專利名稱：：用于內(nèi)毒素相關(guān)癥狀的預(yù)防和治療的方法和組合物的制作方法相關(guān)的申請(qǐng)這項(xiàng)申請(qǐng)是1994年8月10號(hào)提交的登記號(hào)為08/288,568的部分繼續(xù)，后者是1993年8月9號(hào)提交的PCT申請(qǐng)PCT/US93/07453的部分繼續(xù)，而PCT/US93/07453又是1992年8月12號(hào)提交的美國專利申請(qǐng)登記號(hào)07/928,930、現(xiàn)今美國專利5,344,822的部分繼續(xù)申請(qǐng)。所有這些申請(qǐng)和專利均引入作為參考。發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及內(nèi)毒素相關(guān)內(nèi)毒素血癥的治療。更具體而言，它涉及到通過施用中和和/或去除有機(jī)體中內(nèi)毒素的各種組合物以治療這種中毒，同時(shí)涉及到利用這些組合物的預(yù)防。背景和現(xiàn)有技術(shù)正常血清含有很多脂蛋白顆粒，根據(jù)其密度特征分為乳糜顆粒、VLDL、LDL以及HDL。它們包括酯化或游離的膽甾醇、甘油三酯、磷脂、幾種其它的稀有脂成份和蛋白質(zhì)。極低密度脂蛋白(VLDL)以甘油三酯形式將能量轉(zhuǎn)入機(jī)體的細(xì)胞用以儲(chǔ)存和利用。甘油三酯釋放后，VLDL轉(zhuǎn)變成低密度脂蛋白(LDL)。低密度脂蛋白(LDL)將脂甾醇和其它脂溶性物質(zhì)轉(zhuǎn)入機(jī)體細(xì)胞中，而高密度脂蛋白(HDL)將多余或不能利用的脂溶物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)到肝中清除。正常情況下，這些脂蛋白處于平衡，以保證脂溶物質(zhì)的正確運(yùn)送和清除。非正常低的HDL可能引起很多病態(tài)而且在另一些病態(tài)中形成次級(jí)并發(fā)癥。正常狀況下，天然HDL為具有疏水核心表面以單層磷脂覆蓋的固體顆粒。脫輔基脂蛋白A-I和A-II通過它們?chǔ)?螺旋結(jié)構(gòu)疏水表面的相互作用附著在其表面。初生或剛分泌的顆粒呈園盤狀并將游離膽甾醇納入其雙層。膽甾醇為卵磷脂膽甾醇?；D(zhuǎn)移酶(LCAT)所酯化并移動(dòng)至園盤中心。膽甾醇酯運(yùn)動(dòng)到中心是雙層內(nèi)部空間和溶解性限制的結(jié)果。隨著越來越多膽甾醇酯化并運(yùn)動(dòng)至中心，HDL顆?！芭蛎洝睘榍蛐晤w粒。HDL中膽甾醇酯和另外一些集中于“膨脹核心”的水不溶性脂在肝中清除。Anantharamaiah，inSegrest等，酶學(xué)方法，128627-647(1986)描述一系列形成“螺旋輪”的肽是肽間氨基酸相互作用的結(jié)果。這些螺旋輪在其構(gòu)型中存在一個(gè)極性表面和非極性表面。一般情況下，參考文獻(xiàn)表明在這些顆粒中肽可能取代脫輔基蛋白。Jonas等，酶學(xué)方法128A553-582(1986)制備出多種類似HDL的重組顆粒。其技術(shù)包括用標(biāo)準(zhǔn)方法(Hatchetal.，脂研究進(jìn)展(Adv.Lip.Res.)61-68(1968)；Scanuetal.，生物化學(xué)年評(píng)(Anal.Biochem.)44576-588(1971)對(duì)HDL進(jìn)行分離和脫脂以獲取脫HDL蛋白。脫輔基蛋白分級(jí)分離后用去污劑透析與磷脂和膽固醇或不和膽固醇重組。Matzetal.，生物化學(xué)雜志257(8)4535-4540(1982)描述了一種含有脫輔基脂蛋白A-I的磷脂酰膽堿、分子團(tuán)。兩種成分的各種比例均有記述，而且提示所描述的方法可用于制備其它分子團(tuán)。也同時(shí)提示出以分子團(tuán)作為酶底物或HDL分子的模型。但是，本文既不是討論分子團(tuán)在膽甾醇去除中的應(yīng)用，也不是提示其在診斷和治療中的應(yīng)用。Williamsetal，Biochem&amp;Biophvs.Acta875183-194(1986)記述了將磷脂脂質(zhì)體導(dǎo)入分揀脫輔基蛋白和膽甾醇的血漿的實(shí)施例。體內(nèi)分揀脫輔基蛋白和膽甾醇的脂質(zhì)體已被公開，而且提示在相互作用且已分揀出脫輔基蛋白的磷脂脂質(zhì)體中膽甾醇的攝入增強(qiáng)。Williamsetal.，Persp.Biol.&amp;Med.27(3)417-431(1984)討論了卵磷脂脂質(zhì)體用于去除膽甾醇。論文總結(jié)了早期的工作，其中已經(jīng)表明含脫輔基蛋白的脂質(zhì)體在體外從細(xì)胞中去除膽甾醇比不含脫輔基蛋白的脂質(zhì)體更為有效。他們沒有討論含脫輔基蛋白脂質(zhì)體或分子團(tuán)的體內(nèi)應(yīng)用，而且沒有建議脂質(zhì)體體內(nèi)工作的注意事項(xiàng)。重要的是，應(yīng)該指出本發(fā)明的顆粒與現(xiàn)有技術(shù)中描述過的脂質(zhì)體和分子團(tuán)之間存在清楚和明顯的不同。后者包括一個(gè)含脂分子的雙層結(jié)構(gòu)，它包圍了一個(gè)內(nèi)部的含水核心的空間。但是，脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)阻止了脂溶成分在內(nèi)部空間的充填，而且任何脂溶成分的分子攝入限于兩個(gè)脂雙層的空間。于是，用于分揀和釋放如膽甾醇和另外一些脂溶物質(zhì)的空間比本發(fā)明中的顆粒要小的多，該顆粒膨脹類似一個(gè)氣球，其內(nèi)部空間可為所選擇的物質(zhì)充填。