專利名稱：治療后期過(guò)敏反應(yīng)和炎性疾病的方法和組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及預(yù)防和逆轉(zhuǎn)后期過(guò)敏反應(yīng)和炎性疾病的癥狀及表現(xiàn)的方法和組合物。
可以認(rèn)為慢性哮喘主要是與支氣管痙攣有關(guān)的炎性疾病。對(duì)刺激原反應(yīng)的反應(yīng)程度和支氣管的變窄，在哮喘病人中比在正常個(gè)體中更大。持續(xù)的炎癥引起支氣管反應(yīng)過(guò)度或呼吸道反應(yīng)過(guò)度(AHR)?？赡艽嬖谡衬に[、粘液堵塞和過(guò)度分泌；肺軟組織正常。呼吸道狹窄可自動(dòng)或由于治療而逆轉(zhuǎn)。1型(即發(fā))過(guò)敏反應(yīng)可能在兒童及很多成人哮喘的進(jìn)程中起重要作用；但是，當(dāng)成人中該疾病發(fā)作時(shí)，過(guò)敏因素難于確定。接觸冷的干燥空氣、鍛煉及其它加重因素可誘發(fā)哮喘。
對(duì)哮喘地藥物治療的總目標(biāo)是預(yù)防支氣管痙攣并對(duì)支氣管反應(yīng)過(guò)度進(jìn)行長(zhǎng)期控制。由于對(duì)于患者或醫(yī)生來(lái)說(shuō)預(yù)見(jiàn)何時(shí)可能發(fā)生通常是不可能的，故患有幾乎全部是間斷性的和/或完全季節(jié)性的發(fā)作的患者可能需要連續(xù)的治療。
β激動(dòng)劑用作支氣管擴(kuò)張劑；它們刺激β2-腎上腺素能受體、增加細(xì)胞內(nèi)cAMP并可抑制肥大細(xì)胞介質(zhì)的釋放。其它可利用的藥物包括茶堿和有關(guān)黃嘌呤藥物，它們通過(guò)未知的機(jī)理造成支氣管擴(kuò)張；雙色甘酸物，色甘酸阻止介質(zhì)物質(zhì)的釋放并阻斷呼吸系統(tǒng)神經(jīng)原反射；而皮質(zhì)類固醇主要降低炎癥和水腫?？鼓憠A藥物可以通過(guò)在受體水平阻斷副交感神經(jīng)膽堿能刺激來(lái)減緩支氣管痙攣?？菇M胺藥物偶爾會(huì)防止或中止過(guò)敏性哮喘發(fā)作，特別是在兒童中，但是它們對(duì)哮喘只能部分有效，因?yàn)榻M胺只是很多介質(zhì)中的一種。
目前用于治療過(guò)敏性哮喘的藥物的藥征有若干缺點(diǎn)?？偟膩?lái)說(shuō)，常規(guī)試劑作用的時(shí)間較短，且當(dāng)抗原激發(fā)發(fā)生后，其可能部分或全部無(wú)效。此外，由于與這些試劑如β2-腎上腺素能激動(dòng)劑和皮質(zhì)類固醇使用有關(guān)的嚴(yán)重副作用，這些試劑的治療安全閾值較小，故使用它們的患者必須小心控制。
支氣管反應(yīng)過(guò)度(或AHR)是哮喘的證明并與發(fā)生的呼吸道炎癥緊密相關(guān)。哮喘及炎癥的惡化與支氣管反應(yīng)過(guò)度的增加有關(guān)，其抗原由抗原性或非抗原性刺激誘發(fā)。β2-腎上腺素能激動(dòng)劑是治療支氣管痙攣的強(qiáng)效制劑，但是對(duì)呼吸道炎癥或支氣管反應(yīng)過(guò)度無(wú)作用。事實(shí)上，β2-腎上腺素能試劑單獨(dú)的慢性使用，通過(guò)引起β2-受體的下調(diào)，可能加重支氣管反應(yīng)過(guò)度。目前，只有皮質(zhì)類固醇是有效的制劑，它們消除支氣管反應(yīng)過(guò)度。雖然對(duì)哮喘的成人患者來(lái)說(shuō)吸入皮質(zhì)類固醇相對(duì)來(lái)說(shuō)是安全的，但是這些試劑對(duì)兒童具有極端的毒性，包括腎上腺抑制和骨密度和生長(zhǎng)的降低。因此，尋找更為安全有效的降低支氣管反應(yīng)過(guò)度的試劑仍在繼續(xù)進(jìn)行。
患有過(guò)敏性哮喘的病人，在特定抗原吸入激發(fā)后，顯示出至少兩種不同類型的支氣管反應(yīng)。大多數(shù)人只發(fā)生急性支氣管收縮反應(yīng)，在1-3小時(shí)內(nèi)可自動(dòng)好轉(zhuǎn)；這些人被稱為“急性反應(yīng)者”。但是，少數(shù)人發(fā)生早期和后期的反應(yīng)。這些人被稱為“雙重反應(yīng)者”。在雙重反應(yīng)者中，急性反應(yīng)自動(dòng)好轉(zhuǎn)后4-12小時(shí)接著發(fā)生呼吸道阻力的第二次增加(“后期反應(yīng)”)。后期反應(yīng)及雙重反應(yīng)者具有重要的臨床意義，這是由于它們與延長(zhǎng)的呼吸道反應(yīng)過(guò)度或過(guò)度反應(yīng)(AHR)的關(guān)系，癥狀的惡化及臨床哮喘的總體惡化形式，需要主動(dòng)治療。
對(duì)過(guò)敏性動(dòng)物的藥理學(xué)研究表明不僅支氣管收縮反應(yīng)，還有炎癥細(xì)胞返流及介質(zhì)釋放形式在雙重反應(yīng)者中與急性反應(yīng)者有很大差別。其中在急性期中組胺似乎是支氣管收縮劑介質(zhì)，脂氧合酶途徑(即白三烯)的活化產(chǎn)物可能是參與后期反應(yīng)的主要介質(zhì)。但是，肥大細(xì)胞在Ig-E介導(dǎo)的過(guò)敏性呼吸道反應(yīng)中具有決定作用，而色甘酸鈉(肥大細(xì)胞膜穩(wěn)定劑)理論上在“急性”和“雙重”反應(yīng)者中可防止支氣管收縮反應(yīng)。肥大細(xì)胞亞型的多相性可在散開(kāi)反應(yīng)中扮演重要角色，且其可能依靠信號(hào)傳導(dǎo)(第二信使系統(tǒng))中的不同。
在過(guò)去幾年中已發(fā)現(xiàn)支氣管內(nèi)使用的肝素可以是支氣管痙攣和支氣管收縮的有效抑制劑，并且在預(yù)防哮喘中有應(yīng)用價(jià)值(見(jiàn)，例如，Ahmed等，New Eng.J.Med.，32990-95，1993；Ahmed，Resp.DrugDeliv.，IV55-63，1994)。還進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)低分子量肝素，例如平均分子量為4000-5000D的肝素有效地防止抗原誘發(fā)的支氣管收縮；這些低分子量肝素比商購(gòu)的肝素還表現(xiàn)出相當(dāng)小的抗凝活性，并且當(dāng)這些試劑用于治療哮喘時(shí)表現(xiàn)出理想的性質(zhì)(見(jiàn)Ashkin等，Am.Rev.Resp.Dis.，1993 Intl.Conf.Abstracts，p.A660)。但是當(dāng)在患者已接觸抗原后給藥時(shí)，商購(gòu)的和低分子量的肝素在抑制AHR方面效果都是不夠理想的。
在原案申請(qǐng)系列號(hào)No.08/516,786中，我們公開(kāi)了平均分子量小于約3000D的超低分子量肝素(ULMWH)，即使當(dāng)患者被抗原激發(fā)后給藥，它們?cè)谝种萍毙韵磻?yīng)者的AHR中也是有效的。但是，試驗(yàn)和臨床研究表明雖然吸入的商購(gòu)肝素也可減輕急性反應(yīng)者的早期抗原誘發(fā)的支氣管收縮(雖然不是在抗原激發(fā)后)，但是在治療雙重反應(yīng)者時(shí)卻是無(wú)效的。因此，在我們對(duì)ULMWH早期研究后，仍存在疑問(wèn)，即這些物質(zhì)在治療雙重或后期反應(yīng)者中是否象在急性反應(yīng)者中一樣有效。
