本發(fā)明涉及一種乙醇注入法制備丹皮酚-奧扎格雷偶聯物脂質體的方法，屬于醫(yī)藥制備的技術領域。

背景技術：

心腦血管疾病是全球人口死亡的主要原因，嚴重危害人類健康，隨著社會人口的老齡化，發(fā)病率與日俱增，有效預防和治療心腦血管疾病是當代醫(yī)學研究的重點

血栓栓塞是導致心腦血管疾病的重要因素之一，血栓栓塞性疾病是各種內在和外在因素導致血管內血栓形成和栓塞并導致組織和器官功能受損的病理過程。以冠狀動脈血栓和腦血栓為核心的血栓栓塞性疾病在我國有很高的發(fā)病率和死亡率，因此，防止血栓也就成了心血管疾病領域當今最為熱門的研究課題之一?？寡“寰奂谘ㄐ纬蛇^程中具有非常重要的作用，當動脈粥樣斑塊破裂后，血小板被激活，聚集的血小板活化并釋放多種物質，同時為凝血因子的活化提供平臺，凝血因子的活化使纖維蛋白原轉變?yōu)槔w維蛋白，網羅紅細胞等形成血栓。如果能及時有效的控制血小板聚集，即可阻止或者延緩血栓栓塞的形成。

丹皮酚-奧扎格雷偶聯物是一種類白色略帶黃色固體，由丹皮酚與奧扎格雷利用化學拼合的方法偶聯而成。丹皮酚-奧扎格雷偶聯物

的化學名為(e)-3-(4-((1h-咪唑基-1-基)甲基)苯基)丙烯酰氯，分子式：c22h20n2o4，分子量：376.41，結構式為：

奧扎格雷的作用部位是血小板與血管內皮細胞，是特定的血栓素a2合成酶抑制劑，從而抑制血小板聚集，同時提高前列環(huán)素pgi2的濃度，擴張血管，增加血流量，有效抑制腦血栓的形成，被批準用于治療腦血管疾病。丹皮酚通過抗凝、抗血小板聚集改善血液循環(huán)，抑制環(huán)氧化酶反應，通過減少txa2的合成來實現。本品以丹皮酚與奧扎格雷拼合而成，可以通過抑制血小板聚集，達到抑制腦血栓形成和治療腦梗塞的作用，具有很好的穩(wěn)定性、半衰期較長，生物利用度高、療效更好等特點。在臨床上可以預防或治療血小板聚集引起的心腦血管疾病的作用，特別是能治療血栓性心、腦的缺血或梗死等疾病。但本品的水溶性和脂溶性均比較差，使其在臨床的應用中受到很大限制。

脂質體(liposome)是磷脂分散在水中形成的一個類球狀的、包封一部分水相的封閉囊泡。脂質體通常含有一層或多層磷脂膜，脂質體粒徑大小可由20nm到幾十微米，根據粒徑大小脂質體可分為三類：小單室(層)脂質體(suv)、多室(層)脂質體(mlv)以及大單室脂質體(luv)。脂質體細胞具有親和性與組織相容性，其生物降解性較好。在藥物傳遞系統中，藥物被脂質體包封后脂質體封閉的囊泡能夠分離內相和外部環(huán)境，提高封裝藥物的穩(wěn)定性，當藥物制備成脂質體后，可以增強其的生物利用度。靶向性的脂質體可以改變加載藥物的體內分布，提高某些藥物的治療指數，以及一些配體可以修飾脂質體的表面，能降低藥物毒性和提高藥物的穩(wěn)定性。

乙醇注入法制備脂質體具有工藝簡單、粒徑可控、不使用有毒溶劑、易于掌握等優(yōu)點，是一種具有良好應用前景和市場競爭力的脂質體制備技術。

綜上所述，將丹皮酚-奧扎格雷偶聯物制成脂質體，提高生物利用度及穩(wěn)定性，減少刺激，延長藥物作用時間等目的。因此，研究開發(fā)出丹皮酚-奧扎格雷偶聯物脂質體是非常必要的。