內(nèi)毒性休克多為格蘭氏陰性菌(如，大腸桿菌，鼠傷寒沙門氏菌)外膜釋放的脂多糖(LPS)所致，常常是致命的。細(xì)菌脂多糖的結(jié)構(gòu)已被很好地闡明。而且唯一的分子，稱作脂A，通過脂A分子的葡糖胺骨架與酰基鏈相連。參閱Raetz，生物化學(xué)年評(píng)(Ann.Rev.Biochem.)59129-170(1990)。脂A分子的作用像脂多糖結(jié)構(gòu)(“LPS”)膜上的錨而且是LPS參與了內(nèi)毒性休克的發(fā)作。應(yīng)該指出的是LPS分子以脂A型結(jié)構(gòu)和多糖部分為特征。不同LPS分子中后者可能不同，但會(huì)保持具內(nèi)毒素特征的一般結(jié)構(gòu)性結(jié)構(gòu)域單元。認(rèn)為L(zhǎng)PS分子在不同細(xì)菌相同是不正確的(參看Raetz見上)。本領(lǐng)域中通常稱不同LPS分子為“內(nèi)毒素”，該術(shù)語在此之后通指LPS分子。公開內(nèi)容收入作為參考的美國專利5,128,318中，曾闡述過包含有HDL相聯(lián)脫輔基脂蛋白和能結(jié)合內(nèi)毒素并致其失活的脂的重組顆?？赡苁菧p輕內(nèi)毒性所致毒性的有效物質(zhì)。在此引入作為參與并在相關(guān)申請(qǐng)部分列出的母申請(qǐng)祖申請(qǐng)中，已公開過多種其它材料可能用以治療內(nèi)毒素引起的毒性。尤其是，發(fā)現(xiàn)脫輔基脂蛋白非重組顆粒所需，而且可能含有肽和脂，其中肽并非脫輔基脂蛋白。發(fā)明者們還發(fā)現(xiàn)施用脂后再順次施用脫輔基脂蛋白或肽可用于治療內(nèi)毒性引起的毒性。順次施藥后，各種成分集合為一個(gè)重組的顆粒然后用于去除內(nèi)毒素。還發(fā)現(xiàn)至少一些人體其天然脫輔基脂蛋白水平可能比正常水平高，從而可通過施用不含脫輔基蛋白或肽但包含公開內(nèi)容中脂的重組顆粒治療內(nèi)毒血癥。此外，這些申請(qǐng)中公開的發(fā)明包括重組顆粒的使用和在此討論過用以預(yù)防內(nèi)毒素所致毒性的各種成分，需要預(yù)防時(shí)通過給被實(shí)驗(yàn)者施用預(yù)防有效量。被實(shí)驗(yàn)者包括感染或手術(shù)恢復(fù)中的病人。這些病人有時(shí)HDL水平非常低，有時(shí)低至正常水平的20％。這些情形下，最適宜的是用HDL早期預(yù)防以補(bǔ)償這種降低。非常奇怪的是，現(xiàn)在發(fā)現(xiàn)磷脂可以單獨(dú)使用或與其它物質(zhì)如中性脂、膽酸鹽等聯(lián)合使用成為減輕和預(yù)防內(nèi)毒血癥的有效試劑。尤其優(yōu)選的是磷脂酰膽堿單獨(dú)或與其它磷脂如神經(jīng)鞘脂類聯(lián)合使用，組合物中基本不含肽和蛋白質(zhì)，比如脫輔基蛋白或由此衍生的肽。中性脂如甘油單酯、二酯、三酯可與磷脂結(jié)合，組合物以靜脈丸劑方式使用時(shí)只要其中性脂總量低于一定的重量百分?jǐn)?shù)。以其它方式施用時(shí)，如連續(xù)性靜脈注射，重量百分?jǐn)?shù)不是如此關(guān)鍵，但也是強(qiáng)調(diào)的。本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案包括膽汁酸或膽汁鹽與磷脂和中性脂一起使用時(shí)的乳劑。在此表明內(nèi)毒血癥治療中膽酸鹽中的膽汁酸和膽汁鹽中的效力。這些膽汁酸可能單獨(dú)使用，或與一個(gè)或多個(gè)磷脂、和/或中性脂如磷脂酰膽堿，和/或甘油三酯聯(lián)合使用。隨后的公開內(nèi)容中會(huì)詳盡描述本發(fā)明。附圖簡(jiǎn)述圖1表明包含Apo-A-I、膦脂和膽酸鹽的重組顆粒如何形成。圖2表明重組顆粒對(duì)LPS分子的吸收。圖3表明本發(fā)明中的肽在小鼠模型中用于研究?jī)?nèi)毒性所致毒性減輕的實(shí)驗(yàn)。圖4示現(xiàn)有技術(shù)，表明各種肽螺旋輪的形成。參閱上文提到的Anantharamaiah。圖5A和5B表明模型中測(cè)試各種組合物所獲的結(jié)果，由此通過人全血模型中TNF的釋放來測(cè)定內(nèi)毒素的中和。圖5A表明蛋白質(zhì)的作用，而圖5B則表明磷脂的作用。測(cè)試的成分包括天然脂蛋白(VLDL，LDL，HDL)，重組HDL(“R-HDL”)，INTRALIPID組合物，以及包含磷脂和蛋白質(zhì)的乳劑。圖6A和6B對(duì)比了同一模型中甘油三酯(一種中性脂)，一種磷脂磷脂酰膽堿的作用。圖7標(biāo)示出在小鼠模型中與施用各種PC和PC/TG組合物相關(guān)的毒性信息，使用了施用過大腸桿菌脂多糖的55％致死模型。圖8標(biāo)出的數(shù)據(jù)可與以上人全血分析所獲的數(shù)據(jù)相比，但用磷脂與非酯化的膽甾醇，神經(jīng)鞘磷脂，或二者的混合物，取代了甘油三酯。圖9A和9B所示的結(jié)果可與圖5A和5B的結(jié)果相比，除了新圖中，磷脂、非酯化膽甾醇和/或神經(jīng)鞘磷脂與甘油三酯和作為中性脂的酯化膽甾醇混合之外。圖10對(duì)比了體內(nèi)小鼠模型中膽甾醇脂和含乳劑的甘油三酯的結(jié)果。圖11畫出了各種含TG的組合物施用后甘油三酯釋放入血的理論數(shù)量和毒性閾值?！癟PN”代表“全部腸胃外營養(yǎng)”，而“RI”代表根據(jù)本發(fā)明的組合物。實(shí)施方案詳述實(shí)施例1該研究用以測(cè)定鼠傷寒沙門氏菌內(nèi)毒素所致的小鼠存活率。遠(yuǎn)緣雜交的雄性Swiss-Webster小鼠分別以鹽水(20只小鼠)，重組HDL顆粒(40只小鼠)，或重組肽18A(20只小鼠)進(jìn)行尾靜脈注射。