專利名稱：新的膦酰基羧酸的磷脂衍生物、其生產(chǎn)方法及其作為抗病毒藥物的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及通式Ⅰ的新的膦?；人岬闹苌锛捌漉ィ浠プ儺悩?gòu)體，其生理可耐受的無機(jī)或有機(jī)堿的鹽，以及其生產(chǎn)方法和含這些化合物的藥物，
其中R1是有9-13個(gè)碳原子的直鏈或支鏈、飽和或不飽和的烷基鏈，R2可以是含有8-12個(gè)碳原子的直鏈或支鏈、飽和或不飽和的烷基鏈，R3表示含有1-6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基鏈，優(yōu)選甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、叔丁基、戊基、己基、新戊基、叔己基(thexyl)或苯基、膽堿、乙醇胺、肉堿、C5-C7-環(huán)烷基、芐基或下列基團(tuán)之一
n是0、1或2，m表示0、1、2或3。
由于通式Ⅰ的化合物含有不對(duì)稱碳原子，這些化合物的所有光學(xué)活性形式及外消旋混合物也是本發(fā)明的主題。
式Ⅰ化合物在下文還包括鹽、互變異構(gòu)體、酯、光學(xué)活性形式及外消旋混合物。
惡性腫瘤(癌、肉瘤、血液瘤)、炎癥性疾病或自身免疫性疾病以及由病毒或反轉(zhuǎn)錄病毒引起的疾病如AIDS、ARC(AIDS相關(guān)的復(fù)合物)、巨細(xì)胞病毒(cytomegaly)感染、皰疹感染或肝炎的治療除所用治療物質(zhì)的效力不足外，也常常會(huì)伴有極端的副作用。這種效果可以解釋為所用藥理學(xué)活性物質(zhì)的體內(nèi)選擇性不夠以及治療范圍有限。藥理學(xué)活性物質(zhì)的有利的體外藥理學(xué)特性在體內(nèi)條件下常常不會(huì)出現(xiàn)。
因此，數(shù)年來，一直試圖通過修飾藥理學(xué)活性物質(zhì)的化學(xué)結(jié)構(gòu)來提供就其治療范圍而言其特性有所改善的新物質(zhì)。此外，給藥的新藥物形式常常隨將活性物質(zhì)具體運(yùn)送到其作用位點(diǎn)的目的而發(fā)展，作用位點(diǎn)是藥物將發(fā)揮其治療作用的位點(diǎn)。在這種情況下，特別需要避免與健康細(xì)胞之間產(chǎn)生不利的相互作用。一種改善治療范圍的可能性是改變基本活性物質(zhì)的物理特性，這樣例如通過產(chǎn)生酸或堿加成鹽或通過制備藥理學(xué)安全的酯(例如脂肪酸酯；J.Pharm.Sci.79,531(1990))，可以對(duì)藥理學(xué)活性物質(zhì)稍加修飾以改善活性物質(zhì)的溶解度或耐受性。通常將這些稍加化學(xué)修飾的化合物稱為“前藥”，因?yàn)樗鼈兣c體液接觸后或在肝(第一輪代謝)中幾乎立即轉(zhuǎn)變成治療活性劑。本發(fā)明包括所述前藥。
為了提高催化穩(wěn)定性，已將核苷如ara-C和ara-A與磷脂進(jìn)行了化學(xué)相連。與未修飾的核苷相比，相應(yīng)的衍生物在體內(nèi)有較低的毒性和較高的穩(wěn)定性。但是吸收和細(xì)胞滲透幾乎未受影響。[J.Med.Chem.32,367(1989),Cancer Res.37,1640(1977)and 41,2707(1981)]。從下列參考文獻(xiàn)中可以了解核苷的其他磷脂衍生物在J.Biol.Chem.265,6112(1990)中描述了作為抗病毒藥物的脂類核苷酸的生產(chǎn)和用途。但是，在這種情況下，只研究并合成了與已知的核苷如AZT和ddC以脂肪酸酯的結(jié)構(gòu)結(jié)合的二肉豆蔻酰磷脂酰和二棕櫚酰磷脂酰殘基。
在J.Med.Chem.33,1380(1990)中描述了硫醚脂與胞苷二磷酸的核苷結(jié)合物，它們有抗腫瘤作用并可將其用于腫瘤學(xué)。
在Chem.Pharm.Bull.36,209(1988)中，描述了具有抗白血病活性的5’-(3-SN-磷脂酰)-核苷以及在轉(zhuǎn)移酶活性的磷脂酶D的存在下，從適宜的核苷和磷酸膽堿合成它們的酶促合成法。
在Tetrahedron Lett.28,199(1987)和Chem.Pharm.Bull.36,5020(1988)中描述了脂類核苷酸的酶促合成。
WO 94/13324描述了用1-O-烷基-、1-O-酰基-、1-S-?；?和1-S-烷基-sn-甘油基-3-磷酸酯作為脂類載體的口服有效的活性物質(zhì)。
申請(qǐng)EP 418814和J.Med.Chem.34,1912(1991)描述了類異戊二烯氧膦基甲酸酯作為角鯊烯合成酶抑制劑。
在Biochem.Biophys.Res.Commun.171,458(1990)中，描述了抗反轉(zhuǎn)錄病毒Foscarnet與棕櫚酰膦酰基甲酸酯的脂結(jié)合物，并在J.Med.Chem.20,660(1977)中說明了(己基氧基)-羥基氧膦基乙酸的抗HIV活性。
總之，發(fā)現(xiàn)將治療藥物的濃縮物轉(zhuǎn)運(yùn)到各靶器官或靶細(xì)胞的有效方法是非常有利的，在AIDS的情況下，是將藥物運(yùn)送到被認(rèn)為是病毒復(fù)制的主要部位的免疫系統(tǒng)和淋巴系統(tǒng)的細(xì)胞內(nèi)。
PFA(膦?；姿?和PAA(膦?；宜?對(duì)HSV1和2、流感病毒、HBV、VZV、EBV以及反轉(zhuǎn)錄病毒感染有良好的抗病毒活性。
在特定的情況下，PFA/PAA及其衍生物可以有效地替換核苷/作為核苷的有效補(bǔ)充，因?yàn)樗鼈円种茝V譜DNA和RNA聚合酶并以足夠選擇性抑制反轉(zhuǎn)錄病毒的RT。
PFA和PAA本身是有毒性的，因?yàn)樗鼈兣c焦磷酸酯相似，可以在骨中積累。