對(duì)作為雙重反應(yīng)者的哮喘患者的常規(guī)治療方案一般是更主動(dòng)且時(shí)間更長(zhǎng)的如上所述對(duì)急性反應(yīng)者的臨床治療。但是，這些治療方法在抑制如上所述AHR中沒(méi)有實(shí)際效果，并導(dǎo)致它們作用時(shí)間較短，不能防止后期反應(yīng)和在雙重反應(yīng)者中觀察到的AHR。
然而，應(yīng)指出呼吸道只是被后期反應(yīng)(LPR′s)影響的器官或組織的原形。醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)中已確定在雙重反應(yīng)者哮喘患者中觀察到的后期支氣管收縮和AHR不是限于哮喘或甚至于肺病癥的獨(dú)立的現(xiàn)象。除了肺病癥外，還有LPR′s的皮膚、鼻、眼和系統(tǒng)癥狀。這些過(guò)敏性LPR現(xiàn)象與免疫學(xué)機(jī)理密切相關(guān)。見(jiàn)Lemanske和Kaliner，“后期過(guò)敏性反應(yīng)(Late phase Allergic Reactions)”，Allergies，Principles andPractice(Mosby Yearbook，Inc.，4th ed.1997)。按照對(duì)LPR機(jī)理的最新解釋，似乎這些確診的臨床疾病(不論是皮膚、肺、鼻、眼或其它器官)的過(guò)敏機(jī)理為組織學(xué)炎性組分參與，其在抗原激發(fā)后發(fā)生的即發(fā)過(guò)敏或超敏反應(yīng)之后。反應(yīng)的結(jié)果似乎與肥大細(xì)胞介質(zhì)有關(guān)，并被其它靶器官中的常駐細(xì)胞傳播或被募集進(jìn)入肥大細(xì)胞位點(diǎn)或嗜堿性脫粒的細(xì)胞傳播。在處理多種過(guò)敏性疾病和哮喘中被證明有價(jià)值的皮質(zhì)類固醇可能是有利的，因?yàn)樗鼈兡軠p輕此炎癥過(guò)程。
此外，有肺部以外的疾病，其中炎癥反應(yīng)扮演主要角色，例如，炎性腸道疾病、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、腎小球性腎炎和炎性皮膚疾病。這些病癥也常用抗炎劑治療，它們作用期短，或象類固醇和非甾類抗炎藥，可經(jīng)常引起不利的系統(tǒng)或胃腸道反應(yīng)。
需要對(duì)于后期過(guò)敏反應(yīng)和炎性疾病的改善的藥物治療。
本發(fā)明的目的之一是提供治療后期過(guò)敏性反應(yīng)或炎癥反應(yīng)為特征的病癥的更有效、更安全的方法和組合物。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供治療抗原引起的后期哮喘和支氣管反應(yīng)過(guò)度的方法和組合物，其沒(méi)有現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供治療哮喘性雙重反應(yīng)者的方法和組合物，其在預(yù)防和逆轉(zhuǎn)后期哮喘的癥狀中是有效的。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供上述方法和組合物，其在減小特異性和非特異性支氣管反應(yīng)過(guò)度方面高度有效，并即使是在抗原激發(fā)患者后給藥也是如此。
為了完成這些目的以及下文中顯而易見(jiàn)的其它目的，本發(fā)明本發(fā)明包括治療哺乳動(dòng)物患者的方法，它們患有以后期過(guò)敏反應(yīng)為特征的病癥，例如，包括肺、鼻、皮膚、眼和系統(tǒng)LPR′s，或以炎癥反應(yīng)為特征的疾病，該方法包括給患者支氣管內(nèi)、口服、局部、非腸道、鼻內(nèi)或眼內(nèi)使用藥物組合物，該藥物組合物在每劑量中含有約0.005至約1.0mg每千克患者體重的超低分子量肝素(ULMWH)。這些肝素的給藥可以針對(duì)急性癥狀如在抗原激發(fā)后，或慢性癥狀以抑制抑制反應(yīng)如哮喘患者中的支氣管反應(yīng)過(guò)度。
在本發(fā)明方法中有效的ULMWH平均分子量為約1000至約3000D，并可以表現(xiàn)出低水平的抗凝活性或根本沒(méi)有抗凝活性。還提供了新的藥物組合物，例如，包括液體形式的吸入劑(支氣管內(nèi))組合物，或粉末噴霧劑或氣霧劑組合物，其中含有適當(dāng)濃度的ULMWH。
附圖簡(jiǎn)述


圖1顯示了對(duì)兩組過(guò)敏綿羊的抗原激發(fā)作用，一組由急性反應(yīng)者組成而另一組為雙重反應(yīng)者。每組數(shù)據(jù)表示為在SRL(特異性肺阻力)中抗原誘發(fā)平均值±SE％變化，顯示了以前(基礎(chǔ)值)、接觸抗原后即刻(P.A.)和至8小時(shí)。
+＝與基礎(chǔ)值有顯著性差異(P＜.05)
*＝與雙重反應(yīng)者有顯著性差異(P＜.05)
圖2A和2B包括兩個(gè)圖，顯示了在兩組過(guò)敏綿羊中針對(duì)抗原誘發(fā)的支氣管收縮吸入的商購(gòu)肝素的不同作用，一組由急性反應(yīng)者(n＝8)組成而另一組由雙重反應(yīng)者(n＝3)組成。
+＝與基礎(chǔ)值有顯著性差異(P＜.05)
*＝與對(duì)照組有顯著性差異(P＜.05)
圖3顯示了用吸入的FrangminTM(平均分子量5030D)以5.0mg/kg預(yù)處理在雙重反應(yīng)者過(guò)敏性綿羊中對(duì)抗原誘發(fā)支氣管收縮的作用。在接觸抗原的動(dòng)物組中數(shù)據(jù)以平均SRL(cm H2O/L/sec)，這些動(dòng)物先不用藥物，用Fragmin預(yù)處理若干天后重復(fù)。
圖4是方框圖，顯示了在過(guò)敏性綿羊中對(duì)AHR以5.0mg/kg吸入的FrangminTM預(yù)處理的作用。在接觸抗原的動(dòng)物組中基礎(chǔ)值及抗原激發(fā)24小時(shí)后數(shù)據(jù)以平均值±SEPD400呼吸單位表示，先不用藥物處理，用Fragmin預(yù)處理若干天后再重復(fù)。
PE400＝卡巴膽堿的累積刺激量，將SRL增加至基礎(chǔ)值的400％
+＝與基礎(chǔ)值有顯著性差異(P＜.05)
圖5顯示了用吸入的CY-216(平均分子量4270D)以1.25mg/kg預(yù)處理在雙重反應(yīng)者過(guò)敏性綿羊中對(duì)抗原誘發(fā)支氣管收縮的作用。在接觸抗原的動(dòng)物組中就SRL而言數(shù)據(jù)以抗原誘發(fā)的平均值±SE％變化表示，這些動(dòng)物先不用藥物，用CY-216預(yù)處理若干天后重復(fù)。
圖6是方框圖，顯示了在過(guò)敏性綿羊中對(duì)AHR以1.25mg/kg吸入的CY-216預(yù)處理的作用。在接觸抗原的動(dòng)物組中基礎(chǔ)值及抗原激發(fā)24小時(shí)后數(shù)據(jù)以平均值±SE PD400呼吸單位表示，先不用藥物處理，用CY-216預(yù)處理若干天后再重復(fù)。
+＝與基礎(chǔ)值有顯著性差異(P＜.05)
圖7顯示了用吸入的ULMWH CY-222(平均分子量2355D)以1.0mg/kg預(yù)處理在雙重反應(yīng)者過(guò)敏性綿羊中對(duì)抗原誘發(fā)支氣管收縮的作用。在接觸抗原的動(dòng)物組中就SRL而言數(shù)據(jù)以抗原誘發(fā)的平均值±SE％變化表示，這些動(dòng)物先不用藥物，用CY-222預(yù)處理若干天后重復(fù)。