注射物中的顆粒如下a.HDL顆粒顆粒由apo-Hu-HDL(85％-AI；15％A-II和apoC)通過去污劑透析與95％純卵磷脂酰膽堿重組(2∶1w/w)制備而得。參照Matzetal.，J.Biol.Chem.2574535-4540(1982)和公開內(nèi)容在此引入作為參考的美國專利5,128,318。b.肽顆粒肽18A氨基酸序列如下Asp-Trp-Leu-Lys-Ala-Phe-Tyr-Asp-Lys-Val-Ala-Gly-Lys-Leu-Lys-Glu-Ala-Phe。肽樣品也同樣依照如上的Matzetal.，(2∶1w/w)和美國專利5,128,318用去污劑透析與95％純卵磷脂酰膽堿混合并重組。所得的顆粒與美國專利號(hào)5,128,318公開的顆粒相同，除了存在肽，而不是Matz和專利參考中的apo-HDL。施用重組物十五分鐘內(nèi)，再以10mg/kg體重腹腔施用沙門氏菌脂多糖。評(píng)估的標(biāo)準(zhǔn)是存活力。圖3表明結(jié)果，提示高出鹽水對(duì)照組幾乎4倍的存活力。合成多肽幾乎與包含顆粒的重組apo-HDL同樣有效。實(shí)施例2在保存血漿蛋白和血中細(xì)胞成份相互作用的完整性時(shí)可通過一個(gè)體外的人全血系統(tǒng)研究影響脂多糖介導(dǎo)TNF-α激發(fā)的因素。該系統(tǒng)用以測(cè)定中和脂多糖中重要的脂蛋白成分。測(cè)試材料為重組高密度脂蛋白(R-HDL)，天然血漿脂蛋白(VLDL，LDS，HDL)，脂蛋白缺乏血清(LPPS)，以及富甘油三酯乳劑20％INTRALIPID(甘油三酯和磷脂的混合物)。在肝素化的試管中收集血，以Hank’s平衡鹽溶液(此后稱“HBSS”)稀釋，或?qū)⒁獪y(cè)試的材料溶解在HBSS中。所得的溶液轉(zhuǎn)移到Starstedt試管中(250μl/管)。脂多糖溶解于缺乏致熱原的含10mMHEPES的鹽水中，加(2.5μl)到終濃度為10ng/ml。37℃溫育4小時(shí)，然后冷卻到4℃，10,000×g離心5分鐘。收集上清，用商業(yè)化ELISA分析TNF-α。隨后的表1對(duì)比了測(cè)試材料的組合物。圖5A和5B示出結(jié)果。TNF-α產(chǎn)生量的數(shù)據(jù)與相對(duì)于加入蛋白的濃度(圖5A)，和磷脂(圖5B)分別作圖。用對(duì)數(shù)作圖法以表現(xiàn)寬的使用濃度，10°相當(dāng)于1mg/ml。所有的全血溫育包含10ng/ml大腸桿菌0111∶B4脂多糖，用以補(bǔ)充組合物，如圖5A和5B所示。以蛋白質(zhì)作圖時(shí)材料的有效性不同(圖5A)，而磷脂作圖時(shí)則極為相似(圖5B)，由此表明磷脂為重要成分。蛋白缺乏的脂乳劑比天然HDL更為有效，但比R-HDL效力稍低這一發(fā)現(xiàn)進(jìn)一步肯定以上的事實(shí)。蛋白對(duì)中和作用似乎并不重要。天然脂蛋白和重組HDL的組成</tables>實(shí)施例3下一步即測(cè)試人全血中包含不同數(shù)量中性脂的無蛋白脂乳液。使用與實(shí)施例2中相同的人全血分析。在此描述的所有顆粒經(jīng)過相同的方案制得，包括混合磷脂，神經(jīng)鞘磷脂或磷脂酰膽堿，三油酸甘油酯，和/或未酯化的膽甾醇酯，溶解在氯仿中，并且在燒瓶中稱重。加入維生素E(0.02％w/v)作為抗氧化劑。干燥脂膜通過在樣品表面吹入氮?dú)夂蜌鍤庵苽涠谩Ｒ惑w積無熱原鹽水加入燒瓶中，然后在漩渦混合器中混合直至所有的脂懸浮。溶解在高壓勻漿器中勻漿。有或沒有三油酸甘油酯含磷脂酰膽堿的樣品，在勻漿器中以20,000psi循環(huán)10次。含膽甾醇酯及一種或多種其它脂的樣品以30,000psi循環(huán)15-20次。混勻的溶液經(jīng)過0.45μm注射濾器過濾，濾液用前在室溫下保存(三天內(nèi))。圖6A和6B示出這些結(jié)果。這些研究中，脂多糖依賴的TNF-α產(chǎn)生相對(duì)于加入甘油三酯(圖6A)或磷脂(圖6b)的濃度作圖。如圖中所示，組合物包括(按重量比)7％甘油三酯(“TG”)，45％TG，89％TG，94％TG，R-HDL，或無TG的磷脂(只在圖6b中表明)。89％TG組合物是10％INTRALIPID的配方，而94％TG是指20％INTRALIPID。在所有其它的測(cè)試中，使用了卵磷脂酰膽堿(PC)和三油酸甘油酯。這些結(jié)果通過甘油三酯對(duì)比表明無蛋白組合物極為不同。磷脂(PC)的測(cè)試極為相似。由此肯定了磷脂的作用，尤其是磷脂單獨(dú)作用是有效的，但比包含高達(dá)45％TG的乳劑作用要弱。實(shí)施例4而后進(jìn)行的工作是小鼠模型的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，這是被認(rèn)為預(yù)測(cè)在人類中有效性的可靠系統(tǒng)。這些實(shí)驗(yàn)中，以丸劑形式注射小鼠足量實(shí)施例3中描述的制劑以及其它(純磷脂酰膽堿，7％TG，25％TG，71％TG，81％TG，89％TG，94％TG)，或鹽水對(duì)照，以保證磷脂的劑量(200mg/kg或400mg/kg)，同時(shí)注射25mg/kg大腸桿菌0111∶B4LPS。對(duì)照組靜脈注射與乳劑體積相當(dāng)?shù)纳睇}水。72小時(shí)后的存活力見圖7。對(duì)照組的344只動(dòng)物中，155只存活。PC單獨(dú)具有適中的保護(hù)效應(yīng)，95％信度水平統(tǒng)計(jì)學(xué)上并不顯著，而7％，45％和71％TG組合物顯著提高存活力。80％和89％TG組合物處于有效的邊緣，而94％TG存活力降低。劑量增加到400mg/kgPC時(shí)，89％和94％TG乳劑顯著降低存活時(shí)間，如以上所解釋的，可能由于TG的毒性。