本發(fā)明化合物還具有有價(jià)值的藥理學(xué)特性。它們特別適用于治療和預(yù)防由DNA病毒如單純性皰疹病毒、人皰疹病毒、細(xì)胞肥大病毒、乳多泡病毒、水痘帶狀皰疹病毒、肝炎病毒或EB病毒、流感病毒或RNA病毒如Toga病毒或特別是反轉(zhuǎn)錄病毒如oncoviruses HTLV-Ⅰ和Ⅱ以及l(fā)etiviruses visna和人免疫缺陷型病毒HIV-1和2引起的感染。
式Ⅰ化合物似乎特別適用于治療人反轉(zhuǎn)錄病毒HIV感染的臨床癥狀如持久性泛化的淋巴結(jié)病(PGL)、AIDS相關(guān)并發(fā)癥(ARC)的前期和AIDS的完全臨床像以及相關(guān)的CMV和HSV感染。
在J.Infect.Dis.172,225(1995)中描述了Foscarnet(膦酰基甲酸三鈉鹽/PFA)在患CMV視網(wǎng)膜炎的HIV患者中的抗病毒/抗反轉(zhuǎn)錄病毒作用。
Antiviral Res.26,1(1995)中描述了在鼠CMV中的抗病毒作用。
此外，在JAMA 273，1457(1995)中描述了將PFA用于治療CMV視網(wǎng)膜炎。
在J.Med.Chem.37,2216(1994)中描述了抑制HIV-1復(fù)制的PFA-和PAA-2’,3’-二脫氧-3’-硫雜胞苷結(jié)合物，在J.Pharm.Sci.83,1269(1994)中描述了Foscarnet的酰氧基烷基酯。
但美國申請(qǐng)5194654和PCT申請(qǐng)WO 94/13682也是非常重要的參考文獻(xiàn)。其中公開了膦?；人岬闹愌苌锛捌湓谥|(zhì)體中的應(yīng)用，其中，膦?；人岬闹愌苌镄纬闪颂貏e穩(wěn)定的脂質(zhì)體復(fù)合物。盡管權(quán)利要求的范圍很寬，但實(shí)際上1-O-烷基-sn-甘油基-3-膦?；人崾窃撋暾?qǐng)的核心，該物質(zhì)可很好地?fù)饺氲街|(zhì)體的脂類雙層中。所要求的烷基可包括2-24個(gè)碳原子。
但是僅記載了1-O-十八烷基-sn-甘油基-3-膦酰基甲酸酯(十八烷基-膦?；姿狨?的實(shí)施例并給出了其抗病毒作用的數(shù)據(jù)。在所完成的研究和生產(chǎn)中證實(shí)該化合物是不穩(wěn)定的。與所述專利申請(qǐng)相反，該化合物是以純物質(zhì)的溶液/懸浮液而非脂質(zhì)體的形式使用。
在同樣的條件下，本發(fā)明的式Ⅰ化合物是穩(wěn)定的并具有明顯的體外和體內(nèi)(小鼠中的MCMV模型)優(yōu)點(diǎn)。經(jīng)口給藥時(shí)，羧酸酯是特別穩(wěn)定的，而且比相應(yīng)的游離羧酸有更好的生物利用度。
就所用的飽和烷基的鏈長度而言，令人驚奇地發(fā)現(xiàn)結(jié)構(gòu)與作用之間有密切的關(guān)系。只有當(dāng)使用鏈長為10-13個(gè)碳原子的兩個(gè)烷基時(shí)，才具有最佳效果。
因此，與WO 94/13682和US 5194654相比，本申請(qǐng)中所要求的化合物代表了一種意想不到的改進(jìn)，盡管這些申請(qǐng)包含了這些化合物，但它們并不是本申請(qǐng)的核心，而且并未明確提到這些化合物或其名稱，因此，它們的用途也就不是顯而易見的。
式Ⅰ化合物是新的。除穩(wěn)定性(以物質(zhì)和溶液形式)改善外，所要求的化合物與已知脂類衍生物相比有更好的作用。
令人驚奇的是，與游離的藥理學(xué)活性物質(zhì)或未修飾的物質(zhì)相比，式Ⅰ的藥物活性物質(zhì)有更寬的治療范圍。此外，提高了它們?cè)隗w內(nèi)的滯留時(shí)間、改善了通常認(rèn)為是重要因素的藥理學(xué)活性物質(zhì)的生物利用度或膜通透性(如血-腦屏障、細(xì)胞膜等)。因此式Ⅰ化合物可作為藥理學(xué)活性物質(zhì)的載體系統(tǒng)(載體)。就其功能而言，可將式Ⅰ的結(jié)合物稱為細(xì)胞內(nèi)藥物儲(chǔ)備、藥物靶向和藥物傳遞系統(tǒng)。它們能夠使藥理學(xué)活性物質(zhì)在經(jīng)口給藥后在細(xì)胞內(nèi)釋放出來，有利的是這種釋放不會(huì)意想不到地發(fā)生在體細(xì)胞、器官或組織中，而是特異性地發(fā)生于含特定酶的那些細(xì)胞中。但是，特別意想不到的是裂解不是發(fā)生在通過體液如血液、血清或淋巴液或通過肝運(yùn)輸?shù)孜锏倪^程中，而是發(fā)生在相應(yīng)的靶細(xì)胞上或靶細(xì)胞中。這樣可以避免通過腎排泄膦?；人峄蛟诟沃辛呀饨Y(jié)合物，以便可將大部分活性物質(zhì)運(yùn)輸?shù)较鄳?yīng)的靶細(xì)胞內(nèi)。如上所述，所述細(xì)胞主要是生理學(xué)或病理學(xué)激活的細(xì)胞，所述細(xì)胞是藥理學(xué)活性物質(zhì)施用的靶目標(biāo)，如血白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和免疫淋巴系統(tǒng)的其他細(xì)胞種群。具體地說，它們是在相應(yīng)疾病過程中有病理學(xué)或癥狀作用的激活的細(xì)胞(如巨噬細(xì)胞、粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、白細(xì)胞、紅細(xì)胞、單核細(xì)胞等)。此外，它們也是受病毒、細(xì)菌、真菌或其他微生物感染的細(xì)胞。
令人驚奇的是，還發(fā)現(xiàn)當(dāng)將所述物質(zhì)與很特異性的類脂樣載體分子結(jié)合時(shí)，藥理學(xué)活性膦?；人岷推漉サ闹委煼秶@著增大。用該方法制備的結(jié)合物可作為一種新的活性物質(zhì)用于給藥藥物形式的生產(chǎn)。總的來說，結(jié)合會(huì)提高藥物活性膦?；人岬捏w內(nèi)效果，因?yàn)橥ㄟ^所得藥物運(yùn)輸系統(tǒng)將藥理學(xué)活性物質(zhì)定位于靶細(xì)胞內(nèi)，因此藥理學(xué)活性物質(zhì)的效力和耐受力得以提高。這意味著，一方面可以減少待施用的藥理學(xué)活性膦?；人岬牧浚蛄硪环矫嬉韵嗤挠行Я考纯墒顾幚韺W(xué)作用增強(qiáng)。