技術實現要素：

本發(fā)明要解決的技術問題是提供一種乙醇注入法制備丹皮酚-奧扎格雷偶聯物脂質體的方法，將丹皮酚-奧扎格雷偶聯物包裹于脂質體的類似生物膜結構的雙分子小囊中，增加了丹皮酚-奧扎格雷偶聯物的生物利用度及穩(wěn)定性，減少刺激，延長藥物作用時間，制劑可以在一定程度上達到更明確的靶向、控釋等效果，并且物理化學性質穩(wěn)定。

本發(fā)明是通過以下技術方案來實現的。

一種丹皮酚-奧扎格雷偶聯物脂質體，其成分包括皮酚-奧扎格雷偶聯物、磷脂、膽固醇、有機溶劑、緩沖液，其中皮酚-奧扎格雷偶聯物3-8份、磷脂80-120份、膽固醇3-7份、有機溶劑1-3份、緩沖劑10-25份。

進一步地，其成分包括丹皮酚-奧扎格雷偶聯物、大豆卵磷脂、膽固醇、無水乙醇、磷酸鹽緩沖液組成，其中丹皮酚-奧扎格雷偶聯物3-8份、大豆卵磷脂80-120份、膽固醇3-7份、無水乙醇1-3份、磷酸鹽緩沖液10-25份。

一種乙醇注入法制備丹皮酚-奧扎格雷偶聯物脂質體的方法，步驟包括：

按照配比，將磷酸鹽緩沖液在溫度為35-45℃下進行攪拌，稱取丹皮酚-奧扎格雷偶聯物、大豆卵磷脂、膽固醇于無水乙醇中超聲溶解3.5-4.5min形成混合藥物，將混合藥物緩慢勻速到磷酸鹽緩沖液中，繼續(xù)攪拌1.5-2.5h，將最后得到的懸浮液通過0.80μm的微孔濾膜進行整粒，即得丹皮酚-奧扎格雷偶聯物脂質體。

進一步地，超聲溶解的時間為4min，溫度設定40℃，攪拌轉速300r/min。

本發(fā)明的有益效果：

1.本發(fā)明的丹皮酚-奧扎格雷偶聯物脂質體具有比較高的生物利用度及穩(wěn)定性，減少刺激，延長藥物作用時間，更好的預防或治療血小板聚集引起的心腦血管疾病的作用，特別是血栓性心、腦的缺血或梗死等疾病。

2.本發(fā)明的丹皮酚-奧扎格雷偶聯物脂質體具有載藥量高、性能穩(wěn)定，制劑可穩(wěn)定貯存的優(yōu)點。

3.本發(fā)明采用的乙醇注入法制備丹皮酚-奧扎格雷偶聯物脂質體具有工藝簡單、粒徑可控、不使用有毒溶劑、易于掌握等優(yōu)點。

具體實施方式

下面根據實施例對本發(fā)明作進一步詳細說明。

實施例一

量取20ml磷酸鹽緩沖液于具塞錐形瓶中，放入磁子，置集熱式加熱攪拌器上攪拌，轉速350r/min，設定溫度為35℃。精密稱取奧扎格雷6mg、大豆磷脂100mg、膽固醇5mg于具塞錐形瓶中，加入無水乙醇3ml超聲4min使其溶解，用1ml注射器將上述藥物緩慢勻速注入到磷酸鹽緩沖液中，繼續(xù)攪拌2h，將最后得到的懸浮液通過0.80μm的微孔濾膜進行整粒，即得丹皮酚-奧扎格雷偶聯物脂質體。

測定丹皮酚-奧扎格雷偶聯物脂質體的載藥量和包封率分別為9.72％和86.3％。

實施例二

量取20ml磷酸鹽緩沖液于具塞錐形瓶中，放入磁子，置集熱式加熱攪拌器上攪拌，轉速300r/min，設定溫度為40℃。精密稱取奧扎格雷9mg、大豆磷脂150mg、膽固醇7.5mg于具塞錐形瓶中，加入無水乙醇3ml超聲4min使其溶解，用1ml注射器將上述藥物緩慢勻速注入到磷酸鹽緩沖液中，繼續(xù)攪拌2h，將最后得到的懸浮液通過0.80μm的微孔濾膜進行整粒，即得丹皮酚-奧扎格雷偶聯物脂質體。測定丹皮酚-奧扎格雷偶聯物脂質體的載藥量和包封率分別為9.92％和87.4％。

