專利名稱：二肽基肽酶iv的新效應(yīng)物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及由一個(gè)氨基酸及一個(gè)噻唑烷或吡咯烷基團(tuán)構(gòu)成的二肽化合物及與二肽化合物類似的化合物，及其鹽，下文中稱為二肽化合物，也涉及該化合物在治療哺乳動(dòng)物葡萄糖耐受不良，糖尿，高脂血癥，代謝性酸中毒，糖尿病，糖尿病性神經(jīng)病和腎病及糖尿病后遺癥中的應(yīng)用。
因此，本發(fā)明也涉及在作為如下的酶的活性降低效應(yīng)物(底物，偽底物，抑制劑，結(jié)合蛋白，抗體等等)的二肽化合物的輔助下降低哺乳動(dòng)物血糖濃度的簡便方法，所述的酶具有與二肽基肽酶Ⅳ相似或相同的酶活性。
DP Ⅳ或DP Ⅳ類似物(例如胞液性DP Ⅱ有與DP Ⅳ幾乎相同的底物特異性)在血循環(huán)中具有活性，在血液循環(huán)中當(dāng)脯氨酸或丙氨酸是N末端氨基酸相鄰殘基時(shí)，DP Ⅳ或DP Ⅳ類似物能夠高特異性地從生物學(xué)活性肽N末端分解出二肽。
葡萄糖依賴型促胰島多肽腸抑胃肽1-2(GIP1-42)及類胰高血糖素肽酰胺-1 7-36(GLP-17-36)，即通過胰腺刺激葡萄糖誘導(dǎo)型胰島素分泌的激素(也叫做腸降血糖素)，是DP Ⅳ的底物，因?yàn)楹笳咴隗w外及體內(nèi)能從這些肽的N末端序列上分別分解出酪氨酸-丙氨酸及組氨酸-丙氨酸二肽。
降低在體內(nèi)分解這些底物的DP Ⅳ及類DP Ⅳ酶活性能夠在實(shí)驗(yàn)室及哺乳動(dòng)物病理?xiàng)l件下有效地抑制不希望的酶活性。例如，Ⅱ型糖尿病(包括成人型糖尿病)是建立在胰島素分泌減少或特別是來自蛋白水解的異常腸降血糖素濃度所致的受體功能紊亂的基礎(chǔ)上。
依照現(xiàn)有技術(shù)，使用胰島素(例如從牛胰島分離或基因工程技術(shù)得到的物質(zhì))來治療高糖血癥及其相應(yīng)的原因和后遺癥(包括糖尿病)。所有已知的方法包括比較先進(jìn)的手段都需要大量的物質(zhì)，高額的費(fèi)用并對(duì)患者的生活質(zhì)量有明顯的損害。傳統(tǒng)方法(從十九世紀(jì)三十年代開始使用的每日靜脈注射胰島素)治療該疾病的急性癥狀，但持續(xù)使用導(dǎo)致嚴(yán)重的血管變化(動(dòng)脈硬化)及神經(jīng)損傷。
最近有建議皮下埋置植入物(胰島素以計(jì)量的方式被釋放，不需要日常的注射)及植入(移植)完好的朗罕氏細(xì)胞到功能損傷的胰腺或其它器官及組織。這種移植要求有高水平技術(shù)。而且，它們涉及對(duì)受體生物體的手術(shù)介入，這可造成危險(xiǎn)，甚至，在細(xì)胞移植時(shí)需要抑制或干擾免疫系統(tǒng)。
作為DP Ⅳ及類DP Ⅳ酶活性抑制劑的丙氨酰吡咯烷及異亮氨酰噻唑烷的使用已從PCT/DE 97/00820知道，鹽酸異亮氨酰吡咯烷及異亮氨酰噻唑烷的使用已從DD 296 075中知道。異亮氨酰噻唑烷，其在后一現(xiàn)有技術(shù)中被使用，是天然的，也就是說L-蘇型-異亮氨酰噻唑烷，在該兩篇說明書的優(yōu)先權(quán)日和申請(qǐng)日時(shí)，僅該型，即異亮氨酰噻唑烷天然的形式。
已明確知道這些化合物特別是L-蘇型-異亮氨酰噻唑烷是DP Ⅳ及類DP Ⅳ酶活性的良好效應(yīng)物，但這些化合物的使用對(duì)一些患者及疾病會(huì)造成問題。
