大孔吸附樹(shù)脂柱的梯度洗脫是 先用0-40%乙醇除去雜質(zhì)，再用50-95%乙醇洗脫，收集50%低級(jí)醇洗脫物和/或95%低 級(jí)醇洗脫物，濃縮得有效組分；提取或者對(duì)大孔吸附樹(shù)脂柱或聚酰胺層析進(jìn)行梯度洗脫時(shí)， 所用低級(jí)醇選自甲醇、乙醇、丙醇或正丁醇中的任意一種或它們的混合物；對(duì)大孔吸附樹(shù)脂 柱進(jìn)行洗脫時(shí)，洗脫溶劑的用量為所用樹(shù)脂體積的8-12倍量，優(yōu)選10倍量；對(duì)聚酰胺柱洗 脫時(shí)，各洗脫溶劑的用量為所用聚酰胺體積的2-5倍量，優(yōu)選3倍量。所述大孔樹(shù)脂選自 AB-8、D101型樹(shù)脂；濃縮干燥選用減壓、真空、冷凍或噴霧方法中的任意一種方法進(jìn)行。更優(yōu)選的制備方法中，梯度洗脫是先用0-5%乙醇雜質(zhì)，再用10% -20%乙醇洗脫 雜質(zhì)；再用50% -95%乙醇洗脫，收集50%低級(jí)醇洗脫物和/或95%低級(jí)醇洗脫物，濃縮得 有效組分。前述任一種預(yù)防或治療高血糖組有效組分，將前述人一種柞樹(shù)葉有效組分，與藥 學(xué)上可接受載體混合，制成口服制劑或注射劑。所述的藥學(xué)可接受載體，輔料和對(duì)本發(fā)明藥 效沒(méi)有明顯影響的抗氧化劑、氨基酸、維生素、碳水化合物或植物提取物。所述口服制劑為 膠囊劑、軟膠囊劑、顆粒劑、口服液、片劑或滴丸，所述注射劑包括凍干粉針劑或注射液。前述降血糖有效組分，將前述任一種柞樹(shù)葉有效組分與其它中藥組成復(fù)方，所述 的中藥包括活血化淤藥丹參、川芎、龜箭羽、赤芍、牡丹皮、水蛭、當(dāng)歸；益氣養(yǎng)陰藥黃芪、人 參、山茱萸、枸杞子；及滋陰清熱藥黃連、麥冬、地骨皮、知母、地黃、玉竹、黃精。前述任一種柞樹(shù)葉有效組分在制備預(yù)防或治療高血糖疾病的藥物或保健品中的 應(yīng)用，所述高血糖疾病包括糖尿病。本發(fā)明以活性為先導(dǎo)，對(duì)柞樹(shù)葉降糖的活性組分進(jìn)行了追蹤。實(shí)驗(yàn)從不同提取部 位著手，選用正常的和化學(xué)性糖尿病小鼠模型，在整體水平進(jìn)行降血糖藥學(xué)學(xué)比較，初步確 定柞樹(shù)葉降糖的有效組分。為了得到具有降血糖作用的柞樹(shù)葉有效組分，本發(fā)明人利用柞樹(shù)葉為原料，經(jīng)過(guò) 水或極性有機(jī)溶劑提取、大孔吸附樹(shù)脂洗脫、洗脫液濃縮干燥，得到柞樹(shù)葉有效組分。本發(fā) 明以柞樹(shù)葉有效組分為有效活性組分，用于制備預(yù)防或治療降血糖藥物或保健品，該藥物或保健品以柞樹(shù)葉有效組分和藥學(xué)上可接受的載體混合，藥學(xué)上可接受的載體包括口服制 劑輔料、或胃腸外途徑給藥的輔料。給藥途徑可以口服、注射、局部給藥等。根據(jù)本發(fā)明的技術(shù)方案，該中藥制劑或保健品制劑，其中口服制劑或折射用制劑， 其中口服制劑包括膠囊劑、軟膠囊劑、顆粒劑、口服液、片劑或滴丸等。所述注射劑包括凍干 粉針劑或注射液。所用輔料包括，如淀粉、蔗糖、乳糖、糖粉、葡萄糖、甘露醇、木糖醇、聚乙二 醇、異丙醇、土溫-80、甘油、丙二醇、微晶纖維素鈉、糊精、環(huán)糊精、氯化鈉、維生素C、半胱氨 酸、檸檬酸、硫代硫酸鈉、亞硫酸鈉、硬脂酸鹽和明膠等常規(guī)輔料。也包括對(duì)本發(fā)明藥效沒(méi)有 明顯影響的抗氧化劑、氨基酸、維生素、碳水化合物或植物提取物。