通過結(jié)合物的酶促水解而從結(jié)合物中釋放藥理學(xué)活性膦酰基羧酸。
式Ⅰ的結(jié)合物與未結(jié)合的藥理學(xué)活性膦酰基羧酸和其酯相比有顯著的優(yōu)點(diǎn)。與藥理學(xué)活性物質(zhì)共價(jià)結(jié)合的特異性載體提高了很難再吸收的藥理學(xué)活性物質(zhì)的生物利用度，潛在毒性活性分子的耐受性，迅速清除的或代謝的藥物的滯留時(shí)間以及膜通透性差(如血-腦，細(xì)胞等)的化合物的膜穿透能力。
在體內(nèi)脂類部分的酶促裂解通常不發(fā)生于血清中，而只在細(xì)胞內(nèi)。此外，具有其卵磷脂樣結(jié)構(gòu)的載體部分(對(duì)于所要求的效果是必需的)提高了生理學(xué)活性物質(zhì)的穿透能力或膜通透性，并有積存效果。另外，認(rèn)為脂類結(jié)合物的胃腸耐受性比純生理學(xué)活性膦?；人岬母谩Ｖ惤Y(jié)合物在吸收過程中通過膜結(jié)合的穿透能力更好，因此，能更好地克服吸收障礙。這對(duì)于穿透如血-腦屏障也適用。
另外，由于結(jié)合物與原生質(zhì)和組織蛋白質(zhì)能夠更好地結(jié)合，從而改善了體內(nèi)分布。結(jié)合物主要通過正常的生物轉(zhuǎn)化反應(yīng)從硫醚(n=0)氧化成亞砜(n=1)，但由于亞砜和硫醚相比，其作用是等效的，因此，這種轉(zhuǎn)化并不是一種缺點(diǎn)。藥理學(xué)活性膦酰基羧酸從結(jié)合物中的緩慢釋放可以使活性物質(zhì)保持低水平，即在較長的時(shí)間內(nèi)保持穩(wěn)定，由此提高了效力和/或避免了毒副作用。以單磷酸酯形式釋放的藥理學(xué)活性物質(zhì)由于其高親水性而不再能穿透細(xì)胞。
總體來說，藥理學(xué)活性物質(zhì)的細(xì)胞和器官半衰期通過結(jié)合作用得以大大延長，主要是由于延長了結(jié)合物在生物體內(nèi)的滯留時(shí)間。由于在血清和各種器官中沒有裂解活性，因此，幾乎未觀察到或僅觀察到很輕微的骨髓和器官毒性。特別有利的是式Ⅰ的結(jié)合物可特異性地在各種注靶器官、組織或細(xì)胞中積累。
可將式Ⅰ化合物作為活性成分用于生產(chǎn)治療各種疾病的藥物，所述疾病需要在細(xì)胞、器官或組織中保持高水平的藥理學(xué)活性物質(zhì)。代表“藥物-儲(chǔ)備-傳遞-靶向”的該系統(tǒng)的一個(gè)必需條件是對(duì)所進(jìn)行的治療作出反應(yīng)的細(xì)胞要含有裂解酶以便活性物質(zhì)第一步結(jié)合，隨后在活性物質(zhì)被裂解形成生理活性膦?；人岬倪^程中將活性物質(zhì)通過細(xì)胞膜運(yùn)輸?shù)郊?xì)胞內(nèi)，活性物質(zhì)的裂解或者基本上與跨細(xì)胞膜運(yùn)輸同時(shí)發(fā)生或此后部分地在細(xì)胞內(nèi)。細(xì)胞內(nèi)裂解主要是發(fā)生在其中裂解酶也位于細(xì)胞內(nèi)的情況下。
適宜的靶細(xì)胞是例如免疫淋巴系統(tǒng)的細(xì)胞(如血白細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞)或感染的細(xì)胞。
令人驚奇的是，發(fā)現(xiàn)式Ⅰ的化合物還在病毒特異性的DNA或RNA轉(zhuǎn)錄水平抑制DNA或RNA的復(fù)制。該物質(zhì)可通過抑制反轉(zhuǎn)錄酶來影響反轉(zhuǎn)錄病毒的繁殖(參見Proc.Natl.Acad.Sci.USA 83,1911,1986,and Natrue 325,773,1987)。對(duì)HIV(免疫缺陷型疾病AIDS的病因)的抑制作用具有特別的治療意義?，F(xiàn)在已將3’-疊氮基-3’-脫氧胸苷(DE-A-3608606)用于治療AIDS患者的AIDS。但是3’-疊氮基-3’-脫氧胸苷對(duì)骨髓的毒副作用使約50％的受治療患者都需要輸血。通式Ⅰ化合物沒有這些缺點(diǎn)。在藥理學(xué)相關(guān)劑量下它們具有抗病毒作用而沒有細(xì)胞毒性。
可將本發(fā)明化合物和其藥物制劑與其他藥物聯(lián)用以治療和預(yù)防上述感染。含有可用于治療和預(yù)防HIV感染或伴有這種病的疾病的其他藥物的例子是3’-疊氮基-3’-脫氧胸苷、2’,3’-二脫氧核苷如2’,3’-二脫氧胞苷、2’,3’-二脫氧腺苷和2’,3’-二脫氧肌苷、無環(huán)核苷(如無環(huán)鳥苷)、非核苷RT抑制劑、蛋白酶抑制劑如Invirase、干擾素如干擾素α、β、γ、細(xì)胞因子和白細(xì)胞介素(如白細(xì)胞介素16)、趨化因子如MIP1α、MIP1β、CC1、腎排泄抑制劑如丙磺舒、核苷運(yùn)輸抑制劑如雙嘧啶氨醇以及免疫調(diào)節(jié)劑如白細(xì)胞介素Ⅱ或刺激因子如粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)、粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF、neutropoetin)、thrombopoetin和thrombopoetin-樣因子?？蓪⒈景l(fā)明的化合物和其他藥物分開給藥或同時(shí)給藥，并可以以單一或兩種制劑，或在不同的時(shí)間給藥以便達(dá)到協(xié)同效果。
認(rèn)為羧基和膦酸基的堿金屬、堿土金屬和銨鹽是式Ⅰ化合物可能的鹽。鋰、鈉和鉀鹽是優(yōu)選的堿金屬鹽。鎂和鈣鹽是特別優(yōu)選的堿土金屬鹽。本發(fā)明的銨鹽是指含有銨離子的鹽，所述銨離子可被1-4個(gè)碳原子的烷基和/或芳烷基(優(yōu)選芐基)取代最多達(dá)四次。在這種情況下，所述取代基可以相同或不同。