例如糖尿病時(shí)，依賴于癥狀及嚴(yán)重程度，需要使用與現(xiàn)有已知化合物不同的效應(yīng)物如已知為了以優(yōu)化方式進(jìn)行疾病的治療，糖尿病患者的病情必須逐個(gè)穩(wěn)定。在一些時(shí)候，例如通過DP Ⅳ效應(yīng)物降低活性應(yīng)該是足夠的。也會(huì)出現(xiàn)高水平抑制劑活性及長期同樣藥物的使用所造成的副作用，特別在長期治療中。而且，為了增加體內(nèi)效應(yīng)物的吸收率需改善某些轉(zhuǎn)運(yùn)特性。
本發(fā)明的目的是對(duì)例如哺乳動(dòng)物葡萄糖糖耐受不良，糖尿，高脂血癥，代謝性酸中毒，糖尿病，糖尿病性神經(jīng)病和腎病及糖尿病后遺癥的治療提供一種新的(特別是降低活性的)效應(yīng)物，及治療這些疾病的簡單方法。
本發(fā)明的目的通過提供由一種氨基酸及一種噻唑烷或吡咯烷基團(tuán)形成的二肽化合物或二肽類似物及其鹽來達(dá)到。
將這些效應(yīng)物給予哺乳動(dòng)物，優(yōu)選口腔給予時(shí)，內(nèi)源性(或額外外源性給予)的促胰島肽GIP1-42及GLP-17-36(或GLP-17-37或它的類似物)被DP Ⅳ或類DP Ⅳ酶分解而減少，因此這些肽激素或其類似物的濃度的降低被減慢或延遲。因此，本發(fā)明是建立在血液循環(huán)中起作用的DP Ⅳ或類DP Ⅳ酶活性的降低對(duì)血糖水平會(huì)造成影響這個(gè)發(fā)現(xiàn)的基礎(chǔ)上。已發(fā)現(xiàn)1．DP Ⅳ或類DP Ⅳ酶活性的降低能提高葡萄糖刺激的或外來的腸降血糖素(或其類似物)的相對(duì)穩(wěn)定性，也就是說通過給予DPⅣ或類DP Ⅳ蛋白的效應(yīng)物，使對(duì)血中腸降血糖素分解的控制成為可能；2．腸降血糖素(或其類似物)的生物學(xué)分解穩(wěn)定性的提高導(dǎo)致內(nèi)源性胰島素作用的變化；3．通過降低血液中DP Ⅳ或類DP Ⅳ酶活性而提高腸降血糖素的穩(wěn)定性導(dǎo)致葡萄糖誘導(dǎo)性胰島素作用的隨后變化，因此導(dǎo)致對(duì)由DP Ⅳ效應(yīng)物控制的血糖水平的調(diào)節(jié)。
對(duì)本發(fā)明的這一目的特別合適的是二肽化合物，其氨基酸選自天然氨基酸，例如亮氨酸，纈氨酸，谷氨酰胺，脯氨酸，異亮氨酸，天冬酰胺及天冬氨酸。
在本發(fā)明中，通過口服給予高親和性低分子量酶抑制劑相對(duì)于在治療病理癥狀時(shí)廣泛使用的外科技術(shù)是比較經(jīng)濟(jì)的選擇。通過針對(duì)穩(wěn)定性，轉(zhuǎn)運(yùn)及清除特性利用化學(xué)方法進(jìn)行的設(shè)計(jì)，可調(diào)節(jié)作用模式及適應(yīng)不同個(gè)體的特性。
如上所說，例如在糖尿病的長期治療的情況下，可能必須提供具有所述活性的效應(yīng)物，其可符合患者的不同要求及治療他們的癥狀。本發(fā)明所說的二肽化合物顯示出在(二肽化合物)濃度為10微摩爾，特別在表1所示的條件下，二肽基肽酶Ⅳ或類DP Ⅳ酶活性至少降低10％，特別是至少降低40％。通常也要求降低至少60％或70％。優(yōu)選的效應(yīng)物還可顯示最多降低活性20％或30％。而且，本發(fā)明化合物的特別是通過轉(zhuǎn)運(yùn)Pep T1的轉(zhuǎn)運(yùn)特性顯著改善。
