本發(fā)明涉及天然藥物化學和醫(yī)藥技術(shù)領域，具體涉及海南地不容提取物在制備治療痛風性關(guān)節(jié)炎制劑上的應用。

背景技術(shù)：

痛風是一種嘌呤代謝紊亂引起的高尿酸血癥疾病。發(fā)病的原因是由于體內(nèi)尿酸積聚過多，沉積在關(guān)節(jié)的骨和軟骨上。其中半數(shù)以上的患者首先在第1跖跗關(guān)節(jié)發(fā)病，并出現(xiàn)典型的痛風性關(guān)節(jié)炎。據(jù)統(tǒng)計，痛風性關(guān)節(jié)炎的患者中，中年男性發(fā)病率明顯高于女性。而且該病起病急驟，嚴重者可在夜間疼醒。發(fā)病時，關(guān)節(jié)局部腫脹，皮膚暗紅，壓痛明顯，不敢活動。發(fā)病的間歇期可持續(xù)數(shù)月或者數(shù)年，而且隨著病情的加重，間歇期越來越短。臨床檢查表現(xiàn)為血尿酸升高，關(guān)節(jié)的滑液檢查可查到尿酸結(jié)晶，嚴重者可在耳輪、耳垂、關(guān)節(jié)皮下出現(xiàn)痛風石。由于痛風性關(guān)節(jié)炎多伴隨尿酸結(jié)晶的沉積，因此常用的治療關(guān)節(jié)炎的藥物對通風性關(guān)節(jié)炎很難發(fā)揮作用。臨床上，秋水仙可以快速緩解痛風的癥狀，是治療痛風的常用藥。但是由于秋水仙堿具有一定的毒性，同時還具有導致腹瀉和誘發(fā)嘔吐的副作用，在治療的過程中給痛風患者帶來諸多的風險和不適。

海南地不容(stephaniahainanensish.s.loet.y.tsoong)，屬于防己科千金藤屬山烏龜亞屬山烏龜亞組，又名金不換、山烏龜，塊根碩大為藥用有效部位，是海南當?shù)靥赜械乃幉?；味道苦澀，性寒，有微毒，具有清熱解毒、除瘧、止痛等功能。海南地不容是少?shù)民族黎族的傳統(tǒng)醫(yī)藥，傳統(tǒng)功效常用于清熱解毒、抗菌抑炎、鎮(zhèn)靜止痛等。關(guān)于海南地不容的藥理學研究目前甚少，多數(shù)還只是針對其生物堿成分的高效液相測定或光譜分析，更是未見其藥效學的報道。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明提出海南地不容提取物的在制備治療痛風性關(guān)節(jié)制劑中的應用，同時還提出了上述海南地不容提取物的制備方法。

本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣實現(xiàn)的：

海南地不容提取物在制備治療痛風性關(guān)節(jié)炎制劑上的應用。

進一步，所述的海南地不容提取物為水提取物、乙醇提取物和/或有機溶劑萃取物。

進一步，所述的萃取用有機溶劑為石油醚和/或正丁醇。

進一步，上述海南地不容水提取物的制備方法，包括以下步驟：

取海南地不容藥材，粉碎后加入地不容藥材質(zhì)量10-20倍的水，加熱至沸騰1-3h，趁熱過濾，干燥，得到海南地不容水提取物。

進一步，上述海南地不容乙醇提取物的制備方法，包括以下步驟：

取海南地不容藥材，粉碎后放置在容器中，向容器中加入海南地不容質(zhì)量5-10倍的乙醇，加熱回流提取，過濾，得到提取液，提取液過濾即得海南地不容乙醇提取物；所述的乙醇體積濃度為70-95％

進一步，上述海南地不容提有機溶劑萃取物的制備方法，包括以下步驟：

取海南地不容藥材，粉碎后放置在容器中，向容器中加入地不容質(zhì)量5-10倍的乙醇，加熱回流提取，過濾，得到提取液，提取液過濾即得海南地不容乙醇提取物；提取液回收乙醇至無醇味烘干，采用有機溶劑萃取，即得海南地不容有機溶劑萃取物。

