專利名稱：8，9-脫氫雌酮作為抗氧化劑的應(yīng)用的制作方法
生物產(chǎn)生的自由基與許多疾病有關(guān)。需氧生物在氧氣環(huán)境中的存活涉及這些非?；顫姷幕瘜W(xué)基團(tuán)的生物生成和控制它們的生物能力之間復(fù)雜的相互作用(Del Maestro RF，Acta Phy Scan Suppl.492153-68(1980))。在寄主生物和生物生成的自由基之間的相互作用導(dǎo)致了以細(xì)胞損傷和該生物死亡為終結(jié)的深?yuàn)W的生物化學(xué)變性。自由基反應(yīng)的產(chǎn)物的累積導(dǎo)致了許多病態(tài)中的一些疾病，這已被認(rèn)為部分地是由細(xì)胞內(nèi)自由基增長量誘發(fā)細(xì)胞損傷引起的。這些包括—但不局限于—癌癥、心血管疾病、中樞神經(jīng)系統(tǒng)紊亂、骨疾、衰老、早老性癡呆、炎癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、自身免疫疾病、呼吸窘迫和肺氣腫。
自由基損害與許多疾病的聯(lián)系被廣泛報(bào)道，許多細(xì)胞成分包括酶、離子通道、結(jié)構(gòu)蛋白和膜脂質(zhì)是活潑的自由基的可能的目標(biāo)(Rice-Evans C，MolAspects of Med 13(1)1-111(1992))。在合適的位置抗氧化劑成份將限制損害。與這些可能目標(biāo)反應(yīng)的自由基可以損害一系列細(xì)胞功能而導(dǎo)致病變和最終細(xì)胞死亡。在可能的反應(yīng)位點(diǎn)的抗氧化劑成份將限制損害。在保護(hù)DNA、蛋白質(zhì)(包括脂蛋白)和膜脂質(zhì)免受氧化損害中抗氧化劑扮演了重要角色。
自由基損害對許多長期健康問題的病源產(chǎn)生影響是特別明顯的。對于大部分人類疾病，由內(nèi)源產(chǎn)生的氧化劑對初期疾病的過程是次要的，但氧化損害加重了開始的損傷。例如，在一段局部缺血之后在血液流通恢復(fù)期間發(fā)生在器官上的損害可被定義為消腫損傷。盡管是必須的，氧修復(fù)還是造成損傷的組織生成的氧化劑增加但也使損傷暫時(shí)惡化(Uraizee A，Circulation 75(6)1237-1248(1987))。Guanieri(Biochim-Biophys-ACTA 718(2)157-164(1982))描述了在含氧量低的心肌里減少抗氧劑保護(hù)，隨后使起重新充氧作用的脂質(zhì)過氧化增加。在消腫損傷里，局部缺血損傷后由于粘連和激活中性白細(xì)胞在內(nèi)皮損傷位置處的炎性反應(yīng)產(chǎn)生超氧化物。在許多不同的臨床情況中，也增加了在肝臟氧自由基的產(chǎn)生。對于病毒性肝炎和慢性活動(dòng)性肝炎，在肝臟累積了大量被刺激的巨噬細(xì)胞，它們產(chǎn)生自由基。大量有毒的化學(xué)物質(zhì)使肝中毒，這是由于肝臟里增加自由基的生成，通常由細(xì)胞色素P-450做為引起的媒介?？梢詳喽◤蔫F蛋白釋放出的鐵催化羥基的生成是許多肝臟疾病易發(fā)的機(jī)理(Lee WM，N Eng J of Med；Review P.1118(1995))。
氧化和抗氧化劑的使用對于許多炎癥的治療也很重要。類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)是最常見的慢性炎性疾病。流行病學(xué)研究表明標(biāo)準(zhǔn)的和確定的RA流行率在0.3％和1.5％之間。慢性持續(xù)性炎性關(guān)節(jié)疾病伴隨著在發(fā)炎的患風(fēng)濕病的關(guān)節(jié)里生成H2O2。在發(fā)炎期間，也生成氧自由基，尤其是由多形核白細(xì)胞(PMN)和巨噬細(xì)胞產(chǎn)生。在任何慢性或急性炎性疾病中，PMN和巨噬細(xì)胞將產(chǎn)生O2-和H2O2。結(jié)核病、牛皮癬、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、其它自體免疫疾病和成人呼吸窘迫綜合癥也可以被稱為由氧化作為誘因的炎性疾病，其它許多疾病還可以加入到這個(gè)行列中。