特別優(yōu)選的二肽化合物是L-別-異亮氨酰噻唑烷及其鹽類。這些化合物與L-蘇型-異亮氨酰噻唑烷相比，經(jīng)轉(zhuǎn)運(yùn)肽Pep T1的轉(zhuǎn)運(yùn)改善高達(dá)5倍，同時(shí)對(duì)于葡萄糖調(diào)節(jié)具有大致相同的作用程度。
在表1進(jìn)一步給出優(yōu)選化合物。
本發(fā)明中二肽化合物的鹽類可為，例如，有機(jī)鹽如乙酸鹽，琥珀酸鹽，酒石酸鹽或延胡索酸鹽，或無機(jī)酸鹽如磷酸鹽或硫酸鹽。最好使用延胡索酸鹽，其在對(duì)水解作用有高度穩(wěn)定性及比鹽酸鹽更不易溶解的同時(shí)，有很好的作用。從蓋侖制劑的觀點(diǎn)來說，這些特點(diǎn)也是有益的。
也優(yōu)選L-蘇型-異亮氨酰吡咯烷及其鹽類，特別是延胡索酸鹽，及L-別-異亮氨酰吡咯烷及其鹽類，特別是延胡索酸鹽。
二肽化合物的鹽類可以二肽(二肽類似物)組分與鹽類組分的摩爾比為1∶1或2∶1存在。例如，(異亮氨酰噻唑烷)2延胡索酸。
特別優(yōu)選的鹽類是L-蘇型-異亮氨酰噻唑烷及L-別-異亮氨酰噻唑烷的延胡索酸鹽類。
本發(fā)明涉及二肽基肽酶Ⅳ(DP Ⅳ)或類DP Ⅳ酶活性的效應(yīng)物及它們?cè)诮档筒溉閯?dòng)物血清中的血糖濃度到高血糖癥特征性血糖濃度以下中的應(yīng)用。本發(fā)明特別涉及本發(fā)明所述的DP Ⅳ或類DP Ⅳ酶活性效應(yīng)物在預(yù)防或減輕哺乳動(dòng)物的病理代謝異常中的應(yīng)用，所述病理代謝異常為例如，哺乳動(dòng)物中的葡萄糖耐受不良，糖尿，高脂血癥，代謝性酸中毒，糖尿病，糖尿病性神經(jīng)病和腎病及糖尿病后遺癥。在進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及降低哺乳動(dòng)物血清中的血糖濃度到高血糖癥特征性血糖濃度以下的方法，其特征在于給予哺乳動(dòng)物治療有效量的本發(fā)明所述的至少一種DP Ⅳ或類DP Ⅳ酶活性效應(yīng)物。
在進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及藥物組合物，也就是說藥物，其包括至少一種本發(fā)明所述的化合物或其鹽類，任選地與一種或多種藥物可接受載體及/或溶劑混合。
藥物組合物可以是，例如，腸道外或腸道配方的形式并可含有合適載體或它們可以是包括適宜口服給藥相應(yīng)載體的口服配方的形式。
此外，藥物組合物可包括一種或多種具有低血糖作用的活性成分，其可以是已知的活性成分。
本發(fā)明中DP Ⅳ或類DP Ⅳ酶活性的效應(yīng)物可用來降低哺乳生物血清中血糖水平到高血糖血癥特征性血糖濃度下，或用來生產(chǎn)相應(yīng)的藥物。
本發(fā)明中使用的DP Ⅳ或類DP Ⅳ酶效應(yīng)物可作為用來降低哺乳動(dòng)物中DP Ⅳ或類DP Ⅳ蛋白濃度的抑制劑，底物，偽底物，DP Ⅳ表達(dá)抑制劑，結(jié)合蛋白或這些酶蛋白的抗體或這些不同物質(zhì)組合的藥物可接受配方或配方混合物。本發(fā)明的效應(yīng)物可以是DP Ⅳ抑制劑如二肽衍生物或二肽模擬物L(fēng)-別-異亮氨酰噻唑烷及在表1中提到的效應(yīng)物及其延胡索酸鹽。本發(fā)明的效應(yīng)物能使患者及疾病的治療依照各自的情況來調(diào)整，特別是可以控制個(gè)體中發(fā)生的不耐受，過敏及副作用。