實(shí)施例5實(shí)施例2-4中的工件闡明磷脂是抑制內(nèi)毒素血癥的活性作用物。非極性脂而不是甘油三酯可能與磷脂而非PC形成乳劑，由此提示其它脂類也可能有效。典型的例子是神經(jīng)鞘磷脂(另外一種磷脂)，非酯化的膽甾醇(一種極性中性脂)和二者的混合物。同樣，酯化的膽甾醇(一種非極性酯)、鯊烯(一種碳水化合物)和維生素E可能應(yīng)用于此。設(shè)計(jì)一系列實(shí)驗(yàn)測(cè)試這些化合物，使用實(shí)施例2中的人全血分析和實(shí)施例4中的小鼠存活分析。如以前描述過的方法，用純磷脂酰膽堿、磷脂酰膽堿加10％(wt/wt)未酯化的膽甾醇、10％(wt/wt)神經(jīng)鞘磷脂或二者混合的10％制備乳劑。濃度為100mg/dlPC的乳劑和10ng/mlLPS加入全血。溫育混合物并測(cè)出TNF-α的釋放。結(jié)果見于圖8。PC單獨(dú)作用時(shí)TNF-α的產(chǎn)生基本降低。含未酯化膽甾醇、神經(jīng)鞘磷脂或二者混合物的乳劑可能也抑制TNF-α的釋放。實(shí)施例6人全血分析也用于測(cè)定非酯化膽甾醇和/或神經(jīng)鞘磷脂加入含乳劑中性脂中的效應(yīng)。同樣，在乳劑中加入100mg/dlPC。各種組合物(wt/wt)見于下表。圖9A和9B表明結(jié)果。PC乳劑加任何中性脂，加或不加另外的極性脂表現(xiàn)出抑制作用。同樣，10ng/ml的脂多糖是臨床內(nèi)毒素相關(guān)濃度。含乳劑的膽甾醇酯不如含乳劑的TG有效，而含或不含非酯化膽甾醇的乳劑不抑制TNF-α。乳劑中加入神經(jīng)鞘磷脂似乎增強(qiáng)TNF-α產(chǎn)生的抑制作用。實(shí)施例7在體內(nèi)模型中(即用于實(shí)施例4中的模型)測(cè)試內(nèi)毒素致死劑量下含乳劑的膽甾醇酯。PC和TG，或PC和膽甾醇酯(CE)用于制備乳劑，200mg/kgPC的單個(gè)丸劑劑量和25mg/kg大腸桿菌0111∶B4脂多糖(致死劑量)通過尾靜脈注入小鼠。對(duì)照組靜脈注入與乳劑等體積的生理鹽水。圖10的數(shù)據(jù)對(duì)比了含乳劑CE和TG的結(jié)果。每一乳劑共用16只或更多的動(dòng)物至少進(jìn)行兩次實(shí)驗(yàn)。如已表明的，含7％或45％CE(wt％)的乳劑顯著提高存活力。這些結(jié)果以及實(shí)施例6中的結(jié)果表明CE可代替TG制備中和內(nèi)毒素的乳劑。實(shí)施例8含甘油三酯的無蛋白磷脂乳劑在全血中可有效封閉與脂多糖共同激發(fā)的TNF-α的產(chǎn)生。理論上，如果這些乳劑以提供血漿中磷脂保護(hù)性濃度安全地施用，那么它們?cè)隗w內(nèi)可能也是有效的。以前用R-HDL所做的實(shí)驗(yàn)提示磷脂的最低劑量是約200mg/kg。用此劑量和體重4.5％的血漿體積，可計(jì)算出施用一系列乳劑后伴隨的甘油三酯增加后血漿中預(yù)期的甘油三酯含量。見于圖11的結(jié)果呈現(xiàn)隨體重百分比TG增加而上升的平滑曲線。健康成年人甚至在一頓富含油脂的午餐后血漿TG濃度也很少升高到1000mg/dl以上。有報(bào)導(dǎo)胰腺炎病人血漿TG在2000mg/dl以上(Farmer，etal.，美國醫(yī)學(xué)雜志54161-164(1973)；Krauss，etal.，美國醫(yī)學(xué)雜志62144-149(1977)；Glueck，etal.，實(shí)驗(yàn)和臨床醫(yī)學(xué)雜志(J.Lab.Clin.Med.)12359-61)。血漿TG在4000mg/dl以上非常少而且應(yīng)引起重視。上圖中的水平線表明最后兩個(gè)閾值。10％或20％INTRALIPID以提供200mg/kg磷脂的劑量施用可望提高血漿TG濃度(參看兩個(gè)空心環(huán))至安全限以上。相反，含7％，45％，71％或78％(實(shí)體正方形從左到右)乳劑施用后分別提高血漿TG至136，477，1300或2000mg/dl。TG濃度高達(dá)約50％的乳劑可避免TG引起的毒性。實(shí)施例9用與以前的實(shí)施例中相同的實(shí)驗(yàn)測(cè)試磷脂和一種膽汁酸即膽酸鈉聯(lián)合使用的效力。但是，制備用于測(cè)試動(dòng)物的制劑的程序有所不同。本實(shí)施例及隨后的實(shí)施例中，用微流儀(Microfluidizer)高壓勻漿器制備制劑。這種儀器有助于度量。稱重液體三油酸甘油酯或液體大豆甘油三酯放入適量的水或水加8mM、18mM或36mM膽酸鈉中。在稱量紙上稱量固體顆粒狀的磷脂酰膽堿，然后邊攪拌溶液邊緩慢地加入溶液。分散脂類需要3-5分鐘。分散后，傾注溶液于Microfluidizer。該裝置用水壓驅(qū)動(dòng)一個(gè)泵，而這個(gè)泵又控制兩個(gè)方向相反的樣品噴頭。壓力可高達(dá)每平方英尺25,000磅。碰撞中，迫使噴頭通入由正信號(hào)形成的孔，從而勻漿樣品。樣品在microfluidizer中再循環(huán)，“一次通過”定義為將所有樣品泵過機(jī)器所需的時(shí)間。樣品通過20次循環(huán)后產(chǎn)生勻漿的樣品。加右旋糖至終濃度為5％。如以下要討論的，大腸桿菌0111∶B4中純化的內(nèi)毒素(40mg/kg)和乳劑在室溫下混合，立即經(jīng)尾靜脈注射入C57BL6/J小鼠。只注射過膽酸鹽的小鼠再以相同的膽酸鹽濃度給予與膽酸/EML(乳劑)制劑相等體積的膽酸鈉。對(duì)照小鼠注射等體積5％葡萄糖，以平衡血漿滲透性。結(jié)果見于隨后的表中。乳劑是以前實(shí)施例中描述過的磷脂酰膽堿/7％甘油三酯乳劑。使用時(shí)膽酸鈉在乳化前以指明的濃度加入粗材料中。表1.致死內(nèi)毒素攻擊下小鼠的保護(hù)</tables>方便起見，乳劑的重量百分比如下。