氧自由基的生成和脂質(zhì)過氧化過程也已成為中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)創(chuàng)傷和發(fā)作(例如局部缺血)領(lǐng)域的研究人員關(guān)注的焦點(diǎn)。許多研究提供大量證明，在損傷的或局部缺血的CNS存在自由基和脂質(zhì)過氧化反應(yīng)(Hall ED，J-Neurotrauma 9(Suppl，1)S165-S172(1992))。
抗氧化劑已被建議是保護(hù)性的以抗乳癌和包括那些腦癌和肝癌的其它癌癥，并且保護(hù)以抗心血管疾病和骨質(zhì)疏松(Wiseman H，F(xiàn)ree Radical Res21(3)187-94(1994)。它們已被證明可保護(hù)模型和包括核膜的細(xì)胞膜可能致癌的自由基中間物和脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物。涉及粥樣硬化及其普遍發(fā)病率的嚴(yán)峻困難已使該血管疾病的預(yù)防和治療成為關(guān)注的焦點(diǎn)，可能通過它們保護(hù)低密度脂蛋白的性能(LDL)以抗氧化損傷(Steinberg D，NEngl J of Med 14915-924)(1989))。
根據(jù)本發(fā)明，這里提供了一種通過給需要的哺動(dòng)物施用抗氧化劑8，9-脫氫雌酮或其3-硫酸酯藥用可接受的鹽治療或抑制自由基誘發(fā)疾病的方法。作為此過程的推論，本發(fā)明提供一種在哺乳動(dòng)物中用酶、離子通道、結(jié)構(gòu)蛋白和膜脂質(zhì)處理自由基的過程，其包括施用8，9-脫氫雌酮或其藥用可接受的硫酸酯作為犧牲底物以充足的量選擇性地反應(yīng)和抑制與患者的酶、離子通道、結(jié)構(gòu)蛋白或膜脂質(zhì)的自由基反應(yīng)。描述為被承認(rèn)的抗氧化劑療法中有特效的情況是癌癥、中樞神經(jīng)系統(tǒng)紊亂、骨疾、衰老、炎癥、末梢血管疾病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，自身免疫疾病、呼吸窘迫、肺氣腫、預(yù)防消腫損傷、病毒性肝炎、慢性活動(dòng)性肝炎、結(jié)核病，牛皮癬、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、成人呼吸窘迫綜合癥，中樞神經(jīng)系統(tǒng)創(chuàng)傷和發(fā)作。
作為根據(jù)本發(fā)明的應(yīng)用，治療包括實(shí)際病情的、改善的情況，或病情的維持減緩，和抑制包括抑制或預(yù)防過程或狀況改善。
8，9-脫氫雌酮3-硫酸酯的藥用可接受的鹽包括—但不局限于—堿金屬鹽、堿土金屬鹽、銨鹽、含1-6個(gè)碳原子的烷基胺鹽或每個(gè)烷基含1-6個(gè)碳原子的二烷基胺鹽。
8，9-脫氫雌酮的抗氧化劑性能用標(biāo)準(zhǔn)藥學(xué)測試方法確定，該方法測量其抑制由暴露在Cu++離子或培養(yǎng)的內(nèi)皮細(xì)胞誘發(fā)的氧化變性的低密度脂蛋白(LDL)的生成的能力(Parthasarathy S，Proc Natl Acad SciUSA 861046-1050(1989)，采用TBARS(硫代巴比土酸反應(yīng)物質(zhì))方法分析游離醛(YagiK.，Biochem Med 15212-216(1976))。
這個(gè)標(biāo)準(zhǔn)藥理學(xué)測試方法得到的結(jié)果證明，8，9-脫氫雌酮是有力的LDL氧化抑制劑，抑制過程可達(dá)100％。在Cu++傳遞的和豬主動(dòng)脈細(xì)胞傳遞的氧化中分別得到0.22μM和0.12μM的IC50。通過比較在豬主動(dòng)脈細(xì)胞傳遞的氧化測試方法中，對于此酮得到0.56μM的IC50。