化合物也顯示出不同的時(shí)間有效性。醫(yī)生根據(jù)患者的不同情況能采取不同的方法一方面，他能精確地設(shè)置作用的起始速度，另一方面，可控制作用的持續(xù)時(shí)間，特別是作用的強(qiáng)度。
本發(fā)明的方法代表著降低哺乳動(dòng)物血清中已升高的血糖濃度的一種新的方法。其簡單，可經(jīng)濟(jì)開發(fā)及適應(yīng)于治療中使用，特別對(duì)建立在高于平均血糖閾值基礎(chǔ)上的疾病，適用于哺乳動(dòng)物，更適用于人類藥物。
效應(yīng)物可以通過藥學(xué)制劑的形式被給藥，該藥學(xué)制劑包括與現(xiàn)有技術(shù)已知的傳統(tǒng)載體相結(jié)合的活性成分。例如，它們可非腸道給藥(如，靜脈注射，以生理鹽水的形式)或腸道給藥(如，口服，與傳統(tǒng)的載體如葡萄糖相結(jié)合)。
為了使血糖值正常化，依照它們的內(nèi)源穩(wěn)定性及生物利用率，效應(yīng)物需要每天一次或多次給藥。例如，人用劑量可在每天0.01毫克到30.0毫克的范圍內(nèi)，優(yōu)選范圍在每千克體重0.01毫克到10毫克的效應(yīng)物。
已發(fā)現(xiàn)哺乳動(dòng)物的血中二肽基肽酶Ⅳ或類DP Ⅳ酶效應(yīng)物給藥的直接結(jié)果是，由于其活性的暫時(shí)降低，內(nèi)源的(或額外給予的外源的)促胰島肽腸抑胃肽GIP1-42及胰高血糖素樣肽酰胺-1 7-26(GLP-17-36)(或GLP-17-37或它的類似物)被DP Ⅳ或類DP Ⅳ酶分解而降低，因此這些肽激素或其類似物的濃度的降低被減慢或延遲。通過DP Ⅳ效應(yīng)物的作用，(內(nèi)源性或外源性)腸降血糖素或其類似物的穩(wěn)定性增加，其結(jié)果是由于對(duì)胰腺內(nèi)朗罕氏細(xì)胞的腸降血糖素受體的促胰島刺激來說前者的量增加，改變了身體本身胰島素的有效性，其能刺激被治療機(jī)體碳水化合物的代謝。
結(jié)果，被治療機(jī)體血清中的血糖水平降低到高血糖血癥特征性血糖濃度以下，因此可預(yù)防或減輕代謝異常，如葡萄糖耐受不良，糖尿，高糖血癥及嚴(yán)重的代謝酸中毒及糖尿病，它們是長期血液中血糖升高的臨床癥狀。
在現(xiàn)有技術(shù)所知的口服有效抗糖尿病藥中，如此有效的低分子量物質(zhì)至今為止是未知的(除了雙胍偏甲酸分子量為130)。氨?；邕蛲榈姆肿恿吭?46(甘氨酰噻唑烷)，203(異亮氨酰噻唑烷)到275(色氨酰噻唑烷)的范圍內(nèi)變化。相比之下，磺酰脲(優(yōu)降糖494)，糖類(阿卡波糖630)及噻唑烷二酮(pioglitazon:586)的分子量在500到700 Da內(nèi)變化。體內(nèi)氨酰噻唑烷被氨基肽酶水解及酸水解形成內(nèi)源性物質(zhì)，例如氨基酸及半胱胺，因此本發(fā)明化合物作為口服抗糖尿病藥的使用豐富了藥品。
在小鼠及大鼠中，經(jīng)口給予本發(fā)明中使用的化合物可比平均水平更好地治療實(shí)驗(yàn)誘導(dǎo)的高糖血癥(表2及3)。在對(duì)小鼠及大鼠所作的三周毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)中，給予有效劑量的500到1000倍不能明顯出現(xiàn)病理變化。
