專利名稱：共價類脂-膦?；人峤Y合物,其生產方法及其作為抗病毒藥物的用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及通式Ⅰ的新的膦?；人峒捌漉サ念愔苌?、其互變異構體、其生理上可接受的無機或有機堿鹽，以及該化合物的生產方法和含有這些化合物的藥物，
其中R1是基團(CH2)e-Cycl中的直鏈或支鏈、飽和或不飽和的烷基鏈，其中e 表示4-16的整數(shù)，從3位起的碳原子之一可被雜原子(氧、氮或硫)代替，R2可以是氫、含有1-20個碳原子的直鏈或支鏈、飽和或不飽和烷基鏈R3表示含有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基鏈，優(yōu)選甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、叔丁基、戊基、己基、新戊基、叔己基(Thexyl)或苯基、膽堿、乙醇胺、肉堿、C5-C7-環(huán)烷基、芐基或下列基團之一
其中R4表示C1-C6-烷基、芐基或苯基，R5和R6表示C1-C6-烷基，n是1、2或3，X 是一個鍵、氧、硫、氧羰基、羰基氧基、羰基氨基、氨基羰基、亞磺?；蚧酋；?，Y 是一個鍵、氧、硫、氧羰基、羰基氧基、羰基氨基、氨基羰基、亞磺?；蚧酋；?，Cyc 表示含有5-7個原子的環(huán)烷基或苯基，其中的一個環(huán)碳原l 子可被氮代替，并且所述的飽和或芳香環(huán)可被C1-10-烷基、C1-C10-烷氧基、C1-C10-烷硫基或鹵素取代一次或多次，m 表示0、1、2或3，條件是，如果R2同時具有R1的含義時，R1可與R2相同，也就是說，R1和R2的含義可以互換，由于通式Ⅰ的化合物含有不對稱碳原子，這些化合物的所有光學活性形式及外消旋混合物也是本發(fā)明的主題。
惡性腫瘤(癌、肉瘤、血液瘤)、炎癥性疾病或自身免疫性疾病以及由病毒或反轉錄病毒引起的疾病如AIDS、ARC(AIDS相關的復合物)、巨細胞病毒(cytomegaly)、皰疹感染或肝炎的治療除所用治療物質的效力不足外，也常常會伴有極端的副作用。這種效果可以解釋為所用藥理學活性物質的體內選擇性不夠以及治療范圍有限。藥理學活性物質的有利的體外藥理學特性在體內條件下常常不會出現(xiàn)。
因此，數(shù)年來，一直試圖通過修飾藥理學活性物質的化學結構來提供就其治療范圍而言其特性有所改善的新物質。此外，給藥的新藥物形式常常隨將活性物質具體運送到其作用位點的目的而發(fā)展，作用位點是藥物將發(fā)揮其治療作用的位點。在這種情況下，特別需要避免與健康細胞所進行的不利的相互作用。在帶有相應表面抗原的腫瘤細胞的情況下，例如生產識別這些特異性表面抗原的抗體，由此選擇性地與癌細胞結合。用適宜的毒素修飾抗體，這樣在與癌細胞結合后釋放毒素，由此殺死癌細胞。另一種改善治療范圍的方法是改變基本活性物質的物理特性，這樣例如通過產生酸或堿加成鹽或通過制備藥理學安全的酯(例如脂肪酸酯；J.Pharm.Sci.79,531(1990))，可以對藥理學活性物質稍加修飾以改善活性物質的溶解度或耐受性。通常將這些稍加化學修飾的化合物稱為“前藥”，因為它們與體液接觸后或在肝(第一輪代謝)中幾乎立即轉變成治療活性劑。本發(fā)明包括所述前藥。
為了提高催化穩(wěn)定性，已將核苷如ara-C和ara-A與磷脂進行了化學相連。與未修飾的核苷相比，相應的衍生物在體內有較低的毒性和較高的穩(wěn)定性。但是吸收和細胞滲透幾乎未受影響。[J.Med.Chem.32、367(1989),Cancer Res.37,1640(1977)and 41,2707(1981)]。從下列參考文獻中可以了解核苷的其他磷脂衍生物在J.Biol.Chem.265,6112(1990)中描述了作為抗病毒藥物的類脂核苷酸的生產和用途。但是，在這種情況下，只研究并合成了與已知的核苷如AZT和ddC以脂肪酸酯的結構結合的二肉豆蔻酰磷脂酰和二棕櫚酰磷脂酰殘基。
在J.Med.Chem.33,1380(1990)中描述了硫醚脂與胞苷二磷酸的核苷結合物，它們有抗腫瘤作用并可將其用于腫瘤學。
在Chem.Pharm.Bull.36,209(1988)中，描述了具有抗白血病活性的5’-(3-SN-磷脂酰)-核苷以及在轉移酶活性的磷脂酶D的存在下，從適宜的核苷和磷酸膽堿合成它們的酶促合成法。
在Tetrahedron Lett.28,199(1987)和Chem.Pharm.Bull.36,5020(1988)中描述了類脂核苷酸的酶促合成。
WO 94/13324描述了用1-O-烷基-、1-O-?；?、1-S-?；?和1-S-烷基-sn-甘油基-3-磷酸酯作為類脂載體的口服有效的活性物質。
申請EP 418814和J.Med.Chem.34,1912(1991)描述了類異戊二烯氧膦基甲酸酯作為角鯊烯合成酶抑制劑。