*＝與對(duì)照組有顯著性差異(P＜.05)
圖8是方框圖，顯示了在過(guò)敏性綿羊中對(duì)AHR以1.0mg/kg吸入的CY-222預(yù)處理的作用。在接觸抗原的動(dòng)物組中基礎(chǔ)值及抗原激發(fā)24小時(shí)后數(shù)據(jù)以平均值±SE PD400呼吸單位表示，先不用藥物處理，用CY-222預(yù)處理若干天后再重復(fù)。
+＝與基礎(chǔ)值有顯著性差異(P＜.05)
圖9顯示了用吸入的CY-222以1.0mg/kg處理抗原激發(fā)在雙重反應(yīng)者過(guò)敏性綿羊中對(duì)抗原誘發(fā)支氣管收縮的作用。在接觸抗原的動(dòng)物組中在接觸抗原后即刻(時(shí)間為0)和至8小時(shí)就SRL而言數(shù)據(jù)以抗原誘發(fā)的平均值±SE％變化表示(如上所述)，這些動(dòng)物先不用藥物，及在抗原激發(fā)后立即使用CY-222時(shí)若干天后檢測(cè)SRL(箭頭)。
*＝與對(duì)照組有顯著性差異(P＜.05)
圖10是方框圖，顯示了在過(guò)敏性綿羊中對(duì)AHR以1.0mg/kg吸入的CY-222處理抗原激發(fā)后(圖9中的箭頭)的作用。在接觸抗原的動(dòng)物組中基礎(chǔ)值及抗原激發(fā)24小時(shí)后數(shù)據(jù)以平均值±SE PD400呼吸單位表示，先不用藥物處理，當(dāng)抗原激發(fā)后立即用CY-222處理后若干天后再重復(fù)。
+＝與基礎(chǔ)值有顯著性差異(P＜.05)
圖11顯示了用吸入的ULMWH FRU-70(平均分子量2500D)以1.0mg/kg預(yù)處理在雙重反應(yīng)者過(guò)敏性綿羊中對(duì)抗原誘發(fā)支氣管收縮的作用。在接觸抗原的動(dòng)物組中就SRL而言數(shù)據(jù)以抗原誘發(fā)的平均值±SE％變化表示，這些動(dòng)物先不用藥物，用FRU-70預(yù)處理若干天后重復(fù)。
*＝與對(duì)照組有顯著性差異(P＜.05)
圖12是方框圖，顯示了在過(guò)敏性綿羊中對(duì)AHR以1.0mg/kg吸入的FRU-70預(yù)處理的作用。在接觸抗原的動(dòng)物組中基礎(chǔ)值及抗原激發(fā)24小時(shí)后數(shù)據(jù)以平均值±SE PD400呼吸單位表示，先不用藥物處理，用FRU-70預(yù)處理若干天后再重復(fù)。
+＝與基礎(chǔ)值有顯著性差異(P＜.05)
圖13顯示了吸入的FRU-70以0.5mg/kg處理抗原激發(fā)在雙重反應(yīng)者過(guò)敏性綿羊中對(duì)抗原誘發(fā)支氣管收縮的作用。在接觸抗原的動(dòng)物組中在接觸抗原后即刻(時(shí)間為0)和至8小時(shí)就SRL而言數(shù)據(jù)以抗原誘發(fā)的平均值±SE％變化表示(如上所述)，這些動(dòng)物先不用藥物，及在抗原激發(fā)后立即使用FRU-70時(shí)若干天后檢測(cè)SRL(箭頭)。
*＝與對(duì)照組有顯著性差異(P＜.05)
圖14是方框圖，顯示了在過(guò)敏性綿羊中對(duì)AHR以0.5mg/kg吸入的FRU-70處理抗原激發(fā)后(圖13中的箭頭)的作用。在接觸抗原的動(dòng)物組中基礎(chǔ)值及抗原激發(fā)24小時(shí)后數(shù)據(jù)以平均值±SE PD400呼吸單位表示，先不用藥物處理，當(dāng)抗原激發(fā)后立即用FRU-70處理后若干天后再重復(fù)。
+＝與基礎(chǔ)值有顯著性差異(P＜.05)
圖15顯示了吸入六糖混合物(平均分子量1930D)以0.5mg/kg處理抗原激發(fā)在雙重反應(yīng)者過(guò)敏性綿羊中對(duì)抗原誘發(fā)支氣管收縮的作用。在接觸抗原的動(dòng)物組中在接觸抗原后即刻(時(shí)間為0)和至8小時(shí)就SRL而言數(shù)據(jù)以抗原誘發(fā)的平均值±SE％變化表示(如上所述)，這些動(dòng)物先不用藥物，及在抗原激發(fā)后立即使用六糖混合物時(shí)若干天后檢測(cè)SRL(箭頭)。
*＝與對(duì)照組有顯著性差異(P＜.05)
圖16是方框圖，顯示了在過(guò)敏性綿羊中對(duì)AHR以0.5mg/kg吸入的六糖混合物處理抗原激發(fā)后(圖15中的箭頭)的作用。在接觸抗原的動(dòng)物組中基礎(chǔ)值及抗原激發(fā)24小時(shí)后數(shù)據(jù)以平均值±SE PD400呼吸單位表示，先不用藥物處理，當(dāng)抗原激發(fā)后立即用六糖混合物處理后若干天后再重復(fù)。
+＝與基礎(chǔ)值有顯著性差異(P＜.05)
圖17顯示了吸入純化六糖(平均分子量1998D)以0.062mg/kg處理抗原激發(fā)在雙重反應(yīng)者過(guò)敏性綿羊中對(duì)抗原誘發(fā)支氣管收縮的作用。在接觸抗原的動(dòng)物組中在接觸抗原后即刻(時(shí)間為0)和至8小時(shí)就SRL而言數(shù)據(jù)以抗原誘發(fā)的平均值±SE％變化表示(如上所述)，這些動(dòng)物先不用藥物，及在抗原激發(fā)后立即使用六糖時(shí)若干天后檢測(cè)SRL(箭頭)。
*＝與對(duì)照組有顯著性差異(P＜.05)
圖18是方框圖，顯示了在過(guò)敏性綿羊中對(duì)AHR以0.062mg/kg吸入的純化六糖處理抗原激發(fā)后(圖17中的箭頭)的作用。在接觸抗原的動(dòng)物組中基礎(chǔ)值及抗原激發(fā)24小時(shí)后數(shù)據(jù)以平均值±SE PD400呼吸單位表示，先不用藥物處理，當(dāng)抗原激發(fā)后立即用六糖處理后若干天后再重復(fù)。
+＝與基礎(chǔ)值有顯著性差異(P＜.05)
圖19顯示了吸入純化四糖(平均分子量1290D)以0.062mg/kg處理抗原激發(fā)在雙重反應(yīng)者過(guò)敏性綿羊中對(duì)抗原誘發(fā)支氣管收縮的作用。在接觸抗原的動(dòng)物組中在接觸抗原后即刻(時(shí)間為0)和至8小時(shí)就SRL而言數(shù)據(jù)以抗原誘發(fā)的平均值±SE％變化表示(如上所述)，這些動(dòng)物先不用藥物，及在抗原激發(fā)后立即使用四糖時(shí)若干天后檢測(cè)SRL(箭頭)。
*＝與對(duì)照組有顯著性差異(P＜.05)
圖20是方框圖，顯示了在過(guò)敏性綿羊中對(duì)AHR以0.062mg/kg吸入的純化四糖處理抗原激發(fā)后(圖19中的箭頭)的作用。在接觸抗原的動(dòng)物組中基礎(chǔ)值及抗原激發(fā)24小時(shí)后數(shù)據(jù)以平均值±SE PD400呼吸單位表示，先不用藥物處理，當(dāng)抗原激發(fā)后立即用四糖處理后若干天后再重復(fù)。
+＝與基礎(chǔ)值有顯著性差異(P＜.05)
圖21顯示了吸入八糖(平均分子量2480D)以0.25mg/kg處理抗原激發(fā)在雙重反應(yīng)者過(guò)敏性綿羊中對(duì)抗原誘發(fā)支氣管收縮的作用。在接觸抗原的動(dòng)物組中在接觸抗原后即刻(時(shí)間為0)和至8小時(shí)就SRL而言數(shù)據(jù)以抗原誘發(fā)的平均值±SE％變化表示(如上所述)，這些動(dòng)物先不用藥物，及在抗原激發(fā)后立即使用八糖時(shí)若干天后檢測(cè)SRL(箭頭)。