所述藥用制劑為口服制 劑，包括膠囊劑、軟膠囊劑、顆粒劑、口服液、片劑或滴丸等；或者為注射劑，包括凍干粉針劑 和注射液等；或者為局部給藥制劑，包括霜?jiǎng)?、軟膏劑、貼劑、噴霧劑、皮下植入劑等。制劑的 后期制備工藝均屬制藥領(lǐng)域的常規(guī)技術(shù)，本發(fā)明對(duì)此不作限定。糖尿病胰島細(xì)胞受損，胰島素分泌不足而引起的代謝紊亂的一種內(nèi)分泌疾病，一 般認(rèn)為降血糖的作用機(jī)制主要涉及兩個(gè)方面一是促進(jìn)胰島素的分泌和釋放或是胰高糖素 的分泌；二是影響胰島素受體后代謝的某些環(huán)節(jié)，主要是抑制肝臟的糖異生作用，其目的均 是降低并控制血糖水平。研究結(jié)果顯示柞樹(shù)葉對(duì)健康小鼠血糖無(wú)明顯影響，提示其沒(méi)有明 顯的刺激胰島素釋放作用或胰島素樣作用；柞樹(shù)葉中提取分離的有效組分在低劑量條件 下，對(duì)四氧嘧啶所致的血糖升高有明顯的降低作用，這表明其均有修復(fù)受損傷的B細(xì)胞的 功能和降低機(jī)體對(duì)胰島素的拮抗性。糖尿病中醫(yī)辨證屬于“消渴”病范疇。究其病機(jī)主要在于陰津虧損，燥熱偏甚，而 以陰虛為本，燥熱為標(biāo)。燥熱內(nèi)生，津干液枯，氣血澀滯，久而為瘀。故治療糖尿病當(dāng)以養(yǎng)陰 清熱、活血化淤為主。柞樹(shù)葉性平，味微苦、澀，具清熱止痢，止咳，解毒消腫。柞樹(shù)葉中提取 分離的有效組分，其治療消渴能兼顧標(biāo)本，切中消渴病病機(jī)。本發(fā)明研究發(fā)現(xiàn)，柞樹(shù)葉可與 人參、黃連、肉桂、黃芪、山萸肉、當(dāng)歸等中藥，組成具有降糖作用的復(fù)方，降糖效果明顯。由于采用了中藥現(xiàn)代化技術(shù)中的樹(shù)脂技術(shù)，制備工藝簡(jiǎn)單，成本低，適合工業(yè)化生 產(chǎn)。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明人通過(guò)以下實(shí)施例詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)施，但不應(yīng)以此限定本發(fā) 明的實(shí)施范圍。實(shí)施例1 柞樹(shù)葉有效組分的制備方法稱(chēng)取5kg藥材，用10倍藥材量水提取藥材，回流提取三次，每次1小時(shí)，合并三 次提取液，抽濾提取液，濃縮至干，得210g樣品，即得。樣品溶解后，進(jìn)行α-萘酚試驗(yàn) (Molish)反應(yīng)取溶液lml，加10% α -萘酚醇液1滴，搖勻，沿管壁緩慢加入&H2S0410滴， 不振搖，觀察兩液介面間有出現(xiàn)紫紅色杯，說(shuō)明存在糖、苷類(lèi)成分；利用TLC(薄層色譜)檢 識(shí)(展開(kāi)劑n-BuOH HAc H20 = 4 1 5，V/V)，在 254nm 下有暗斑，F(xiàn)eCl3 溶液噴灑， 顯深藍(lán)色斑點(diǎn)；實(shí)施例2 柞樹(shù)葉有效組分的制備方法稱(chēng)取5kg藥材，用10倍藥材量95%乙醇提取藥材，回流提取三次，每次1小時(shí)，合 并三次提取液，抽濾提取液，濃縮至干，得143g樣品，即得。樣品溶解后，進(jìn)行α-萘酚試驗(yàn) (Molish)反應(yīng)取溶液1ml，加10% α -萘酚醇液1滴，搖勻，沿管壁緩慢加入濃H2SO4IO滴，不振搖，觀察兩液介面間有出現(xiàn)紫紅色杯，說(shuō)明存在糖、苷類(lèi)成分；利用TLC(薄層色譜)檢 識(shí)(展開(kāi)劑CHCl3 MeOH = 9 1，V/V))，在254nm下有暗斑，香蘭醛-硫酸溶液噴灑，后 加熱，有深紅色斑點(diǎn)出現(xiàn)。