一種環(huán)二肽在制備治療皮膚創(chuàng)傷的藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明所屬生物醫(yī)藥領(lǐng)域，特別涉及一種環(huán)二肽的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 皮膚創(chuàng)傷是人們在日常生產(chǎn)生活中的常見疾病，如不及時處理會導(dǎo)致感染，化 膿，留疤，甚至導(dǎo)致全身的膿毒癥，危及生命。
[0003] 燒燙傷是戰(zhàn)時及日常生活中常見的機體損傷。隨著現(xiàn)代工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)技術(shù)的發(fā)展， 化學(xué)和電子燒傷亦呈增多的趨勢。在森林火災(zāi)、易燃易爆物燃燒爆炸、公共場所失火等災(zāi)害 中很大的可能會造成大量的人員燒燙傷。
[0004] 深度燒燙傷局部組織的病理變化，按局部損傷程度的不同層次，將其劃分為類似 同心園狀的三個區(qū)帶，即：1.中心為凝固壞死帶；2.周圍為毛細血管淤滯帶；3.外圍為充 血帶。其中壞死帶代表該處組織壞死，淤滯帶和充血帶的損傷組織主要改變的是毛細血管 通透性的增加和擴張，血流緩慢容易發(fā)生微血管栓塞，使局部組織缺氧并造成對全身的影 響。因此，要對燒燙傷進行治療，首先需要阻止和改善淤滯帶和充血帶的病理生理變化及其 對全身的影響，使其盡快的恢復(fù)并達到生理的修復(fù)狀態(tài)，而不是向更深或更壞的病理變化 發(fā)展。
[0005] 臨床上常用的治療燒燙傷的藥物以中藥的種類最多，西藥其次。中藥處方是以中 藥材為原料，經(jīng)過一定的工藝步驟制得的，但中藥材中除了有效成分外還有其他的成分，這 些成分對受損傷的皮膚組織的作用不明，存在潛在的風(fēng)險，而使用中藥外用制劑對燒燙傷 的傷口進行處理后，大量的色素沉積，使得創(chuàng)面愈合后疤痕更為明顯，影響美觀。西藥主要 以消炎和對癥治療為主，在治療過程中副作用較大，如磺胺嘧啶銀抗菌作用對控制創(chuàng)面感 染雖有顯著效果，但對細胞的活性有一定的損害作用，對壞死組織的穿透性差。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 針對上述中藥與西藥被用于治療燒燙傷患者的過程中會出現(xiàn)的問題，發(fā)明人想到 利用生物學(xué)中的小分子物質(zhì)能夠直接穿透細胞膜這一特征，然后將其直接作用在創(chuàng)面上， 小分子物質(zhì)就能夠很快的進入到受損傷的組織細胞中，從而激活受傷細胞的自我修復(fù)能 力，從根本上來對創(chuàng)面進行治療修復(fù)，這樣就避免了外用藥物對燒燙傷患者的不良反應(yīng)的 出現(xiàn)。經(jīng)過長期的實驗研究，發(fā)明人也終于找到了具有對創(chuàng)面修復(fù)愈合能力的小分子物 質(zhì)，該小分子物質(zhì)屬于環(huán)肽中的環(huán)二肽，分子結(jié)構(gòu)簡單。
[0007] 本發(fā)明提供了一種小分子物質(zhì)在制備皮膚外傷的藥物中應(yīng)用，特別是一種環(huán)二 肽在燒燙傷中的應(yīng)用。
[0008] 本發(fā)明所述的環(huán)二肽是環(huán)-L-脯-L-丙二肽，相對分子質(zhì)量為168. 23,具體的分子 結(jié)構(gòu)如下：
[0009] 本發(fā)明所述的環(huán)-L-脯-L-丙二肽可以由化學(xué)合成制得，也可從生物體中提取純 化得到。
[0010] 所述的環(huán)-L-脯-L-丙二肽的化學(xué)合成的制備方法，其特征在于合成步驟包括縮 合、脫保護、環(huán)化三個階段，具體技術(shù)方案如下：
[0011] 1.中和縮合：取進行Boc氨基保護的L-脯氨酸與丙氨酸甲酯鹽酸鹽在含有 THF(四氫呋喃）、吡啶、（Boc)20、DMAP (催化劑）的條件下進行中和縮合反應(yīng)得到N-叔丁 氧羰基-脯氨酰丙氨酸甲酯；
[0012] 2.脫保護：在EtoAc (乙酸乙酯）和HC1的飽和溶液的作用下對步驟1中得到的 N-叔丁氧羰基-脯氨酰丙氨酸甲酯進行氨基脫保護處理，得到脯氨酰丙氨酸甲酯；
[0013] 3.環(huán)化：將步驟2中得到的脯氨酰丙氨酸甲酯與甲醇混合，用NaHC03調(diào)節(jié)pH后， 加熱回流18小時，過濾，柱層析純化，得到白色的環(huán)-L-脯-L-丙二肽。
[0014] 合成路線如下：
