專利名稱：神經(jīng)保護(hù)劑的制作方法
在局部缺血、中風(fēng)和腦損傷過程中神經(jīng)元細(xì)胞死亡的機(jī)理被認(rèn)為是谷氨酸誘發(fā)毒性。[Simon RP.Science226850(1984)；Benveniste H，J.Neurochem.431369(1984)]。該機(jī)理也涉及其它神經(jīng)病學(xué)疾病，如早老性癡呆癥、肌萎縮性側(cè)索硬化癥、癲病、亨廷頓舞蹈病和帕金森病。[Beal F，Nature 321168(1986)；Maragos WF，Trends Neurosci.1065(1987)；Gree-namyre JT，Neurobiol.Aging10593(1989)；Koh JY，Brain Res.533315(1990)；Mattson MP，J.Neurosci.12376(1992)；Rothstein，JD，New England J.Med.3261464(1992)；Choi，DW，NewEngland J.Med.326(22)1493-4(1992)]。在正常情況下谷氨酸是作為腦中的興奮性神經(jīng)介質(zhì)。它由突觸前點(diǎn)釋放出，并激活突觸后神經(jīng)元受體。激活的受體可使鈉離子和鈣離子流入細(xì)胞從而產(chǎn)生興奮反應(yīng)。這些興奮性氨基酸的作用是由某些特殊受體亞型介導(dǎo)，其中被深入研究的是N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受體。過度激活NMDA復(fù)合受體會造成病理性的神經(jīng)元過度興奮。在病理情況下，在細(xì)胞間液中積累過量水平的谷氨酸會導(dǎo)致谷氨酸受體的過度興奮。這樣會引起鈉和鈣的大量流入，造成細(xì)胞內(nèi)高水平的鈣含量，從而引發(fā)未知的細(xì)胞死亡過程。
目前研制的谷氨酸受體拮抗劑可防止中風(fēng)或腦損傷后的神經(jīng)元細(xì)胞死亡。[Hirose K，Neurochem.Res.18479(1993)；Dugan LL，Annals of Neurology，35卷增補(bǔ)本S17-19(1994)]大量的研究表明NMDA亞型受體的阻斷可使在模擬多種神經(jīng)病理情況的動物模型中所發(fā)生的神經(jīng)元的損傷和喪失明顯減少。這些觀察充分說明NMDA拮抗劑可在某些臨床情況中提供神經(jīng)保護(hù)。但許多這類藥物僅在損害或損傷后六小時內(nèi)給藥才會有效。這是因為通過電位差引起的鈣通道鈣進(jìn)入細(xì)胞中，因而細(xì)胞內(nèi)的鈣水平也會增高。另外，由于正常的突觸傳導(dǎo)和腦活性需要激活谷氨酸受體，因此，很難采用谷氨酸受體阻斷劑延長治療。這樣就限制了它們在慢性神經(jīng)變性疾病中用作神經(jīng)保護(hù)劑的作用。因此那些可防止細(xì)胞內(nèi)鈣增長后發(fā)生的神經(jīng)細(xì)胞死亡的藥物適用于延長對中風(fēng)和腦損傷的治療以及對神經(jīng)變性疾病的慢性治療。
有幾種假設(shè)來說明細(xì)胞內(nèi)高鈣水平會導(dǎo)致細(xì)胞死亡。其一是假設(shè)激活了與鈣有關(guān)的蛋白酶如鈣蛋白酶。另一種假設(shè)是激活了與神經(jīng)鈣蛋白、鈣/鈣調(diào)節(jié)蛋白有關(guān)的磷酸酶，從而使氮氧化物合酶(NOS)脫磷酸化。NOS的脫磷酸化可產(chǎn)生氮氧化物，它對細(xì)胞有毒。第三種假設(shè)是細(xì)胞內(nèi)較高的鈣水平引起了編程性細(xì)胞死亡或細(xì)胞程序死亡。這些不同的假設(shè)相互并不排斥，似乎這些假設(shè)以及其它未知的情況均由細(xì)胞內(nèi)較高水平的鈣會引起并造成細(xì)胞死亡。