實(shí)施例3 柞樹(shù)葉有效組分的制備方法稱(chēng)取5kg藥材，用10倍藥材量水提取藥材，回流提取三次，每次1小時(shí)，合并三次 提取液，抽濾提取液，上樣于5kg處理好的DlOl大孔樹(shù)脂，流速15ml/min，上樣完成后，水 洗脫至洗脫液近無(wú)色，共用水50升，20%乙醇洗脫至洗脫液近無(wú)色，洗脫了 40升，50%乙醇 洗脫至洗脫液近無(wú)色，洗脫了 40升，80 %乙醇洗脫至洗脫液近無(wú)色，洗脫了 30升，最后用 95%乙醇洗脫30升。濃縮，干燥，收集樣品。各洗脫物濃縮后所得樣品重量分別為2. 60g、 157. 5g、22. 40g、4. 60g和3. 7g。樣品溶解后，進(jìn)行α -萘酚試驗(yàn)(Molish)反應(yīng)取溶液lml， 加10% α _萘酚醇液1滴，搖勻，沿管壁緩慢加入濃H2SO4IO滴，不振搖，觀察兩液介面間有 出現(xiàn)紫紅色杯，說(shuō)明存在糖、苷類(lèi)成分。實(shí)施例4 柞樹(shù)葉有效組分的制備方法稱(chēng)取5kg藥材，用10倍藥材量水提取藥材，回流提取三次，每次1小時(shí)，合并三次 提取液，抽濾提取液，上樣于5kg處理好的AB-8大孔樹(shù)脂，流速15ml/min，上樣完成后，水洗 脫至洗脫液近無(wú)色，共用水50升，20%乙醇洗脫至洗脫液近無(wú)色，洗脫了 40升，50%乙醇洗 脫至洗脫液近無(wú)色，洗脫了 40升，80 %乙醇洗脫至洗脫液近無(wú)色，洗脫了 30升，最后用95 % 乙醇洗脫30升。濃縮干燥，收集樣品。各洗脫物濃縮后所得樣品重量分別為3. 20g、130. 0g、 26. 40g、8. 60g和5. 3g。樣品溶解后，進(jìn)行α-萘酚試驗(yàn)(Molish)反應(yīng)取溶液lml，加10% α -萘酚醇液1滴，搖勻，沿管壁緩慢加入濃貼0410滴，不振搖，觀察兩液介面間有出現(xiàn)紫紅 色杯，說(shuō)明存在糖、苷類(lèi)成分；利用TLC(薄層色譜)檢識(shí)(展開(kāi)劑CHCl3 MeOH = 9 1， V/V))，在254nm下有暗斑，香蘭醛-硫酸溶液噴灑，后加熱，有深紅色斑點(diǎn)出現(xiàn)。實(shí)施例5 柞樹(shù)葉聚酰胺層析分離的有效組分的制備方法稱(chēng)取5kg藥材，用10倍藥材量水提取藥材，回流提取三次，每次1小時(shí)，合并三次 提取液，抽濾提取液，上樣于5kg處理好的DlOl大孔樹(shù)脂，流速15ml/min，上樣完成后，水洗 脫至洗脫液近無(wú)色，共用水50升，20%乙醇洗脫至洗脫液近無(wú)色，洗脫了 40升，50%乙醇洗 脫至洗脫液近無(wú)色，洗脫了 40升，80 %乙醇洗脫至洗脫液近無(wú)色，洗脫了 30升，最后用95 % 乙醇洗脫30升。濃縮，干燥，收集樣品，即得。取上述柞樹(shù)葉50%乙醇洗脫物組分，用15-60 目聚酰胺進(jìn)行層析，用含水乙醇梯度洗脫，分別收集其30%乙醇濃度的洗脫部位，得到有效 組分6. 4g ；利用TLC (薄層色譜)檢識(shí)(展開(kāi)劑:n-BuOH HAc H2O = 4 1 5，V/V)， 在254nm下有暗斑，F(xiàn)eCl3溶液噴灑，顯深藍(lán)色斑點(diǎn)。