鹽酸普拉克索的藥物組合物及其在生物醫(yī)藥中的應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明公開了鹽酸普拉克索的藥物組合物及其在生物醫(yī)藥中的應(yīng)用，本發(fā)明提供的鹽酸普拉克索的藥物組合物中含有鹽酸普拉克索和一種結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物化合物(Ⅰ)，鹽酸普拉克索、化合物(Ⅰ)單獨作用時，對急性痛風性關(guān)節(jié)炎具有治療作用；鹽酸普拉克索和化合物(Ⅰ)聯(lián)合作用時，對急性痛風性關(guān)節(jié)炎的治療效果進一步提高，可以開發(fā)成治療急性痛風性關(guān)節(jié)炎的藥物，與現(xiàn)有技術(shù)相比具有突出的實質(zhì)性特點和顯著的進步。
【專利說明】
鹽酸普拉克索的藥物組合物及其在生物醫(yī)藥中的應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及鹽酸普拉克索的藥物組合物及在生物醫(yī)藥中 的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 普拉克索被用來治療特發(fā)性帕金森病的體征和癥狀，單獨或與左旋多巴聯(lián)用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的目的在于提供一種鹽酸普拉克索的藥物組合物，該藥物組合物中含鹽酸 普拉克索和一種結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物，鹽酸普拉克索和該天然產(chǎn)物可以協(xié)同治療急性痛風 性關(guān)節(jié)炎。
[0004] 本發(fā)明的上述目的是通過下面的技術(shù)方案得以實現(xiàn)的：
[0005] 一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物（I)，
[0006]
[0007] -種鹽酸普拉克索的藥物組合物，包括鹽酸普拉克索、如權(quán)利要求1所述的化合物 (I)和藥學上可以接受的載體，制備成需要的劑型。
[0008] 進一步地，藥學上可以接受的載體包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、 崩解劑、吸收促進劑、表面活性劑、吸附載體或潤滑劑。
[0009] 進一步地，所述劑型包括片劑、膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、 膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。
[0010] 上述化合物（I)的制備方法，包含以下操作步驟：（a)將臭靈丹草粉碎，用65~85% 乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇 萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a)中正丁醇萃取 物用大孔樹脂除雜，先用6 %乙醇洗脫8個柱體積，再用70 %乙醇洗脫8個柱體積，收集70 % 洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中70%乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠 分離，依次用體積比為50:1、25:1、15:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個組分；（d) 步驟(c)中組分4用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為10:1、5:1和2:1的二氯甲烷-甲醇 梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積 百分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~14個柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到 化合物(I)。
[0011]進一步地，化合物（I)的制備方法中，步驟(a)用75%乙醇熱回流提取，合并提取 液。
[0012]進一步地，化合物（I)的制備方法中，所述大孔樹脂為AB-8型大孔吸附樹脂。
[0013]進一步地，化合物（I)的制備方法中，步驟(a)中用二氯甲烷代替乙酸乙酯進行萃 取，得到二氯甲烷萃取物。
[0014] 上述化合物(I)在制備治療急性痛風性關(guān)節(jié)炎的藥物中的應(yīng)用。
[0015] 上述鹽酸普拉克索的藥物組合物在制備治療急性痛風性關(guān)節(jié)炎的藥物中的應(yīng)用。
[0016] 本發(fā)明的優(yōu)點：
[0017] 本發(fā)明提供的鹽酸普拉克索的藥物組合物含鹽酸普拉克索和一種結(jié)構(gòu)新穎的天 然產(chǎn)物，鹽酸普拉克索和該天然產(chǎn)物單獨作用時，對急性痛風性關(guān)節(jié)炎具有治療作用;二者 聯(lián)合作用時，對急性痛風性關(guān)節(jié)炎的治療效果進一步提高，可以開發(fā)成治療急性痛風性關(guān) 節(jié)炎的藥物。
【具體實施方式】