一種治療痛風性關(guān)節(jié)炎的制劑，包括上述海南地不容提取物。

進一步，所述的治療痛風性關(guān)節(jié)炎的制劑，還包括藥學上可接受的輔料。

進一步，所述的制劑為片劑、口服液、膠囊劑、顆粒劑、注射液或者粉針劑。

本發(fā)明的有益效果：

本發(fā)明所述的海南地不容提取物，可以顯著降低痛風性關(guān)節(jié)炎大鼠的關(guān)節(jié)腫脹度，降低大鼠脾體指數(shù)、降低痛風模型大鼠白細胞、中性粒細胞和淋巴細胞水平，大鼠血中尿酸水平也有明顯的下降，對痛風性關(guān)節(jié)炎治療效果顯著。本發(fā)明所述的地不容提取物制備方法簡便，容易操作，可以直接使用，也可以添加相應輔料制備成一定劑型的制劑使用。

附圖說明

為了更清楚地說明本發(fā)明實施例或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對實施例或現(xiàn)有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本發(fā)明的一些實施例，對于本領域普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動性的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他的附圖。

圖1為海南地不容提取物在造模24h內(nèi)對痛風性關(guān)節(jié)炎大鼠踝關(guān)節(jié)腫脹度的影響(x±s，n＝10)。

注：與模型組比較，*p<0.05，**p<0.01

圖2為海南地不容提取物對痛風性關(guān)節(jié)炎大鼠脾指數(shù)、腎指數(shù)的影響(x±s，n＝10)。

注：與模型組比較，*p<0.05，**p<0.01

圖3為海南地不容提取物對痛風性關(guān)節(jié)炎大鼠白細胞、中性粒細胞及淋巴細胞影響(x±s，n＝10)。

注：與模型組比較，*p<0.05，**p<0.01

圖4為海南地不容提取物對痛風性關(guān)節(jié)炎大鼠血清ua的影響(x±s，n＝10)。

注：與模型對照組比較，*p<0.05，**p<0.01

圖中，①為海南地不容乙醇提取物，②為海南地不容石油醚萃取物，③為海南地不容正丁醇萃取物。

具體實施方式

下面將結(jié)合本發(fā)明實施例中的附圖，對本發(fā)明實施例中的技術(shù)方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本發(fā)明一部分實施例，而不是全部的實施例。基于本發(fā)明中的實施例，本領域普通技術(shù)人員在沒有作出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發(fā)明保護的范圍。

實施例1

海南地不容水提取物的制備

稱取海南地不容藥材1kg，粉碎后放置在容器中，向容器中加入蒸餾水10-20l，加熱至沸騰2h，趁熱過濾得到海南地不容水提取物25g。

實施例2

取海南地不容藥材5kg，粉碎，用體積濃度70-95％的乙醇溶液熱回流提取(25l×3次)，合并提取液，濃縮至無醇味得到乙醇提取濃縮液(2l)，烘干，得到海南地不容的乙醇提取物90g。

實施例3

取海南地不容藥材5kg，粉碎，用體積濃度70-95％的乙醇溶液熱回流提取(25l×3次)，合并提取液，濃縮至無醇味得到乙醇提取濃縮液(2l)，將所得乙醇提取濃縮液用水稀釋至10l，依次用石油醚(3l×3次)和水飽和的正丁醇(5l×3次)萃取，減壓濃縮，分別得到石油醚萃取物(50g)和正丁醇萃取物(105g)。

實施例4

按實施例1-3任一項中的方法制得提取物，按其與賦形劑重量比為1:9的比例加入賦形劑，制粒壓片。

實施例5

按實施例1方法先制得水提取物，按常規(guī)口服液制法制成口服液。

實施例7

膠囊劑或顆粒劑的制備方法：按實施例1-3任一項中的方法先制得提取物，按其與賦形劑重量比為1:8的比例加入賦形劑，制成膠囊或顆粒劑。

實施例8

注射液的制備方法：按實施例1制得水提取物，加注射用水充分溶解，精濾，灌封滅菌制成注射液。

實施例9

無菌粉針的制備方法：按實施例1的方法先制得水提取物，溶于無菌注射用水中，攪拌使充分溶解，用無菌抽濾漏斗過濾，再無菌精濾，分裝于安瓿，低溫冷凍干燥后無菌熔封得粉針劑。