實(shí)施例6 柞樹(shù)葉聚酰胺層析分離的有效組分的制備方法稱(chēng)取5kg藥材，用10倍藥材量水提取藥材，回流提取三次，每次1小時(shí)，合并三次 提取液，抽濾提取液，上樣于5kg處理好的DlOl大孔樹(shù)脂，流速15ml/min，上樣完成后，水洗 脫至洗脫液近無(wú)色，共用水50升，20%乙醇洗脫至洗脫液近無(wú)色，洗脫了 40升，50%乙醇洗 脫至洗脫液近無(wú)色，洗脫了 40升，80 %乙醇洗脫至洗脫液近無(wú)色，洗脫了 30升，最后用95 % 乙醇洗脫30升。濃縮，干燥，收集樣品，即得。取上述柞樹(shù)葉50%乙醇洗脫物組分，用15-60 目聚酰胺進(jìn)行層析，用含水乙醇梯度洗脫，分別收集其50%乙醇濃度的洗脫部位，得到有效 組分9. 6g ；利用TLC (薄層色譜)檢識(shí)(展開(kāi)劑n-BuOH HAc H2O = 4 1 5，V/V)，
7在254nm下有暗斑，F(xiàn)eCl3溶液噴灑，顯深藍(lán)色斑點(diǎn)。實(shí)施例7 柞樹(shù)葉有效組分的膠囊劑制備取實(shí)施例5或?qū)嵤├?方法制備的柞樹(shù)葉有效組分100g，60°C干燥，研磨粉碎，過(guò) 80目篩，加過(guò)80目篩的微晶纖維素100g，混合均勻，用70%乙醇適量制成軟材，過(guò)30目篩 制顆粒，烘干，使水分小于5%，過(guò)40目篩整粒，分裝于3號(hào)膠囊中。每粒膠囊含柞樹(shù)葉有效 組分0. Ig,用鋁塑復(fù)合包裝，即得?？诜o藥，每日3次，每次1粒。實(shí)施例8 柞樹(shù)葉有效組分的片劑制備取實(shí)施例5或?qū)嵤├?方法制備的柞樹(shù)葉有效組分60g，加入微晶纖維素60g，以 2%的羥丙甲纖維素作為粘合劑進(jìn)行制軟材，制粒干燥整粒，加入4%的崩解劑羧甲基淀粉 鈉和潤(rùn)滑劑0. 5 %硬脂酸鎂與細(xì)粉混合均勻，干粒加入硬脂酸鎂，整粒，混勻，壓片，即得。每 片含柞樹(shù)葉有效組分0. lg?？诜o藥，每日3次，每次1片。實(shí)施例9 柞樹(shù)葉水、醇提取物對(duì)四氧嘧啶致小鼠高血糖的影響取健康ICR小鼠88只，其中正常對(duì)照組10只，尾靜脈注射生理鹽水0. lml/10g,其 余小鼠尾靜脈注射四氧嘧啶生理鹽水溶液(45mg/kg)(造模劑量根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果定的)，造 模72h后測(cè)空腹血糖，血糖值大于11. lmmol/L的小鼠為糖尿病動(dòng)物模型，按血糖值隨機(jī)分 為模型對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組(降糖靈150mg/kg)、柞樹(shù)葉水提取物(實(shí)施例1所得樣品)小 (IOg生藥/kg)、大(20g生藥/kg)劑量組，柞樹(shù)葉醇提取物(實(shí)施例2所得樣品)小(IOg 生藥/kg)、大(20g生藥/kg)劑量組共6組。各給藥組均按0.2ml/10g體積灌胃給藥，每 天1次，連續(xù)14天，正常對(duì)照組和模型對(duì)照組給予等體積生理鹽水。給藥第7天眶后取血 測(cè)空腹血糖，第14天摘眼球取血，測(cè)空腹血糖值。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用表示，組間用t檢驗(yàn)進(jìn)行 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。表1柞樹(shù)葉水、醇提取物對(duì)四氧嘧啶致小鼠高血糖的影響，藥后7天和14天小鼠
血糖結(jié)果(x±s)