*＝與對(duì)照組有顯著性差異(P＜.05)
圖22是方框圖，顯示了在過(guò)敏性綿羊中對(duì)AHR以0.25mg/kg吸入的八糖處理抗原激發(fā)后(圖21中的箭頭)的作用。在接觸抗原的動(dòng)物組中基礎(chǔ)值及抗原激發(fā)24小時(shí)后數(shù)據(jù)以平均值±SE PD400呼吸單位表示，先不用藥物處理，當(dāng)抗原激發(fā)后立即用八糖處理后若干天后再重復(fù)。
+＝與基礎(chǔ)值有顯著性差異(P＜.05)
圖23顯示了吸入雙糖(平均分子量660D)以1.0mg/kg預(yù)處理抗原激發(fā)在雙重反應(yīng)者過(guò)敏性綿羊中對(duì)抗原誘發(fā)支氣管收縮的作用。在接觸抗原的動(dòng)物組中在接觸抗原后即刻(時(shí)間為0)和至8小時(shí)就SRL而言數(shù)據(jù)以抗原誘發(fā)的平均值±SE％變化表示(如上所述)，這些動(dòng)物先不用藥物，及在用雙糖預(yù)處理后若干天后重復(fù)。
圖24顯示了口服純化六糖(平均分子量1998D)以2.0mg/kg預(yù)處理抗原激發(fā)在雙重反應(yīng)者過(guò)敏性綿羊中對(duì)抗原誘發(fā)支氣管收縮的作用。在接觸抗原的一只綿羊中就SRL而言數(shù)據(jù)以抗原誘發(fā)的平均值±SE％變化表示，這些動(dòng)物先不用藥物，及在用六糖預(yù)處理后若干天后重復(fù)。
圖25是方框圖，顯示了在過(guò)敏性綿羊中對(duì)AHR以2.0mg/kg口服的純化六糖預(yù)處理后的作用。在接觸抗原的一只綿羊中基礎(chǔ)值及抗原激發(fā)24小時(shí)后數(shù)據(jù)以平均值±SE PD400呼吸單位表示，先不用藥物處理，用六糖預(yù)處理后若干天后再重復(fù)。
圖26顯示了靜脈使用純化六糖(平均分子量1998D)以0.25mg/kg預(yù)處理在雙重反應(yīng)者過(guò)敏性綿羊中對(duì)抗原誘發(fā)支氣管收縮的作用。在接觸抗原的一只綿羊中就SRL而言數(shù)據(jù)以抗原誘發(fā)的平均值±SE％變化表示，這些動(dòng)物先不用藥物，及在用六糖預(yù)處理后若干天后重復(fù)。
圖27是方框圖，顯示了在過(guò)敏性綿羊中對(duì)AHR以0.25mg/kg靜脈使用純化六糖預(yù)處理后的作用。在接觸抗原的一只綿羊中基礎(chǔ)值及抗原激發(fā)24小時(shí)后數(shù)據(jù)以平均值±SE PD400呼吸單位表示，先不用藥物處理，用六糖預(yù)處理后若干天后再重復(fù)。
圖28是方框圖，顯示了分別吸入的、口服及腹膜內(nèi)使用純化的六糖在三組小鼠的支氣管肺泡洗出液體中，預(yù)防嗜酸性細(xì)胞流入的活性比較。
本發(fā)明總的來(lái)說(shuō)涉及哺乳動(dòng)物患有的或傾向患有的以后期過(guò)敏反應(yīng)和/或炎癥反應(yīng)為特征的疾病的方法，以及含有適于實(shí)施該方法使用的超低分子量肝素的新的藥物組合物。
肝素是硫酸化的粘多糖，在肥大細(xì)胞中以蛋白多糖的形式合成，并特別富集于多種動(dòng)物的肺中。肝素不是固定分子量的特定化合物，而實(shí)際上是不同硫酸化多糖鏈的多相混合物，該鏈由重復(fù)單元D-葡糖胺和L-艾杜糖醛酸或D-葡萄糖醛酸組成。由動(dòng)物組織中分離的肝素的平均分子量為約6000至約30000D。
在藥物學(xué)上，肝素主要是已知的抗凝劑。此活性來(lái)自肝素結(jié)合抗凝血酶III(AT-III)的一些殘基的能力，加速了AT-III中和活化的凝集因子并防止凝血酶原轉(zhuǎn)變?yōu)槟?。較大量的肝素可以滅活凝血酶和早期的凝集因子，防止纖維蛋白原轉(zhuǎn)變?yōu)槔w維蛋白。
肝素的出血活性與其多糖片斷的分子量有關(guān)；低分子量組分或片斷(例如，分子量小于6000D的片斷)具有中度至低度的抗凝血酶和出血作用。同樣，由動(dòng)物組織中分離的低分子量肝素一般比商購(gòu)肝素具有較低的出血性，但是可能仍具有顯著的抗凝劑活性。
商購(gòu)肝素一般得自牛肺或豬腸粘膜，其平均分子量為約15000至17500D。
已表明肝素是IP3受體的特異性阻斷劑并抑制IP3介導(dǎo)的鈣離子釋放。我們已建議肝素可能在肥大細(xì)胞中阻斷IP3受體并因此通過(guò)信號(hào)傳導(dǎo)的干擾可調(diào)節(jié)肥大細(xì)胞脫粒和介質(zhì)釋放。體內(nèi)和體外研究支持了此觀點(diǎn)，并表明吸入肝素可減輕綿羊的過(guò)敏性支氣管收縮，預(yù)防鍛煉引起的哮喘，并抑制抗IgE引起的肥大細(xì)胞組胺釋放。已發(fā)現(xiàn)以高達(dá)1000單位/千克吸入肝素對(duì)部分促凝血酶原激酶時(shí)間(PTT)沒(méi)有作用，因此表明“無(wú)抗凝劑”作用。
還報(bào)道了低分子量肝素(平均分子量約4500D)，其具有降低的APTT活性，在動(dòng)物研究中在預(yù)防抗原引起的支氣管收縮反應(yīng)(ABR)和支氣管反應(yīng)過(guò)度，也稱為呼吸道反應(yīng)過(guò)度(AHR)方面有效。但是，如上所述及下面的更詳細(xì)的闡述中，商購(gòu)肝素和中或低分子量肝素，即使是具有非常低的抗凝劑活性的那些，在動(dòng)物試驗(yàn)中都不能有效地改善抗原激發(fā)后AHR。這些肝素顯然只提供了預(yù)防、防止作用，但是在治療抗原誘發(fā)的哮喘發(fā)作中沒(méi)有價(jià)值。
在母案申請(qǐng)系列號(hào)No.08/516786中我們發(fā)現(xiàn)并報(bào)告了超低分子量肝素(ULMWH)片斷不僅是有效的呼吸道麻痹抑制劑，而且在即使當(dāng)抗原激發(fā)后給藥時(shí)在降低AHR方面具有高效。慢性、有規(guī)律地使用ULMWH也可降低AHR，因此ULMWH可以用于哮喘的慢性治療，該哮喘不論是特異性(即抗原)還是非特異性因素引起的。
我們先前的申請(qǐng)只涉及并公開(kāi)了試驗(yàn)數(shù)據(jù)，其表明了ULMWH在治療急性反應(yīng)者早期哮喘的效果，而不是在治療“雙重反應(yīng)者”中，它們表現(xiàn)出早期和后期支氣管收縮和延長(zhǎng)的AHR。如上所述，不論是抗原激發(fā)前或后給藥，在我們的早期研究基礎(chǔ)上不能預(yù)見(jiàn)ULMWH在抑制雙重反應(yīng)者的支氣管收縮(早期和后期)及AHR方面是有效的。此預(yù)見(jiàn)性的缺乏可以由下面的事實(shí)得到證實(shí)當(dāng)抗原激發(fā)前給藥時(shí)，商購(gòu)肝素和中等或低分子量肝素(分子量＞3000D)抑制急性反應(yīng)者的AHR，但是在抑制在雙重反應(yīng)者中觀察到的后期反應(yīng)和AHR方面沒(méi)有顯著的效果。
進(jìn)一步用ULMWH進(jìn)行控制試驗(yàn)后，我們驚奇地發(fā)現(xiàn)，當(dāng)雙重反應(yīng)者在抗原激發(fā)前甚至在抗原激發(fā)后吸入給藥時(shí)，平均分子量為約1000至約3000的肝素片斷，在抑制早期和后期的支氣管收縮和AHR方面是有效的。