在Biochem.Biophys.Res.Commun.171,458(1990)中，描述了抗反轉錄病毒Foscarnet與棕櫚酰膦?；姿狨サ闹Y合物，并在J.Med.Chem.20,660(1977)中說明了(己基氧基)-羥基氧膦基乙酸的抗HIV活性。
通常，發(fā)現(xiàn)將治療藥物的濃縮物轉運到各靶器官或靶細胞的有效方法是非常有利的，在AIDS的情況下，是將藥物運送到被認為是病毒復制的主要部位的免疫系統(tǒng)和淋巴系統(tǒng)的細胞內。
PFA(膦酰基甲酸)和PAA(膦?；宜?對HSV 1和2、流感病毒、HBV、VZV、EBV以及反轉錄病毒感染有良好的抗病毒活性。
在特定的情況下，PFA/PAA及其衍生物可以有效地替換核苷/作為核苷的有效補充，因為它們抑制廣譜DNA和RNA聚合酶并以足夠選擇性抑制反轉錄病毒的RT。
PFA和PAA本身是有毒性的，因為它們與焦磷酸酯相似，可以在骨中積累。
本發(fā)明化合物還具有有價值的藥理學特性。它們特別適用于治療和預防由DNA病毒如單純性皰疹病毒、人皰疹病毒、細胞肥大病毒、乳多泡病毒、水痘帶狀皰疹病毒、肝炎病毒或EB病毒、流感病毒或RNA病毒如Toga病毒或特別是反轉錄病毒如oncoviruses HTLV-Ⅰ和Ⅱ以及l(fā)etiviruses visna和人免疫缺陷型病毒HIV-1和2引起的感染。
式Ⅰ化合物似乎特別適用于治療人反轉錄病毒HIV感染的臨床癥狀如持久性泛化的淋巴結病(PGL)、AIDS相關并發(fā)癥(ARC)的前期和AIDS的完全臨床像以及相關的CMV和HSV感染。
在J.Infect.Dis.172,225(1995)中描述了Foscarnet(膦?；姿崛c鹽/PFA)在患CMV視網膜炎的HIV患者中的抗病毒/抗反轉錄病毒作用。
Antiviral Res.26,1(1995)中描述了在鼠CMV中的抗病毒作用。
此外，在JAMA 273,1457(1995)中描述了將PFA用于治療CMV視網膜炎。
在J.Med.Chem.37,2216(1994)中描述了抑制HIV-1復制的PFA-和PAA-2’,3’-二脫氧-3’-硫雜胞苷結合物，在丁.Pharm.Sci.83,1269(1994)中描述了Foscarnet的酰氧基烷基酯。
美國申請5194654和PCT申請WO 94/13682也是非常重要的參考文獻。其中公開了膦?；人岬念愔苌锛捌湓谥|體中的應用，其中，膦?；人岬念愔苌镄纬闪颂貏e穩(wěn)定的脂質體復合物。盡管權利要求的范圍很寬，但實際上1-O-烷基-sn-甘油基-3-膦酰基羧酸是該申請的核心，該物質可很好地摻入到脂質體的類脂雙層中。所要求的烷基可包括2-24個碳原子，但是是未被另外取代的。
但是僅記載了1-O-十八烷基-sn-甘油基-3-膦?；姿狨?十八烷基-膦?；姿狨?的實施例并給出了其抗病毒作用的數(shù)據(jù)。在所完成的研究和生產中證實該化合物是不穩(wěn)定的。與所述專利申請相反，該化合物是以純物質的溶液/懸浮液而非脂質體的形式使用。
在同樣的條件下，本發(fā)明的式Ⅰ化合物是穩(wěn)定的并具有明顯的體外和體內(小鼠模型)優(yōu)點。
在體外，類脂膦?；人狨ヅc其相應的游離羧酸同樣有效。體內，它們具有明顯的優(yōu)點，特別是對于口服給藥而言。式Ⅰ化合物的羧酸酯在酸性條件下因脫羧反應而導致的結構破壞降低，從而生物利用度提高。因此，與相應的游離羧酸相比，其治療劑量可以減少。此外，羧酸酯通過例如血-腦屏障或靶細胞的細胞膜的膜通透性最好。由于羧酸酯在體內必需經酯酶裂解，其血清半衰期得到延長。
與WO 94/13682和US 5194654相比，該申請中所要求的化合物代表了一種有意義的延伸，雖然它們不被包括在這些申請內。
式Ⅰ化合物是新的。除穩(wěn)定性(以物質和溶液形式)改善外，所要求的化合物與已知類脂衍生物相比有更好的作用。
令人驚奇的是，與游離的藥理學活性物質或未修飾的物質相比，式Ⅰ的藥物活性物質有更寬的治療范圍。此外，提高了它們在體內的滯留時間、改善了通常認為是重要因素的藥理學活性物質的生物利用度或膜通透性(如血-腦屏障、細胞膜等)。因此式Ⅰ化合物可作為藥理學活性物質的載體系統(tǒng)(載體)。就其功能而言，可將式Ⅰ的結合物稱為細胞內藥物儲備、藥物靶向和藥物傳遞系統(tǒng)。它們能夠使藥理學活性物質在經口給藥后在細胞內釋放出來，有利的是這種釋放不會意想不到地發(fā)生在體細胞、器官或組織中，而是特異性地發(fā)生于含特定酶的那些細胞中。但是，特別意想不到的是裂解不是發(fā)生在通過體液如血液、血清或淋巴液或通過肝運輸?shù)孜锏倪^程中，而是發(fā)生在相應的靶細胞上或靶細胞中。這樣可以避免通過腎排泄膦酰基羧酸或在肝中裂解結合物，以便可將大部分活性物質運輸?shù)较鄳陌屑毎麅?。如上所述，所述細胞主要是生理學或病理學激活的細胞，所述細胞是藥理學活性物質施用的靶目標，如血白細胞、淋巴細胞、巨噬細胞和免疫淋巴系統(tǒng)的其他細胞種群。具體地說，它們是在相應疾病過程中有病理學或癥狀作用的激活的細胞(如巨噬細胞、粒細胞、淋巴細胞、白細胞、紅細胞、單核細胞等)。此外，它們也是受病毒、細菌、真菌或其他微生物感染的細胞。