為進(jìn)一步證明8，9-脫氫雌酮的抗氧化性能，使用培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行了兩個(gè)附加標(biāo)準(zhǔn)藥理學(xué)測試過程。在第一個(gè)測試過程中，放射性同位素標(biāo)記的LDL(125I-LDL)(McFarlane AS，InMunro HN，Allison JB，eds，Mammalian Protein metabolism，Vol.1，New YorkAcademic Press297-341(1964))通過在存在和不存在8，9-脫氫雌酮條件下暴露在Cu++里變性。然后，表示清除結(jié)合氧化變性LDL的脂蛋白受體的J774巨噬細(xì)胞放在處理的125I-LDL中。該試驗(yàn)的結(jié)果表明，在8，9-脫氫雌酮存在下氧化的LDL的結(jié)合被降低了72％和56％(分別為2.5和0.25μM 8，9-脫氫雌酮)。通過比較，同樣濃度的雌酮降低了氧化的LDL的結(jié)合39％和0％。由于氧化的LDL被巨噬細(xì)胞結(jié)合和代謝被認(rèn)為是對海綿狀細(xì)胞的改善以及粥樣硬化斑產(chǎn)生強(qiáng)烈影響，這種減少LDL氧化反應(yīng)和隨后結(jié)合以清除受體的影響被認(rèn)為是特別有益的。
在第二個(gè)測試過程里，豬主動(dòng)脈細(xì)胞(PAEC)容易受到如上所述由在8，9-脫氫雌酮存在或不存在下暴露在Cu++中的改性的LDL影響。氧化的LDL被證明對主動(dòng)脈細(xì)胞有細(xì)胞毒素作用，這個(gè)過程也被證明與粥樣硬化過程有很強(qiáng)的連帶關(guān)系。隨后將處理過的LDL與細(xì)胞孵育24小時(shí)。用MTT方法評估細(xì)胞毒素(Hansen MB，J Immu Methods 119203-210(1989))。該測試方法評定在所給試樣中存活的細(xì)胞的百分比。在此測試?yán)铮浜蠓旁跓o化合物存在的25μg/ml氧化LDL中只有2％的細(xì)胞存活。在對此實(shí)驗(yàn)中，放在在8，9-脫氫雌酮(2.5μM)存在下Cu++處理的LDL中之后，存活的細(xì)胞的百分比是100％或絕大部分。在相同的試樣里測試的其它化合物對PACE的保護(hù)影響最小(17β-雌二醇-11％存活。馬烯雌酮＝4％存活；雌酮＝37％存活)。該測試過程的結(jié)果證明在8，9-脫氫雌酮存在下改性的LDL不是細(xì)胞毒素的，并因此得到的數(shù)據(jù)與上述用TBARS方法證明的用8，9-脫氫雌酮氧化改性的抑制相符合。
基于上述這些測試過程的結(jié)果，8，9-脫氫雌酮及其硫酸酯藥用可接受的鹽諸如堿金屬鹽堿土金屬鹽、銨鹽、含有1-6碳原子的烷基胺鹽或每個(gè)烷基含有1-6個(gè)碳原子的二烷基胺鹽作為抗氧化劑用于治療和抑制導(dǎo)致疾病的自由基。
本發(fā)明的抗氧化劑可以配成純的或與藥用載體配合用于給藥，由化合物的溶解及化學(xué)性質(zhì)決定的特性選擇給藥途徑和穩(wěn)定的藥理學(xué)實(shí)施。藥用載體可以是固體或液體。
固體載體可以包括一種或多種也可以作為矯味劑、潤滑劑、增溶劑、懸浮劑、填充劑、glidants、壓縮助劑、粘合或片劑崩解劑的物質(zhì)；它也可以是一種用膠囊包裹的材料。在粉末里，載體是被細(xì)分的固體，其與精細(xì)分開的有效組分成混合物形式。在片劑里，有效組分與具有需要的組分性質(zhì)的載體以適當(dāng)?shù)谋壤旌喜撼伤Ｍ男螤詈痛笮?。粉末和片劑?yōu)選含最多99％的有效組分。適合的固體載體包括例如磷酸鈣、硬脂酸鎂、滑石、蔗糖、乳糖、糊精、淀粉、明膠、纖維素、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、聚乙烯吡咯烷酮、低熔點(diǎn)蠟和離子交換樹脂。
液體載體在制備溶液、懸浮液、乳劑、糖漿、酏劑和加壓成分時(shí)使用。有效組分可以被溶于或懸浮于藥用可接受的液體載體諸如水、有機(jī)溶劑、藥用可接受的油或脂或這兩者的混合物中。液體載體可含有其它適合的藥用可接受的諸如增溶劑、乳化劑、緩沖液、防腐劑、甜味劑、矯味劑、懸浮劑、增稠劑、色素、粘度調(diào)節(jié)劑、穩(wěn)定劑或滲透調(diào)節(jié)劑。用于口服或腸胃外給藥的液體載體適合的例子包括水(部分地含有上述添加劑，例如纖維素衍生物，優(yōu)選羧甲基纖維素鈉)、醇類(包括一羥基醇類和多羥基醇類，例如甘醇)和它們的衍生物、lethicins和油類(例如精餾的椰子油和花生油)。對腸胃外給藥，載體也可以是油酯。諸如油酸乙酯和肉豆蔻異丙酯。對于腸胃外給藥、無菌液體載體以無菌液體形式成分使用。用于加壓的成分的液體載體可以是鹵化的烴或其它藥用可接受的推進(jìn)劑。
是無菌溶液或懸浮液的液體藥用成分可通過肌肉內(nèi)、腹膜內(nèi)或皮下注射使用。無菌溶液也可以靜脈給藥。本發(fā)明的化合物也可以液體或固體成分的形式口服給藥。