注與模型對(duì)照組比較*P < 0. 05**P < 0. 01***P < 0. 001與正常對(duì)照組比較ΔΔΔΡ
< 0. 001由表1血糖值結(jié)果可知，模型組與正常組比較，血糖值明顯升高，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理差異有極顯著性(P <0.001)；陽(yáng)性組與模型組比較血糖值明顯降低，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理差異有 極顯著性(P <0.001)；柞樹(shù)葉水提取物大劑量組與模型組比較，給藥14天血糖值明顯降 低，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理差異有顯著性(P < 0.05)，降糖率為20.49% ；柞樹(shù)葉醇提取物小、大劑 量組與模型組比較，給藥14天血糖值明顯降低，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理差異有顯著性(P < 0. 05-P < 0.01)，降糖率分別為12. 13%和22. 49%。實(shí)施例10 柞樹(shù)葉大孔吸附樹(shù)脂洗脫物對(duì)四氧嘧啶致小鼠高血糖的影響取健康ICR小鼠87只，其中正常對(duì)照組10只，尾靜脈注射生理鹽水0. lml/10g, 其余小鼠尾靜脈注射四氧嘧啶生理鹽水溶液(45mg/kg)(造模劑量根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果定的)， 造模72h后測(cè)空腹血糖，血糖值大于11. lmmol/L的小鼠為糖尿病動(dòng)物模型，按血糖值隨機(jī) 分為模型對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組(降糖靈150mg/kg)、柞樹(shù)葉(實(shí)施例3所得樣品)水洗脫 物組(200mg/kg)、20%乙醇洗脫物組(200mg/kg)、50%乙醇洗脫物組(200mg/kg)、80 %乙 醇洗脫物組(200mg/kg)、95%乙醇洗脫物組(200mg/kg)共7組。各給藥組均按0. 2ml/10g 體積灌胃給藥，每天1次，連續(xù)14天，正常對(duì)照組和模型對(duì)照組給予等體積生理鹽水。給藥 第7天眶后取血測(cè)空腹血糖，第14天摘眼球取血，測(cè)空腹血糖值。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用表示，組 間用t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。表2柞樹(shù)葉大孔吸附樹(shù)脂洗脫物藥后7天和14天對(duì)四氧嘧啶誘發(fā)高血糖小鼠血
糖的影響( 士S)
動(dòng)物數(shù)(只) 劑量 血糖(mmol/L) 降糖率(％) 組別--- 注與模型對(duì)照組比較，***P < 0. 001廣P <0.01,*P< 0. 05 ；與空白對(duì)照組比較， ΔΔΔΡ < 0. 001.由表2血糖值結(jié)果可知，藥前血糖值各造模組與空白對(duì)照組比較，小鼠血 糖值明顯升高，差異具有顯著性(P < 0. 001)，符合隨機(jī)分組要求。給藥7天血糖值模型對(duì) 照組與空白對(duì)照組比較，小鼠的血糖值明顯升高，差異有顯著性(P <0.001)；降糖靈組與 模型對(duì)照組比較，小鼠的血糖值明顯降低，差異有顯著性(P < 0. 