[0018] 下面結(jié)合實施例進一步說明本發(fā)明的實質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明保護范 圍。
[0019] 實施例1:化合物(I)分離制備及結(jié)構(gòu)確證
[0020]分離方法：（a)將臭靈丹草(3kg)粉碎，用75%乙醇熱回流提取(20LX3次），合并提 取液，濃縮至無醇味(4L)，依次用石油醚(4L X 3次）、乙酸乙酯(4L X 3次)和水飽和的正丁醇 (4LX3次）萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a)中 正丁醇萃取物用AB-8型大孔樹脂除雜，先用6%乙醇洗脫8個柱體積，再用70%乙醇洗脫8個 柱體積，收集70%洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中70%乙醇洗脫濃 縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為50:1 (8個柱體積）、25:1 (8個柱體積）、15:1 (8個柱體 積)和5:1(10個柱體積）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個組分；（d)步驟(c)中組分4用正 相硅膠進一步分離，依次用體積比為10:1(8個柱體積）、5:1(10個柱體積)和2:1(5個柱體 積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反 相硅膠分離，用體積百分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~14個柱體積洗脫液， 洗脫液減壓濃縮得到化合物（I) (HPLC歸一化純度大于98% )。
[0021] 結(jié)構(gòu)確證:冊431-]\^顯示[]\?^]+為111/2 357.1217，結(jié)合核磁特征可得分子式為 C21H18〇4,不飽和度為13。核磁共振氫譜數(shù)據(jù) SH(ppm，CD3C0CD3,500MHz):H-3(7.05，s)，H-4 (7.00，d，J = 7.6Hz)，H-5(7.12，d，J = 7.6Hz)，H-2'（7.04，d，J=1.8Hz)，H-4'（6.41，s)，H-6'（7.04，d，J=1.8Hz)，H-4"（6.89，d，J=12.3Hz)，H-5"（6.73，d，J = 12.3Hz)，H-7"a(4.12， d，J=ll ·4Ηζ)，H-7"b(4.17，d，J=ll ·4Ηζ)，H-8"a(5.13，s)，H-8"b(5.18，s)，0CH3-3' (3 · 85，s)，0CH3-5 '（ 3 · 85，s);核磁共振碳譜數(shù)據(jù)δ。(ppm，CD3COCD3，125MHz): 156 · 8 (C，2-C)， 103.7(CH，3-C)，122.5(C，3a-C)，107.8(CH，4-C)，146.8(CH，5-C)，145.1(C，6-C)，114.3(C， 7-C)，147.9(C，7a-C)，132.1(C，l，-C)，107.4(CH，2，-C)，162.2(C，3，-C)，105.4(CH，4，-C)， 160.2(C，5，-C)，107.4(CH，6，-C)，137.5(CH，4，，-C)，120.7(CH，5，，-C)，152.4(C，6，，-C)，79.2 (CH2，7" -C)，112 · 7 (CH2，8" -C)，56 · 1 (CH3，3 ' -OCH3)，56 · 1 (CH3，5 ' -OCH3)。氫譜顯示二取代2-芳基苯并呋喃結(jié)構(gòu)[SH7.05(lH，s，H-3)，7.00(lH，d，J = 7.6Hz，H-4)，7.12(lH，d，J = 7.6Hz， H-5)，7.04(lH，d，J=1.8Hz，H-2'），6.41(lH，s，H-4'），7.04(lH，d，J=1.8Hz，H-6'）]，兩個 甲氧基質(zhì)子信號[知3.85(3!1，8)和3.85(3H，s)]，一個四取代氧雜環(huán)庚烯環(huán)R H6.89(lH，d，J = 12.3Hz，H-4"），6.73(lH，d，J=12.3Hz，H-5"），4.12(lH，d，J=11.4Hz，H-7"a)，4.17(lH， d，J= 11.4Hz，H-7"b)]，以及一個環(huán)外亞甲基質(zhì)子信號 WH5.13(lH，s，H-8"a)，5.18(lH，s， H-8"b)]。碳譜顯示該化合物具有21個碳譜信號，包括兩個甲氧基，兩個亞甲基（一個烯屬 碳），八個次甲基以及九個季碳。通過和文獻中的核磁數(shù)據(jù)比較發(fā)現(xiàn)，該新化合物是一個苯 并咲喃型化合物。進一步的文獻查閱發(fā)現(xiàn)，該化合物和已知化合物moracin U具有相似的結(jié) 構(gòu)。比較兩者的核磁數(shù)據(jù)以及高分辨數(shù)據(jù)可以發(fā)現(xiàn)，該化合物和moracin U的區(qū)別在于多出 了一個不飽和度即一個雙鍵。進一步的HMBC譜解析發(fā)現(xiàn)，H2-8" /C-6"，H2-8" /C-7"，H-5" /C-8"以及H-4"/C-6"的相關(guān)性說明該化合物中多出來的雙鍵是位于C-6"和C-8"位之間的。H-0CH3-5'/C-5'以及H-0CH 3-3'/C-3'的相關(guān)性說明化合物中的C-5'以及C-3'位都是甲氧基取 代。綜合氫譜、碳譜、HMBC譜和N0ESY譜，以及文獻關(guān)于相關(guān)類型核磁數(shù)據(jù)，可基本確定該化 合物如下所示，立體構(gòu)型進一步通試驗確定，理論值與實驗值基本一致。該化合物化 學式及碳原子編號如下：
