專利名稱：一種細(xì)菌內(nèi)毒素或熱原檢測的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及細(xì)菌內(nèi)毒素或熱原檢測；特別是涉及一種應(yīng)用超濾處理的細(xì)菌內(nèi)毒素 或熱原檢測的方法。
背景技術(shù)：
細(xì)菌內(nèi)毒素系存在與革蘭氏陰性細(xì)菌細(xì)胞壁外膜中的脂多糖成分，在理化特性上 屬于兼具親水性與疏水性的兩性分子，攜帶正電與負(fù)電荷。內(nèi)毒素是一類具有高度活性的 分子，對機(jī)體具有廣泛的生物學(xué)作用。內(nèi)毒素對機(jī)體可引發(fā)一系列的毒害作用是熱原反應(yīng) 的主要誘因，一納克的內(nèi)毒素足以引起健康成人產(chǎn)生發(fā)熱反應(yīng)；白細(xì)胞數(shù)目改變(開始為 白細(xì)胞減少，數(shù)小時后為白細(xì)胞增多)；皮膚炎癥；休克和其它等。注射用的藥物制劑(包括 各種注射液、凍干粉針、注射用水等)、醫(yī)療器械(臨床診斷產(chǎn)品、各種洗液、檢驗用試劑)、 生化試劑等對細(xì)菌內(nèi)毒素含量均有嚴(yán)格的限量規(guī)定。按照現(xiàn)有的中國藥典、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)、其它 技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)中，對于細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法，描述了操作的要求和注意事項，提出了通過稀釋來控 制對內(nèi)毒素檢查的干擾，但沒有對待測樣品進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素的分離制備、同時又去除影響 內(nèi)毒素檢測的干擾成分等方法，因此，有些藥物制劑，如清開靈注射液、其它天然藥物(包 括中藥)注射制劑中，難以實施細(xì)菌內(nèi)毒素的檢查，沒有細(xì)菌內(nèi)毒素的檢測指標(biāo)。對于清開 靈注射液，它本身具有清熱解毒，化痰通絡(luò)，醒神開竅的功效，是中醫(yī)里用于高燒和上呼吸 道感染的一線用藥，但它在使用中常常發(fā)生過敏性休克、皮炎、高熱等不良反應(yīng)，這些都與 清開靈注射液的細(xì)菌內(nèi)毒素的質(zhì)量控制密切相關(guān)?，F(xiàn)行的中國藥典中，對中藥和其它藥物 注射劑，通過以家兔為供試動物的熱原檢查法，判斷供試品中所含熱原的限度是否符合規(guī) 定，但當(dāng)這些藥物本身具有退熱降溫的功效時，所測定的結(jié)果往往不可靠，易出現(xiàn)假陰性的 結(jié)果，如清開靈注射液在生產(chǎn)中就經(jīng)常發(fā)生這種情形，導(dǎo)致成品制劑中的細(xì)菌內(nèi)毒素和熱 原超過藥典規(guī)定而未能檢查出來，致使不合格品進(jìn)入藥品流通市場。中國發(fā)明專利申請(申請?zhí)?00510045847. 2) “一種定量測定樣品中內(nèi)毒素濃度 的判斷方法”公開了一種定量測定樣品中內(nèi)毒素濃度的判斷方法將內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品和待測 樣品做系列稀釋；將上述經(jīng)過系列稀釋的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣品分別與鱟試劑反應(yīng)，在 內(nèi)毒素測定儀上測得濁度值；該發(fā)明提出了定量測定樣品中內(nèi)毒素濃度的判斷方法，定量 給出了通過標(biāo)準(zhǔn)曲線來計算樣品中內(nèi)毒素濃度的試驗誤差，也可以與內(nèi)毒素測定儀、動態(tài) 比濁定量法配合使用，判斷定量測定樣品內(nèi)毒素濃度的試驗誤差，從而提高了測定結(jié)果的 準(zhǔn)確性。
權(quán)利要求