認(rèn)為膦?；人嶂愌苌锏聂人狨ナ撬幚韺W(xué)可接受的酯，而且含有芐基、膽堿、乙醇胺、肉堿、C5-C7環(huán)烷基或含有1-6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基，特別是甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、異丙基、異丁基、叔丁基、新戊基或叔己基的酯是優(yōu)選的。甲基、乙基、丙基、丁基、叔丁基和芐基是特別優(yōu)選的。
脂類膦?；人狨ピ隗w外與相應(yīng)的游離羧酸一樣有效。但是在體內(nèi)只有當(dāng)經(jīng)口給藥時(shí)，才有顯著的優(yōu)點(diǎn)。
式Ⅰ化合物的羧酸酯在酸性介質(zhì)中通過脫羧帶來的降解作用較低，因此，它們的生物利用度得到提高。因此，與相應(yīng)的游離羧酸相比，給藥劑量降低了數(shù)倍。另外，如當(dāng)克服了血腦屏障并通過細(xì)胞膜進(jìn)入靶細(xì)胞時(shí)，膜通透性得到提高。由于在體內(nèi)首先通過酯酶裂解羧酸酯，因此，在血清中的半衰期延長。
式Ⅰ中的R1優(yōu)選表示直鏈C10-C12烷基。R1具體代表癸基、十一烷基、十二烷基或十三烷基。
n優(yōu)選是0或1。
R2優(yōu)選表示直鏈C9-C12烷基。
R2具體代表癸基、十一烷基或十二烷基。
所要求的通式Ⅰ的結(jié)合物中，優(yōu)選的偶聯(lián)的膦酸及其酯是下列酸和其酯-膦?；姿?膦?；宜?膦酰基丙酸特別優(yōu)選的脂類部分是n=0和組合R1=癸基/R2=十二烷基，R1=十一烷基/R2=十一烷基或R1=十二烷基/R2=癸基，和另外R1=十一烷基/R2=癸基，R1=十三烷基/R2=癸基，R1=十二烷基/R2=十一烷基。
通式Ⅰ的化合物可通過如下方法制備1．在任選取代的芳基磺酰氯的存在下，于有機(jī)堿中或在堿的存在下于惰性有機(jī)溶劑中，將通式Ⅱ的化合物
其中R1、R2和n具有上述的含義，與通式Ⅲ的化合物反應(yīng)
其中m具有上述含義并且R3代表上述酯殘基之一，任選地，隨后通過用堿皂化的方法將羧酸酯轉(zhuǎn)變成式Ⅰ的衍生物或其生理相容性鹽；或者2．從式Ⅲ化合物和烷基-或芳基磺酰氯制得混合酸酐，然后將其與式Ⅱ的醇在堿存在下于惰性有機(jī)溶劑中反應(yīng)或直接在堿中反應(yīng)，然后隨需要將羧酸酯用堿皂化；或者3．將其中R表示氫的式Ⅲ的膦酰基羧酸與式Ⅱ的醇在堿和任選取代的芳基磺酰氯的存在下反應(yīng)，如需要，可將其轉(zhuǎn)變成生理上可接受的鹽；或者4．將其中R表示氫的式Ⅲ化合物和烷基-或芳基磺酰氯的混合酸酐與式Ⅱ的醇在堿和任選地惰性有機(jī)溶劑的存在下反應(yīng)，然后任選地將該結(jié)合物轉(zhuǎn)變成生理相容性鹽；或者5．將通式Ⅳ的膦酸二酰氯與通式Ⅱ的醇在堿中以1∶1的摩爾比進(jìn)行反應(yīng)，
其中所述膦酸二酰氯根據(jù)Bhongle等(Synthetic Commun。17,1071(1987))的方法，將膦酸二-三甲基硅烷基酯與草酰氯反應(yīng)制得或者6．按照Tetrahedron Letters，33卷(49):7473-7474的方法，用草酰氯將式Ⅲ的化合物轉(zhuǎn)變成式Ⅳ的膦酸二酰氯，隨和將該膦酸二酰氯與式Ⅱ的醇在堿的存在下以1∶1的摩爾比進(jìn)行反應(yīng)。將形成的膦酸單酰氯中間體皂化生成半酯，然后用堿皂化將該羧酸酯轉(zhuǎn)變成式Ⅰ的衍生物或其生理相容性鹽。
可視需要將膦?；人嶂愌苌锏挠坞x酸轉(zhuǎn)變成所需的酯。
式Ⅱ化合物及其制備方法記載于實(shí)施例和EP-0545699。
用于治療例如病毒感染的含有式Ⅰ化合物的藥物可以以液體或固體的形式經(jīng)腸或胃腸外給藥。在這種情況下，常用的給藥劑型可以是例如片劑、膠囊、糖衣丸、糖漿、溶液劑或懸浮液。優(yōu)選使用水作為注射溶媒，在水中可以含有注射液常用的添加劑如穩(wěn)定劑、增溶劑和緩沖劑。所述添加劑可以是例如酒石酸鹽或檸檬酸鹽緩沖劑，乙醇，螯合劑如乙二胺四乙酸及其無毒的鹽，用于調(diào)節(jié)粘度的高分子聚合物如液體聚環(huán)氧乙烷。必須將用于注射液的載體滅菌并優(yōu)選將其填充到安瓿內(nèi)。固體載體是例如淀粉、乳糖、山梨糖醇、甲基纖維素、滑石、高度分散的硅酸、高分子脂肪酸如硬脂酸、明膠、瓊脂、磷酸鈣、硬脂酸鎂、動(dòng)物和植物脂、固體高分子聚合物如聚乙二醇等。用于口服施用的適宜制劑可任選地含有矯味劑和甜味劑。
原則上，可將式Ⅰ化合物經(jīng)口、氣管內(nèi)、直腸、鼻、陰道內(nèi)、舌、靜脈內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、皮內(nèi)或皮下給藥。劑量取決于各種因素，例如給藥方式、物種、年齡以及各自的狀態(tài)。本發(fā)明化合物的給藥量通常為0.1-1000mg/天/kg體重、優(yōu)選2-800mg/天/kg體重、最佳為30-250mg/天/kg體重。優(yōu)選將每日劑量分2-5次給藥，每次施用1-2片活性物質(zhì)含量為0.5-3000mg的片劑。該片劑還可以是緩釋片劑，通過這種方法，可以將每日的給藥次數(shù)減少至1-3次。緩釋片劑的活性物質(zhì)含量可以是20-5000mg?；钚晕镔|(zhì)還可以以連續(xù)輸注的方式施用，通常適宜的劑量為每日5-10000mg。