更令人驚奇的是，我們發(fā)現(xiàn)在抗原激發(fā)前口服和靜脈內(nèi)(或其它非腸道)使用ULMWH，有效地抑制了雙重反應(yīng)者的支氣管收縮和AHR。
因此，本發(fā)明一方面包括治療作為雙重反應(yīng)者的哺乳動(dòng)物并患有抗原引起的后期哮喘的患者的方法，該方法包括在抗原激發(fā)前或后給此患者支氣管內(nèi)使用藥物組合物，該組合物患有約0.005至約1.0mg每千克患者體重的一種或多種有效的ULMWH片斷(餾分)，所述組合物的每個(gè)給藥劑量，并優(yōu)選約0.075至約0.75mg/kg每劑量。為了此申請(qǐng)的目的，“優(yōu)選的ULMWH”抗原定義為具有平均分子量約1000-3000D的肝素片斷。當(dāng)在本發(fā)明的方法中使用時(shí)，平均分子量為約1000-2500D的ULMWH是特別有效的。每個(gè)ULMWH片斷可以含有四糖、戊糖、六糖、七糖、八糖和十糖以及更大鏈長(zhǎng)的分子。
本發(fā)明中使用的ULMWH片斷是硫酸化糖單元的低聚體，例如，其可以具有如下結(jié)構(gòu)
盡管N-脫硫酸化肝素在其它生物系統(tǒng)中具有已知活性，例如作為細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制劑，但是現(xiàn)發(fā)現(xiàn)本發(fā)明中有效的ULMWH片斷中的糖單元為N-硫酸化的；N-脫硫酸化的片斷無(wú)效。
雖然本發(fā)明的方法和組合物中使用的硫酸化多糖在本文中一般指超低分子量肝素，即得自天然肝素的超低分子量片斷(或這些ULMWH的合成形式)，但是本發(fā)明也包括了衍生自硫酸肝素、硫酸軟骨素B、硫酸軟骨素、戊聚糖多硫酸酯和/或其它糖胺聚糖和粘多糖的硫酸化多糖的用途。但是，目標(biāo)硫酸化多糖片斷的分子量必須為約1000-3000D。也可以使用有效的ULMWH或任何上述其它硫酸化多糖的藥用鹽，例如鈉鹽、鈣鹽或鉀鹽。
按照本發(fā)明的第一個(gè)方面，作為雙重反應(yīng)者的人或其它哺乳動(dòng)物患者，其已吸入、咽下或以其它方式接觸抗原(即已被抗原“激發(fā)”)，該抗原是已知引起患者哮喘發(fā)作的類型，或?qū)?lái)接觸抗原激發(fā)的患者，通過(guò)吸入使用至少一個(gè)劑量的含有一種或多種有效ULMWH的藥物組合物，其中ULMWH在上述濃度范圍內(nèi)。需要的話，在抗原激發(fā)后可以隨后使用附加的劑量直到患者康復(fù)或保持正常的空氣流動(dòng)耐受水平。
本發(fā)明還在第二個(gè)方面包括給雙重反應(yīng)者哮喘患者慢性使用有效的ULMWH以降低并抑制早期或后期AHR。“慢性給藥”在本文中指每天至少一次使用含有效的ULMWH的藥物組合物，至少連續(xù)使用10天。含約0.005-1.0mg/kg每劑量，優(yōu)選約0.0075-0.75mg/kg每劑量的組合物的慢性給藥，至少與皮質(zhì)類固醇相比可以無(wú)限持續(xù)以提供AHR-抑制治療，而基本沒(méi)有副作用。
本發(fā)明中用于治療后期哮喘和其它肺部病癥的吸入劑(支氣管內(nèi))ULMWH組合物，可以含有液體或粉末組合物，其中含有有效的ULMWH片斷，并適于噴霧或支氣管內(nèi)使用，或通過(guò)氣霧以可分開(kāi)的計(jì)量藥量使用的氣霧劑組合物。
適宜的液體組合物，例如，含有含水的有效ULMWH、藥用吸入劑溶劑，例如，等滲鹽水或抑制細(xì)菌的水。該溶液可以通過(guò)泵或壓縮準(zhǔn)確的噴霧分配器，或通過(guò)任何其它常用方式使所需劑量的液體組合物吸入哺乳動(dòng)物患者的肺部。
適宜的粉末組合物，例如，包括肝素與乳糖或其它支氣管給藥可接受的惰性粉末徹底混合的粉末狀制劑。這些粉末組合物可以通過(guò)氣霧分配器給藥，或包于可打破的膠囊中，由哺乳動(dòng)物患者將其插入能將此膠囊刺入并以適于吸入的穩(wěn)定氣流吹出粉末的裝置。
在本發(fā)明方法中使用的氣霧劑一般包括氟代烷拋射劑、表面活性劑和助溶劑，并充入到鋁制或其它常規(guī)氣霧劑容器中，該容器再被適當(dāng)?shù)挠?jì)量閥密閉并壓入拋射劑，制備出計(jì)量藥量的吸入器(MDI)。
在適用于加壓氣霧劑分配器如MDI中的任何拋射劑載體中的有效的ULMWH的總濃度，必須足夠高以便每個(gè)劑量提供約0.005-0.1mg(5-100μg)每千克患者體重的有效的ULMWH。因此，例如，如果MDI每次啟動(dòng)施用約85μl的含藥物拋射劑載體，對(duì)于重75千克的哺乳動(dòng)物患者來(lái)說(shuō)在載體中有效的ULMWH的濃度約為0.0045-0.088mg/μl(4.5-88μg/μl)，每次啟動(dòng)施用0.375至7.5mg(375-7500μg)的ULMWH，如果需要一次啟動(dòng)施用全部劑量的話。如果需要兩次啟動(dòng)給藥，相應(yīng)的濃度范圍為約0.0022-0.044mg/μl(2.2-44μg/μl)，每次啟動(dòng)施用0.188至3.75mg(188-3750μg)的ULMWH。
在任何液體噴霧器溶液中有效的ULMWH的總濃度必須足夠高以便每個(gè)劑量提供約0.05-1.0mg(50-100μg)每千克患者體重的有效的ULMWH。因此，例如，如果每次啟動(dòng)用噴霧器施用5ml溶液，對(duì)于重75千克的哺乳動(dòng)物患者來(lái)說(shuō)有效的ULMWH的濃度約為0.75-15.0mg/ml。
在本發(fā)明的另一個(gè)方面，給患有抗原引起的后期哮喘的患者，即雙重反應(yīng)者，在患者接觸抗原激發(fā)前，通過(guò)口服或非腸道(例如，IV或IM)使用含有效的ULMWH的組合物。該口服或非腸道使用的組合物每個(gè)劑量含有約0.005至約1.0mg每千克患者體重的有效的ULMWH。在抗原激發(fā)前最多8小時(shí)(但是優(yōu)選不超過(guò)4小時(shí))進(jìn)行口服或非腸道組合物的給藥，并在降低早期和后期支氣管收縮和在抑制AHR方面是有效的。
藥物領(lǐng)域的技術(shù)人員不難理解，很多常規(guī)方法和儀器可用來(lái)準(zhǔn)確地施用支氣管內(nèi)藥物的計(jì)量劑量并按照患者的體重和患者病癥的嚴(yán)重性調(diào)整所需劑量。此外，很多本領(lǐng)域已知的液體、粉末和氣霧劑載體適于本發(fā)明的支氣管給藥ULMWH組合物，并且很多藥用口服和非腸道給藥載體可以用于口服和非腸道給藥的含ULMWH組合物。本發(fā)明不限于任何特定的惰性載體、溶劑、賦形劑或劑型，并且不限于支氣管給藥的任何特定方法或儀器。
這些藥物組合物還可以是有效的ULMWH作為活性組分含于任何藥用口服、注射或IV藥物載體，或局部或眼內(nèi)給藥載體中的劑型。每種劑型含有約0.005-1.0mg/kg平均患者體重的有效的ULMWH(一種或多種ULMWH)和藥用惰性載體組分，例如，常規(guī)賦形劑、載體、填充劑、粘合劑、崩解劑、溶劑、助溶劑、甜味劑、著色劑和可常規(guī)包括在口服給藥的藥物劑型中任何其它無(wú)活性組分。適宜的口服劑型包括片劑、膠囊、小膠囊、凝膠膠囊、丸劑、液體溶液劑、混懸劑或酏劑、散劑、錠劑、微粒和滲透性給藥系統(tǒng)。注射和IV劑型包括等滲鹽水溶液劑或含適宜的緩沖劑的右旋糖溶液劑及防腐劑。很多適宜的劑型和載體，及列于上述的無(wú)活性組分，是本領(lǐng)域已知的并在標(biāo)準(zhǔn)教科書中給出，例如Remington′s Pharmaceutical Sciences，17版(1985)。