用9mM膽酸鹽時(shí)，相對(duì)于乳劑的重量百分?jǐn)?shù)是7％膽酸鹽、6.1％甘油三酯和86.9％磷脂酰膽堿。用18mM膽酸鹽時(shí)，重量百分?jǐn)?shù)為13.1％膽酸鹽、5.7％甘油三酯和81.2％磷脂酰膽堿。36mM膽汁鹽時(shí)，相對(duì)值為23.2％膽汁鹽、5％甘油三酯和71.8％磷脂酰膽堿。應(yīng)當(dāng)指出的是這些實(shí)驗(yàn)中施用的脂多糖的量比以前致死研究中的實(shí)驗(yàn)要高得多。這種更高的劑量絕對(duì)優(yōu)勢(shì)地超過了磷脂酰膽堿和/或甘油三酯的保護(hù)效應(yīng)。于是，這些實(shí)驗(yàn)所得的結(jié)論是膽汁酸鹽，膽酸鈉具保護(hù)效應(yīng)。用別的膽酸鹽和含膽酸鹽的?；撬崴M(jìn)行的研究在此沒有描述。膽汁酸另外的實(shí)施例包括異脫氧膽酸、石膽酸、3，6-二羥基膽烷酸、豬膽酸、α，β-ω-鼠膽酸(muricholicacid)、鼠脫氧膽酸(murodeoxycholicacid)、熊脫氧膽酸、熊膽酸以及這些酸的鹽類，例如它們的鈉鹽或?；撬峄蚋拾彼岬慕Y(jié)合膽汁酸。參閱前文，Hoffman。實(shí)施例10然后進(jìn)行下一步研究，首先用小鼠作受試動(dòng)物作存活力研究。存活力研究中，受試動(dòng)物分為四組。第一組注射5％右旋糖溶液作為對(duì)照。第二組注射93％(重量比)磷脂酰膽堿和7％(重量比)甘油三酯乳劑，制備如前所述。乳劑含5％右旋糖和約50mg/ml脂的大豆磷脂。第三和第四組動(dòng)物注射與第二組相似的乳劑，添加18mM膽酸鈉或18mM膽氧膽酸鈉。本實(shí)驗(yàn)所用的方案與實(shí)施例9相同。用藥后72小時(shí)測(cè)存活力，總結(jié)于下面的表中表1.7％甘油三酯乳劑加入膽汁酸72小時(shí)后對(duì)小鼠存活力的效應(yīng)</tables>應(yīng)該注意的是，組間存活力對(duì)比的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性是用計(jì)算機(jī)程序的歸納Wilcox方法作出的。相對(duì)于組I對(duì)照的對(duì)比例于“1”下，對(duì)組2動(dòng)物以7％乳劑處理的對(duì)比列于“2”下，用乳劑加膽酸鈉處理對(duì)組3動(dòng)物的對(duì)比列于“3”下。存活力百分?jǐn)?shù)和統(tǒng)計(jì)學(xué)分析都表明含膽酸鹽的制劑具明確的，非預(yù)料中的優(yōu)越性。實(shí)施例11第二套實(shí)驗(yàn)用兔模型。用該模型測(cè)定TNF(腫瘤壞死因子)-α的釋放。兔子分為三組，并且注射5％右旋糖溶液、如前所述的磷脂和甘油三酯(93％/7％)的乳劑、或也含有18mM膽汁酸的93％/7％乳劑。所有的乳劑如實(shí)施例10中的一樣調(diào)至5％右旋糖。兔子注射首次丸劑(primingbolus)乳劑后兩小時(shí)再用100μg大腸桿菌0111∶B4脂多糖攻擊。首次施用后，以每小時(shí)每公斤體重50mg的脂靜脈施用配方以保證持續(xù)供給。脂多糖攻擊后持續(xù)靜脈用藥三小時(shí)。首次乳劑施用后30分鐘和用藥五小時(shí)后每小時(shí)從兔子上采血。接下來的表中列出TNF-α的峰值。它們發(fā)生于內(nèi)毒素施用后兩小時(shí)。用熟知的Student’s檢驗(yàn)確定統(tǒng)計(jì)學(xué)的顯著性。如表所示，隨著18mM膽汁酸施用TNF-α值顯著降低。表2.兔中乳劑對(duì)TNF-α產(chǎn)生的效應(yīng)</tables>前述的實(shí)施例在一方面詳述了本發(fā)明，它包含了通過施用與一種內(nèi)毒素相聯(lián)合磷脂的有效劑量在被實(shí)驗(yàn)者中減輕或抑制了內(nèi)毒素血癥。通過為人熟知的磷蛋白顆粒去除的標(biāo)準(zhǔn)生物學(xué)方法從被實(shí)驗(yàn)者中去除磷脂和內(nèi)毒素的聯(lián)合。內(nèi)毒素與磷脂的聯(lián)合使之失活。實(shí)施例也表明施用膽烷酸或膽烷酸家族中的一種如一種膽汁酸或膽汁鹽也可達(dá)到與磷脂同樣的效果，即減輕或抑制內(nèi)毒素血癥。于是，無蛋白和肽而含一種或膽汁酸/膽汁鹽和磷脂的組合物可能用來治療內(nèi)毒素血癥。為Hofmann，肝病學(xué)4(5)4S-14S(1984)等描述過的膽烷酸引入作為參考。應(yīng)該特別注意的是參考中引入的5S頁，圖1和2表明具膽烷酸特征的結(jié)構(gòu)。治療對(duì)象優(yōu)選為人，但本發(fā)明也同樣適用于獸醫(yī)學(xué)?！皽p輕”在此使用是指治療到減輕如格蘭氏陰性菌(鼠傷寒沙門氏菌，大腸桿菌等)產(chǎn)生的各種內(nèi)毒素所致內(nèi)毒素血癥的負(fù)擔(dān)。在內(nèi)毒素毒性引起或?qū)⒁鸢Y狀時(shí)要伴隨施用制劑的預(yù)防。一般地，這種現(xiàn)象發(fā)生于手術(shù)中。于是，將要進(jìn)行手術(shù)的被實(shí)驗(yàn)者可預(yù)備性的施用活性成分。磷脂和膽汁酸結(jié)合為治療所需的有效量可能不同。一般情況下，優(yōu)選每公斤被實(shí)驗(yàn)者體重高達(dá)200mg-約800mg劑量的磷脂，盡管依照內(nèi)毒素血癥的嚴(yán)重性或預(yù)防中發(fā)生的和程度可能增加或減少。對(duì)膽烷酸和膽烷酸鹽，如膽汁酸或其鹽類，使用每公斤體重約10mg到300mg劑量，更優(yōu)選每公斤體重15mg-約275mg。組合物中尤希望施用膽汁酸/膽汁鹽和磷脂，其中也包含中性脂但非必需因?yàn)闊o中性脂的磷脂乳劑也同樣可預(yù)想的到。