不同地不容提取物療效比較

藥物：海南地不容提取物分別按照實施例1～3制得。秋水仙堿片，批號161206，規(guī)格0.5mg/s，西雙版納版納藥業(yè)有限責任公司；取6片秋水仙堿，研磨，加蒸餾水至200ml，混勻配制成濃度為0.15mg/ml秋水仙堿溶液。微晶尿酸鈉(msu)，參照coderre方法，194ml蒸餾水加6ml1mol/lnaoh，煮沸，加1g尿酸，用1ml1mol/lhcl調(diào)ph至7.2，攪拌冷卻，4℃冰箱保存24h，去上清，用濾紙將沉淀物水分吸干，放入70℃干燥箱烘2h，取出，刮下粉末，放入研缽內(nèi)研成細末，用孔徑250μm的金屬篩過篩，制成msu粉末備用。

清潔級sd大鼠，雄性，體重200～220g。將大鼠隨機分為18組：正常對照組、模型對照組、陽性對照組(秋水仙堿0.0015g·kg-1)、海南地不容提取物①～③(乙醇提取物、石油醚萃取物、正丁醇萃取物)各設3個劑量組(100mg·kg-1、200mg·kg^-1、300mg·kg-1)，每組10只。造模前給藥5d，1次/d，造模后繼續(xù)給藥。受試藥組分別灌胃給予不同劑量的海南地不容提取物，正常對照組灌胃給予相應體積的水，陽性對照藥灌胃給予相應劑量的秋水仙堿藥液。

取1000mgmsu加9ml生理鹽水，再加lml吐溫-80，加熱攪拌，配制成10mlmsu混懸液(濃度為100mg·ml-1)，給藥30min后大鼠右后踝關(guān)節(jié)屈曲，用手觸摸可捫及兩骨突部，75％醫(yī)用酒精局部消毒后，用6號注射針在左右后側(cè)踝關(guān)節(jié)背側(cè)從45°方向插入脛骨肌腿內(nèi)側(cè)，將0.1mlmsu混懸液注入到踝關(guān)節(jié)腔，制備急性痛風性關(guān)節(jié)炎模型，伸曲、旋轉(zhuǎn)運動2min，正常對照組大鼠用無菌生理鹽水代替msu混懸液。之后按照以下的方法，分別測定大鼠的不同生理指標。

1.1關(guān)節(jié)腫脹度測定

造模前在大鼠右后足踝關(guān)節(jié)三叉處外部繞踝關(guān)節(jié)用記號筆畫圈做記號，測量大鼠右足至標記處排水容積兩次，取平均值為給藥前關(guān)節(jié)體積；造模后1h、4h、6h、24h測量大鼠右足至標記處排水容積，按公式計算腫脹度。

腫脹度(ml)＝致炎后踝關(guān)節(jié)排水容積(ml)－致炎前踝關(guān)節(jié)排水容積(ml)。

1.2血液分析

造模24h，末次給藥30min后，測完指定部位的排水容積后，從大鼠眼眶后靜脈叢采血5ml，其中4ml室溫下自然凝血2h，3500r·min^-1離心10min，吸取血清，參照試劑盒說明書依法測定血清ua、no含量；另1ml加10μledta抗凝，使用動物血液分析儀依法測定白細胞、中性粒細胞、淋巴細胞數(shù)量。

1.3生化及組織學指標

在玻璃紙上用銳利的刀片從大鼠右踝關(guān)節(jié)背側(cè)快速切斷筋膜，切取踝關(guān)節(jié)三叉處除骨的全部軟組織及軟骨，稱重并加9倍量的冰生理鹽水制成10％組織勻漿，3500r·min^-1離心10min，吸取上清，參照試劑盒說明書依法測定總蛋白、no含量；處死取脾臟、腎臟，稱重，計算脾體系數(shù)和腎體系數(shù)。

以上測定數(shù)據(jù)采用統(tǒng)計學分析，計量資料數(shù)據(jù)結(jié)果以x±s表示，組間比較采用t檢驗。具體結(jié)果分析如下。由于水提取物實驗數(shù)據(jù)和乙醇提取物幾乎一致，差異很小，為了便于對照分析，對實驗結(jié)果進行統(tǒng)計分析的時候只選取了乙醇提取物。