實施例三

量取20ml磷酸鹽緩沖液于具塞錐形瓶中，放入磁子，置集熱式加熱攪拌器上攪拌，轉速300r/min，設定溫度為40℃。精密稱取奧扎格雷6mg、大豆磷脂100mg、膽固醇10mg于具塞錐形瓶中，加入無水乙醇3ml超聲4min使其溶解，用1ml注射器將上述藥物緩慢勻速注入到磷酸鹽緩沖液中，繼續(xù)攪拌2h，將最后得到的懸浮液通過0.80μm的微孔濾膜進行整粒，即得丹皮酚-奧扎格雷偶聯物脂質體。測定丹皮酚-奧扎格雷偶聯物脂質體的載藥量和包封率分別為9.62％和84.6％。

制備方法2-逆向蒸發(fā)法

丹皮酚-奧扎格雷偶聯物脂質體各組分比例：丹皮酚-奧扎格雷偶聯物：磷脂＝1:50～5:50；膽固醇：磷脂＝1:5～1:30。

精密稱取奧扎格雷、大豆磷脂、膽固醇于茄形瓶中，加入無水乙醇并振蕩使其溶解，加入磷酸鹽緩沖液，振蕩并超聲4min使其分散形成w/o型乳劑，置于旋轉蒸發(fā)器上50℃減壓蒸發(fā)除去溶劑，等到茄形瓶里物質到達膠態(tài)后，加磷酸鹽緩沖液，震搖后繼續(xù)減壓蒸發(fā)形成混懸液后，過0.80μm的微孔濾膜進行整粒，即得丹皮酚-奧扎格雷偶聯物脂質體。

具體實施方式

實施例一

精密稱取奧扎格雷6mg、大豆磷脂100mg、膽固醇5mg于茄形瓶中，加入無水乙醇10ml，振蕩使其溶解，再加入5ml磷酸鹽緩沖液，振蕩并超聲4min使其分散形成w/o型乳劑，置于旋轉蒸發(fā)器上50℃減壓蒸發(fā)除去溶劑，等到茄形瓶里物質到達膠態(tài)后，最后加15ml磷酸鹽緩沖液，震搖后繼續(xù)減壓蒸發(fā)形成混懸液后，過0.80μm的微孔濾膜進行整粒，即得丹皮酚-奧扎格雷偶聯物脂質體。測定丹皮酚-奧扎格雷偶聯物脂質體的載藥量和包封率分別為9.32％和83.5％。

實施例二

精密稱取奧扎格雷9mg、大豆磷脂150mg、膽固醇7.5mg于茄形瓶中，加入無水乙醇10ml，振蕩使其溶解，再加入5ml磷酸鹽緩沖液，振蕩并超聲4min使其分散形成w/o型乳劑，置于旋轉蒸發(fā)器上50℃減壓蒸發(fā)除去溶劑，等到茄形瓶里物質到達膠態(tài)后，最后加15ml磷酸鹽緩沖液，震搖后繼續(xù)減壓蒸發(fā)形成混懸液后，過0.80μm的微孔濾膜進行整粒，即得丹皮酚-奧扎格雷偶聯物脂質體。測定丹皮酚-奧扎格雷偶聯物脂質體的載藥量和包封率分別為9.72％和84.7％。

實施例三

精密稱取奧扎格雷6mg、大豆磷脂100mg、膽固醇10mg于茄形瓶中，加入無水乙醇10ml，振蕩使其溶解，再加入5ml磷酸鹽緩沖液，振蕩并超聲4min使其分散形成w/o型乳劑，置于旋轉蒸發(fā)器上50℃減壓蒸發(fā)除去溶劑，等到茄形瓶里物質到達膠態(tài)后，最后加15ml磷酸鹽緩沖液，震搖后繼續(xù)減壓蒸發(fā)形成混懸液后，過0.80μm的微孔濾膜進行整粒，即得丹皮酚-奧扎格雷偶聯物脂質體。測定丹皮酚-奧扎格雷偶聯物脂質體的載藥量和包封率分別為9.56％和82.4％。

上述實施例只為說明本發(fā)明的技術構思及特點，其目的在于讓熟悉此領域技術的人士能夠了解本發(fā)明內容并加以實施，并不能以此限制本發(fā)明的保護范圍。凡根據本發(fā)明精神實質所作的等效變化或修飾，都應涵蓋在本發(fā)明的保護范圍內。