磷脂結(jié)合施用的想法來自一個(gè)事實(shí)，即中性脂和磷脂聯(lián)合形成的顆粒類似脂蛋白，但不同于其衍生物因?yàn)樗麄儾缓某煞值牡鞍?，后者常出現(xiàn)于脂蛋白中。治療的更優(yōu)方案是磷脂為磷脂酰膽堿，如卵黃磷脂酰膽堿，大豆磷脂酯酰膽堿或神經(jīng)鞘脂類。對(duì)于膽汁酸/膽酸鹽，優(yōu)選膽酸及其鹽類，如膽酸鈉，脫氧膽酸鈉和鵝膽酸鈉。至于中性中性脂，優(yōu)選膽甾醇酯或甘油三酯，但別的中性脂如鯊烯或其它碳水化合物油類、甘油單酯、二酯以及維生素E等抗氧化劑也可使用。組合物施用的方式有所不同，優(yōu)選丸劑或其它靜脈內(nèi)注射。例如，使用丸劑方式，而且組合物中含甘油三酯，劑量施用上要慎重。眾所周知，甘油三酯用量過大時(shí)有毒性。然后，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員可很容易地調(diào)制成組合物以致于甘油三酯的毒性被降低或去除。通常情況下，使用丸劑方式時(shí)，組合物中甘油三酯或其它中性脂的重量百分?jǐn)?shù)不能超過80，優(yōu)選不超過70。最優(yōu)選的方案是，用丸劑時(shí)組合物中的中性脂重量百分比不超過50的。然而，用非丸劑方式如其它的靜脈方式時(shí)，中毒的危險(xiǎn)降低。然而上文描述的范圍為靜脈或其它施藥的方式所優(yōu)選，盡管必須明白這并非必需。對(duì)膽汁酸和膽汁酸鹽，優(yōu)選劑量從25mg/kg體重到高達(dá)約500mg/kg體重，更優(yōu)選的劑量從約50mg/kg體重到約100mg/kg體重。對(duì)磷脂，優(yōu)選劑量從約100mg/kg體重到約1000mg/kg體重。然而劑量只是一般情形而且根據(jù)被實(shí)驗(yàn)者和施藥的模式有所不同。如上文指出的，無蛋白和肽制劑需要至少一種磷脂或膽汁酸/膽汁鹽存在。對(duì)磷脂，優(yōu)選至少一種中性脂如甘油三酯，甘油二酯或甘油單酯存在。組合物可能包括另外的材料如甾醇類(如膽甾醇、β-谷甾醇)、酯化或非酯化的脂類(如膽甾醇脂或非酯化的膽甾醇)、碳水化合物油類如鯊烯、抗氧化劑如維生素E，但這些并不必需。當(dāng)然任何一種這樣的制劑中可能使用多于一種磷脂、和/或多于一種中性脂。中性脂和磷脂聯(lián)合應(yīng)用時(shí)，中性脂應(yīng)以相對(duì)于組合物中總脂重量的約3％到50％存在。膽汁酸/膽汁鹽可單獨(dú)使用，或與磷脂、中性脂或二者同時(shí)聯(lián)合使用。至于這些額外的材料(如磷脂和中性脂)，優(yōu)選種類是前文提到和討論過的。任選的額外成分包括上文列出的那些。本發(fā)明的一部分也是治療內(nèi)毒素血癥中有用的組合物。本發(fā)明這一特征的一個(gè)實(shí)施方案是組合物中至少包含每一種膽汁酸/膽汁鹽、磷脂和中性脂中至少一種，其中組合物作為整體包含可減輕內(nèi)毒素血癥的活性成分的量。依重量百分?jǐn)?shù)，這種組合物優(yōu)選約3％到約50％的中性脂、約10％到約95％的磷脂。尤其優(yōu)選的是，組合物含膽汁酸/膽汁鹽的重量約為10-15％，中性脂的重量約為5％到10％，用磷脂平衡組合物。應(yīng)當(dāng)指出的是，這些重量百分?jǐn)?shù)是相對(duì)于由三種成分組成的組合物而言。例如，三成分系統(tǒng)與載體、佐劑、如上文討論過的任選成分聯(lián)合時(shí)，相對(duì)于整個(gè)組合物的百分?jǐn)?shù)將會(huì)下降。需謹(jǐn)記的是這種組合物總是無蛋白和肽存在。組合物不含膽汁酸或膽汁鹽時(shí)，這種無蛋白無肽組合物優(yōu)選為至少約3％重量的中性脂，高達(dá)約50％的中性脂，以至少一種磷脂平衡。優(yōu)選情況下，中性脂為甘油三酯，但可能是上文討論過的任何一種另外的中性脂。同樣，磷脂優(yōu)選為磷脂酰膽堿。本發(fā)明的其它方面對(duì)本領(lǐng)域的技術(shù)人員將會(huì)明了，在此不需重述。應(yīng)該明白的是，說明書和實(shí)施例僅是說明性的，但并非用于限制本發(fā)明的，在本發(fā)明范圍和精神之內(nèi)的其它實(shí)施方案，是本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以想到的。序列表(1)一般信息(i)申請(qǐng)者Levine，DanielM.Parker，ThomasS.Rubin，AlbertL.Gordon，BruceR.Saal，StuartD.(ii)發(fā)明名稱基于內(nèi)毒素的預(yù)防和治療方法(iii)序列數(shù)9(iv)聯(lián)系地址(A)收信人Felfe&amp;Lynch(B)街道第三大道805(C)城市紐約城(D)州紐約(E)國家美國(F)區(qū)號(hào)10022(v)計(jì)算機(jī)可讀方式(A)介質(zhì)類型磁盤，5.25英寸，360kb儲(chǔ)存(B)計(jì)算機(jī)IBMPS/2(C)操作系統(tǒng)PC-DOS(D)軟件Wordperfect(vi)現(xiàn)在申請(qǐng)數(shù)據(jù)(A)申請(qǐng)?zhí)?B)提交日期(C)分類(vii)在先申請(qǐng)數(shù)據(jù)(A)申請(qǐng)?zhí)朠CT/US93/07453(B)提交日期1993年8月9號(hào)(vii)在先申請(qǐng)數(shù)據(jù)(A)申請(qǐng)?zhí)?7/928,930(B)提交日期1992年8月12號(hào)(viii)代理人/律師信息(A)姓名Hanson，NormanD.