即使是在抗原激發(fā)發(fā)生后，本文中描述的ULMWH組合物為早期和后期抗原引起的哮喘以及后期過(guò)敏反應(yīng)為特征的其它疾病提供了高效的治療。
為了表明與較高分子量肝素相比，有效的ULMWH在治療哮喘性雙重反應(yīng)者中的意料之外的優(yōu)越性，對(duì)雙重反應(yīng)者過(guò)敏綿羊，在抗原激發(fā)前和后，進(jìn)行試驗(yàn)比較不同肝素類型的作用。這些試驗(yàn)的詳細(xì)說(shuō)明和所得結(jié)果見(jiàn)下列實(shí)施例和附圖的圖示。
下列實(shí)施例，舉例說(shuō)明了本發(fā)明的方法和組合物并表明其效果，不是旨在給出特定的組合物、物質(zhì)、方法或給藥方案，為了實(shí)施本發(fā)明必須排他地使用。
實(shí)施例1
給雙重反應(yīng)者過(guò)敏性綿羊使用吸入的ULMWH
方法
肺氣流阻力
將先前描述的對(duì)豬蛔蟲(chóng)抗原雙重支氣管收縮反應(yīng)的過(guò)敏性綿羊用于所有的研究中。用帶膠頭的鼻氣管插管給綿羊插管，并提供食管球?qū)Ч芗夹g(shù)檢測(cè)非氣流阻力(RI)，同時(shí)用身體體積描記法檢測(cè)胸部氣體體積。數(shù)據(jù)以特異性RL(SRL，定義為RL計(jì)時(shí)胸部氣體體積(Vtg))。
呼吸道反應(yīng)
為了評(píng)價(jià)呼吸道反應(yīng)，在吸入緩沖鹽水前和后并在每次進(jìn)行10次呼吸的增加濃度的卡巴膽堿(0.25，0.5，1.0，2.0和4.0％wt/vol溶液)的給藥后，通過(guò)檢測(cè)SRL進(jìn)行吸入卡巴膽堿的累積劑量-反應(yīng)曲線。通過(guò)確定卡巴膽堿(呼吸單位)的累積激發(fā)劑量(PD400)檢測(cè)呼吸道反應(yīng)，其增加SRL至基礎(chǔ)值的400％。一個(gè)呼吸單位定義為吸入一次1％的卡巴膽堿溶液。
肝素片斷
在此處報(bào)告的這些研究中，給雙重反應(yīng)者過(guò)敏性綿羊在抗原激發(fā)前和/或后使用不同的肝素物質(zhì)。這些肝素中的一些是平均分子量為1000至3000D的ULMWH，一些為平均分子量較高的，一種為較低分子量的。被測(cè)的肝素片斷見(jiàn)下表1。
表1
肝素片斷和其分子量
1抗凝劑八糖混合物。
2非抗凝劑八糖混合物。
3由商購(gòu)豬肝素中得到的低聚糖，主要含有四糖、六糖、八糖和十糖片斷。
4由六糖混合物通過(guò)凝膠柱色譜得到的，含有約70％的八糖和30％的十糖片斷。
5由六糖混合物通過(guò)凝膠柱色譜得到。
6由六糖混合物通過(guò)凝膠柱色譜得到。
7雙糖被三硫酸化，但是其分子量很低，可以認(rèn)為是具有肝素樣性質(zhì)的ULMWH片斷。
試驗(yàn)方案
呼吸道研究
確定每個(gè)動(dòng)物的基礎(chǔ)值呼吸道反應(yīng)(PD400)，任何在不同的試驗(yàn)天數(shù)用豬蛔蟲(chóng)對(duì)綿羊進(jìn)行呼吸道激發(fā)。在激發(fā)前、激發(fā)后立即及后8小時(shí)每小時(shí)檢測(cè)SRL。抗原激發(fā)后當(dāng)AHR發(fā)生時(shí)24小時(shí)檢測(cè)激發(fā)后PD400。此方案在至少14天后重復(fù)，但是給每個(gè)動(dòng)物使用一個(gè)劑量的被測(cè)肝素片斷之一，使用時(shí)間在抗原激發(fā)前約30分鐘或在激發(fā)后SRL檢測(cè)后即刻。
數(shù)據(jù)分析
數(shù)據(jù)表示為
(a)SRL(％變化)＝(激發(fā)后SRL-基礎(chǔ)值SRL)×100/基礎(chǔ)值SRL
(b)PD400(呼吸單位)
結(jié)果
圖1顯示了兩組過(guò)敏性綿羊?qū)乖ぐl(fā)的不同反應(yīng)，一組由急性反應(yīng)者組成而另一組由雙重反應(yīng)者組成。在抗原激發(fā)后約3小時(shí)后急性反應(yīng)者的SRL回到基礎(chǔ)值并保持在此。但在雙重反應(yīng)者中，在約6小時(shí)有SRL的后期峰，在研究結(jié)束的第8小時(shí)其水平顯著高于基礎(chǔ)值。正是此第二、后期峰是雙重反應(yīng)者的特征。
圖2A和2B描述了在急性反應(yīng)者(圖2A)和雙重反應(yīng)者(圖2B)中用商購(gòu)肝素在激發(fā)前處理對(duì)SRL的作用。雖然急性反應(yīng)者的SRL即使在抗原激發(fā)后保持在接近基礎(chǔ)值的水平，但在雙重反應(yīng)者中早期和后期的SRL不被肝素預(yù)處理減弱，即使給雙重反應(yīng)者使用高達(dá)2000單位每千克。
圖3-6表明了當(dāng)在抗原激發(fā)前給藥時(shí)，低分子量肝素片斷，F(xiàn)ragmin和CY-216在改善雙重反應(yīng)者的支氣管收縮和AHR缺乏效果。
圖7-10表明用吸入U(xiǎn)LMWH CY-222(平均分子量2355D，在本發(fā)明的有效的ULMWH范圍內(nèi))預(yù)處理及在抗原激發(fā)后處理，在改善雙重反應(yīng)者的早期和后期抗原誘發(fā)的支氣管收縮和AHR方面有效。
圖11-14表明了在阻力早期和后期哮喘中，用ULMWH FRU-70(平均分子量2500D)預(yù)處理及在抗原激發(fā)后處理的效果。
圖15-22顯示了即使是當(dāng)抗原激發(fā)后給藥時(shí)，不同的有效ULMWH片斷在顯著降低雙重反應(yīng)者的支氣管收縮和AHR方面的效果。
圖23表明了雙糖片斷，其平均分子量?jī)H為約660D(基本低于有效的ULMWH片斷要求的分子量范圍)，在改善雙重反應(yīng)者過(guò)敏性綿羊中的抗原誘發(fā)的支氣管收縮方面無(wú)效。
在圖7-14和17-22反映了其數(shù)據(jù)的這些試驗(yàn)中，對(duì)每個(gè)ULMWH片斷來(lái)說(shuō)，給過(guò)敏性綿羊使用的有效的ULMWH的劑量是最小有效量(通過(guò)劑量-范圍試驗(yàn)確定)?？梢杂^察到在雙重反應(yīng)者的治療中，不同的ULMWH具有變化的最小有效劑量水平。在抗原激發(fā)前使用的CY-222和FRU-70的最小劑量為約1.0mg/kg，但是在抗原激發(fā)后FRU-70和吸入的六糖混合物的為約0.5mg/kg。純化的四糖，其在被測(cè)的有效的ULMWH中具有最低的平均分子量，當(dāng)在抗原激發(fā)后使用0.062mg/kg時(shí)具有最小的有效量，這與純化的六糖相同。最小數(shù)據(jù)表明至少在治療雙重反應(yīng)者中平均分子量接近最低限值約1000D的純化片斷可能是最有效的ULMWH。就觀察到的抗過(guò)敏和/或抗炎活性而言，最佳的結(jié)構(gòu)域和/或序列似乎是四糖。
實(shí)施例2
給雙重反應(yīng)者過(guò)敏性綿羊使用口服ULMWH
在本試驗(yàn)中，試驗(yàn)動(dòng)物和評(píng)價(jià)方法同實(shí)施例1的方法。
在用豬蛔蟲(chóng)抗原激發(fā)前90分鐘，給一只雙重反應(yīng)者過(guò)敏性綿羊口服2mg/kg純化的六糖(平均分子量1998D)。用六糖預(yù)處理對(duì)SRL從基礎(chǔ)值(使用六糖的時(shí)間)至抗原激發(fā)后8小時(shí)的作用見(jiàn)圖24。為了比較，圖24還給出了在同一雙重反應(yīng)者綿羊中的SRL變化百分率(在若干天前進(jìn)行的試驗(yàn)中)，該綿羊接受抗原刺激但是不用ULMWH預(yù)處理。