除實(shí)施例中所提到的化合物和將權(quán)利要求中所述的取代基的各種含義進(jìn)行組合所得到的化合物之外，本發(fā)明還包括如下的式Ⅰ化合物1．(3-十二烷基硫基-2-癸氧基)丙氧基羥基-氧膦基-甲酸2．(3-十二烷基亞磺酰基-2-癸氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-甲酸3．(3-十二烷基磺?；?2-癸氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-甲酸4．(3-十一烷基硫基-2-癸氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-甲酸5．(3-癸基硫基-2-癸氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-甲酸6．(3-十三烷硫基-2-癸氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-甲酸7．(3-十一烷基硫基-2-十一烷氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-甲酸8．(3-十一烷基亞磺?；?2-十一烷氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-甲酸9．(3-十一烷基磺?；?2-十一烷氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-甲酸10．(3-十二烷基硫基-2-十一烷氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-甲酸11．(3-癸基巰基-2-十二烷氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-甲酸12．(3-十一烷基硫基-2-十二烷氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-甲酸13．(3-十二烷硫基-2-十二烷氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-甲酸14．(3-十二烷基硫基-2-壬氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-甲酸15．(3-十一烷基硫基-2-壬氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-甲酸16．(3-十二烷基硫基-2-辛氧基]-丙氧基羥基-氧膦基-甲酸17．(3-十二烷基硫基-2-癸氧基)丙氧基羥基-氧膦基-丙酸18．(3-十二烷基亞磺酰基-2-癸氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-丙酸19．(3-十二烷基磺?；?2-癸氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-丙酸20．(3-十一烷基硫基-2-癸氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-丙酸21．(3-癸基硫基-2-癸氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-丙酸22．(3-十三烷硫基-2-癸氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-丙酸23．(3-十一烷基硫基-2-十一烷氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-丙酸24．(3-十一烷基亞磺酰基-2-十一烷氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-丙酸25．(3-十一烷基磺?；?2-十一烷氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-丙酸26．(3-十二烷基硫基-2-十一烷氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-丙酸27．(3-癸基硫基-2-十二烷氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-丙酸28．(3-十一烷基硫基-2-十二烷氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-丙酸29．(3-十二烷硫基-2-十二烷氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-丙酸30．(3-十二烷基硫基-2-壬氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-丙酸31．(3-十一烷基硫基-2-壬氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-丙酸32．(3-十二烷基硫基-2-辛氧基]-丙氧基羥基-氧膦基-丙酸33．(3-十二烷基硫基-2-癸氧基)丙氧基羥基-氧膦基-乙酸34．(3-十二烷基亞磺?；?2-癸氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-乙酸35．(3-十二烷基磺酰基-2-癸氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-乙酸36．(3-十一烷基硫基-2-癸氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-乙酸37．(3-癸基硫基-2-癸氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-乙酸38．(3-十三烷硫基-2-癸氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-乙酸39．(3-十一烷基硫基-2-十一烷氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-乙酸40．(3-十一烷基亞磺?；?2-十一烷氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-乙酸41．(3-十一烷基磺酰基-2-十一烷氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-乙酸42．