在編程性細(xì)胞死亡中，細(xì)胞分裂所需的基因會被激活，似乎細(xì)胞就要分裂。[Heintz N，Trends-Biochem-Sci.18157(1993)]。許多高度分化的細(xì)胞如神經(jīng)元喪失了分裂能力并在分裂失敗后死去。因此，某些可抑制細(xì)胞分裂的藥物也可用來防止細(xì)胞進(jìn)行編程性細(xì)胞死亡。
本發(fā)明提供一種方法，該方法采用選自下組的化合物用作神經(jīng)保護(hù)劑雷帕霉素、雷帕霉素的苯基三唑啉二酮的1，3-Diels Alder加成物、4-[[4-(二甲氨基)苯基]偶氮]苯磺酸的雷帕霉素42-酯、雷帕霉素的甲基三唑啉二酮的Diels Alder加成物、以及雷帕霉素-氧-芐基-27-肟(共同稱作本發(fā)明的化合物)，該方法包括經(jīng)口服、非胃腸、血管內(nèi)、鼻內(nèi)、支氣管內(nèi)、透皮、或經(jīng)直腸等途徑向所需治療的哺乳動物施用該化合物。本發(fā)明特別提供一種治療哺乳動物所患有的中風(fēng)、腦損傷和神經(jīng)變性疾病如早老性癡呆癥、肌萎縮性側(cè)索硬化癥(ALS)、癲癇、亨廷頓舞蹈病或帕金森病的方法，該方法包括經(jīng)口服、非胃腸、血管內(nèi)、鼻內(nèi)、支氣管內(nèi)、透皮、或經(jīng)直腸等途徑向所需治療的哺乳動物施用有效量的、選自下組的化合物雷帕霉素、雷帕霉素的苯基三唑啉二酮的1，3-DielsAlder加成物、4-[[4-(二甲氨基)苯基]偶氮]苯磺酸的雷帕霉素42-酯、雷帕霉素的甲基三唑啉二酮的Diels Alder加成物以及雷帕霉素-氧-芐基-27-肟。本發(fā)明的化合物也可用于抑制與上述病癥有關(guān)的神經(jīng)細(xì)胞死亡。
本發(fā)明還提供一種方法，該方法是將NMDA和/或AMPA拮抗劑與選自下組的化合物相結(jié)合用作神經(jīng)保護(hù)劑雷帕霉素、雷帕霉素的苯基三唑啉二酮的1，3-Diels Alder加合物、4-[[4-(二甲氨基)苯基]偶氮]苯磺酸的雷帕霉素42-酯、雷帕霉素的甲基三唑啉二酮的Diels Alder加合物、以及雷帕雷素-氧-芐基-27-肟，以及提供治療中風(fēng)、腦損傷和神經(jīng)變性疾病如早老性癡呆癥、肌萎縮性側(cè)索硬化癥(ALS)、癲癇、亨廷頓舞蹈病，或帕金森病的方法。本發(fā)明的化合物也可與NMDA和/或AMPA拮抗劑相結(jié)合用于抑制與上述疾病有關(guān)的神經(jīng)細(xì)胞死亡。
當(dāng)將本發(fā)明的化合物與NMDA和/或AMPA拮抗劑結(jié)合使用時，可將合劑同時施用或者先后施用，次序不限。
優(yōu)選的NMDA拮抗劑包括[2-(8，9-二氧-2，6-二氮雜雙環(huán)[5.2.0]-壬-1(7)-烯-2-基)乙基]膦酸(美國專利5168103已公開，在此作為參考)，D氨基-5-膦?；焖狨?D-AP5)，4-膦酰甲基-2-哌啶羧酸(CGS19755)，D，L-(E)-2-氨基-4-甲基膦?；?3-戊酸(CGP37849)，5，7-二氯犬尿喹啉酸酯、反式-2-羧基-5，7-二氯-4-苯基氨基羰氨基-1，2，3，4-四氫喹啉(L689560)，以及5，7-二硝基喹喔啉-2，3-二酮(MNQX)；優(yōu)選的AMPA拮抗劑包括6-(1H-咪唑-1-基)-7-硝基-2，3(1H，4H)-喹喔啉二酮的鹽酸化物(YM90K)(J.Med.Chem.37647(1994))，鹽酸化1-(4-氨基苯基)-4-甲基-7，8-亞甲基二氧-5H-2，3-苯并二氮雜(GYKI52466)，以及6-硝基-7-氨磺酰苯并(f)喹喔啉-2，3-二酮(NBQX)，6-氰基-7-硝基喹喔啉-2，3-二酮(CNQX)，以及，6，7-二硝基喹喔啉-2，3-二酮(DNQX)。
治療包括對正發(fā)作病癥進(jìn)行治療、對病癥發(fā)展的抑制、對病癥的改善，以及對病癥的緩解。