(B)注冊(cè)號(hào)30,946(C)參考/存檔號(hào)ROGO211.4-PCT(ix)電訊信息(A)電話(212)688-9200(B)傳真(212)838-3884(2)SEQIDNO1的信息(i)序列特征(A)長(zhǎng)度18個(gè)氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓?fù)鋵W(xué)線性(xi)序列描述SEQIDNO1AspTrpLeuLysAlaPheTyrAspLysValAlaGluLysLeuLys51015GluAlaPhe(2)SEQIDNO2的信息(i)序列特征(A)長(zhǎng)度18個(gè)氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓?fù)鋵W(xué)線性(xi)序列描述SEQIDNO2LysTrpLeuAspAlaPheTyrLysAspValAlaLysGluLeuGlu51015LysAlaPhe(2)SEQIDNO3的信息(i)序列特征(A)長(zhǎng)度17個(gè)氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓?fù)鋵W(xué)線性(xi)序列描述SEQIDNO3AspTrpLeuLysAlaPheTyrAspLysAlaGluLysLeuLysGlu51015AlaPhe(2)SEQIDNO4的信息(i)序列特征(A)長(zhǎng)度22個(gè)氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓?fù)鋵W(xué)線性(xi)序列描述SEQIDNO4ProLysLeuGluGluLeuLysGluLysLeuLysGluLeuLeuGlu51015LysLeuLysGluLysLeuAla20(2)SEQIDNO5的信息(i)序列特征(A)長(zhǎng)度16個(gè)氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓?fù)鋵W(xué)線性(xi)序列描述SEQIDNO5ValSerSerLeuLysGluTyrTrpSerSerLeuLysGluSerPhe51015Ser(2)SEQIDNO6的信息(i)序列特征(A)長(zhǎng)度20個(gè)氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓?fù)鋵W(xué)線性(xi)序列描述SEQIDNO6ValSerSerLeuLeuSerSerLeuLysGluTyrTrpSerSerLeu51015LysGluSerLeuSer20(2)SEQIDNO7的信息(i)序列特征(A)長(zhǎng)度24個(gè)氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓?fù)鋵W(xué)線性(xi)序列描述SEQIDNO7ValSerSerLeuLeuSerSerLeuLeuSerSerLeuLysGluTyr51015TrpSerSerLeuLysGluSerGluSer20(2)SEQIDNO8的信息(i)序列特征(A)長(zhǎng)度22個(gè)氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓?fù)鋵W(xué)線性(xi)序列描述SEQIDNO8ProValLeuAspGluPheArgGluLysLeuAsnGluGluLeuGlu51015AlaLeuLysGlnLysMetLys20(2)SEQIDNO9的信息(i)序列特征(A)長(zhǎng)度22個(gè)氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓?fù)鋵W(xué)線性(xi)序列描述SEQIDNO9ProLeuAlaGluAspLeuGlnThrLysLeuAsnGluAsnValGlu51015AspLeuArgLysGlnLeuVal20權(quán)利要求1.治療被實(shí)驗(yàn)者內(nèi)毒素血癥的方法，它包括給被實(shí)驗(yàn)者施用有效量的無蛋白無肽含足量一種膽烷酸或膽烷酸鹽和一種磷脂的組合物，從而減輕被實(shí)驗(yàn)者的內(nèi)毒素血癥。2.權(quán)利要求1中的方法，其中膽烷酸或膽烷酸鹽是膽汁酸或膽汁酸鹽。3.權(quán)利要求2中的方法，其中磷脂是磷脂酰膽堿。4.權(quán)利要求1中的方法，其中組合物可進(jìn)一步包含一種中性脂。5.權(quán)利要求4中的方法，其中中性脂是甘油三脂。6.權(quán)利要求1中的方法，其中膽汁酸是膽酸。7.權(quán)利要求1中的方法，其中膽汁酸鹽是膽酸鹽。8.權(quán)利要求7中的方法，其中膽酸鹽是膽酸鈉。9.權(quán)利要求2中的方法，其中組合物可進(jìn)一步包括一種中性脂。10.權(quán)利要求9中的方法，磷脂是磷脂酰膽堿而且中性脂為甘油三脂。11.權(quán)利要求1中的方法，它包括靜脈內(nèi)施用所述組合物。12.權(quán)利要求1中的方法，它包括口服所述組合物。13.治療內(nèi)毒素血癥中有用的組成物，其包括有效量的(i)一種膽烷酸或膽烷酸鹽，(ii)一種中性脂和(iii)一種磷脂，其中所述組合物無蛋白無肽。14.權(quán)利要求13中的組合物，其中所說膽烷酸或膽烷酸鹽是膽汁酸或膽汁酸鹽。15.權(quán)利要求14中的組合物，其中所說膽汁鹽是膽酸鈉。16.權(quán)利要求13中的組合物，其中所說中性脂是甘油三脂。17.權(quán)利要求13中的組合物，其中所說磷脂是磷脂酰膽堿。18.權(quán)利要求13中的組合物，其中所說膽汁鹽是膽酸，中性脂是甘油三脂，而磷脂是磷脂酰膽堿。19.