表1顯示了本發(fā)明化合物對(duì)DP Ⅳ的有益作用。表1在30℃,pH 7.6及離子強(qiáng)度為0.125的條件下，不同效應(yīng)物對(duì)于二肽基肽酶Ⅳ催化0.4毫摩爾底物H-Gly-Pro-pNA水解反應(yīng)的作用
已知氨酰吡咯烷及氨酰噻唑烷可被小腸粘膜細(xì)胞，血清和肝細(xì)胞上的脯氨酸氨基肽酶及氨?；彼岫拿杆纸猓亦邕蛲榄h(huán)在酸存在時(shí)(如胃酸)趨于打開，形成相應(yīng)的半胱胺衍生物(見US 458407)。因此，當(dāng)口服給藥時(shí)，驚奇地發(fā)現(xiàn)活性成分具有劑量依賴型有效性?？稍谙卤碇锌吹皆趯?duì)健康的Wistar大鼠經(jīng)口給予L-別-異亮氨酸-噻唑烷后，L-別-異亮氨酸-噻唑烷對(duì)血清DP Ⅳ活性的劑量依賴作用。
表2經(jīng)口給予及依賴于L-別-異亮氨酸-噻唑烷的劑量后在30℃，pH 7.6及0.125的離子強(qiáng)度的條件下，血清中的DP Ⅳ對(duì)于0.4毫摩爾的底物H-甘氨酸-脯氨酸-pNA的殘余活性，在給予抑制劑30分鐘后檢測
在糖尿病動(dòng)物模型中，經(jīng)口給予本發(fā)明的活性成分L-別-異亮氨酸-噻唑烷并同步口服糖刺激物后，可達(dá)到驚奇也是希望看到的結(jié)果，就是其具有降糖作用(表3)。
為了加強(qiáng)各種抗糖尿病藥的降血糖作用，通常是混合使用不同的口服有效抗糖尿病藥。雖然本發(fā)明中效應(yīng)物的抗糖尿病作用是不依賴其它已知口服抗糖尿病藥，為了達(dá)到理想的正常血糖效果，本發(fā)明的活性成分類似地可以合適制劑的形式可適用于組合治療。
因此，本發(fā)明中所使用的化合物可制成傳統(tǒng)配方，例如，片劑，膠囊，糖丸，藥丸，栓劑，小粒，氣霧劑，糖漿，液體，固體及乳劑及懸浮液和溶液，使用惰性，非毒性，藥物可接受的載體及添加劑或溶劑。在這樣的配方中，每一例子中藥物學(xué)有效化合物優(yōu)選以總混合物的約0.1到80％(重量)、優(yōu)選1-50％(重量)的濃度存在，也就是說足夠產(chǎn)生指定范圍的劑量的量。
表3對(duì)同步進(jìn)行糖耐受試驗(yàn)不同的動(dòng)物模型大鼠經(jīng)口給予20微摩爾的L-別-異亮氨酸-噻唑烷后，在60分鐘期間循環(huán)血糖的降低程度
胃腸道粘膜對(duì)本發(fā)明中所使用化合物的良好吸收使得能夠使用大量蓋侖制劑這些物質(zhì)作為藥物能以糖丸，膠囊，可咬型膠囊，片劑，滴劑，糖漿及栓劑和鼻腔噴霧的形式被使用。
通過使用溶劑及/或載體，任選地使用乳化劑及/或分散劑來擴(kuò)散活性成分生產(chǎn)配方，任選地，例如水作為稀釋劑時(shí)有機(jī)溶劑可作為助溶劑。
下列的輔助成分可提及水，非毒性有機(jī)溶劑，如石蠟(礦物油部分)，植物油(如油菜籽油，花生油，芝麻油)，醇類(如乙醇，甘油)，乙二醇類(如丙二醇，聚乙二醇)；固體載體，例如粉碎的天然礦物質(zhì)(高度分散的硅酸，硅酸鹽)，糖類(如未加工糖，乳糖，葡萄糖)；乳化劑，如非離子及陰離子乳化劑(如聚氧乙烯脂肪酸酯，聚氧乙烯脂肪醇醚，烷基磺酸鹽及芳基磺酸鹽)，分散劑(如，木質(zhì)素，亞硫酸廢液，甲基纖維素，淀粉及聚乙烯吡咯酮)及助流劑(如硬脂酸鎂，滑石，硬脂酸及十二烷基硫酸鈉)及任選地調(diào)味劑。
傳統(tǒng)的給藥方式是有效的，優(yōu)選腸道或腸道外給藥，特別是經(jīng)口給藥。在腸道給藥時(shí)，除了包括上述的載體，片劑也可包括其它添加劑，如檸檬酸鈉，碳酸鈣及磷酸鈣，也可加入各種輔助成分，如淀粉，特別是土豆淀粉，明膠等。為制成片劑可使用助流劑，如硬脂酸鎂，十二烷基硫酸鈉，滑石。在為口服使用的水性懸浮液及/或酏劑的情況下，為了各種口味除了上述所提及的添加劑，可在有效成分中加入矯味劑或色素。