通過以下模擬哺乳動物神經(jīng)毒性的體外標(biāo)準(zhǔn)藥理試驗來說明本發(fā)明的化合物可用作神經(jīng)保護(hù)劑。
第一步標(biāo)準(zhǔn)藥理試驗說明本發(fā)明的化合物可以抑制由谷氨酸誘發(fā)的毒性造成的神經(jīng)細(xì)胞死亡。簡單地說，是通過對Furshpan和Potter法進(jìn)行了某些改善后的方法來制備鼠的海馬和神經(jīng)皮質(zhì)培養(yǎng)物。[Neuron3199(1989)]。從經(jīng)過注射0.1ml 20％水合氯醛麻醉的Long Evans小狗中取下腦。解剖其海馬，并將其從其余的皮質(zhì)中分離下來。在37℃下經(jīng)輕輕搖動使該兩組織在5ml含有20μ/ml木瓜蛋白酶、1mM L-半胱氨酸和0.5mM EDTA的Earle′s平衡鹽溶液(EBSS)中酶化解離30分鐘。然后用EBSS清洗海馬和神經(jīng)皮質(zhì)組織一次，通過在37℃下用3-5ml抑制劑溶液培養(yǎng)30分鐘停止解離，該抑制劑溶液是含有1mg/ml卵類粘蛋白和1mg/ml白蛋白的EBSS溶液。
將經(jīng)解離的海馬和神經(jīng)皮質(zhì)組織用含有4.5g/L右旋葡萄糖而不含L-谷氨酰胺的DME清洗兩次，然后用2ml添加有5％胎牛血清、5％鼠血清、50μ/ml青霉素、0.05mg/ml鏈霉素和MITO+血清增量劑[由Collaborative Biomedical Products出品的一種培養(yǎng)基添加劑](10％DME)的DME研磨。經(jīng)50次研磨，使未解離的組織沉降，分離出解離細(xì)胞的懸浮液。將2ml新鮮的10％DME加入剩余的組織中并繼續(xù)研磨。將兩分細(xì)胞懸浮液混合，并用血細(xì)胞計數(shù)器測定細(xì)胞濃度。
96孔板的每一孔中加有150μL的30000個海馬細(xì)胞，并在37℃、5％CO2條件下培養(yǎng)。將神經(jīng)皮質(zhì)細(xì)胞置于24孔板中，濃度為每孔500000個細(xì)胞。當(dāng)神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞融聚時(約3天后)，在每孔中加入4-10μM胞嘧啶β-D-阿拉伯呋喃糖苷以防止細(xì)胞進(jìn)一步增生。靜置一周后，除去培養(yǎng)基，并換成添加有2.5％胎牛血清、2.5％鼠血清、50μ/ml青霉素、0.05mg/ml鏈霉素和MITO+1mM犬尿喹啉酸酯和10mM MgCl2(5％DME+KM)的DME補(bǔ)充劑。犬尿喹啉酸酯是非特異的谷氨酸受體的阻斷劑，鎂水平的增高可阻斷NMDA受體通道中鈣和鈉的流入。加入KM可防止由血清中的谷氨酸產(chǎn)生的神經(jīng)毒性，并使神經(jīng)元在培養(yǎng)過程中保持幾個月不變。細(xì)胞需經(jīng)每周加液，即除去一半培養(yǎng)基，更換新鮮的5％DME+KM。
將被測化合物溶于DMSO中制成10mM原液，并分成等份在-80°下保藏。在每一試驗步驟實施前，需將各等份的原液解凍，并在DME中或者Hank′s平衡鹽溶液(HBSS)中稀釋，以達(dá)到1nM至10μM的被測濃度，Hank′s平衡鹽溶液(HBSS)中含有44mM碳酸氫鈉、10mM葡萄糖，以及30μM谷氨酸。
經(jīng)4-12周培養(yǎng)后，將海馬細(xì)胞清洗三次，并加入溶于HBSS的被測化合物，或者加入不含DME(SF DME)的血清以及30-150μM的谷氨酸。在每一試驗步驟中，每種不同藥物濃度處理至少三孔的細(xì)胞。30μM谷氨酸可殺死初期培養(yǎng)物中70-80％的神經(jīng)元，并可殺死后期培養(yǎng)物中更多的神經(jīng)元。由30M谷氨酸誘發(fā)的毒性可被1mM犬尿喹啉酸酯+10mM MgCl2(KM)阻斷。