令人驚奇的是，還發(fā)現(xiàn)當將所述物質與很特異性的類脂樣載體分子結合時，藥理學活性膦?；人岷推漉サ闹委煼秶@著增大。用該方法制備的結合物可作為一種新的活性物質用于給藥藥物形式的生產?？偟膩碚f，結合會提高藥物活性膦酰基羧酸的體內效果，因為通過所得藥物運輸系統(tǒng)將藥理學活性物質定位于靶細胞內，因此藥理學活性物質的效力和耐受力得以提高。這意味著，一方面可以減少待施用的藥理學活性膦?；人岬牧浚蛄硪环矫嬉韵嗤挠行Я考纯墒顾幚韺W作用增強。
通過結合物的酶促水解而從結合物中釋放藥理學活性膦?；人?。
式Ⅰ的結合物與未結合的藥理學活性膦?；人岷推漉ハ啾扔酗@著的優(yōu)點。與藥理學活性物質共價結合的特異性載體提高了很難再吸收的藥理學活性物質的生物利用度，潛在毒性活性分子的耐受性，迅速清除的或代謝的藥物的滯留時間以及膜通透性差(如血-腦，細胞等)的化合物的膜穿透能力。
在體內類脂部分的酶促裂解通常不發(fā)生于血清中，而只在細胞內。此外，具有其卵磷脂樣結構的載體部分(對于所要求的效果是必需的)提高了生理學活性物質的穿透能力或膜通透性，并有積存效果。另外，認為類脂結合物的胃腸耐受性比純生理學活性膦酰基羧酸的更好。類脂結合物在吸收過程中通過膜結合的穿透能力更好，因此，能更好地克服吸收障礙。這對于穿透如血-腦屏障也適用。
另外，由于結合物與原生質和組織蛋白質能夠更好地結合，從而改善了體內分布。結合物主要通過正常的生物轉化反應從硫醚氧化成亞砜，但由于亞砜和硫醚相比，其作用是等效的，因此，這種轉化并不是一種缺點。藥理學活性膦?；人釓慕Y合物中的緩慢釋放可以使活性物質保持低水平，即在較長的時間內保持穩(wěn)定，由此提高了效力和/或避免了毒副作用。以單磷酸酯形式釋放的藥理學活性物質由于其高親水性而不再能穿透細胞。
總體來說，藥理學活性物質的細胞和器官半衰期通過結合作用得以大大延長，主要是由于延長了結合物在生物體內的滯留時間。由于在血清和各種器官中沒有裂解活性，因此，幾乎未觀察到或僅觀察到很輕微的骨髓和器官毒性。特別有利的是式Ⅰ的結合物可特異性地在各種靶器官、組織或細胞中積累。
可將式Ⅰ化合物作為活性成分用于生產治療各種疾病的藥物，所述疾病需要在細胞、器官或組織中保持高水平的藥理學活性物質。代表“藥物-儲備-傳遞-靶向”的該系統(tǒng)的一個必需條件是對所進行的治療作出反應的細胞要含有裂解酶以便活性物質第一步結合，隨后在活性物質被裂解形成生理活性膦酰基羧酸的過程中將活性物質通過細胞膜運輸?shù)郊毎麅?，活性物質的裂解或者基本上與跨細胞膜運輸同時發(fā)生或此后部分地在細胞內。細胞內裂解主要是發(fā)生在其中裂解酶也位于細胞內的情況下。
適宜的靶細胞是例如免疫淋巴系統(tǒng)的細胞(如血白細胞、單核細胞、巨噬細胞、淋巴細胞)或感染的細胞。
令人驚奇的是，發(fā)現(xiàn)式Ⅰ的化合物還在病毒特異性的DNA或RNA轉錄水平抑制DNA或RNA的復制。該物質可通過抑制反轉錄酶來影響反轉錄病毒的繁殖(參見Proc.Natl.Acad.Sci.USA 83,1911,1986,andNatrue 325,773,1987)。對HIV(免疫缺陷型疾病AIDS的病因)的抑制作用具有特別的治療意義?，F(xiàn)在已將3’-疊氮基-3’-脫氧胸苷(DE-A-3608606)用于治療AIDS患者的AIDS。但是3’-疊氮基-3’-脫氧胸苷對骨髓的毒副作用使約50％的受治療患者都需要輸血。式Ⅰ的化合物沒有這些缺點。在藥理學相關劑量，它們有抗病毒效力而無細胞毒性。
可將本發(fā)明化合物和其藥物制劑與其他藥物聯(lián)用以治療和預防上述感染。含有可用于治療和預防HIV感染或伴有這種病的疾病的其他藥物的例子是3’-疊氮基-3’-脫氧胸苷、2’,3’-二脫氧核苷如2’,3’-二脫氧胞苷、2’,3’-二脫氧腺苷和2’,3’-二脫氧肌苷、無環(huán)核苷(如無環(huán)鳥苷)、非核苷RT抑制劑、蛋白酶抑制劑如Invirase、干擾素如干擾素α、β、γ、細胞因子和白細胞介素(如白細胞介素16)、趨化因子如MIP1α、MIP1β、CC1、腎排泄抑制劑如丙磺舒、核苷運輸抑制劑如雙嘧啶氨醇以及免疫調節(jié)劑如白細胞介素Ⅱ或刺激因子如粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)、粒細胞集落刺激因子(G-CSF、neutropoetin)、thrombopoetin和thrombopoetin-樣因子?？蓪⒈景l(fā)明的化合物和其他藥物分開給藥或同時給藥，并可以以單一或兩種制劑，或在不同的時間給藥以便達到協(xié)同效果。