[0022]
[0023] 買施例2:藥理作用
[0024] 本實例使用尿酸鈉制備急性痛風性關(guān)節(jié)炎模型，觀察藥物治療前后受試關(guān)節(jié)周 徑、關(guān)節(jié)腔組織中前列腺素 E2(PGE)、腫瘤壞死因子-a(TNF-a)含量及關(guān)節(jié)腔積液白細胞數(shù) 量。
[0025] 1、材料與方法
[0026] 1.1動物
[0027] SD大鼠，雄性，清潔級，體重200~250g，由廣東醫(yī)學院實驗動物中心提供。在實驗 室正常飼養(yǎng)3d后供試。
[0028] 1.2試劑與樣品
[0029] 鹽酸普拉克索購自中國藥品生物制品檢定所?；衔铮↖)自制，制備方法見實施例 1。尿酸鈉(Sigma公司提供），前列腺素 E2(PGE2)放射免疫試劑盒(北京東亞免疫技術(shù)研究所 提供），腫瘤壞死因子-a(TNF-a)試劑盒(軍事醫(yī)學科學院研究所提供）。
[0030] 1.3大鼠分組及模型制備
[0031] 大鼠隨機分為5組，每組12只，分別為正常對照組（不造模）、模型對照組和鹽酸普 拉克索組（80mg · kg^1)、化合物（I)組（80mg · kg^1)、鹽酸普拉克索與化合物⑴組合物組 【40mg · kg"1鹽酸普拉克索+40mg · kg^1化合物（I)】。
[0032] 造模方法：用6號注射針在受試大鼠右側(cè)踝關(guān)節(jié)背側(cè)以45°角插入脛骨肌腱內(nèi)側(cè)， 將10 %尿酸鈉溶液按0.2mL/只注入踝關(guān)節(jié)腔內(nèi)。
[0033]造模第二天，給藥組按照上述劑量灌胃給藥，每日一次，連續(xù)3天;正常對照組和模 型對照組灌胃等量的生理鹽水。
[0034] 1.4大鼠關(guān)節(jié)腫脹度測定實驗
[0035]各組大鼠在造模前、造模后3h(給藥前）及最后一次給藥后3d，分別在受試踝關(guān)節(jié) 相同部位用無彈性軟尺測量其周長，觀察造模前及治療前后大鼠踝關(guān)節(jié)周長的變化。
[0036] 1 · 5關(guān)節(jié)腔中PGE2、TNF_a、白細胞的測定實驗
[0037]各組大鼠在最后一次給藥治療72h后斷頭處死，打開受試關(guān)節(jié)腔取關(guān)節(jié)積液，涂 片，進行白細胞計數(shù)；取下關(guān)節(jié)腔周圍軟組織，勻漿后采用放射免疫測定法測定組織中 PGE2、TNF-a，按試劑盒說明書操作。
[0038] 1.6統(tǒng)計學方法
[0039]實驗數(shù)據(jù)用均數(shù)土標準差(X土s)表示，應(yīng)用SPSS 18.0版統(tǒng)計軟件進行單因素方 差分析和t檢驗，以P<〇. 05為差異有統(tǒng)計學意義。
[0040] 2、實驗結(jié)果
[0041] 2.1對痛風性關(guān)節(jié)炎大鼠踝關(guān)節(jié)腫脹的影響
[0042]與正常對照組比較，模型對照組大鼠踝關(guān)節(jié)腫脹度明顯增加(P<0.01)。與模型對 照組比較，鹽酸普拉克索組、化合物（I)組大鼠關(guān)節(jié)腫脹程度明顯減小(P<〇.05)，鹽酸普拉 克索與化合物(I)組合物組關(guān)節(jié)腫脹程度減小(P0.01)。結(jié)果見表1。
[0043] 2.2對痛風性關(guān)節(jié)炎大鼠關(guān)節(jié)腔組織中PGE2、TNF-a水平及白細胞計數(shù)的影響 [0044]與正常對照組比，模型組大鼠關(guān)節(jié)腔組織中PGE2、TNF_a含量顯著升高(Ρ<〇.〇1) ; 與模型對照組比較，鹽酸普拉克索組、化合物（I)組大鼠關(guān)節(jié)腔組織中PGE2、TNF_a含量降低 (P<0.05);與模型對照組比較，鹽酸普拉克索與化合物（I)組合物組關(guān)節(jié)腔組織中PGE 2、 TNF-a含量顯著降低(P<0.01)。與正常對照組相比，模型對照組大鼠關(guān)節(jié)腔積液中白細胞 數(shù)量明顯升高(P<〇.01);與模型對照組比，鹽酸普拉克索組、化合物（I)組大鼠關(guān)節(jié)腔積液 中白細胞數(shù)量降低(P<〇.05)，鹽酸普拉克索與化合物（I)組合物組顯著降低(P<0.01)。試 驗結(jié)果見表2。
[0045]表1各組關(guān)節(jié)腫脹度變化的比較(mm)
[0046]
[0047] 表2各組大鼠關(guān)節(jié)腔組織中PGE2、TNF-a含量及白細胞計數(shù)
[0048]
[0049] 痛風為遺傳性和(或)獲得性引起的尿酸排泄減少和(或)嘌呤代謝障礙，急性痛風 性關(guān)節(jié)炎的根本病因是高尿酸血癥及其導致的關(guān)節(jié)局部尿酸鈉晶體的析出。應(yīng)用尿酸鈉局 部關(guān)節(jié)注射造成痛風性關(guān)節(jié)炎模型被認為是經(jīng)典的痛風性關(guān)節(jié)炎的造模方法，可用于評價 抗痛風性關(guān)節(jié)炎藥物的療效。