(3-十二烷基硫基-2-十一烷氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-乙酸43．(3-癸基硫基-2-十二烷氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-乙酸44．(3-十一烷基硫基-2-十二烷氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-乙酸45．(3-十二烷硫基-2-十二烷氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-乙酸46．(3-十二烷基硫基-2-壬氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-乙酸47．(3-十一烷基硫基-2-壬氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-乙酸48．(3-十二烷基硫基-2-辛氧基]-丙氧基羥基-氧膦基-乙酸49．(3-十二烷基硫基-2-癸氧基)丙氧基羥基-氧膦基-甲酸甲酯50．(3-十一烷基硫基-2-癸氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-甲酸甲酯51．(3-十三烷硫基-2-癸氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-甲酸甲酯52．(3-十一烷基硫基-2-十一烷氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-甲酸甲酯53．(3-十二烷基硫基-2-十一烷氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-甲酸甲酯54．(3-癸基硫基-2-十二烷氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-甲酸甲酯55．(3-十二烷硫基-2-癸氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-乙酸甲酯56．(3-十二烷基硫基-2-癸氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-乙酸甲酯57．(3-十三烷基硫基-2-癸氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-乙酸甲酯58．(3-十一烷基硫基-2-十一烷氧基]-丙氧基羥基-氧膦基-乙酸甲酯59．(3-十二烷基硫基-2-十一烷氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-乙酸甲酯60．(3-癸基硫基-2-十二烷氧基]-丙氧基羥基-氧膦基-乙酸甲酯61．(3-十二烷硫基-2-癸氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-甲酸乙酯62．(3-十一烷基硫基-2-癸氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-甲酸乙酯63．(3-十三烷基硫基-2-癸氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-甲酸乙酯64．(3-十一烷基硫基-2-十一烷氧基]-丙氧基羥基-氧膦基-甲酸乙酯65．(3-十二烷基硫基-2-十一烷氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-甲酸乙酯66．(3-癸基硫基-2-十二烷氧基]-丙氧基羥基-氧膦基-甲酸乙酯67．(3-十二烷硫基-2-癸氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-乙酸乙酯68．(3-十一烷基硫基-2-癸氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-乙酸乙酯69．(3-十三烷基硫基-2-癸氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-乙酸乙酯70．(3-十一烷基硫基-2-十一烷氧基]-丙氧基羥基-氧膦基-乙酸乙酯71．(3-十二烷基硫基-2-十一烷氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-乙酸乙酯72．(3-癸基硫基-2-十二烷氧基]-丙氧基羥基-氧膦基-乙酸乙酯73．(3-十二烷硫基-2-癸氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-甲酸異丙酯74．(3-十一烷基硫基-2-癸氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-甲酸異丙酯75．(3-十三烷基硫基-2-癸氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-甲酸異丙酯76．(3-十一烷基硫基-2-十一烷氧基]-丙氧基羥基-氧膦基-甲酸異丙酯77．(3-十二烷基硫基-2-十一烷氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-甲酸異丙酯78．(3-癸基硫基-2-十二烷氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-甲酸異丙酯79．(3-十二烷硫基-2-癸氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-乙酸異丙酯80．(3-十一烷基硫基-2-癸氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-乙酸異丙酯81．