認為羧基和膦酸基的堿金屬、堿土金屬和銨鹽是式Ⅰ化合物可能的鹽。鋰、鈉和鉀鹽是優(yōu)選的堿金屬鹽。鎂和鈣鹽是特別優(yōu)選的堿土金屬鹽。本發(fā)明的銨鹽是指含有銨離子的鹽，所述銨離子可被1-4個碳原子的烷基和/或芳烷基(優(yōu)選芐基)取代最多達四次。在這種情況下，所述取代基可以相同或不同。
式Ⅰ中的R1優(yōu)選為直鏈、飽和的亞烷基鏈，其中e等于5-12個碳原子。Cycl優(yōu)選代表環(huán)己基或環(huán)戊基或被C1-C4烷基或鹵素任選取代的苯基。優(yōu)選X和Y彼此獨立地表示硫、亞磺?；⒒酋；?、氧或一個鍵。特別優(yōu)選X是硫并且Y是氧?；鶊F-(CH2)e-Cycl優(yōu)選位于C3母體物質的3位。e表示6-10。(CH2)e-Cycl最優(yōu)選地表示苯基己基或環(huán)己基己基。R2所表示的烷基中，特別優(yōu)選含有8-12個碳原子的直鏈或支鏈、飽和或不飽和的烷基鏈。R2所表示的烷基中，特別優(yōu)選壬基、癸基、十一烷基或十二烷基。
所要求的通式Ⅰ的結合物中，特別優(yōu)選的偶聯(lián)的膦?；人崾?膦酰基甲酸-膦?；宜?膦?；犰Ⅴ；姿?、膦?；宜岷挽Ⅴ；岬孽?yōu)選甲酯、乙酯、丙酯、丁酯、叔丁酯和芐酯。
通式Ⅰ的化合物可通過如下方法制備1．在任選取代的芳基磺酰氯的存在下，于有機堿中或在堿的存在下于惰性有機溶劑中，將通式Ⅱ的化合物
其中R1、R2和n具有上述的含義，與通式Ⅲ的化合物反應
其中m和R3具有上述含義并且R3優(yōu)選表示C1-C6烷基，隨后通過用堿皂化的方法將羧酸酯轉變成式Ⅰ的衍生物或其生理相容性鹽；或者2．從式Ⅲ化合物和烷基-或芳基磺酰氯制得混合酸酐，然后將其與式Ⅱ的醇在堿存在下于惰性有機溶劑中反應或直接在堿中反應，然后隨需要將羧酸酯用堿皂化；或者3．將其中R表示氫的式Ⅲ的膦酰基羧酸與式Ⅱ的醇在堿和任選取代的芳基磺酰氯的存在下反應，并且如需要，可將其轉變成生理相容性酯或鹽；或者4．將其中R表示氫的式Ⅲ化合物和烷基-或芳基磺酰氯混合酸酐與式Ⅱ的醇在堿和任選地惰性有機溶劑的存在下反應，然后任選地將該結合物轉變成生理相容性鹽；或者5．將通式Ⅳ的膦酸二酰氯與通式Ⅱ的醇在堿中以1∶1的摩爾比進行反應，
其中所述膦酸二酰氯根據(jù)Bhongle等(Synthetic Commun.17,1071(1987))的方法，將膦酸二-三甲基硅烷基酯與草酰氯反應制得，或者6．按照Tetrahedron Letters,33,7473(1992)的方法，用草酰氯將式Ⅲ的化合物轉變成式Ⅳ的膦酸二酰氯，隨和將該膦酸二酰氯與式Ⅱ的醇在堿的存在下以1∶1的摩爾比進行反應。將形成的膦酸單酰氯中間體皂化生成半酯，然后用堿皂化將該羧酸酯轉變成式Ⅰ的衍生物或其生理相容性鹽。
式Ⅱ化合物及其制備方法記載于實施例和EP-0545966。
用于治療例如病毒感染的含有式Ⅰ化合物的藥物可以以液體或固體的形式經腸或胃腸外給藥。在這種情況下，常用的給藥劑型可以是例如片劑、膠囊、糖衣丸、糖漿、溶液劑或懸浮液。優(yōu)選使用水作為注射溶媒，在水中可以含有注射液常用的添加劑如穩(wěn)定劑、增溶劑和緩沖劑。所述添加劑可以是例如酒石酸鹽或檸檬酸鹽緩沖劑，乙醇，螯合劑如乙二胺四乙酸及其無毒的鹽，用于調節(jié)粘度的高分子聚合物如液體聚環(huán)氧乙烷。必須將用于注射液的載體滅菌并優(yōu)選將其填充到安瓿內。固體載體是例如淀粉、乳糖、山梨糖醇、甲基纖維素、滑石、高度分散的硅酸、高分子脂肪酸如硬脂酸、明膠、瓊脂、磷酸鈣、硬脂酸鎂、動物和植物脂、固體高分子聚合物如聚乙二醇等。用于口服施用的適宜制劑可任選地含有較味劑和甜味劑。
劑量取決于各種因素，例如給藥方式、物種、年齡以及各自的狀態(tài)。本發(fā)明化合物的給藥量通常為0.1-100mg/天/kg體重、優(yōu)選0.2-80mg/天/kg體重。優(yōu)選將每日劑量分2-5次給藥，每次施用1-2片活性物質含量為0.5-500mg的片劑。該片劑還可以是緩釋片劑，通過這種方法，可以將每日的給藥次數(shù)減少至1-3次。緩釋片劑的活性物質含量可以是2-1000mg?；钚晕镔|還可以以連續(xù)輸注的方式施用，通常適宜的劑量為每日5-5000mg。
除實施例中所提到的化合物和將權利要求中所述的取代基的各種含義進行組合所得到的化合物之外，本發(fā)明還包括如下的式Ⅰ化合物1．[3-(對-氯苯基)己硫基-2-癸氧基]-丙氧基-羥基-氧膦基-甲酸2．[3-(對-叔丁基苯基)氧基-辛硫基-2-癸氧基]-丙氧基-羥基-氧膦基-甲酸3．[3-(苯基)氧基-己硫基-2-癸氧基]-丙氧基-羥基-氧膦基-甲酸4．[3-(苯基)庚硫基-2-癸氧基]-丙氧基-羥基-氧膦基-甲酸5．[3-(對-氯苯基)氧基-戊硫基-2-癸氧基]-丙氧基-羥基-氧膦基-甲酸6．[3-(間-乙基苯基)癸硫基-2-癸氧基]-丙氧基-羥基-氧膦基-甲酸7．[3-(對-叔丁基苯基)辛硫基-2-癸氧基]-丙氧基-羥基-氧膦基-甲酸8．[3-(環(huán)己基)庚硫基-2-癸氧基]-丙氧基-羥基-氧膦基-甲酸9．[3-(環(huán)戊基)壬硫基-2-癸氧基]-丙氧基-羥基-氧膦基-甲酸10．