對(duì)于腸道外給藥，可使用活性成分的溶液，其使用了合適的液態(tài)載體物質(zhì)。在靜脈給藥時(shí)，已證明給藥劑量大約在0.01到2.0克/千克體重/天的范圍內(nèi)，特別是在0.01到1.0克/千克體重/天的范圍內(nèi)效果較好，在腸道給藥時(shí)，給藥劑量大約在0.01到2.0克/千克體重/天的范圍內(nèi)，特別是在0.01到1.0克/千克體重/天的范圍內(nèi)效果較好。
不過在一些時(shí)候，根據(jù)試驗(yàn)動(dòng)物或患者的體重或給藥途徑，并且以動(dòng)物的種類及其對(duì)藥物的個(gè)體或給藥間隔的不同反應(yīng)為基礎(chǔ)，必須以不同于指示量給藥。一些時(shí)候例如使用少于上面所提及的最小劑量就夠了，而另一些時(shí)候需使用超過上述所提及劑量的上限。當(dāng)使用較大劑量時(shí)，最好一天分成幾份使用。對(duì)于人類也是上述的劑量范圍，同時(shí)上面的建議也適用。
藥物配方的實(shí)施例1. 每粒膠囊中含有100毫克的L-別-異亮氨酰噻唑烷對(duì)于約10,000粒膠囊，需準(zhǔn)備下列成分的溶液L-別-異亮氨酰噻唑烷鹽酸鹽1.0千克甘油 0.5千克聚乙二醇 3.0千克水 0.5千克5.0千克溶液以已知方式放入軟明膠膠囊中，膠囊適于咀嚼或吞咽。
2．含有100毫克L-別-異亮氨酰噻唑烷的片劑/糖衣片劑或糖丸下面是關(guān)于制備100,000個(gè)片劑所需的量L-別-異亮氨酰噻唑烷鹽酸鹽，細(xì)碎10.0千克葡萄糖 4.35千克乳糖 4.35千克淀粉 4.50千克纖維素，細(xì)碎 4.50千克上述成分混合后與下面溶液相混，該溶液由以下來制備聚乙烯吡咯烷酮 2.0千克多乙氧基醚 0.1千克及水 大約5.0千克并用已知的方法將潮濕塊磨碎成粒狀，隨后加入0.2千克的硬脂酸鎂，干燥。最后得到30.0千克的片劑混合物，將其制成圓頂樣每片300毫克的片劑。該片劑能用已知的方法包衣或糖衣化。
下面是優(yōu)選化合物的技術(shù)數(shù)據(jù)。
關(guān)于Ile-Thia*延胡索酸鹽(異構(gòu)體)及其它鹽類的實(shí)驗(yàn)
IT*F=異亮氨酰噻唑烷延胡索酸鹽核磁共振及高效液相色譜數(shù)據(jù)證實(shí)了實(shí)驗(yàn)物質(zhì)的性質(zhì)。
測定物質(zhì)Ki的測量條件酶在25毫摩爾Tris pH 7.6,30％硫酸銨，0.5毫摩爾EDTA,0.5毫摩爾DTE中的DP Ⅳ豬腎，0.75毫克/毫升，18單位/毫升(GPpNA)儲(chǔ)存溶液用測量緩沖液稀釋成1∶250緩沖液40毫摩爾HEPES pH 7.6,I=0.125(KCl)底物GPpNA*HCl儲(chǔ)存溶液2.1毫摩爾測量裝置Perkin-Elmer生物分析讀數(shù)儀，HTS 7000Plus,T=30℃λ=450納米測量混合物100微升 緩沖液100微升 底物(三種不同濃度0.8毫摩爾-0.2毫摩爾)50微升水/抑制劑(七種不同濃度，2.1微摩爾-32.8納摩爾)10微升 酶緩沖液，水/抑制劑及酶預(yù)熱到30℃，反應(yīng)在加入如上一樣預(yù)熱的底物后開始。
檢測進(jìn)行四次。