治療內(nèi)毒素血癥有用的無蛋白無肽組合物，它包括(a)至少一種在量上相當(dāng)于組合物中總脂重量的大約3％-50％的中性脂；(b)至少一種磷脂。20.權(quán)利要求19中的無蛋白無肽組合物，其中中性脂是甘油三脂。21.權(quán)利要求19中的無蛋白無肽組合物，其中所說磷脂為磷脂酰膽堿。22.權(quán)利要求19中的無蛋白無肽組合物，其中至少一種中性脂包括膽固醇基酯。23.權(quán)利要求19中的無蛋白無肽組合物，其進(jìn)一步包括神經(jīng)鞘氨醇。24.減輕被實(shí)驗(yàn)者內(nèi)毒素血癥的方法，其中包括給被實(shí)驗(yàn)者施用有效量的無蛋白無肽組合物，該組合物包括至少一種與內(nèi)毒素血癥相關(guān)內(nèi)毒素相聯(lián)的磷脂。25.權(quán)利要求24中的方法，其中所說組合物進(jìn)一步包括至少一種中性脂。26.權(quán)利要求24中的方法，它包括以大丸劑方式施用組合物。27.權(quán)利要求24中的方法，它包括靜脈內(nèi)施用所述組合物。28.權(quán)利要求24中的方法，它包括足量施用所說組合物，以保證被實(shí)驗(yàn)者每公斤體重高達(dá)800mg的磷脂。29.權(quán)利要求28中的方法，它包括足量施用所說組合物，以保證被實(shí)驗(yàn)者每公斤體重高達(dá)400mg的磷脂。30.權(quán)利要求28中的方法，它包括足量施用所說組合物，以保證被實(shí)驗(yàn)者每公斤體重高達(dá)200mg的磷脂。31.權(quán)利要求28中的方法，它包括足量施用所說組合物，以保證被實(shí)驗(yàn)者每公斤體重高達(dá)100mg的磷脂。32.權(quán)利要求24中的方法，其中磷脂是磷脂酰膽堿。33.權(quán)利要求24中的方法，其中磷脂是神經(jīng)鞘脂類。34.權(quán)利要求25中的方法，其中中性脂是甘油三脂。35.權(quán)利要求25中的方法，其中中性脂是膽甾醇脂。36.權(quán)利要求25中的方法，其中組合物包括高達(dá)組合物重量80％的中性脂。37.權(quán)利要求36中的方法，其中中性脂以高達(dá)組合物重量70％的量存在。38.權(quán)利要求37中的方法，其中中性脂以高達(dá)組合物重量50％的量存在。39.權(quán)利要求38中的方法，其中中性脂以高達(dá)組合物重量10％的量存在。40.權(quán)利要求24中的方法，其中組合物進(jìn)一步包括一種甾醇。41.權(quán)利要求40中的方法，其中甾醇是β-谷甾醇和一種植物甾醇。42.權(quán)利要求25中的方法，其中中性脂是一種酯化的脂。43.權(quán)利要求25中的方法，其中中性脂是一種非酯化的脂。44.權(quán)利要求42中的方法，其中酯化的脂是脂化的膽甾醇。45.權(quán)利要求43中的方法，其中非酯化的脂是非酯化膽甾醇。46.減輕被實(shí)驗(yàn)者內(nèi)毒素血癥的方法，其中包括給被實(shí)驗(yàn)者施用有效量的無蛋白無肽組合物，該組合物包括至少一種與內(nèi)毒素血癥相關(guān)內(nèi)毒素相聯(lián)的磷脂。47.權(quán)利要求46中的方法，其中組合物進(jìn)一步包括至少一種中性脂。48.權(quán)利要求46中的方法，它包括以大丸劑方式施用所說組合物。49.權(quán)利要求46中的方法，它包括以靜脈內(nèi)方式施用所說組合物。50.權(quán)利要求46中的方法，它包括足量施用所說組合物，以保證被實(shí)驗(yàn)者每公斤體重高達(dá)800mg的磷脂。51.權(quán)利要求50中的方法，它包括足量施用組合物，以保證被實(shí)驗(yàn)者每公斤體重高達(dá)400mg的磷脂。52.權(quán)利要求50中的方法，它包括足量施用組合物，以保證被實(shí)驗(yàn)者每公斤體重高達(dá)200mg的磷脂。53.權(quán)利要求50中的方法，它包括足量施用組合物，以保證被實(shí)驗(yàn)者每公斤體重高達(dá)100mg的磷脂。54.權(quán)利要求46中的方法，其中磷脂是磷脂酰膽堿。55.權(quán)利要求46中的方法，其中磷脂是神經(jīng)鞘磷脂類。56.權(quán)利要求47中的方法，其中中性脂是甘油三脂。57.權(quán)利要求47中的方法，其中中性脂是膽甾醇脂。58.權(quán)利要求47中的方法，其中組合物包括高達(dá)組合物重量80％的中性脂。59.權(quán)利要求58中的方法，其中中性脂以高達(dá)組合物重量70％的量存在。60.權(quán)利要求59中的方法，其中中性脂以高達(dá)組合物重量50％的量存在。61.權(quán)利要求60中的方法，其中中性脂以高達(dá)組合物重量10％的量存在。62.權(quán)利要求46中的方法，其中組合物進(jìn)一步包括一種甾醇。63.權(quán)利要求62中的方法，其中甾醇是β-谷甾醇和一種植物甾醇。64.權(quán)利要求47中的方法，其中中性脂是一種酯化的脂。65.權(quán)利要求47中的方法，其中中性脂是一種非酯化的脂。66.權(quán)利要求65中的方法，其中酯化的脂是膽甾醇脂。67.權(quán)利要求66中的方法，其中非酯化的脂是非酯化膽甾醇。全文摘要本發(fā)明公開了對(duì)內(nèi)毒素所致毒性的治療和預(yù)防。通過給被實(shí)驗(yàn)者施用含組合物的磷脂達(dá)到此目的。組合物無蛋白無肽，可能含有甘油三脂、其它極性或中性脂。膽汁酸或膽汁酸鹽。文檔編號(hào)A61K38/00GK1158087SQ95195173公開日1997年8月27日申請(qǐng)日期1995年8月10日優(yōu)先權(quán)日1994年8月10日發(fā)明者D·M·萊文,T·S·帕克,A·L·羅賓,B·R·戈登,S·D·薩爾申請(qǐng)人:羅戈辛研究院