[3-(環(huán)庚基)辛硫基-2-癸氧基]-丙氧基-羥基-氧膦基-甲酸11．[3-(環(huán)己基)氧基-戊硫基-2-癸氧基]-丙氧基-羥基-氧膦基-甲酸12．[3-(環(huán)己基)硫基-戊硫基-2-癸氧基]-丙氧基-羥基-氧膦基-甲酸13．[3-(苯基)十一烷硫基-2-癸氧基]-丙氧基-羥基-氧膦基-甲酸14．[3-十二烷硫基-2-(苯基)己硫基]-丙氧基-羥基-氧膦基-甲酸15．[3-癸氧基-2-(環(huán)己基)己硫基]-丙氧基-羥基-氧膦基-甲酸16．[3-(對-氯苯基)己硫基-2-癸氧基]-丙氧基-羥基-氧膦基-乙酸17．[3-(對-叔丁基苯基)氧基-辛硫基-2-癸氧基]-丙氧基-羥基-氧膦基-乙酸18．[3-(苯基)氧基-己硫基-2-癸氧基]-丙氧基-羥基-氧膦基-乙酸19．[3-(苯基)庚硫基-2-癸氧基]-丙氧基-羥基-氧膦基-乙酸20．[3-(對-氯苯基)氧基-戊硫基-2-癸氧基]-丙氧基-羥基-氧膦基-乙酸21．[3-(間-乙基苯基)癸硫基-2-癸氧基]-丙氧基-羥基-氧膦基-乙酸22．[3-(對-叔丁基苯基)辛硫基-2-癸氧基]-丙氧基-羥基-氧膦基-乙酸23．[3-(環(huán)己基)庚硫基-2-癸氧基]-丙氧基-羥基-氧膦基-乙酸24．[3-(環(huán)戊基)壬硫基-2-癸氧基]-丙氧基-羥基-氧膦基-乙酸25．[3-(環(huán)庚基)辛硫基-2-癸氧基]-丙氧基-羥基-氧膦基-乙酸26．[3-(環(huán)己基)氧基-戊硫基-2-癸氧基]-丙氧基-羥基-氧膦基-乙酸27．[3-(環(huán)己基)硫基-戊硫基-2-癸氧基]-丙氧基-羥基-氧膦基-乙酸28．[3-(苯基)十一烷硫基-2-癸氧基]-丙氧基-羥基-氧膦基-乙酸29．[3-十二烷硫基-2-(苯基)己硫基]-丙氧基-羥基-氧膦基-乙酸30．[3-癸氧基-2-(環(huán)己基)己硫基]-丙氧基-羥基-氧膦基-乙酸31．[3-(對-氯苯基)己硫基-2-癸氧基]-丙氧基-羥基-氧膦基-丙酸32．[3-(對-叔丁基苯基)氧基-辛硫基-2-癸氧基]-丙氧基-羥基-氧膦基-丙酸33．[3-(苯基)氧基-己硫基-2-癸氧基]-丙氧基-羥基-氧膦基-丙酸34．[3-(苯基)庚硫基-2-癸氧基]-丙氧基-羥基-氧膦基-丙酸35．[3-(對-氯苯基)氧基-戊硫基-2-癸氧基]-丙氧基-羥基-氧膦基-丙酸36．[3-(間-乙基苯基)癸硫基-2-癸氧基]-丙氧基-羥基-氧膦基-丙酸37．[3-(對-叔丁基苯基)辛硫基-2-癸氧基]-丙氧基-羥基-氧膦基-丙酸38．[3-(環(huán)己基)庚硫基-2-癸氧基]-丙氧基-羥基-氧膦基-丙酸39．[3-(環(huán)戊基)壬硫基-2-癸氧基]-丙氧基-羥基-氧膦基-丙酸40．[3-(環(huán)庚基)辛硫基-2-癸氧基]-丙氧基-羥基-氧膦基-丙酸41．[3-(環(huán)己基)氧基-戊硫基-2-癸氧基]-丙氧基-羥基-氧膦基-丙酸42．[3-(環(huán)己基)硫基-戊硫基-2-癸氧基]-丙氧基-羥基-氧膦基-丙酸43．[3-(苯基)十一烷硫基-2-癸氧基]-丙氧基-羥基-氧膦基-丙酸44．[3-十二烷硫基-2-(苯基)己硫基]-丙氧基-羥基-氧膦基-丙酸45．[3-癸氧基-2-(環(huán)己基)己硫基]-丙氧基-羥基-氧膦基-丙酸46．((3-(6-環(huán)己基己硫基)-2-癸氧基)-丙氧基)-羥基-氧膦基-甲酸丁酯47．((3-(6-苯基己硫基)-2-癸氧基)-丙氧基)-羥基-氧膦基-甲酸乙酯48．((3-(6-苯基己硫基)-2-癸氧基)-丙氧基)-羥基-氧磷基-甲酸丙酯49．((3-(6-苯基己硫基)-2-癸氧基)-丙氧基)-羥基-氧膦基-甲酸叔丁酯50．((3-(6-苯基己硫基)-2-癸氧基)-丙氧基)-羥基-氧膦基-甲酸(2-二甲氨基)乙酯實施例 1R,S-(3-(6-苯基己硫基)-2-癸氧基)-丙氧基)-羥基-氧膦基-甲酸二鈉鹽1(Ph6S10OP-PFA)6-苯基-1-己硫醇13氮氣氛圍下，將溶于40毫升乙醇的15.0g(62.2mmol)1-溴-6-苯基-己烷(記載于未審定的公開專利申請PCT/EP95/04413中)加入到7.10g(93.3mmol)硫脲的30毫升乙醇溶液中。在回流溫度下沸騰7小時后，將其冷卻至室溫，與33毫升濃氨水混合并加熱回流4小時。隨后，將其用15毫升濃鹽酸酸化至pH1。將其用乙醚萃取3次，每次200毫升，用水和飽和氯化鈉溶液洗滌，硫酸鎂干燥，然后真空蒸除溶劑。將殘余物加入二氯甲烷中，吸濾出固體，再次用二氯甲烷洗滌，然后將濾液真空蒸發(fā)。得到9.80g(82％)無色油狀的13。