經(jīng)37℃下培養(yǎng)過夜，測定每孔中以下5個區(qū)域中存活的海馬神經(jīng)元的數(shù)目北、南、東和西端及中央部份。采用15x的目鏡，通過10x物鏡對每一區(qū)域進(jìn)行目測，并且所測定的每個區(qū)域約為1.54mm2。每種情況一般重復(fù)三次。計算每一情況下每孔中神經(jīng)元的平均數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)誤差。在作對比的30μM谷氨酸條件下仍存活的神經(jīng)元平均數(shù)表示其對谷氨酸毒性不敏感。
下表所示的是由實施例1的化合物所得的結(jié)果。化合物濃度存活的神經(jīng)元數(shù) S.D.實施例1 10nM 1145實施例1 100nM 92 38實施例1 1μM46 10實施例1 10μM 47 20SF DME284犬尿喹啉酸酯 1mM 82 17下表所示的是采用本發(fā)明的化合物所得的試驗結(jié)果?；衔餄舛? 存活的神經(jīng)元數(shù) S.D.實施例1 200nM 229 30實施例1 20nM 713實施例12nM 634實施例2 200nM 127 38實施例2 20nM 180 64實施例22nM 110 36實施例3 200nM 241 46實施例3 20nM 285 40實施例32nM 98 21實施例4 200nM 157 56實施例4 20nM 130 29實施例42nM 117 32實施例5 200nM 135 11實施例5 20nM 96 12實施例52nM 131 19犬尿喹啉酸酯 1mM 202 40HBSS 53 25該標(biāo)準(zhǔn)藥物試驗的結(jié)果表明本發(fā)明的化合物可抑制谷氨酸誘發(fā)的毒性，因此可用作神經(jīng)保護(hù)劑。如第一個表所示，證明實施例1的化合物在低濃度(10nM和100nM)時比實施例1的化合物在高濃度(1μM和10μM)時的效果好，可能是由于實施例1的化合物在該高濃度下會產(chǎn)生某種程度的細(xì)胞毒作用。評估結(jié)果表明，在模擬哺孔動物神經(jīng)毒性時，濃度范圍在2-200nM的本發(fā)明的化合物對谷氨酸誘發(fā)的毒性具有神經(jīng)保護(hù)活性。該化合物在谷氨酸濃度較高(75μM)時不能防止神經(jīng)元細(xì)胞死亡。對于對谷氨酸毒性更為敏感的后期海馬培養(yǎng)物(大于8周)中谷氨酸誘發(fā)的毒性，本發(fā)明化合物用作神經(jīng)保護(hù)劑的效果減弱。
第二步體外標(biāo)準(zhǔn)藥理試驗表明，本發(fā)明的化合物可以增強(qiáng)已知的NMDA和AMPA抑制劑的神經(jīng)保護(hù)作用。簡單地說，按如前所述的方法將神經(jīng)皮質(zhì)培養(yǎng)物在24孔板中培養(yǎng)8周。將神經(jīng)皮質(zhì)細(xì)胞用不含葡萄糖的DME清洗6次(該DEM是經(jīng)向介質(zhì)中鼓入95％N2/5％CO2脫氧至少10分鐘制成的)以誘發(fā)局部缺血從而造成神經(jīng)細(xì)胞死亡，可通過測定乳酸脫氫酶的水平，因為每孔中LDH活性量與死細(xì)胞數(shù)直接相關(guān)。在特定孔中分別加入100μM[2-(8，9-二氧-2，6-二氮雜雙環(huán)[5.2.0]壬-1(7)-烯-2-基)乙基]膦酸(美國專利5168103已公開，在此作為參考)和10μM YM90K以阻斷NMDA和AMPA谷氨酸受體。在待測孔中加入1μM實施例1的化合物。用含有葡萄糖和100μM[2-(8，9-二氧-2，6-二氮雜雙環(huán)[5.2.0.]壬-1(7)-烯-2-基)乙基]膦酸的普通DME清洗作對比的孔。在發(fā)生局部缺血后的不同時刻分別從每孔中取5μL試樣，并通過向每一試樣中國入250μmL的2mg NADH/25mL磷酸鹽緩沖劑來測定試樣中的LDH活性。經(jīng)20-30分鐘培養(yǎng)后，加入10μL 22.7mM丙酮酸鹽，在340nm讀取光密度(OD)。光密度隨時間的變量(mOD/min)所反映的就是試樣中LDH的量。較高的光密度變量意味著較多的LDH活性，即表示較多的細(xì)胞死亡。每種情況下從4-8孔中取樣，并測定每一情況下的平均值和標(biāo)準(zhǔn)誤差。所得的結(jié)果如下表所示。