圖25顯示的是代表性的PD400值，當(dāng)該綿羊接受抗原刺激并用六糖預(yù)處理及不預(yù)處理(對(duì)照)時(shí)，在基線和抗原激發(fā)處檢測(cè)該值。
實(shí)施例3
給雙重反應(yīng)者過(guò)敏性綿羊靜脈使用ULMWH
按照實(shí)施例2的方法，用另一只雙重反應(yīng)者過(guò)敏性綿羊進(jìn)行試驗(yàn)，不同的是在一個(gè)試驗(yàn)中在抗原激發(fā)前1小時(shí)靜脈使用0.25mg/kg的純化的六糖，而在第二個(gè)試驗(yàn)(對(duì)照)中接受抗原刺激但不預(yù)處理。預(yù)處理和對(duì)照試驗(yàn)的SRL變化百分率見(jiàn)圖26，而這些試驗(yàn)在基線和抗原激發(fā)后的PD400值見(jiàn)圖27。
實(shí)施例4
在小鼠中預(yù)防抗原誘發(fā)的嗜酸性細(xì)胞返流
在四組敏化的實(shí)驗(yàn)室小鼠(每組n＝3)中，于抗原激發(fā)后24小時(shí)進(jìn)行支氣管肺泡灌洗以確定每組中嗜酸性細(xì)胞返流值。用氣霧鹽水(安慰劑)或純化的六糖處理，通過(guò)以下途徑并按照以下劑量給藥，分別是吸入氣霧劑8，口服(100μg)和腹膜內(nèi)(40μg)。通過(guò)比較在使用六糖后和鹽水組的支氣管肺泡灌洗液中檢測(cè)的此返流水平，確定每個(gè)治療組中嗜酸性細(xì)胞返流的抑制百分率。
小鼠的三個(gè)治療組的平均抑制百分率見(jiàn)圖28。接受吸入和口服六糖的小鼠顯示了嗜酸性細(xì)胞返流40-50％的降低，而接受腹膜內(nèi)六糖的小鼠顯示了約20％的降低。
8小鼠(n＝3)被置于含于9ml滅菌注射水中的10mg六糖的室中，該水被氣霧化。讓小鼠吸入此氣霧劑約30分鐘。
在急性和雙重反應(yīng)者中觀察到的商購(gòu)肝素的不同作用(見(jiàn)圖2A和2B)可以表明在呼吸道過(guò)敏性反應(yīng)中不同信號(hào)途徑的參與。這表明在呼吸道中的免疫介導(dǎo)的肥大細(xì)胞反應(yīng)中，IP3在“急性反應(yīng)者”中是主要的活性途徑，而非IP3途徑(例如，二?；?甘油/蛋白激酶C或其它途徑)可能是“雙重反應(yīng)者”中的有效途徑。
后期反應(yīng)和AHR與顯著的呼吸道炎癥有關(guān)。在此反應(yīng)中，對(duì)呼吸道粘膜和支氣管肺泡灌洗液(BAL)的病理學(xué)研究已顯示了嗜酸性細(xì)胞、嗜中性白細(xì)胞和活化的T-淋巴細(xì)胞的返流。已在后期反應(yīng)中觀察到了源自嗜酸性細(xì)胞的炎性介質(zhì)在血漿和BAL中的升高的水平，包括嗜酸性陽(yáng)離子蛋白和主要的基本蛋白。在后期反應(yīng)中也觀察到了TH2型細(xì)胞因子(IL4和IL5)在過(guò)敏原激發(fā)后的上調(diào)。因此，細(xì)胞炎癥反應(yīng)，結(jié)合釋放的前炎癥介質(zhì)(例如，白三烯，PAF，嗜酸性蛋白等)和在支氣管粘膜局部產(chǎn)生的細(xì)胞因子，在后期過(guò)敏性炎癥和支氣管收縮中扮演了核心角色。
通過(guò)用“抗過(guò)敏劑”(如色甘酸鈉)防止肥大細(xì)胞介質(zhì)釋放或通過(guò)“抗炎”劑如糖皮質(zhì)激素作用，AHR及呼吸道炎癥可以得到改善。此“抗過(guò)敏劑”只是有效的預(yù)防劑并可預(yù)防介質(zhì)釋放和AHR。由于這些試劑不具有抗炎活性，當(dāng)在接觸抗原后給藥時(shí)，它們一般是無(wú)效的。相反，“抗炎劑”可減輕抗原激發(fā)后AHR和呼吸道炎癥，不論是在接觸抗原前或后給藥。我們的數(shù)據(jù)表明ULMWH的作用類似于糖皮質(zhì)激素的抗炎作用。
由于即使當(dāng)抗原激發(fā)后給藥，有效的ULMWH也能改善AHR，因此它們可以用于治療與AHR有關(guān)的非哮喘性病癥，例如，慢性支氣管炎、肺氣腫和肺泡纖維變性。
此外，基于我們的發(fā)現(xiàn)，考慮到在抑制哮喘性LPR中某些ULMWH的效果，類似于皮質(zhì)類固醇的抗炎作用，有效的ULMWH可用于治療下列病癥并通過(guò)以下途徑給藥
1.在肺外部位的后期反應(yīng)和炎癥反應(yīng)
(a)過(guò)敏性鼻炎
(b)過(guò)敏性皮炎
(c)過(guò)敏性結(jié)膜炎
2.炎癥反應(yīng)扮演主要角色的肺外部位疾病
(i)炎性胃腸疾病
(ii)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎及其它膠原血管性疾病
(iii)腎小球性腎炎
(iv)炎性皮膚病
(v)肉樣瘤病
3.給藥途徑
(i)支氣管內(nèi)
(ii)鼻內(nèi)
(iii)局部
(iv)口服
(v)非腸道(IM或IV)
然而，應(yīng)該強(qiáng)調(diào)本發(fā)明不以任何方式受限于任何理論或?qū)嶋H的生理或生化機(jī)理或途徑，雖然這些實(shí)際的作用機(jī)理有所參與，但是包括治療后期過(guò)敏性反應(yīng)為特征的病癥，或治療雙重反應(yīng)者哺乳動(dòng)物患者的方法，以及用于上述方法中的組合物。
因此，本發(fā)明提供了達(dá)到本發(fā)明多種目的并適合實(shí)際應(yīng)用條件要求的方法和組合物。
由于對(duì)上述發(fā)明抗炎作出多種可能的實(shí)施方案，并正如對(duì)上述實(shí)施方案可作出多種變化，應(yīng)理解此處描述的所有內(nèi)容是為了解釋說(shuō)明而不是為了限制。
在下面的權(quán)利要求中給出了要求保護(hù)了新的及需要用專利證書保護(hù)的內(nèi)容。
權(quán)利要求
1.治療患有或傾向患有以后期過(guò)敏反應(yīng)、呼吸道反應(yīng)過(guò)度或炎癥反應(yīng)為特征的病癥的哺乳動(dòng)物患者的方法，所述方法包括給該患者使用藥物組合物，該藥物組合物含有約0.005至約1.0mg每千克患者體重每個(gè)劑量的超低分子量肝素(ULMWH)，所述ULMWH的平均分子量為約1000至約3000D。
2.權(quán)利要求1的方法，其中所述ULMWH的平均分子量為約1000至約2500D。
3.權(quán)利要求1的方法，其中所述ULMWH包括選自如下的肝素片斷四糖、五糖、六糖、七糖、八糖和十糖及其藥用鹽。
4.權(quán)利要求1的方法，其中所述ULMWH是N-硫酸化的。
5.權(quán)利要求1的方法，其中所述組合物含有約0.075至約0.75mg的所述ULMWH每千克每個(gè)劑量。
6.權(quán)利要求1的方法，其中所述ULMWH基本上不具有抗凝劑活性。
7.權(quán)利要求1的方法，其中所述組合物通過(guò)口服、非腸道、局部、支氣管內(nèi)、鼻內(nèi)或眼內(nèi)途徑給藥。
8.權(quán)利要求7的方法，其中所述非腸道給藥是靜脈或肌肉內(nèi)給藥。
9.權(quán)利要求1的方法，其中所述病癥以后期過(guò)敏反應(yīng)為特征，選自肺后期反應(yīng)、鼻后期反應(yīng)、皮膚后期反應(yīng)、眼后期反應(yīng)及系統(tǒng)的后期反應(yīng)。
10.權(quán)利要求9的方法，其中所述后期反應(yīng)為肺后期反應(yīng)。