R,S-2-癸氧基-3-(6-苯基己硫基)-1-丙基-苯甲酸酯14氮氣氛圍下，將9.60g(49.4mmol)13和6.80g(49.4mmol)碳酸鉀加入100毫升甲乙酮中，將其攪拌15分鐘，然后與19.7g(49.4mmol)3-溴-2-癸氧基-1-丙基-苯甲酸酯12(EP 0545966)和一粒碘化鉀晶體混合。加入5毫升二甲基甲酰胺，然后將其在室溫下攪拌48小時。吸濾出碳酸鉀，將沉淀用庚烷洗滌，然后將濾液真空濃縮。將殘余物加入水中，用庚烷萃取，將有機相用0.5N氫氧化鈉洗滌，用水洗至中性，用硫酸鎂干燥并蒸發(fā)。得到25.6(100％)14，該產物不經純化直接用于合成15。
R,S-2-癸氧基-3-(6-苯基己硫基)-1-丙醇15
氮氣氛圍下，將25.5g(49.7mmol)14、30毫升乙醇和12毫升(60.0mmol)5N氫氧化鈉的混合物于室溫下攪拌共48小時。將其真空蒸發(fā)，加入水中，用二氯甲烷萃取，用1N氫氧化鈉和水洗滌，用硫酸鎂干燥并真空蒸除溶劑。得到18.9g(93％)粗產物。將其通過閃式硅膠色譜(流動相庚烷/乙酸乙酯7∶1)的方法進行純化，由此得到12.8g(63％)無色油15。
二氯氧膦基甲酸甲酯16氮氣下，將28.2g(99.2mmol)二-(三甲基硅烷氧基)-氧膦基-甲酸甲酯(Synthetic Commun.17,1071(1987)；Tetrahedron Lett.33,7473)溶于150毫升二氯甲烷，然后在0℃下于30分鐘內滴加5滴二甲基甲酰胺和37.8g(0.297mol)草酰氯。室溫下攪拌2小時，然后真空蒸除溶劑并進行高真空蒸餾，得到12.1g(69％)16,bp 42-45℃/0.19毫巴。
R,S-((3-(6-苯基己硫基)-2-癸氧基)-丙氧基)-羥基-氧膦基甲酸甲酯17(實施例12.21)氮氣氛圍下，將1.50g(8.48mmol)二氯氧膦基甲酸甲酯16溶于15毫升二氯甲烷并冷卻至5℃。于15分鐘內滴加溶于20毫升二氯甲烷的3.50g(8.48mmol)R,S-2-癸氧基-3-(6-苯基己硫基)-1-丙醇15和900mg(8.48mmol)三乙胺的混合物，在該過程中，反應內溫上升至10℃。10℃下30分鐘后，將其在室溫下繼續(xù)攪拌3小時，然后倒入由7.85ml1N氫氧化鈉和200毫升冰水形成的溶液中。將其用二氯甲烷萃取2次，每次100毫升，將合并的有機相用水洗滌并用硫酸鎂干燥。真空蒸除溶劑，得到4.3g(95％)油，將其通過閃式硅膠色譜進行純化。洗脫掉未反應的15(1.35g，流動相乙酸乙酯)后用二氯甲烷/甲醇10∶1展開，由此得到2.52g(56％)無色油狀的17(12.21)。
氮氣下，將2.50g(4.71mmol)17,20毫升乙醇和20毫升四氫呋喃與4.7ml(14.1mmol)3N氫氧化鈉混合。將其在室溫下攪拌2小時，用旋轉蒸發(fā)儀蒸除溶劑，將其加入250毫升水中，用叔丁基甲基醚萃取2次，每次50毫升。用1N HCl將水相調至pH8.5，然后通過冷凍干燥除去水。得到2.3g(87％)1，熔點212-214℃。
實施例2R,S-((3-(12-苯基十二烷硫基)-2-癸氧基)-丙氧基)-羥基-氧膦基-甲酸二鈉鹽2(Ph12S10OP-PFA)
12-苯基-1-十二硫醇18按照制備13(實施例1)的方法，將15.0g(46.1mmol)1-溴-12-苯基-十二烷與5.3g(69.2mmol)硫脲反應。得到11.1g(87％)18。
R,S-癸氧基-3-(12-苯基十二烷硫基)-丙基-苯甲酸酯19由10.8g(38.8mmol)18和15.3g(38.8mmol)12制得20.0g(92％)19。
R,S-癸氧基-3-(12-苯基十二烷硫基)-1-丙醇20將4.40g(7.37mmol)19用3.0ml(15mmol)5N氫氧化鈉水解得到3.08g(85％)無色油狀的20。
類似于實施例1，用1.90g(9.95mmol)16和4.90g(9.95mmol)R,S-2-癸氧基-3-(12-苯基十二烷硫基)-1-丙醇20制得3.39g(52％)無色油狀R,S-((3-(12-苯基十二烷硫基)-2-癸氧基)-丙氧基)-羥基-氧膦基甲酸甲酯(實施例12.22)。將其用氫氧化鈉溶液皂化(類似于實施例1)得到2.90g(94％)2，熔點224℃。
實施例 3R,S-((3-(10-苯基癸硫基)-2-癸氧基)-丙氧基)-羥基-氧膦基-甲酸二鈉鹽3(Ph10S10OP-PFA)類似于實施例1，用1.10g(6.29mmol)16和2.92g(6.29mmol)R,S-癸氧基-3-(10-苯基癸硫基)-1-丙醇制得0.85g(23％)無色樹脂狀R,S-((3-(10-苯基癸硫基)-2-癸氧基)-丙氧基)-羥基-氧膦基甲酸甲酯(實施例12.23)。將其用氫氧化鈉溶液皂化(實施例1)得到0.71g(79％)3,熔點219-220℃。
實施例 4R,S-((3-(5-(4-氯苯基)-戊硫基)-2-癸氧基)-丙氧基)-羥基-氧膦基-甲酸二鈉鹽4(ClPh5S10OP-PFA)類似于實施例1，用1.10g(mmol)16和2.70g(6.20mmol)R,S-2-癸氧基-3-(5-(4-氯苯基)-戊硫基)-1-丙醇制得3.30g(97％)無色油狀R,S-((3-(5-(4-氯苯基)-戊硫基)-2-癸氧基)-丙氧基)-羥基-氧膦基-甲酸甲酯(實施例12.24).將2.80g該酯用氫氧化鈉溶液皂化(實施例1)得到2.90g(96％)4，熔點170-172℃。