(3-十三烷基硫基-2-癸氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-乙酸異丙酯82．(3-十一烷基硫基-2-十一烷氧基]-丙氧基羥基-氧膦基-乙酸異丙酯83．(3-十二烷基硫基-2-十一烷氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-乙酸異丙酯84．(3-癸基硫基-2-十二烷氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-乙酸異丙酯85．(3-十二烷硫基-2-癸氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-甲酸新戊酯86．(3-十一烷基硫基-2-癸氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-甲酸新戊酯87．(3-十三烷基硫基-2-癸氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-甲酸新戊酯88．(3-十一烷基硫基-2-十一烷氧基]-丙氧基羥基-氧膦基-甲酸新戊酯89．(3-十二烷基硫基-2-十一烷氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-甲酸新戊酯90．(3-癸基硫基-2-十二烷氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-甲酸新戊酯91．(3-十二烷硫基-2-癸氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-甲酸新戊酯92．(3-十一烷基硫基-2-癸氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-乙酸新戊酯93．(3-十三烷基硫基-2-癸氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-乙酸新戊酯94．(3-十一烷基硫基-2-十一烷氧基]-丙氧基羥基-氧膦基-乙酸新戊酯95．(3-十二烷基硫基-2-十一烷氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-乙酸新戊酯96．(3-癸基硫基-2-十二烷氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-乙酸新戊酯97．(3-十二烷硫基-2-癸氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-甲酸芐酯98．(3-十一烷基硫基-2-癸氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-甲酸芐酯99．(3-十三烷基硫基-2-癸氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-甲酸芐酯100．(3-十一烷基硫基-2-十一烷氧基]-丙氧基羥基-氧膦基-甲酸芐酯101．(3-十二烷基硫基-2-十一烷氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-甲酸芐酯102．(3-癸基硫基-2-十二烷氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-甲酸芐酯103．(3-十二烷硫基-2-癸氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-乙酸芐酯104．(3-十一烷基硫基-2-癸氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-乙酸芐酯105．(3-十三烷基硫基-2-癸氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-乙酸芐酯106．(3-十一烷基硫基-2-十一烷氧基]-丙氧基羥基-氧膦基-乙酸芐酯107．(3-十二烷基硫基-2-十一烷氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-乙酸芐酯108．(3-癸基硫基-2-十二烷氧基)-丙氧基羥基-氧膦基-乙酸芐酯實(shí)施例1R,S-(3-十二烷硫基-2-癸氧基)-丙氧基-羥基-氧膦基-甲酸二鈉鹽(DMDOP-PFA)和甲酯DMDOP-PFA-OMe將18.2ml膦?；姿崛柞ト苡?40ml二氯甲烷中，然后在攪拌下與72.5ml溴代三甲硅烷混合。將混合物在室溫?cái)嚢?小時(shí)，蒸發(fā)，將殘余物加入甲醇中并將該溶液再次蒸發(fā)，如此重復(fù)兩次。將殘余物加入30毫升無水吡啶中并與48.7g R,S-(3-十二烷硫基-2-癸氧基)-丙-1-醇的溶液混合。將該混合物蒸發(fā)至干，攪拌下將殘余物與47.1g 2,4,6-三-異丙基-苯磺酰氯和150毫升無水吡啶混合。最初的粘稠懸浮液在約30分鐘后變稀，將其在室溫下攪拌25小時(shí)。
抽濾出沉淀并用少量吡啶洗滌。攪拌下將濾液與150毫升水混合，將該混合物在室溫下攪拌30分鐘，蒸發(fā)并與乙醚混合。濾除再次析出的沉淀，將乙醚濾液與0.5N HCl一起搖出。將乙醚相用水充分洗滌，干燥并蒸發(fā)。
將殘余物(84.2g)通過硅膠色譜純化，用二氯甲烷/甲醇/冰乙酸(9∶0.5∶0.5)洗脫。將含有產(chǎn)物的餾份蒸發(fā)濃縮。得到45.4g相應(yīng)的R,S-(3-十二烷硫基-2-癸氧基)-丙氧基羥基-氧膦基甲酸甲酯(DMDOP-PFA-OMe)。
TLC(硅膠)∶Rf=0.3(乙酸/丙酮/冰乙酸/水10∶4∶0.5∶0.5)Rf=0.69(二氯甲烷/甲醇8∶2)
為了將羧酸甲酯皂化，將5g上面得到的產(chǎn)物溶于70毫升四氫呋喃并與6.7ml 2N NaOH混合。將其攪拌4小時(shí)，然后放置過夜。將反應(yīng)混合物用2-乙基己酸調(diào)至pH8并蒸發(fā)。將殘余物與丙酮一起攪拌，將沉淀出的產(chǎn)物抽濾。得到4.1g酸，熔點(diǎn)為242-246℃(分解)。