測量時(shí)間為10分鐘。
熔點(diǎn)測定使用來自Leica Aktiengesellschaft的Kofler加熱平臺(tái)顯微鏡或DSC儀器(Heumann-Pharma)來測定熔點(diǎn)，數(shù)值未校正。
旋光性用來自Perkin-Elmer公司的“Polarimeter 341”或更先進(jìn)的設(shè)備記錄在不同波長條件下的旋轉(zhuǎn)值。
質(zhì)譜測量條件在購自PE Sciex公司的“API165”或“API 365”設(shè)備上利用電噴離子化(ESI)來記錄質(zhì)譜。
這個(gè)試驗(yàn)中濃度大約為c=10微克/毫升，物質(zhì)被MeOH/H2O50∶50,0.1％HCO2H吸收，使用電噴泵(20微升/分鐘)灌輸。在陽性狀態(tài)[M+H]+,ESI電壓U=5600V的條件下測量。
鹽類有以下數(shù)據(jù)
檢測Ile-Thia的溶解度Ile-Thia*延胡索酸鹽稱量為10.55毫克相應(yīng)于0.02毫摩爾(520.72克/摩爾)加入100微升H2O蒸餾100微升不溶，目視對(duì)表面不濕潤從200微升開始溶解一直到400微升才完全溶解2.63％
因此說這種鹽很少潮濕并不易分解Ile-Thia*琥珀酸鹽稱量為16.6毫克相應(yīng)于0.031毫摩爾(522.73克/摩爾)加入16微升H2O蒸餾16微升不溶，目視“吸收“水分從66微升到1.5毫升可觀察到物質(zhì)不完全溶解Ile-Thia*酒石酸鹽稱量為17.3毫克相應(yīng)于0.049毫摩爾(352.41克/摩爾)加入100微升H2O蒸餾100微升完全溶解17.3％Ile-Thia*磷酸鹽稱量為15.5毫克相應(yīng)于0.051毫摩爾(300.32克/摩爾)加入100微升H2O蒸餾可觀察到100微升微溶不斷每次加入100微升水到400微升時(shí)完全溶解3.87％Ile-Thia*鹽酸鹽稱量為16.1毫克相應(yīng)于0.067毫摩爾(238.77克/摩爾)
加入100微升H2O蒸餾100微升完全溶解16.1％Ile-Thia*鹽類的概括分析Boc保護(hù)氨基酸Boc-Ile-OH放入乙酸乙酯中并將混合物冷卻到大約零下5℃。逐滴加入N-甲基嗎啉，在恒溫下逐滴加入氯化新戊酸(試驗(yàn)室規(guī)模)或新己酰氯(中試規(guī)模)。為了活化，需將反應(yīng)物攪拌幾分鐘。隨后依次逐滴加入N-甲基嗎啉(試驗(yàn)室規(guī)模)及噻唑烷鹽酸鹽(試驗(yàn)室規(guī)模)，加入噻唑烷(中試規(guī)模)。實(shí)驗(yàn)室中的加工是用傳統(tǒng)方法使用鹽溶液，中試時(shí)混合物用氫氧化鈉及醋酸溶液來純化。
使用鹽酸/二惡烷(試驗(yàn)室規(guī)模)或硫酸(中試規(guī)模)來除去Boc保護(hù)基團(tuán)。
在實(shí)驗(yàn)室中從乙醇/乙醚中結(jié)晶出鹽酸鹽。
在中試中，通過加入氫氧化鈉/氨來制備游離胺。延胡索酸溶解到熱乙醇中，逐滴加入游離胺，出現(xiàn)(Ile-Thia)2延胡索酸鹽的沉淀。
電泳分析異構(gòu)體及對(duì)映體。
權(quán)利要求
1.由一個(gè)氨基酸及一個(gè)噻唑烷或吡咯烷基團(tuán)形成的二肽化合物，及其鹽。
2.如權(quán)利要求1中所述的二肽化合物，其特征在于所述氨基酸選自天然氨基酸。
3.前述任一項(xiàng)權(quán)利要求中所述的二肽化合物，其特征在于在濃度10微摩爾下，其降低二肽基肽酶Ⅳ或類DPⅣ酶活性至少10％。