經(jīng)模擬局部缺血神經(jīng)毒性的標(biāo)準(zhǔn)試驗步驟測試本發(fā)明的化合物，所采用的神經(jīng)皮質(zhì)培養(yǎng)物不包括經(jīng)1周培養(yǎng)后的，因其對局部缺血引起的神經(jīng)毒性不敏感。按如前所述的方法將被測化合物與NMDA和AMPA抑制劑一同施用。同時還測試環(huán)孢菌素以作為對照。時間(小時) LDH活性標(biāo)準(zhǔn)誤差對照組8 0.300.5413 1.371.5824 2.972.6730 4.442.50局部缺血8 0.490.3613 6.171.1024 16.404.2930 21.493.35實施例18 1.040.2013 3.080.7124 9.001.6430 14.022.4實施例28 1.080.3413 2.311.4124 7.693.1330 12.433.85實施例38 0.840.2013 2.361.4124 7.033.2430 11.252.62實施例48 0.910.3413 2.541.0224 8.214.1430 13.313.41實施例58 0.740.3813 1.650.8124 4.821.4230 8.832.41環(huán)孢菌素8 1.540.6313 3.311.3724 8.451.9430 13.592.34
該標(biāo)準(zhǔn)藥物試驗步驟的結(jié)果表明本發(fā)明的化合物可以增強(qiáng)NMDA和AMPA抑制劑抑制局部缺血誘發(fā)的神經(jīng)毒性的神經(jīng)保護(hù)作用。
本發(fā)明的化合物可單獨(dú)地或與可藥用的載體制成哺乳動物所需的制劑。該藥物載體可為固體或液體。制備口服制劑時，發(fā)現(xiàn)采用0.01％溶于PHOSAL PG-50(含1，2-丙二醇的濃縮磷脂，A.Nattermann&Cie.GmbH)的Tween 80可得到適宜的口服制劑。
固體載體可包括一種或多種物質(zhì)，它們也可用作調(diào)味劑、潤滑劑、增溶劑、懸浮劑、填充劑、助流劑、壓縮助劑、結(jié)合劑或片劑崩解劑；它也可以是膠囊包封材料。制備粉劑時，載體被分成粉狀固體，并與分成粉狀的活性成分混合。制備片劑時，按照適宜的比例將活性成分與具有所需壓縮特性的載體相混合，壓制成所需的形狀和大小。該粉劑和片劑優(yōu)選含有99％的活性成分。適用的固體載體包括，例如，磷酸鈣、硬脂酸鎂、滑石粉、糖、乳糖、葡萄糖、淀粉、明膠、纖維素、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、聚乙烯吡咯烷酮、低熔點(diǎn)蠟和離子交換樹脂。
液體載體用于制備溶液劑、混懸劑、乳劑、糖漿劑、酏劑和加壓組合物?；钚猿煞挚扇芙饣驊腋∮诳伤幱玫囊后w載體中，如水、有機(jī)溶劑、兩者的混合物或者可藥用的油或脂肪。液體載體中可含有其它可藥用的添加劑，如增溶劑、乳化劑、緩沖劑、防腐劑、甜味劑、調(diào)味劑、懸浮劑、增稠劑、著色劑、粘度調(diào)節(jié)劑、穩(wěn)定劑或滲透壓調(diào)節(jié)劑。適于口服或非胃腸施用的液體載體的實例包括水(可含有部分上述的添加劑，例如纖維素衍生物，優(yōu)選羧甲基纖維素鈉溶液)、醇(包括一元醇和多元醇，例如二醇類)及其衍生物、lethicins、和油(例如分餾椰子油和花生油)。用于非胃腸給藥時，載體可為油性酯類如油酸乙酯和十四烷酸異丙酯。無菌液體載體可用于經(jīng)非胃腸給藥的無菌液體組合物中。用于加壓組合物的液體載體可以是鹵代烴或其它可藥用的助推劑。