實施例 5R,S-((3-(10-(4-叔丁基苯氧基)-癸硫基)-2-癸氧基)-丙氧基)-羥基-氧膦基-甲酸二鈉鹽5(tBuPhO10S10OP-PFA)類似于實施例1，用1.10g(6.20mmol)16和3.34g(6.20mmol)R,S-2-癸氧基-3-(5-(4-叔丁基苯氧基)-癸硫基)-1-丙醇制得1.92g(58％)無色油狀R,S-((3-(5-(4-叔丁基苯氧基)-癸硫基)-2-癸氧基)-丙氧基)-羥基-氧膦基-甲酸甲酯(實施例12.25)。將其用氫氧化鈉溶液皂化(實施例1)得到1.90g(95％)5。
實施例 6R,S-((3-(5-環(huán)己基戊硫基)-2-癸氧基)-丙氧基)-羥基-氧膦基-甲酸二鈉鹽6(CH5S10OP-PFA)類似于實施例1，用1.10g(6.20mmol)16和2.48g(6.20mmol)R,S-2-癸氧基-3-(5-環(huán)己基戊硫基)-1-丙醇制得2.60g(81％)無色油狀R,S-((3-(5-環(huán)己基戊硫基)-2-癸氧基)-丙氧基)-羥基-氧膦基-甲酸甲酯(實施例12.26)。將其用氫氧化鈉溶液皂化(實施例1)得到1.50g(92％)6，熔點217-219℃。
實施例 7R,S-((3-(6-環(huán)己基己硫基)-2-癸氧基)-丙氧基)-羥基-氧膦基-甲酸二鈉鹽7(CH6S10OP-PFA)類似于實施例1，用1.30g(7.30mmol)16和3.00g(7.30mmol)R,S-2-癸氧基-3-(6-環(huán)己基己硫基)-1-丙醇制得2.80g(72％)無色油狀R,S-((3-(6-環(huán)己基己硫基)-2-癸氧基)-丙氧基)-羥基-氧膦基-甲酸甲酯(實施例12.27)。將2.02g該酯用氫氧化鈉溶液皂化(實施例1)得到2.00g(93％)7，熔點199-202℃。
實施例 8R,S-((3-(12-環(huán)己基十二烷硫基)-2-癸氧基)-丙氧基)-羥基-氧膦基-甲酸二鈉鹽8(CH12S10OP-PFA)類似于實施例1，用0.55g(3.10mmol)16和1.50g(3.10mmol)R,S-2-癸氧基-3-(12-環(huán)己基十二烷硫基)-1-丙醇制得1.70g(81％)無色油狀R,S-((3-(12-環(huán)己基十二烷硫基)-2-癸氧基)-丙氧基)-羥基-氧膦基-甲酸甲酯(實施例12.28)。將1.50g該酯用氫氧化鈉溶液皂化(實施例1)得到1.10g(71％)8，熔點105-107℃。
實施例 9R,S-((3-(8-環(huán)己基辛硫基)-2-癸氧基)-丙氧基)-羥基-氧膦基-甲酸二鈉鹽9(CH8S10OP-PFA)類似于實施例1，用1.10g(6.29mmol)16和2.75g(6.29mmol)R,S-2-癸氧基-3-(8-環(huán)己基辛硫基)-1-丙醇制得2.40g(68％)無色油狀R,S-((3-(8-環(huán)己基辛硫基)-2-癸氧基)-丙氧基)-羥基-氧膦基-甲酸甲酯(實施例12.29)。將1.37g該酯用氫氧化鈉溶液皂化(實施例1)得到O.95g(68％)9，分解＞250℃。
實施例 10R,S-((3-(10-環(huán)己基癸硫基)-2-癸氧基)-丙氧基)-羥基-氧膦基-甲酸二鈉鹽10(CH10S10OP-PFA)類似于實施例1，用1.10g(6.29mmol)16和2.96g(6.29mmol)R,S-2-癸氧基-3-(10-環(huán)己基癸硫基)-1-丙醇制得1.15g(37％)無色油狀R,S-((3-(10-環(huán)己基癸硫基)-2-癸氧基)-丙氧基)-羥基-氧膦基-甲酸甲酯(實施例12.30)。將其用氫氧化鈉溶液皂化(實施例1)得到1.06g(89％)10，熔點179-181℃。
實施例 11R,S-((3-(5-(4-氯苯氧基)-戊硫基)-2-癸氧基)-丙氧基)-羥基-氧膦基-甲酸二鈉鹽11(ClPhO5S10OP-PFA)類似于實施例1，用1.10g(6.29mmol)16和2.80g(6.29mmol)R,S-2-癸氧基-3-(5-(4-氯苯氧基)-戊硫基)-1-丙醇制得1.27g(36％)無色油狀R,S-((3-(5-(4-氯苯氧基)-戊硫基)-2-癸氧基)-丙氧基)-羥基-氧膦基-甲酸甲酯(實施例12.31)。將其用氫氧化鈉溶液皂化(實施例1)得到1.34g(99％)蠟狀的11，熔點175-177℃。
實施例 12類似于實施例1至11，可以合成實施例12.21至12.51。
表1．實施例1至11和12.21至12.51的部分NMR數(shù)據(jù)和Rf-值