TLC(硅膠)∶Rf=0.31(異丙醇/乙酸丁酯/水/濃氨水10∶6∶3∶1)13C-NMR(D2O):COOH(d,175ppm,JP-C=231.4Hz)實(shí)施例2R,S-(3-十二烷硫基-2-癸氧基)-丙氧基-羥基-氧膦基-乙酸二鈉鹽(DMDOP-PAA)和甲酯DMDOP-PAA-OMe類似于實(shí)施例1，用蠟狀的膦?；宜崛柞ズ?3-十二烷硫基-2-癸氧基)-丙-1-醇制得標(biāo)題化合物，熔點(diǎn)358-360℃(分解)。
DMDOP-PAA:
TLC(硅膠)∶Rf=0.53(正丁醇/冰乙酸/水2∶1∶1)Rf=0.07(二氯甲烷/冰乙酸/水9∶0.5∶0.5)DMDOP-PAA-OMeTLC(硅膠)∶Rf=0.6(正丁醇/冰乙酸/水2∶1∶1)Rf=0.1(二氯甲烷/冰乙酸/水9∶0.5∶0.5)實(shí)施例3體外確定骨髓毒性(CFU-GM試驗(yàn))按Seidel和Kreja(Seidl,H．和J.Kreja,L.,Blut 47,139-145,1983)所述完成CFU-GM試驗(yàn)。在含0.8％甲基纖維素、20％馬血清、10-4M α硫代甘油的Iscove培養(yǎng)基中培養(yǎng)Balb/c小鼠的骨髓細(xì)胞(1×105細(xì)胞/ml)，然后在每只動(dòng)物靜脈內(nèi)注射50μg內(nèi)毒素(馬流產(chǎn)沙門氏菌；Sigma,Deisenhofen,Germany)后4小時(shí)，從Balb/c小鼠中得到最佳體積(12.5或25μl)的內(nèi)毒素激活的小鼠血清。將菌落培養(yǎng)6天后，將其用2-(對(duì)-碘代苯基)-3-(對(duì)-硝基苯基)-5-苯基四唑鹽酸鹽水合物(INT,Sigma)染色，然后用自動(dòng)圖像處理儀(Artek 982 B,Biosys GmbH,Karben,Germany)計(jì)數(shù)。
表1說明與細(xì)胞生長抑制劑順鉑(Cis-DDP)和阿霉素相比，從數(shù)個(gè)濃度依賴性試驗(yàn)得到了膦?；姿?、DMDOP-PFA、膦?；宜?、DMDOP-PAA、(3-十八烷氧基-2-羥基)-丙氧基-羥基-氧膦基甲酸乙酯(OOHP-PFAE)和(3-十八烷氧基-2-羥基)-丙氧基-羥基-氧膦基甲酸(OOHP-PFA)的IC50濃度。從表中可以看出，DMDOP-PFA和DMDOP-PAA在達(dá)到100μg/ml的最高試驗(yàn)濃度時(shí)，對(duì)粒細(xì)胞/單核細(xì)胞系列的骨髓干細(xì)胞也沒有毒性。這種情況也見于膦?；姿?，但與DMDOP-PFA和DMDOP-PAA相比，膦?；宜嵋约敖Y(jié)合物OOHP-PFAE和OOHP-PFA毒性較高。
表Ⅰ在CFU-GM試驗(yàn)中Cis-DDP、阿霉素、膦?；姿?Foscarnet)、DMDOP-PFA、膦酰基乙酸、DMDOP-PAA、OOHP-PFAE和OOHP-PFA的IC50值(μg/ml)
a平均值±SEM；n，以濃度依賴方式，一式兩份或三份完成的試驗(yàn)數(shù)。實(shí)施例4在小鼠巨細(xì)胞病毒(MCMV)模型中經(jīng)口服處理后的生物利用度用8×105PFU(噬菌斑形成單位)皮下處理雌性Balb/c小鼠。動(dòng)物存活率以下列順序提高未處理的＜Foscarnet處理的＜DMDOP-PFA處理的＜DMDOP-PFA-OMe。
權(quán)利要求
1．式Ⅰ膦酰基羧酸的新的磷脂衍生物
其中R1是有9-13個(gè)碳原子的直鏈或支鏈、飽和或不飽和的烷基鏈，R2可以是含有8-12個(gè)碳原子的直鏈或支鏈、飽和或不飽和烷基鏈，R3表示含有1-6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基鏈，優(yōu)選甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、叔丁基、戊基、己基、新戊基、叔己基或苯基、膽堿、乙醇胺、肉堿、C5-C7-環(huán)烷基、芐基或下列基團(tuán)之一
n是0、1或2，m表示0、1、2或3，其互變異構(gòu)體、光學(xué)異構(gòu)體和外消旋體，其前體和其生理可耐受的無機(jī)或有機(jī)堿鹽。
2．根據(jù)權(quán)利要求1的式Ⅰ化合物，其中R1代表癸基、十一烷基、十二烷基或十三烷基。
3．根據(jù)權(quán)利要求1或2的式Ⅰ化合物，其中R2代表癸基、十一烷基或十二烷基。
4．根據(jù)權(quán)利要求1至3任一項(xiàng)的式Ⅰ化合物，其中n代表0或1。
5．根據(jù)權(quán)利要求1至4任一項(xiàng)的式Ⅰ化合物，其中m代表0、1或2。
6．根據(jù)權(quán)利要求1至5任一項(xiàng)的式Ⅰ化合物，其中R3代表甲基、乙基、丙基、丁基、叔丁基或芐基。
7．含有權(quán)利要求1至6之一中要求的至少一種式Ⅰ化合物以及常用的藥物輔劑和載體的藥物組合物。
8．權(quán)利要求1至6之一中要求的至少一種式Ⅰ化合物用于生產(chǎn)治療自身免疫疾病、腫瘤、炎癥、病毒或反轉(zhuǎn)錄病毒疾病的藥物的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及通式Ⅰ的新的氧膦基羧酸脂類衍生物及,其互變異構(gòu)體,其生理上可耐受的酯,其生理上可耐受的無機(jī)或有機(jī)堿鹽,以及其生產(chǎn)方法和含這些化合物的藥物,其中各符號(hào)的含義見說明書。
文檔編號(hào)A61P31/14GK1209133SQ96180011
公開日1999年2月24日 申請(qǐng)日期1996年12月16日 優(yōu)先權(quán)日1995年12月15日
發(fā)明者H·茲爾赫, D·赫爾曼, H·G·奧皮茨, G·茲梅爾曼 申請(qǐng)人:曼海姆泊靈格股份公司