4.權(quán)利要求3中所述的二肽化合物，其特征在于其降低活性至少40％。
5.前述任一項(xiàng)權(quán)利要求中所述的二肽化合物，其特征在于所述氨基酸選自亮氨酸，纈氨酸，谷氨酰胺，脯氨酸，異亮氨酸，天冬酰胺及天冬氨酸。
6.前述任一項(xiàng)權(quán)利要求中所述的二肽化合物，其為L-蘇型-異亮氨酰吡咯烷，L-別-異亮氨酰噻唑烷，L-別-異亮氨酰吡咯烷及其鹽。
7.前述任一項(xiàng)權(quán)利要求中所述的二肽化合物，其特征在于所述的鹽是有機(jī)鹽如乙酸鹽，琥珀酸鹽，酒石酸鹽或延胡索酸鹽，或無機(jī)酸鹽如磷酸鹽或硫酸鹽。
8.前述任一項(xiàng)權(quán)利要求中所述的二肽化合物的鹽，其特征在于它們以二肽化合物與鹽的摩爾比為1∶1或2∶1存在。
9.前述任一項(xiàng)權(quán)利要求中所述的二肽化合物的鹽，其為延胡索酸鹽。
10.權(quán)利要求9中所述的二肽化合物的鹽，其為L-蘇型-異亮氨酰噻唑烷延胡索酸鹽或L-別-異亮氨酰噻唑烷延胡索酸鹽。
11.藥物組合物，其特征在于其包括包括至少一種前述任一項(xiàng)權(quán)利要求中所述的化合物或其鹽，任選地與一種或多種藥物學(xué)上可接受的載體及/或溶劑混合。
12.權(quán)利要求11中所述的藥物組合物，其特征為載體是用于腸道外或腸道配方的載體。
13.權(quán)利要求11中所述的藥物組合物，其特征為其以經(jīng)口給藥的配方形式存在。
14.權(quán)利要求11-13任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其特征為其額外包括一種具有降血糖作用的活性成分。
15.前述任一項(xiàng)權(quán)利要求中所述的至少一種化合物或藥物組合物在制備用于降低二肽基肽酶Ⅳ活性或類二肽基肽酶Ⅳ活性的藥物中的應(yīng)用。
16.至少一種權(quán)利要求1-14任一項(xiàng)所述的化合物或組合物在制備可使哺乳動(dòng)物血清中血糖水平降低到高血糖癥特征性血糖水平以下的藥物中的應(yīng)用。
17.至少一種權(quán)利要求1-14任一項(xiàng)所述的化合物或組合物在制備用于口服治療與糖尿病相關(guān)的代謝紊亂的藥物中的應(yīng)用。
18.至少一種權(quán)利要求1-14任一項(xiàng)所述的化合物或組合物在制備用于治療哺乳動(dòng)物葡萄糖耐受不良，糖尿，高脂血癥，代謝性酸中毒，糖尿病，糖尿病性神經(jīng)病和腎病及糖尿病后遺癥的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及由一個(gè)氨基酸及一個(gè)噻唑烷或吡咯烷基團(tuán)形成的二肽化合物,與二肽化合物類似的化合物,及其鹽。本發(fā)明還涉及所述化合物在治療哺乳動(dòng)物葡萄糖耐受不良,糖尿,高脂血癥,代謝性酸中毒,糖尿病,糖尿病性神經(jīng)病和腎病及糖尿病后遺癥中的應(yīng)用。
文檔編號(hào)A61K31/425GK1303381SQ99806723
公開日2001年7月11日 申請(qǐng)日期1999年5月28日 優(yōu)先權(quán)日1998年5月28日
發(fā)明者漢斯-烏爾里?！さ履绿? 康拉德·格隆德, 達(dá)格瑪·施倫齊希, 蘇珊·克魯貝爾 申請(qǐng)人:前體生物藥物開發(fā)有限公司