001)，降糖率為56. 2%;柞樹(shù)葉50%乙醇洗脫物組、95%乙醇洗脫物組與模型對(duì)照組比較，小鼠的血糖值有所降低，出 現(xiàn)顯著性差異(P < 0. 05)，降糖率分別為21. 6%,23. 6% ；柞樹(shù)葉水洗脫物組、柞樹(shù)葉20% 乙醇洗脫物組、柞樹(shù)葉80%乙醇洗脫物組與模型對(duì)照組比較，小鼠的血糖值有所降低，但均 未出現(xiàn)顯著性差異(P > 0. 05)，降糖率分別為9. 0%、3. 4%、9. 9%。給藥14天血糖值模型 對(duì)照組與空白對(duì)照組比較，小鼠的血糖值明顯升高，差異有顯著性(P<0.001)；降糖靈組 與模型對(duì)照組比較，小鼠的血糖值明顯降低，差異有顯著性(P < 0. 001)，降糖率為50. 6%； 柞樹(shù)葉50%乙醇洗脫物組、95%乙醇洗脫物組與模型對(duì)照組比較，小鼠的血糖值有所降低， 出現(xiàn)顯著性差異(P < 0. 05)，降糖率分別為25. 3%,24.9% ；；柞樹(shù)葉水洗脫物組、柞樹(shù)葉 20%乙醇洗脫物組、柞樹(shù)葉80%乙醇洗脫物組與模型對(duì)照組比較，小鼠的血糖值有所降低， 但均未出現(xiàn)顯著性差異(P > 0. 05)，降糖率分別為5.4%、11.4%、11.7%。實(shí)施例11 柞樹(shù)葉聚酰胺柱洗脫物對(duì)四氧嘧啶致小鼠高血糖的影響取健康ICR小鼠54只，其中正常對(duì)照組10只，尾靜脈注射生理鹽水0. lml/10g, 其余小鼠尾靜脈注射四氧嘧啶生理鹽水溶液(45mg/kg)(造模劑量根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果定的)， 造模72h后測(cè)空腹血糖，血糖值大于11. lmmol/L的小鼠為糖尿病動(dòng)物模型，按血糖值隨機(jī) 分為模型對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組(降糖靈150mg/kg)、柞樹(shù)葉(實(shí)施例5和6所得樣品)30% 乙醇洗脫物組(200mg/kg)和50%乙醇醇洗脫物組(200mg/kg)共4組。各給藥組均按 0. 2ml/10g體積灌胃給藥，每天1次，連續(xù)14天，正常對(duì)照組和模型對(duì)照組給予等體積生理 鹽水。給藥第7天眶后取血測(cè)空腹血糖，第14天摘眼球取血，測(cè)空腹血糖值。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用
表示，組間用t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。表3柞樹(shù)葉聚酰胺柱洗脫物藥后7天和14天對(duì)四氧嘧啶誘發(fā)高血糖小鼠血糖的 影響(x±S ) 注與模型對(duì)照組比較，***Ρ < 0. 001廣P < 0. 01，*Ρ < 0. 05 ；與空白對(duì)照組比較， ΔΔΔΡ < 0. 001.由表2血糖值結(jié)果可知，藥前血糖值模型對(duì)照組與空白對(duì)照組比較，小鼠 血糖值明顯升高，差異具有顯著性(P < 0.001)，各給藥組與模型對(duì)照組比較，小鼠血糖值 沒(méi)有明顯變化，未出現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P >0.05)，符合隨機(jī)分組要求。