液體藥物組合物，即無菌溶液或混懸液可經(jīng)例如肌內(nèi)、腹膜內(nèi)或皮下注射途徑施用。無菌溶液也可經(jīng)靜脈內(nèi)給藥。本發(fā)明的化合物也可以液體或固體組合物形式經(jīng)口服給藥。
本發(fā)明的組合物也可以常規(guī)栓劑的形式經(jīng)直腸給藥。當(dāng)經(jīng)鼻內(nèi)或支氣管內(nèi)吸入或吹入給藥時，可將雷帕霉素制成含水或部分含水的溶液，使其可以氣霧劑形式施用。本發(fā)明的化合物也可經(jīng)透皮給藥，所采用的透皮貼劑對皮膚無毒，它含有活性化合物和對該活性化合物無毒的載體，并且它可以使藥物經(jīng)皮膚傳入而被血流系統(tǒng)吸收。所采用的載體可以是多種形式，如膏霜、軟膏、糊劑、凝膠，以及夾層裝置。膏霜和軟膏可以是水包油或油包水型的粘稠液體或者半固體的乳化體。由分散于石油或親水石油中、并含有活性成分的吸收性粉末構(gòu)成的糊劑也適用。可采用多種夾層裝置以使活性成分釋放入血液中，該夾層裝置如被含活性成分且含或不含載體的儲層覆蓋的半透膜，或者含有活性成分的基層。其它夾層裝置也是文獻(xiàn)中已知的。
所需劑量根據(jù)所使用的特定組合物、給藥途徑、癥狀表現(xiàn)的嚴(yán)重程度和所治療的特定對象而有所不同。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)藥理試驗步驟所得的結(jié)果，活性成分的靜脈內(nèi)每日具體劑量為0.1μg/kg-100mg/kg，優(yōu)選0.001-25mg/kg，更優(yōu)選0.01-5mg/kg?？诜咳站唧w劑量為0.005-50mg/kg，優(yōu)選0.01-25mg/kg，更優(yōu)選0.05-10mg/kg。開始治療時，一般采用低于最佳劑量的小劑量的化合物。然后劑量逐漸增加，直到達(dá)到在該情況下所能達(dá)到的最佳效果?？诜?、非胃腸、鼻內(nèi)或支氣管內(nèi)給藥的確切劑量由給藥醫(yī)師根據(jù)對所治療的特定對象的經(jīng)驗而確定。藥物組合物優(yōu)選為單位劑型，例如片劑或膠囊。這種劑型中，組合物被再分為含有適量活性成分的單位劑量；單位劑型可以是小包裝的組合物，例如小包裝的粉劑、小瓶、安瓿、預(yù)充液注射器或含液扁囊。單位劑型可以是例如膠囊或片劑本身，或者也可以是適量的該小包裝形式的組合物。
通過以下實施例說明本發(fā)明化合物的制備。
實施例1雷帕霉素在美國專利3929992中描述了雷帕霉素的制備，在此作為參考。
實施例2雷帕霉素的苯基三唑啉二酮的1，3Diels Alder加成物將雷帕霉素(0.66g，721mmol)溶于二氯甲烷(10ml)中，并冷卻至0℃。向其中滴加溶于二氯甲烷(10ml)的苯基三唑啉二酮(0.133g，758mmol)。將該溶液攪拌過夜，TLC顯示反應(yīng)未完成。再加入苯基三唑啉二酮(0.025g，27mmol)。該反應(yīng)采用乙酸乙酯作洗脫劑，經(jīng)HPLC(4.1×31cm，SiO2)純化得到固體的標(biāo)題化合物。將該固體用30ml己烷和1ml乙酸乙酯研磨過濾，風(fēng)干得到粉狀的標(biāo)題化合物(0.383g)。C59H84N4O15的分析計算值C，65.05；H，7.77；N，5.14。實測值C，65.39；H，7.98；N，4.92IR(KBr，cm-1)3450，1715NMR(DMSO)δ7.50(m，3H)，7.40(m，2H)，3.11(s，3H)，3.00(s，3H)2.95(s，3H)，0.8(q，1H)MS(-FAB)1088(M-)實施例34-[[4-(二甲氨基)苯基]偶氮]苯磺酸的雷帕霉素42-酯在美國專利5177203中公開了實施例3的化合物的制備，在此作為參考。