一種細(xì)菌內(nèi)毒素或熱原檢測的方法，其特征在于包括如下步驟(1)超濾處理將樣品溶液用除熱原處理的切向流超濾膜過濾，超濾膜的截留分子量為1-15kd，保留未透過液作為初始超濾濃縮液，當(dāng)初始超濾濃縮液的體積達(dá)到樣品原液的5％～20％時，用初始超濾濃縮液0.5～5倍體積的無熱原水沖洗超濾膜和管路得清洗液，將清洗液與初始超濾濃縮液合并為超濾濃縮液；收集超濾透過液備用；所述的樣品溶液來源于液體樣品或配置的液體樣品；(2)細(xì)菌內(nèi)毒素或熱原檢查按照中國藥典2005版附錄的方法檢測超濾濃縮液中細(xì)菌內(nèi)毒素的含量；或者是按照中國藥典2005版附錄熱原檢查方法，對超濾濃縮液進(jìn)行熱原檢測。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的細(xì)菌內(nèi)毒素或熱原檢測的方法，其特征在于所述的步驟(1) 還包括初始超濾濃縮液的洗滌，初始超濾濃縮液的洗滌是指當(dāng)初始超濾濃縮液的體積達(dá)到 樣品原液的5% 20%時，該初始超濾濃縮液為第一次超濾濃縮液，向第一次超濾濃縮液 中加入第一次超濾濃縮液1-3倍體積的無熱原水，進(jìn)行超濾處理，當(dāng)?shù)诙纬瑸V濃縮液的 體積又減少到第一次超濾濃縮液體積時，再加入第一次超濾濃縮液1-3倍體積的無熱原水 進(jìn)行超濾處理；重復(fù)加入第一次超濾濃縮液1-3倍體積的無熱原水進(jìn)行超濾處理2-7次； 合并收集超濾濃縮液與對超濾膜與和管路清洗液即獲得超濾濃縮液，用于內(nèi)毒素和熱原檢 測。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的細(xì)菌內(nèi)毒素或熱原檢測的方法，其特征在于所述的超 濾膜為超濾膜包或濾芯。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的細(xì)菌內(nèi)毒素或熱原檢測的方法，其特征在于所述的超濾膜 的截留分子量為5 10KD。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的細(xì)菌內(nèi)毒素或熱原檢測的方法，其特征在于所述配置的液 體樣品是指將待檢測固態(tài)樣品用無熱原水溶解，置于除熱原處理的容器中所得的樣品溶 液。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的細(xì)菌內(nèi)毒素或熱原檢測的方法，其特征在于所述的液體樣 品為中藥注射制劑、水、化學(xué)試劑或醫(yī)用透析液；或者是所述液體樣品為動物、植物或微生 物的提取液。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的細(xì)菌內(nèi)毒素或熱原檢測的方法，其特征在于所述的中藥注 射制劑為清開靈注射液、清開靈凍干粉針、魚腥草注射液及凍干粉針、艾迪注射液、白花蛇 舌草注射液、板藍(lán)根注射液及凍干粉針、板藍(lán)解毒注射液、參附注射液參麥注射液、柴胡注 射液、柴辛感冒注射液、川參通注射液、穿心蓮注射液喘可治注射液、刺五加注射液、丹參滴 注液、丹參注射液、當(dāng)歸寄生注射液、燈盞花素注射液、燈盞細(xì)辛注射液、丁公藤注射液、復(fù) 方半邊蓮注射液、復(fù)方大青葉注射液、復(fù)方風(fēng)濕寧注射液、復(fù)方苦參注射液、復(fù)方蒲公英注 射液、復(fù)方麝香注射液、冠心寧注射液、紅花注射液、紅茴香注射液、黃瑞香注射液、黃芪注 射液、苦黃注射液、苦木注射液、勒馬回注射液、羚羊角注射液、脈絡(luò)寧注射液、毛冬青注射 液、生脈注射液、舒肝寧注射液、雙黃連注射液粉針凍干粉、田基黃注射液、痛可寧注射液、 香丹注射液、雪蓮注射液、雪上一枝蒿總堿注射液、血栓通注射液、益母草注射液、茵桅黃注 射液、銀黃注射液、魚金注射液或正清風(fēng)痛寧注射液。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種細(xì)菌內(nèi)毒素或熱原檢查的方法，該方法先將樣品溶液用除熱原處理的切向流超濾膜過濾，超濾膜的截留分子量為1-15kd，保留未透過液作為初始超濾濃縮液，當(dāng)初始超濾濃縮液的體積達(dá)到樣品原液的5％～20％時，用初始超濾濃縮液0.5～5倍體積的無熱原水沖洗超濾膜和管路得清洗液，將清洗液與初始超濾濃縮液合并為超濾濃縮液；本發(fā)明通過細(xì)菌內(nèi)毒素的定量分離制備，消除了藥物制劑中所含的化學(xué)成分干擾細(xì)菌內(nèi)毒素與鱟試劑反應(yīng)過程而干擾細(xì)菌內(nèi)毒素檢測結(jié)果的可靠性，或無法直接用凝膠檢查法檢查藥物制劑中的細(xì)菌內(nèi)毒素。
文檔編號G01N33/53GK101832998SQ20091003783
公開日2010年9月15日 申請日期2009年3月12日 優(yōu)先權(quán)日2009年3月12日
發(fā)明者張曉元, 郭勇 申請人:華南理工大學(xué)