給藥7天血糖值模型 對(duì)照組與空白對(duì)照組比較，小鼠的血糖值明顯升高，差異有顯著性(Ρ<0.001)；降糖靈組 與模型對(duì)照組比較，小鼠的血糖值明顯降低，差異有顯著性(P < 0. 001)，降糖率為54. 8%； 柞樹(shù)葉30%乙醇洗脫物組、50%乙醇洗脫物組與模型對(duì)照組比較，小鼠的血糖值明顯降低，出現(xiàn)顯著性差異(？<0.01)，降糖率分別為23.1%、25.8%。給藥14天血糖值模型對(duì)照 組與空白對(duì)照組比較，小鼠的血糖值明顯升高，差異有顯著性(P <0.001)；降糖靈組與模 型對(duì)照組比較，小鼠的血糖值明顯降低，差異有顯著性(P < 0. 001)，降糖率為56. 5%;柞樹(shù) 葉30%乙醇洗脫物組、50%乙醇洗脫物組與模型對(duì)照組比較，小鼠的血糖值明顯降低，出現(xiàn) 顯著性差異(P < 0. Ol-P < 0.001)，降糖率分別為25. 2%,27. 1%0實(shí)施例12 含柞樹(shù)葉的降糖復(fù)方具體處方組成如下柞樹(shù)葉20g|、人參15g、黃連5g以上各味藥按比例混合后，加入500_600ml水，文火煎煮30min，過(guò)濾藥渣，煎煮兩 次。早晚各一次，口服。實(shí)施例13 含柞樹(shù)葉的降糖復(fù)方具體處方組成如下柞樹(shù)葉30g|、肉桂5g、生地10g、知母10g、紅花5g以上各味藥按比例混合后，加入SOO-IOOOml水，文火煎煮30min，過(guò)濾藥渣，煎煮 兩次。早晚各一次，口服。實(shí)施例14 含柞樹(shù)葉的降糖復(fù)方具體處方組成如下柞樹(shù)葉20g|、人參15g、黃連5g、山萸肉IOg以上各味藥按比例混合后，加入500-600ml水，文火煎煮30min，過(guò)濾藥渣，煎煮兩 次。早晚各一次，口服。實(shí)施例15 含柞樹(shù)葉的降糖復(fù)方具體處方組成如下柞樹(shù)葉30g|、黃芪20g、葛根10、山萸肉10、黃連5g以上各味藥按比例混合后，加入600-800ml水，文火煎煮30min，過(guò)濾藥渣，煎煮兩 次。早晚各一次，口服。實(shí)施例16 含柞樹(shù)葉的降糖復(fù)方具體處方組成如下柞樹(shù)葉30g|、黃芪20g、淫羊藿10g、當(dāng)歸10g、黃連5g以上各味藥按比例混合后，加入SOO-IOOOml水，文火煎煮30min，過(guò)濾藥渣，煎煮
兩次。早晚各一次，口服。
權(quán)利要求
一種降血糖的藥物組合物，其特征在于包括治療有效量的有效組分，所述有效組分選自下述提取物柞樹(shù)葉的水和/或低級(jí)醇提取物。
2.權(quán)利要求1的藥物組合物，其特征在于低級(jí)醇選自碳數(shù)為C卜C5的直鏈或支鏈低級(jí) 醇；其中水和低級(jí)醇是V/V混合。
3.權(quán)利要求2的藥物組合物，其中低級(jí)醇選自甲醇、乙醇、丙醇或正丁醇中的任意一種 或它們的混合物。
4.一種降血糖的藥物組合物的制備方法，其特征在于將治療有效量的有效組分和藥學(xué) 上可接受載體混合，所述有效組分用如下方法制得1)取柞樹(shù)葉藥材，用水和/或低級(jí)醇提取，得到提取液，將所得提取液濃縮，干燥，即為 有效組分；或者，2)將步驟1)提取液直接上大孔吸附樹(shù)脂柱，或者將步驟1)提取液先濃縮再分散后， 上大孔吸附樹(shù)脂柱；依次用0-95%低級(jí)醇對(duì)大孔吸附樹(shù)脂柱進(jìn)行梯度洗脫，分別收集各洗 脫物；將其中45-55%低級(jí)醇洗脫物和/或85-99%低級(jí)醇洗脫物，濃縮干燥后即為有效組 分；或者，3)取步驟2)中45-55%低級(jí)醇洗脫物和/或85-99%低級(jí)醇洗脫物濃縮后，用15-60 目聚酰胺進(jìn)行層析，用0-95%低級(jí)醇進(jìn)行梯度洗脫，收集其30%和/或50%低級(jí)醇濃度的 洗脫物，濃縮干燥得到有效組分。