實施例4雷帕霉素的甲基三唑啉二酮1，3-Diels Alder加合物按實施例2所述的方法制備標(biāo)題化合物。
實施例5雷帕霉素-O-芐基-27-肟在美國專利5023265中公開了實施例5的化合物的制備，在此作為參考。
權(quán)利要求
1.一種抑制需治療的哺乳動物的神經(jīng)元細(xì)胞死亡的方法，它包括經(jīng)口服、非胃腸、血管內(nèi)、鼻內(nèi)、支氣管內(nèi)、透皮或經(jīng)直腸途徑向所述哺乳動物施用有效量的選自下組的化合物雷帕霉素、雷帕霉素的苯基三唑啉二酮的1，3-Diels Alder加合物、4-[[4-(二甲氨基)苯基]偶氮]苯磺酸的雷帕霉素42-酯、雷帕霉素的甲基三唑啉二酮的1，3-DielsAlder加合物，以及雷帕霉素-O-芐基-27-肟。
2.權(quán)利要求1的方法，其中的化合物是雷帕霉素。
3.一種治療哺乳動物所患有的中風(fēng)、腦損傷、或神經(jīng)變性疾病的方法，它包括經(jīng)口服、非胃腸、血管內(nèi)、鼻內(nèi)、支氣管內(nèi)、透皮或經(jīng)直腸途徑向所述哺乳動物施用有效量的選自下組的化合物雷帕霉素、雷帕霉素的苯基三唑啉二酮的1，3-Diels Alder加合物、4-[[4-(二甲氨基)苯基]偶氮]苯磺酸的雷帕霉素42-酯、雷帕霉素的甲基三唑啉二酮的1，3-Diels Alder合物，以及雷帕霉素-氧-芐基-27-肟。
4.權(quán)利要求3的方法，其中的化合物是雷帕霉素。
5.權(quán)利要求3的方法，其中的神經(jīng)變性疾病是選自下組的疾病早老性癡呆癥、肌萎縮性側(cè)索硬化癥(ALS)、癲癇、亨廷頓舞蹈病，和帕金森病。
6.權(quán)利要求5的方法，其中的化合物是雷帕霉素。
7.一種采用選自下組的化合物作為神經(jīng)保護(hù)劑的方法雷帕霉素、雷帕霉素的苯基三唑啉二酮的1，3-Diels Alder加合物、4-[[4-(二甲氨基)苯基]偶氮]苯磺酸的雷帕霉素42-酯、雷帕霉素的甲基三唑啉二酮的Diels Alder加合物，以及雷帕霉素-O-芐基-27-肟，該方法包括經(jīng)口服、非胃腸、血管內(nèi)、鼻內(nèi)、支氣管內(nèi)、透皮，或經(jīng)直腸途徑向所需治療的哺乳動物施用有效量的該化合物。
8.權(quán)利要求7的方法，其中的化合物是雷帕霉素。
9.權(quán)利要求1的方法，它還包括將化合物與NMDA或AMPA拮抗劑結(jié)合施用。
10.權(quán)利要求1的方法，它還包括將化合物與NMDA和AMPA拮抗劑共同結(jié)合施用。
11.權(quán)利要求3的方法，它還包括將化合物與NMDA或AMPA拮抗劑結(jié)合施用。
12.權(quán)利要求3的方法，它還包括將化合物與NMDA或AMPA拮抗劑結(jié)合施用。
13.權(quán)利要求7的方法，它還包括將化合物與NMDA或AMPA拮抗劑結(jié)合施用。
14.權(quán)利要求7的方法，它還包括將化合物與NMDA或AMPA拮抗劑共同結(jié)合施用。
全文摘要
本發(fā)明提供一種方法，該方法采用選自下組的化合物作為神經(jīng)保護(hù)劑；雷帕霉素、雷帕霉素的苯基三唑啉二酮的1，3-Diels Alder加合物、4-[[4-(二甲氨基)苯基]偶氮]苯磺酸的雷帕霉素42-酯、雷帕霉素的甲基三唑啉二酮的Diels Alder加合物，或雷帕霉素-O-芐基-27-肟。
文檔編號A61P25/14GK1159915SQ96123098
公開日1997年9月24日 申請日期1996年12月6日 優(yōu)先權(quán)日1995年12月7日
發(fā)明者S·S·-H·林, K·L·莫爾納-金伯 申請人:美國家用產(chǎn)品公司