各Rf-值以10μg/10μl的體積用溶劑36(異丙醇/乙酸丁酯/水/氨50∶30∶15∶5,v/v)在Fa.Merck,Darmstadt(Material-Nr.5715)的Kieselgel 60F254DC制備板測得。用HCl/高氯酸噴霧試劑進行檢測。所示的13C-位移指羰基碳(雙重峰，J=250Hz)。
實施例 13在鼠細胞肥大病毒(MCMV)模型中體內(exp.951016)檢測醚類脂-Foscarnet結合物用MCMV模型體內檢測在分子的醚類脂部分有變化的各種醚類脂-Foscarnet結合物。在該試驗中，與安慰劑處理對照相比，在感染后+9天測定用MCMV病毒感染后的存活率(表2)。
在0天，通過腹膜內注射2×105PFU/動物來感染動物(對照Ⅰ和Ⅱ除外)。在-1天，用100mg/kg環(huán)磷酰胺經口服免疫抑制所有動物(除對照Ⅰ外)。從0天(感染后+1小時)到+8天，以30mg×kg-1的劑量每天一次腹膜內施用所有檢測物質。每種情況都以10只動物為一組。在+9天確定存活的動物數(shù)。
如從表2所見，在用PBS安慰的對照Ⅲ(組3)中，到+9天，10只動物中只有1只存活。在該動物模型中，所有檢測的都是有效的。就存活期而言，檢測物質有顯著的結構-作用關系，TBUPHO10S10OP-PFA、CLPH5S10OP-PFA和PH6S10OP-PFA是最有活性的化合物。
表1在MCMV模型中體內醚類脂-Foscarnet結合物的結構-作用關系a
a在-1天用1×100mg/kg環(huán)磷酰胺經口免疫抑制。在0天，通過腹膜內注射2×105PFU/動物來感染。從0天(+1小時)到+8天(n=每組10只動物)，以30mg×kg-1腹膜內注射治療。
權利要求
1．式Ⅰ的膦酰基羧酸的磷脂衍生物，其互變異構體、光學異構體和外消旋體和其生理可接受的無機或有機堿鹽以及式Ⅰ化合物的前藥，
其中R1是基團(CH2)e-Cycl中的直鏈或支鏈、飽和或不飽和的烷基鏈，其中e 表示4-16的整數(shù)，從3位起的碳原子之一可被雜原子(氧、氮或硫)代替，R2可以是氫、含有1-20個碳原子的直鏈或支鏈、飽和或不飽和烷基鏈R3表示含有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基鏈，優(yōu)選甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、叔丁基、戊基、己基、新戊基、叔己基或苯基、膽堿、乙醇胺、肉堿、C5-C7-環(huán)烷基、芐基或下列基團之一
其中R4表示C1-C6-烷基、芐基或苯基，R5和R6表示C1-C6-烷基，n是1、2或3，X 是一個鍵、氧、硫、氧羰基、羰基氧基、羰基氨基、氨基羰基、亞磺?；蚧酋；?，Y 是一個鍵、氧、硫、氧羰基、羰基氧基、羰基氨基、氨基羰基、亞磺?；蚧酋；珻ycl 表示含有5-7個原子的環(huán)烷基或苯基，其中的一個環(huán)碳原子可被氮代替，并且所述的飽和或芳香的環(huán)可被C1-10-烷基、C1-C10-烷氧基、C1-C10-烷硫基或鹵素取代一次或多次，m 表示0、1、2或3，條件是，如果R2同時具有R1的含義的話，R1可與R2相同。
2．權利要求1的化合物，其中R2可以是含有8-12個碳原子的直鏈或支鏈、飽和或不飽和烷基鏈。
3．權利要求1或2任一的化合物，其中R3不是氫。
4．權利要求1至3之一項的化合物，其中m是0、1或2。
5．權利要求1-4之一項的化合物，其中R3代表甲基、乙基、丙基、丁基、叔丁基或芐基。
6．權利要求1-5之一項的化合物，其中e代表6至10之間的數(shù)。
7．權利要求1-6之一項的化合物，其中X代表硫、亞磺?；?、磺?；?、氧或一個鍵。
8．權利要求1-7之一項化合物，其中Y代表硫、亞磺?；⒒酋；⒀趸蛞粋€鍵。
9．權利要求1-8之一項化合物，其中X代表硫，Y代表氧。
10．權利要求1-9之一項化合物，其中cycl代表環(huán)已基、環(huán)戊基或任選被鹵素或C1-C4烷基取代的苯基。
11．權利要求1-10之一項化合物，其中R2代表壬基、癸基、十一烷基或十二烷基。
12．權利要求1-11之一項化合物，其中R1代表苯基己基或任選被叔丁基或氯取代的環(huán)己基。
13．含有權利要求1-12之一項中所要求的至少一種式Ⅰ化合物和常用藥物輔劑和載體的藥物組合物。
14．權利要求1-12之一項中所要求的至少一種式Ⅰ化合物用于生產治療自身免疫疾病、腫瘤、炎癥、病毒或反轉錄病毒疾病的藥物的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及通式Ⅰ的新的膦?；人岬念愔苌铩⑵浠プ儺悩嬻w、其生理可接受的無機或有機堿鹽,以及該化合物的生產方法和含有這些化合物的藥物,其中在說明書中給出了各符合的含義。
文檔編號A61K31/66GK1209069SQ96180012
公開日1999年2月24日 申請日期1996年12月16日 優(yōu)先權日1995年12月15日
發(fā)明者H·茲爾赫, D·赫爾曼, H·G·奧皮茨, G·茲梅爾曼, E·沃斯 申請人:曼海姆泊靈股份公司