[0050] 尿酸鈉沉積到關(guān)節(jié)腔周圍時，誘使單核-巨噬細胞吞噬晶體、肥大細胞、多形核嗜 中性粒細胞聚集到其周圍，并釋放出致炎、致痛物質(zhì)，如組胺、前列腺素(PG)、白細胞三烯 B4、TNF_a等炎癥遞質(zhì)，產(chǎn)生很強的炎癥效應(yīng)及致痛效應(yīng)。PG作為第三信使是炎癥反應(yīng)的重 要遞質(zhì)，炎癥的發(fā)生發(fā)展與局部PG含量有密切關(guān)系。一般認為，在關(guān)節(jié)炎的發(fā)病過程中， PGE2的作用最為強烈。TNF-a作為炎癥趨化因子和激活因子在痛風性關(guān)節(jié)炎的發(fā)生、發(fā)展過 程中亦起重要作用。分析受試關(guān)節(jié)腔組織中PGE 2、TNF_a含量及關(guān)節(jié)積液中白細胞數(shù)量有利 于指導痛風的臨床診斷和治療。
[0051] 上述結(jié)果表明，鹽酸普拉克索、化合物（I)單獨作用時，對急性痛風性關(guān)節(jié)炎具有 治療作用;鹽酸普拉克索和化合物（I)聯(lián)合作用時，對急性痛風性關(guān)節(jié)炎的治療效果進一步 提高，可以開發(fā)成治療急性痛風性關(guān)節(jié)炎的藥物。
[0052]上述實施例的作用在于說明本發(fā)明的實質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明的保護 范圍。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當理解，可以對本發(fā)明的技術(shù)方案進行修改或者等同替換， 而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實質(zhì)和保護范圍。
【主權(quán)項】
1. 一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物（I)，2. -種鹽酸普拉克索的藥物組合物，其特征在于:包括鹽酸普拉克索、如權(quán)利要求1所 述的化合物(I)和藥學上可W接受的載體，制備成需要的劑型。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的鹽酸普拉克索的藥物組合物，其特征在于:藥學上可W接受的 載體包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進劑、表面活性劑、吸附 載體或潤滑劑。4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的鹽酸普拉克索的藥物組合物，其特征在于：所述劑型包括片 劑、膠囊劑、日服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注 射劑、栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。5. 權(quán)利要求1所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于，包含W下操作步驟：（a)將臭 靈丹草粉碎，用65~85%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油酸、乙酸 乙醋和水飽和的正下醇萃取，分別得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物； (b)步驟(a)中正下醇萃取物用大孔樹脂除雜，先用6%乙醇洗脫8個柱體積，再用70%乙醇 洗脫8個柱體積，收集70%洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（C)步驟(b)中70%乙 醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為50:1、25:1、15:1和5:1的二氯甲燒-甲醇梯 度洗脫得到4個組分；（d)步驟(C)中組分4用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為10:1、5: 1和2:1的二氯甲燒-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合 的反相硅膠分離，用體積百分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~14個柱體積洗脫 液，洗脫液減壓濃縮得到化合物(I)。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:步驟(a)用75%乙醇熱回 流提取，合并提取液。7. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:所述大孔樹脂為AB-8型 大孔吸附樹脂。8. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:步驟(a)中用二氯甲燒代 替乙酸乙醋進行萃取，得到二氯甲燒萃取物。9. 權(quán)利要求1所述的化合物（I)在制備治療急性痛風性關(guān)節(jié)炎的藥物中的應(yīng)用。10. 權(quán)利要求2~4任一所述的鹽酸普拉克索的藥物組合物在制備治療急性痛風性關(guān)節(jié) 炎的藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號】A61K31/343GK105906647SQ201610333811
【公開日】2016年8月31日
【申請日】2016年5月19日
【發(fā)明人】秦勇, 王 琦, 陳遠東, 趙維, 陸賽花, 徐成, 周自桂, 陳建芳
【申請人】江蘇神龍藥業(yè)有限公司