本發(fā)明涉及救必應(yīng)酸的新用途，具體涉及救必應(yīng)酸在制備抗乙肝病毒藥物中的用途。
背景技術(shù)：
由乙型肝炎病毒(hepatitisbvirus，hbv)引發(fā)的乙型病毒性肝炎是一種世界性疾病。據(jù)統(tǒng)計(jì)，我國(guó)的乙肝病毒感染率約60％-70％，每年有30-50萬(wàn)人死于hbv引起的肝硬化或肝癌。目前臨床上用于抗乙肝病毒的藥物主要有干擾素和核苷類(lèi)藥物。這兩類(lèi)藥物雖然在hbv感染的治療上有著比較好的療效，但是均存在售價(jià)昂貴，且不良反應(yīng)多、易耐藥和停藥后易反跳的缺點(diǎn)。因此，尋找新的安全有效抗乙肝病毒藥物顯得非常重要。
救必應(yīng)又名鐵冬青、熊膽木等，為冬青科植物，分布于廣東、廣西、湖南、江蘇等眾多地區(qū)，救必應(yīng)酸(分子式為c30h48o5)在救必應(yīng)的干燥樹(shù)皮中含量較高。到目前為止，已有救必應(yīng)酸降血脂、抗腫瘤、防治心腦血管疾病的相關(guān)專利文獻(xiàn)，但尚未見(jiàn)關(guān)于救必應(yīng)酸抗乙肝病毒作用的研究報(bào)道。
救必應(yīng)酸屬五環(huán)三萜化合物，具有五環(huán)三萜母核。五環(huán)三萜類(lèi)化合物的結(jié)構(gòu)通式為：
式中，r為cooh、coo―β―d―葡萄糖基或其他藥學(xué)上可接受的基團(tuán)。當(dāng)式中的r為cooh時(shí)，化合物名為救必應(yīng)酸(rotundicacid)。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明目的是提供救必應(yīng)酸的一種新藥用用途，具體涉及救必應(yīng)酸在制備抗乙肝病毒藥物中的用途。尤其是在救必應(yīng)酸在制備抑制乙肝病毒表面抗原或乙肝病毒e抗原分泌藥物中的應(yīng)用。
所述的抗乙肝病毒藥物可制成片劑、顆粒劑、膠囊劑或滴丸劑。
本發(fā)明首次公開(kāi)救必應(yīng)酸在制備抗乙肝病毒藥物中的新用途。經(jīng)體外hepg22.2.15細(xì)胞藥理實(shí)驗(yàn)證實(shí)，救必應(yīng)酸具有良好的抗hbv作用，兼具有效濃度較低以及細(xì)胞毒性較小的優(yōu)點(diǎn)；救必應(yīng)酸對(duì)hbsag和hbeag均有抑制作用，在100μg/ml時(shí)對(duì)hbsag和hbeag的抑制率分別為39.5％和40.2％，對(duì)hbv的抑制作用均強(qiáng)于陽(yáng)性對(duì)照拉米呋啶，及齊墩果酸與救必應(yīng)藥材提取物。
具體實(shí)施方式
為了更好地理解本發(fā)明的實(shí)質(zhì)，下面用實(shí)施例的形式提供救必應(yīng)酸抗乙肝病毒的藥理實(shí)驗(yàn)結(jié)果，說(shuō)明其在制藥領(lǐng)域的新用途。同時(shí)必須說(shuō)明這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。
實(shí)施例1救必應(yīng)藥材提取物的制備
取救必應(yīng)藥材適量，粉碎，過(guò)1號(hào)篩，藥材加8倍量70％(體積分?jǐn)?shù))乙醇，加熱回流提取2次，每次1h，過(guò)濾，合并提取液，置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中，在80℃下減壓濃縮至稠膏狀。將濃縮液轉(zhuǎn)移置減壓干燥箱中，在80℃下繼續(xù)進(jìn)行干燥、粉碎，即得救必應(yīng)藥材提取物。
實(shí)施例2
1.實(shí)驗(yàn)材料
1.1受試藥物：救必應(yīng)酸(從救必應(yīng)中提取得到，純度＞98％)。
1.2對(duì)照藥物：拉米呋啶，齊墩果酸，救必應(yīng)藥材提取物(實(shí)施例1得)
1.3體外細(xì)胞模型：轉(zhuǎn)染乙肝病毒的2.2.15細(xì)胞株(hepg2.2.15細(xì)胞)。將hepg2.2.15細(xì)胞接種于dmem培養(yǎng)液(含10％胎牛血清，380μg/mlg418，0.03％谷氨酰胺，青霉素和鏈霉素各100μg/ml)，置5％co2，37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
2.試劑及主要儀器
二甲基亞楓(dmso，ar)，mtt(噻唑藍(lán)，ar)，乙肝病毒表面抗原檢測(cè)試劑盒和乙肝病毒e抗原檢測(cè)試劑盒購(gòu)自上海實(shí)業(yè)科華生物技術(shù)有限公司。
3.實(shí)驗(yàn)方法
選用對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的hepg2.2.15細(xì)胞，經(jīng)胰蛋白酶消化液消化后，稀釋濃度至105cells/ml，接種于96孔板，每孔200μl，培養(yǎng)24h后，換成二甲基亞砜助溶的含救必應(yīng)酸藥物的dmem培養(yǎng)液，該藥物設(shè)5個(gè)藥液濃度，同時(shí)設(shè)不含藥液培養(yǎng)的細(xì)胞對(duì)照組和藥物對(duì)照組(包括拉米呋啶，齊墩果酸，救必應(yīng)藥材提取物)，每種藥物設(shè)4個(gè)平行孔。每3天更換樣品液一次，連續(xù)培養(yǎng)9天，分別取上清液，使用乙型肝炎病毒表面抗原診斷試劑盒和乙型肝炎病毒e抗原診斷試劑盒按照elisa方法測(cè)定細(xì)胞上清液中hbsag及hbeag含量，同時(shí)用上述細(xì)胞株，用mtt法測(cè)定藥物的細(xì)胞毒性。
4.實(shí)驗(yàn)結(jié)論
如表1所示，采用hepg2.2.15細(xì)胞模型，本發(fā)明所述的救必應(yīng)酸能夠抑制乙肝病毒表面抗原和乙肝病毒e抗原的分泌，具有良好的抗hbv作用，且有效濃度低，細(xì)胞毒性較小。此外，救必應(yīng)酸在100μg/ml時(shí)對(duì)hbsag和hbeag的抑制率分別為39.5％和40.2％，對(duì)hbv的抑制作用均強(qiáng)于陽(yáng)性對(duì)照拉米呋啶，以及齊墩果酸與救必應(yīng)藥材提取物。
本發(fā)明所述的救必應(yīng)酸可作為活性成分制備用于抗乙肝病毒的藥物。
表1藥物對(duì)hepg2.2.15細(xì)胞的毒性情況及對(duì)hbsag和hbeag的抑制效果
注：—：“未見(jiàn)明顯毒性”系指用mtt法檢測(cè)細(xì)胞存活率≥75％；+：“顯示毒性”系指細(xì)胞存活率﹤75％。