11.權(quán)利要求10的方法，其中所述病癥是后期哮喘。
12.權(quán)利要求1的方法，其中所述病癥是以呼吸道反應(yīng)過(guò)度為特征的非哮喘性病癥。
13.權(quán)利要求12的方法，其中所述病癥選自慢性支氣管炎、肺氣腫和肺泡纖維變性。
14.權(quán)利要求1的方法，其中所述病癥的特征是炎癥反應(yīng)。
15.權(quán)利要求1的方法，其中病癥選自過(guò)敏性鼻炎、過(guò)敏性皮炎、過(guò)敏性結(jié)膜炎、炎性胃腸疾病、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、膠原血管性疾病、腎小球性腎炎、炎性皮膚疾病和肉樣瘤病。
16.權(quán)利要求1的方法，其中所述組合物包括所述ULMWH在水、藥用液體吸入劑載體中的溶液劑或混懸劑。
17.權(quán)利要求16的方法，其中所述載體是等滲鹽水或抑制細(xì)菌水。
18.權(quán)利要求16的方法，其中所述組合物通過(guò)泵或壓縮準(zhǔn)確的噴霧器給藥。
19.權(quán)利要求16的方法，其中給患者使用足夠量的所述組合物，以提供劑量為約0.05-1.0mg/kg的所述ULMWH。
20.權(quán)利要求16的方法，其中所述組合物含有約0.75-15.0mg/ml的所述ULMWH。
21.權(quán)利要求1的方法，其中所述組合物為含有氣霧拋射劑的氣霧劑組合物。
22.權(quán)利要求21的方法，其中所述組合物通過(guò)計(jì)量劑量的吸入器分配。
23.權(quán)利要求21的方法，其中給患者使用足夠量的所述組合物，以提供劑量為約0.005-0.1mg/kg的ULMWH。
24.權(quán)利要求21的方法，其中所述組合物含有約2.2-88μg/μl的ULMWH。
25.權(quán)利要求1的方法，其中所述組合物含有所述ULMWH與支氣管給藥可接受的惰性粉末混合的粉末狀制劑。
26.權(quán)利要求25的方法，其中所述惰性粉末是乳糖。
27.權(quán)利要求25的方法，其中組合物通過(guò)氣霧劑分配器給藥。
28.權(quán)利要求25的方法，其中所述組合物通過(guò)可破碎的膠囊給藥。
29.權(quán)利要求1的方法，其中所述組合物在誘發(fā)過(guò)敏性反應(yīng)的抗原激發(fā)前給患者使用。
30.權(quán)利要求1的方法，其中所述組合物在誘發(fā)過(guò)敏反應(yīng)的抗原激發(fā)后給患者使用。
31.治療患有或傾向患有以后期過(guò)敏反應(yīng)、呼吸道反應(yīng)過(guò)度或炎癥反應(yīng)為特征的病癥的哺乳動(dòng)物患者的組合物，所述組合物在藥用吸入劑、口服、非腸道、疾病、鼻內(nèi)或眼內(nèi)給藥載體中含有約0.005至約1.0mg每千克患者體重每個(gè)劑量的超低分子量肝素(ULMWH)，所述ULMWH的平均分子量為約1000至約3000D。
32.權(quán)利要求31的組合物，其中所述ULMWH的平均分子量為約1000至約2500D。
33.權(quán)利要求31的組合物，其中所述ULMWH包括選自如下的肝素片斷四糖、五糖、六糖、七糖、八糖和十糖及其藥用鹽。
34.權(quán)利要求31的組合物，其中所述ULMWH是N-硫酸化的。
35.權(quán)利要求31的組合物，其中所述組合物含有約0.075至約0.75mg的所述ULMWH每千克每個(gè)劑量。
36.權(quán)利要求31的液體或流體組合物，其中每毫升組合物含有約1.0至約20.0mg的所述ULMWH。
37.權(quán)利要求31的組合物，其中所述ULMWH基本上不具有抗凝劑活性。
38.權(quán)利要求31的組合物，其中含有所述ULMWH在水、藥用吸入劑載體中的溶液。
39.權(quán)利要求38的組合物，其中所述載體是等滲鹽水或抑制細(xì)菌水。
40.權(quán)利要求38的組合物，其中所述組合物通過(guò)泵或壓縮準(zhǔn)確的噴霧器給藥。
41.權(quán)利要求38的組合物，其中還含有氣霧拋射劑并適于通過(guò)計(jì)量氣霧劑量的吸入器給藥。
42.權(quán)利要求31的組合物，其中含有所述ULMWH與支氣管給藥可接受的惰性粉末混合的粉末狀制劑。
43.權(quán)利要求42的組合物，其中所述惰性粉末是乳糖。
44.權(quán)利要求42的組合物，其通過(guò)氣霧劑分配器給藥。
45.權(quán)利要求42的組合物，其通過(guò)可破碎的膠囊給藥。
46.權(quán)利要求31的組合物，其中含有藥用口服載體。
47.權(quán)利要求46的組合物，其口服劑型選自片劑、膠囊、小膠囊、凝膠膠囊、丸劑、液體溶液劑，混懸劑或酏劑、散劑、錠劑、微粒及滲透給藥系統(tǒng)。
48.權(quán)利要求47的組合物，其中還含有賦形劑、載體、填充劑、粘合劑、崩解劑、溶劑、助溶劑、甜味劑或著色劑。
49.權(quán)利要求31的組合物，其中含有藥用非腸道給藥用載體。
50.權(quán)利要求49的組合物，其中所述載體包括等滲鹽水溶液或右旋糖溶液。
51.權(quán)利要求49的組合物，其適于靜脈給藥。
52.權(quán)利要求49的組合物，其適于肌肉內(nèi)給藥。
53.權(quán)利要求31的組合物，其中含有藥用局部給藥用載體。
54.權(quán)利要求31的組合物，其中含有藥用鼻內(nèi)給藥用載體。
55.權(quán)利要求31的組合物，其中含有藥用眼內(nèi)給藥用載體。
56.治療患有或傾向患有以后期過(guò)敏反應(yīng)、呼吸道反應(yīng)過(guò)度或炎癥反應(yīng)為特征的病癥的哺乳動(dòng)物患者的方法，所述方法包括給該患者使用藥物組合物，該藥物組合物含有約0.005至約1.0mg每千克患者體重每個(gè)劑量的硫酸化多糖，所述硫酸化多糖的平均分子量為約1000至約3000D。
57.權(quán)利要求56的方法，其中所述硫酸化多糖得自糖胺聚糖或粘多糖。
58.權(quán)利要求57的方法，其中所述硫酸化多糖得自肝素、硫酸肝素、硫酸軟骨素B、硫酸軟骨素或戊聚糖多硫酸酯。
59.權(quán)利要求56的方法其中所述硫酸化多糖包括四糖、五糖、六糖、七糖、八糖和十糖及其藥用鹽。
60.權(quán)利要求59的方法，其中所述硫酸化多糖包括四糖。
全文摘要
治療患有或傾向患有特征如下的疾病的哺乳動(dòng)物患者的方法,所述疾病特征為后期過(guò)敏反應(yīng)、呼吸道反應(yīng)過(guò)度或炎癥反應(yīng),例如,哮喘、過(guò)敏性鼻炎、過(guò)敏性皮炎、過(guò)敏性結(jié)膜炎、炎性胃腸疾病或風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎,所述方法包括給該患者使用口服、非腸道、支氣管內(nèi)、局部、鼻內(nèi)或眼內(nèi)用藥物組合物,該藥物組合物每個(gè)劑量含有約0.005至約1.0mg每千克患者體重的超低分子量肝素(ULMWH)或其它硫酸化多糖,它們的平均分子量為約1000至約3000D。還公開(kāi)了用于此新的治療方法中的適宜的吸入劑及其它藥物組合物。
文檔編號(hào)A61K9/00GK1269715SQ98808919
公開(kāi)日2000年10月11日 申請(qǐng)日期1998年8月4日 優(yōu)先權(quán)日1997年8月4日
發(fā)明者T·阿邁德 申請(qǐng)人:巴克·諾頓藥物有限公司