2.1海南地不容提取物對痛風性關(guān)節(jié)炎大鼠關(guān)節(jié)腫脹度的影響

與正常對照組相比，模型組大鼠踝關(guān)節(jié)腫脹度在造模后1-6h內(nèi)均顯著升高(p<0.01)，說明造模成功。

造模后1h，與模型組相比，秋水仙堿組、海南地不容乙醇提取物、石油醚萃取物、正丁醇萃取物各劑量組大鼠踝關(guān)節(jié)腫脹度均顯著下降(p<0.01)；造模后4h，與模型組相比，秋水仙堿組、海南地不容乙醇提取物、石油醚萃取物、正丁醇萃取物各劑量組大鼠踝關(guān)節(jié)腫脹度均顯著下降(p<0.01)；造模后6h，與模型組相比，秋水仙堿組、海南地不容乙醇提取物、石油醚萃取物、正丁醇萃取物高劑量組大鼠踝關(guān)節(jié)腫脹度均顯著下降(p<0.05)；海南地不容提取物乙醇提取物、石油醚萃取物、正丁醇萃取物中，低劑量組大鼠踝關(guān)節(jié)腫脹度亦有不同程度降低的趨勢。

可以看出，本發(fā)明所述的地不容提取物在100-300mg·kg^-1劑量范圍內(nèi)，對大鼠關(guān)節(jié)腫脹具有顯著的消腫效果。結(jié)果見圖1。

2.2海南地不容提取物對痛風性關(guān)節(jié)炎大鼠脾體指數(shù)、腎體指數(shù)的影響

與正常對照組相比，模型組腎體指數(shù)明顯降低，脾體指數(shù)明顯升高(p<0.05、0.01)；與模型對照組相比，秋水仙堿組大鼠腎體指數(shù)顯著升高，脾體指數(shù)顯著降低(p<0.05)；海南地不容乙醇提取物、石油醚萃取物、正丁醇萃取物高劑量組腎體指數(shù)明顯上升(p<0.01)，海南地不容乙醇提取物、石油醚萃取物、正丁醇萃取物各劑量組脾體指數(shù)均有不同程度的下降(p<0.05、0.01)。提示海南地不容提取物具有提高免疫能力和抗氧化能力的作用，有助于痛風的改善見圖2。

2.3對痛風性關(guān)節(jié)炎大鼠全血中血細胞水平的影響

與正常對照組相比，模型對照組的白細胞、中性粒細胞和淋巴細胞數(shù)量有升高的趨勢；與模型組相比秋水仙堿和海南地不容乙醇提取物、石油醚萃取物、正丁醇萃取物高劑量組大鼠的白細胞、中性粒細胞合淋巴細胞數(shù)量明顯減少(p<0.05、0.01)，海南地不容乙醇提取物、石油醚萃取物、正丁醇萃取物其余各劑量組均有降低趨勢。這些生化指標的顯著降低，提示海南地不容提取物具有顯著的抗炎作用見圖3。

2.4對痛風性關(guān)節(jié)炎大鼠血清ua水平的影響

各組大鼠血尿酸值結(jié)果顯示，與正常對照組相比，模型組血尿酸值明顯升高(p<0.05)；與模型組相比，海南地不容乙醇提取物、石油醚萃取物、正丁醇萃取物中高劑量組大鼠血尿酸明顯下降(p<0.05)。見圖4。

上述試驗結(jié)果表明，本發(fā)明所述的海南地不容水提取物、乙醇提取物、石油醚萃取物、正丁醇萃取物對大鼠痛風性關(guān)節(jié)炎具有治療作用。

不同劑量地不容提取物藥效的比較

分別配置不同濃度的海南地不容水提取物、乙醇提取物、石油醚萃取物、正丁醇萃取物，參照1.1中所述的方法，測定不同濃度對大鼠腫脹度的影響，腫脹度計算公式＝(給藥組足踝體積-正常組足踝體積)/正常組足踝體積×100％。其結(jié)果如表1所示。

表1不同濃度的提取物對大鼠腫脹度的影響(％)

隨著劑量的加大，各提取物對大鼠的消腫效果逐步提高，但是考慮到藥物劑量過大，容易產(chǎn)生各種副作用及耐藥性，因此，用藥劑量選擇100-1000mg/kg為宜。

以上所述僅為本發(fā)明的較佳實施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。