[0016] 本發(fā)明所述的環(huán)-L-脯-L-丙二肽分子量小，結(jié)構(gòu)簡單，人工合成簡單，對燒燙傷 的治療效果顯著，在治療過程中能很快透過損傷皮膚組織進入細胞，修復(fù)受損細胞，激活自 我修復(fù)能力，使得創(chuàng)面愈合速度加快，愈合復(fù)發(fā)率低，疤痕淺，并且避免了在使用中藥和西 藥治療后的潛在副作用。
[0017] 本發(fā)明所述的環(huán)-L-脯-L-丙二肽可以直接作為外用藥物直接涂抹在經(jīng)過處理的 燒燙傷傷口上，有靶向性的對癥治療，副作用小，療效顯著；也可作為內(nèi)服制劑，服用后可以 提高機體免疫功能，增強對抗外界細菌病毒感染的能力。
【具體實施方式】
[0018] 以下是結(jié)合具體試驗對本發(fā)明的說明，并不是對本發(fā)明保護范圍的限制。
[0019] 實施例1本發(fā)明中所述的環(huán)-L-脯-L-丙二肽的制備方法
[0020] 主要藥品試劑：L_丙氨酸、經(jīng)Boc氨基保護的脯氨酸
[0021] 制備環(huán)-L-脯-L-丙二肽的過程：
[0022] (1)丙氨酸甲酯鹽酸鹽的制備：向適量甲醇與二氯亞砜的混合液中加入L-丙氨酸 l〇g，在室溫下攪拌24h。TLC跟蹤反應(yīng)完成，減壓旋干溶劑，得到白色的丙氨酸甲酯鹽酸鹽 14. 78g。
[0023] (2)中和縮合反應(yīng)：向100ml無水四氫呋喃中加入步驟（1)中得到的丙氨酸甲酯 鹽酸鹽、經(jīng)Boc氨基保護的脯氨酸20g、吡啶20ml、DMAP，待全部混合后，在氬氣的保護下 加入溶于無水四氫呋喃的（Boc)20,室溫下攪拌10小時。TLC跟蹤反應(yīng)完成，柱層析純化 (石油醚：乙酸乙酯=4:1)，旋干溶劑得到黃色的N-叔丁氧羰基-脯氨酰丙氨酸甲酯固體 28.32g〇
[0024] (3)Boc保護氨基脫保護處理：取步驟（2)中得到的N-叔丁氧羰基-脯氨酰丙氨 酸甲酯，加入乙酸乙酯鹽酸（HCl/EtOAc)的飽和溶液2. 6L，冰水浴下攪拌2h，冰水浴中減壓 蒸掉溶劑，以甲醇-乙醚重結(jié)晶得白色的脯氨酰丙氨酸甲酯固體22. 31g。
[0025] (4)環(huán)-L-脯-L-丙二肽的制備：將步驟（3)中得到的脯氨酰丙氨酸甲酯加入到 0. 9L甲醇中，用NaHC03調(diào)節(jié)pH為7-8,加熱回流18h，過濾，柱層析純化（乙酸乙酯：甲醇 =2:1)，最后得到白色固體環(huán)-L-腦-L-丙二膚16. 45g。
[0026] 實施例2環(huán)-L-脯-L-丙二肽在燒燙傷中的應(yīng)用
[0027] 本實施例的目的在于對本發(fā)明中所述的環(huán)-L-脯-L-丙二肽在制備治療燒燙傷藥 物中的應(yīng)用，以小鼠實驗性燒燙傷的結(jié)果做進一步的說明。
[0028] 1、實驗材料
[0029] 1. 1樣品：按實施例1制得樣品：環(huán)-L-脯-L-丙二肽
[0030] 1. 2實驗動物：18_22g健康昆明種小鼠，180只
[0031] 1. 3實驗試劑：10%硫化鈉溶液、乙醚、濕潤燒傷膏（汕頭市美寶制藥有限公司）
[0032] 2、對環(huán)-L-脯-L-丙二肽治療小鼠燒燙傷功能效果的評價方法
[0033] 2. 1對小鼠實驗性燙傷的影響
[0034] 健康昆明種小鼠30只，隨機分為3組，每組10只，實驗前24h用10 %硫化鈉脫毛劑 脫去小鼠背部的毛，乙醚麻醉后，用熔化至150°C的石蠟液0. 5mL滴至脫毛部位，造成ΙΙΓ 燙傷，然后按表1分組并在燙傷部位涂抹給藥，3個分組給藥方法都為早晚給藥2次，觀察燙 傷部位愈合時間，燙傷部位用數(shù)碼相機拍照，用IPP5. 1圖像分析軟件包測量各組小鼠背部 燙傷面積。用所測結(jié)果進行統(tǒng)計學(xué)分析，結(jié)果見表1。
[0035] 由表1可以看出，環(huán)-L-脯-L-丙二肽劑量組可明顯縮短燙傷后的創(chuàng)面愈合時間， 同時亦能使燙傷創(chuàng)面面積明顯縮小，與生理鹽水組比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 〇. 05, P < 0. 01)，在涂藥后期的治療過程中，環(huán)-L-脯-L-丙二肽在對小鼠燙傷的修復(fù)效果明顯高 于濕潤燒傷膏組。重復(fù)實驗3次，每次實驗結(jié)果趨勢同表1中結(jié)果趨勢相同。
[0036] 表1環(huán)-L-脯-L-丙二肽對小鼠實驗性燙傷的影響結(jié)果U 土S)
[0038] 注#表示與生理鹽水組比較，ρ〈0·05
[0039] 2. 2對小鼠實驗性燒傷的影響
[0040] 健康昆明種小鼠30只，隨機分為3組，每組10只，于實驗前24h用10%硫化鈉脫 毛劑脫去小鼠背部的毛，乙醚麻醉后，用石棉紙板一小塊，中間挖空3cm32cm，置于小鼠背 上，用吸管取0.