本發(fā)明的抗氧化劑可以慣用的栓劑形式從直腸給藥。為了通過從鼻內(nèi)或支氣管內(nèi)用吸入劑或吸入劑給藥，本發(fā)明的抗氧化劑可以被配成水溶液或部分水溶液然后以氣霧劑形式使用。本發(fā)明的化合物也可以使用含有活性化合物和對活性化合物是惰性的對皮膚無毒的并允許經(jīng)皮膚傳送藥劑以系統(tǒng)吸收到血流中的載體的透皮片經(jīng)皮膚給藥。載體可以采用多種形式諸如霜?jiǎng)┖蛙浉鄤?、糊劑、凝膠、和閉合的裝置。霜?jiǎng)┖蛙浉鄤┛梢允撬托突蛴桶偷恼车囊后w或半固態(tài)的乳劑。由分散在含有效組分的石油或親水石油里吸收的粉末組成的糊劑也是適用的。許多閉合裝置可被用于釋放有效組分進(jìn)入血流里，諸如覆蓋含有有效組分含或不含載體的貯器的半透膜，或含有有效組分的基層。其它閉合裝置在文獻(xiàn)里已知。
另外，本發(fā)明的抗氧化劑可以用作溶液、霜或洗液，將其與藥用可接受的賦形劑配伍，活性化合物含量0.1-5％，優(yōu)選2％，用于給感染真菌區(qū)域施藥。
所需的測量根據(jù)使用的特定的成分、給藥途徑、呈現(xiàn)的癥狀的嚴(yán)重性和被處理的特定目標(biāo)而不同?；谠跇?biāo)準(zhǔn)藥理學(xué)測試過程所得的結(jié)果，活性化合物的計(jì)劃每日劑量應(yīng)為0.02μg/kg-500μg/kg。治療通常從小于最佳化合物劑量的小劑量開始。然后增加劑量-直達(dá)到在這些情況下的最佳作用；根據(jù)基于各個(gè)被處理的實(shí)際情況的給藥物理?xiàng)l件確定用于口服、腸胃外、鼻內(nèi)或腹膜內(nèi)給藥的最精確劑量。優(yōu)選藥用化合物是單位劑量形式，例如，片劑或膠囊。在這樣的形式里，成分被再分為含有適當(dāng)量的有效組分的單元?jiǎng)?；單位劑形可以是被包裹的成分，例如被包裹的粉末、藥瓶、安瓿、預(yù)裝的注射器或含液體的sachets。單位劑量形式可以是例如膠囊或片劑本身，或可以是任何這樣的成分的適當(dāng)量的組合形式。
權(quán)利要求
1.一種抑制或處理導(dǎo)致疾病的自由基的方法，通過對需要的哺乳動(dòng)物施用8，9-脫氫雌酮或8，9-脫氫雌酮-3-硫酸酯的藥用可接受鹽抗氧化劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中3-硫酸酯的藥用可接受鹽是堿金屬鹽、堿土金屬鹽、銨鹽、含有1-6個(gè)碳原子的烷基胺鹽或每個(gè)烷基含有1-6個(gè)碳原子的二烷基胺鹽。
3.一種抑制自由基，在需要這種治療的哺乳動(dòng)物體內(nèi)與酶、離子通道、結(jié)構(gòu)蛋白和膜脂質(zhì)反應(yīng)的方法，其包括施用8，9-脫氫雌酮或8，9-脫氫雌酮-3-硫酸酯的藥用可接受鹽作為犧牲底物，以足夠的量選擇反應(yīng)并抑制與所述動(dòng)物的酶、離子通道、結(jié)構(gòu)蛋白和膜脂質(zhì)的自由基反應(yīng)。
4.一種抑制和下列疾病發(fā)展有關(guān)的內(nèi)生的自由基的方法，疾病包括癌癥、中樞神經(jīng)系統(tǒng)紊亂、骨疾、衰老、炎癥、末梢血管疾病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、自身免疫疾病、呼吸窘迫、肺氣腫、預(yù)防消腫損傷、病毒性肝炎、慢性活動(dòng)性肝炎、結(jié)核病、牛皮癬、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、成人呼吸窘迫綜合癥、中樞神經(jīng)系統(tǒng)創(chuàng)傷或發(fā)作，或在消腫過程中的損傷，其方法包括施用8，9-脫氫雌酮或8，9-脫氫雌酮-3-硫酸酯的藥學(xué)上可接受的鹽。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種用8，9-脫氫雌酮或8，9-脫氫雌酮-3-硫酸酯藥學(xué)上可接受的鹽作為抗氧化劑的方法。
文檔編號A61KGK1158725SQ9612334
公開日1997年9月10日 申請日期1996年12月3日 優(yōu)先權(quán)日1995年12月4日
發(fā)明者S·J·阿德爾曼 申請人:美國家用產(chǎn)品公司