5.權(quán)利要求4的制備方法，其中，提取或者對(duì)大孔吸附樹(shù)脂柱或聚酰胺層析進(jìn)行梯度洗脫時(shí)，所述低級(jí)醇是碳數(shù)為C1-C5 的直鏈或支鏈低級(jí)醇；其中水和低級(jí)醇是V/V混合；步驟1)提取中低級(jí)醇濃度為0-95% ；用回流、浸漬、滲漉或水煎方法提?。徊襟E2)中所述大孔樹(shù)脂為聚苯乙烯型、聚丙烯酸酯型或聚甲基丙烯酸酯型中的任意 一種或幾種為骨架材料的樹(shù)脂；步驟2)中大孔吸附樹(shù)脂柱梯度洗脫是先用濃度為低于5% 的低級(jí)醇洗脫除去雜質(zhì)，再用濃度為X的低級(jí)醇洗脫，其中X ( 95% ；收集50%低級(jí) 醇洗脫物和/或95%低級(jí)醇洗脫物，濃縮；步驟3)中聚酰胺層析梯度洗脫是先用濃度為低于5%的低級(jí)醇洗脫除去雜質(zhì)，再用濃 度為X的低級(jí)醇洗脫，其中X < 95%;收集其30%和/或50%低級(jí)醇濃度的洗脫物， 濃縮。
6.權(quán)利要求4的制備方法，其中，提取或者對(duì)大孔吸附樹(shù)脂柱或聚酰胺層析進(jìn)行梯度 洗脫時(shí)，所用低級(jí)醇選自甲醇、乙醇、丙醇或正丁醇中的任意一種或它們的混合物；所述大 孔樹(shù)脂選自AB-8、D101型樹(shù)脂；濃縮干燥選用減壓、真空、冷凍或噴霧方法中的任意一種方 法進(jìn)行。
7.權(quán)利要求4的制備方法，其中，提取所用溶劑是0-95%乙醇；大孔吸附樹(shù)脂柱的梯度 洗脫是先用0-40%乙醇除去雜質(zhì)，再用50-95%乙醇洗脫，收集50%低級(jí)醇洗脫物和/或 95%低級(jí)醇洗脫物，濃縮得有效組分。
8.權(quán)利要求7制備方法，大孔吸附樹(shù)脂柱的梯度洗脫是先用0-5%乙醇除去雜質(zhì)，后用 10% -20%乙醇洗脫除去雜質(zhì)；再用50% -95%乙醇洗脫，收集50%低級(jí)醇洗脫物和/或 95%低級(jí)醇洗脫物，濃縮得有效組分。
9.權(quán)利要求4的制備方法，所述藥學(xué)上可接受載體包括常規(guī)口服制劑輔料，或者包括常規(guī)口服制劑輔料和對(duì)本發(fā)明藥效沒(méi)有明顯影響的抗氧化劑、氨基酸、維生素、碳水化合物 或植物提取物。
10.權(quán)利要求1至9任一項(xiàng)中的柞樹(shù)葉有效組分在制備預(yù)防或治療高血糖疾病的藥物 或保健品中的應(yīng)用。
11.權(quán)利要求10的應(yīng)用，所述高血糖疾病包括糖尿病。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種柞樹(shù)樹(shù)葉的提取物在制備防治高血糖疾病藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明提供了從該樹(shù)葉中分離得到提取物的制備方法，并通過(guò)藥理試驗(yàn)證明，該提取物具有明顯的降低血糖作用。本發(fā)明同時(shí)還提供該提取物用于制備防治糖尿病的藥物制劑。
文檔編號(hào)A61P3/10GK101890063SQ20091014331
公開(kāi)日2010年11月24日 申請(qǐng)日期2009年5月20日 優(yōu)先權(quán)日2009年5月20日
發(fā)明者周亞偉 申請(qǐng)人:周亞偉