本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種吲哚美辛在制備預(yù)防和治療癌癥藥物方面的應(yīng)用，尤其是其用作食管癌和乳腺癌預(yù)防、治療藥物在臨床治療中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

癌癥已成為中國(guó)首位死亡原因，是嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問(wèn)題。據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，中國(guó)食管癌和乳腺癌也是最常見(jiàn)的癌癥類(lèi)型，也是最多見(jiàn)的癌癥死亡原因。食管癌是常見(jiàn)的一種惡性腫瘤疾病，據(jù)相關(guān)的數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)表明，食管癌的死亡率在我國(guó)惡性腫瘤死亡率的第二位，其中河北省的食管癌比較嚴(yán)重，占到了惡性腫瘤死亡率的第一位。乳腺癌是全世界女性最常見(jiàn)的惡性腫瘤，在過(guò)去的20年中，世界上多數(shù)國(guó)家乳腺癌的發(fā)病率均呈持續(xù)增長(zhǎng)。根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)水品的發(fā)展，我國(guó)癌譜也發(fā)生了明顯變化，今年我國(guó)女性乳腺癌發(fā)病率在城鄉(xiāng)均呈明顯上升趨勢(shì)，居女性惡性腫瘤發(fā)病率的首位，乳腺癌成為了嚴(yán)重威脅我國(guó)婦女健康的疾病。

癌癥是由環(huán)境、飲食以及生活方式與遺傳因素協(xié)同作用的結(jié)果，由致癌物作用結(jié)合細(xì)胞遺傳因素導(dǎo)致細(xì)胞遺傳基因突變而逐漸發(fā)展為癌。癌癥早期的臨床癥狀不明顯,當(dāng)臨床癥狀較為突出時(shí),患者的病情已經(jīng)處于中期或者晚期,所以選擇安全有效的預(yù)防和治療癌癥的方法對(duì)于改善患者的預(yù)后及生活質(zhì)量都具有重要意義。

吲哚美辛為非選擇性的環(huán)氧化酶-2（cyclooxygenase-2）cox-2抑制劑，為常用的非甾體類(lèi)抗炎藥，是最強(qiáng)的前列腺素（pg）合成酶抑制劑之一，常用于解熱及緩解炎性疼痛。目前還未有研究涉及吲哚美辛對(duì)癌癥，尤其是食管癌或乳腺癌的作用。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)缺陷，提供一種吲哚美辛在制備預(yù)防和治療癌癥藥物方面的應(yīng)用，尤其是其用作食管癌和乳腺癌預(yù)防、治療藥物在臨床治療中的應(yīng)用。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

吲哚美辛在制備預(yù)防和治療癌癥藥物方面的應(yīng)用。吲哚美辛，化學(xué)名稱(chēng)：2-甲基-1-(4-氯苯甲酰基)-5-甲氧基-1h-吲哚-3-乙酸，cas號(hào)為53-86-1，分子式為c19h16clno4，分子量為357.79。

具體的，吲哚美辛在制備預(yù)防和治療食管癌或乳腺癌藥物方面的應(yīng)用，以及用作預(yù)防乳腺癌術(shù)后復(fù)發(fā)的藥物，也就是說(shuō)吲哚美辛在食管癌和乳腺癌的預(yù)防、術(shù)后復(fù)發(fā)的預(yù)防及臨床治療中的應(yīng)用。

吲哚美辛可以與本領(lǐng)域常規(guī)輔料復(fù)配后制成片劑、膠丸、栓劑、針劑或乳膏劑等，用作預(yù)防和治療癌癥藥物。吲哚美辛的劑量范圍為1－4mg/kg。吲哚美辛包括以下幾種規(guī)格，片劑：每片25mg。膠丸：每粒25mg、75mg。栓劑：每個(gè)25mg、75mg、100mg。針劑：1mg、10mg、20mg。乳膏劑：100mg、10g。

此外，吲哚美辛還可以與依氟鳥(niǎo)氨酸（dfmo）復(fù)配（吲哚美辛劑量為2mg/kg，dfmo劑量為3g/kg）后用作預(yù)防和治療癌癥藥物，兩者聯(lián)合使用時(shí)可增強(qiáng)治療效果。

本發(fā)明使用的pdx（patientderivedxenograft）模型是利用癌癥患者的癌組織在免疫缺陷小鼠身上建立的皮下移植瘤模型，依靠小鼠提供的微環(huán)境進(jìn)行生長(zhǎng)。該模型生物學(xué)穩(wěn)定，保持了原代腫瘤的特點(diǎn)，異種移植的模型可能是最接近目前人類(lèi)癌癥特點(diǎn)。pdx模型減少了體外處理過(guò)程，能更好地保持患者臨床腫瘤組織的原有生物學(xué)特性和組織學(xué)特征，并且pdx模型取材于不同的患者，可以保留患者腫瘤的異質(zhì)性，不僅可以檢測(cè)治療功效，也是符合癌癥生物學(xué)治療基本原則的一種工具和手段，還可以幫助測(cè)試新的抗腫瘤藥物的療效，同時(shí)也為腫瘤發(fā)生發(fā)展的機(jī)制研究提供了新的方法，為一對(duì)一的個(gè)體化抗癌治療提供了可能.本發(fā)明通過(guò)將吲哚美辛處理于食管癌pdx模型小鼠，發(fā)現(xiàn)：與對(duì)照組相比，小鼠腫瘤明顯減小。在4t1小鼠乳腺癌細(xì)胞移植瘤小鼠模型上也有相同的抑制腫瘤生長(zhǎng)效果。

本發(fā)明發(fā)現(xiàn)吲哚美辛在利用人新鮮腫瘤組織接種于免疫缺陷scid小鼠皮下建立的食管癌pdx模型上有顯著的抗腫瘤生長(zhǎng)效果，能夠起到食管癌復(fù)發(fā)預(yù)防的效果，并且吲哚美辛在4t1乳腺癌細(xì)胞移植瘤模型上有顯著的抗腫瘤生長(zhǎng)效果。本發(fā)明中，吲哚美辛在scid小鼠的體內(nèi)腫瘤治療濃度為1－4mg/kg，也可以0.1－0.4mg/kg的劑量供患者服用。

本發(fā)明利用了cox1、cox2非選擇性抑制劑吲哚美辛在食管癌和乳腺癌的復(fù)發(fā)預(yù)防中的增效作用，顯著提高了食管癌和乳腺癌的復(fù)發(fā)預(yù)防效果。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：吲哚美辛在預(yù)防食管癌和乳腺癌上能有顯著的效果。通過(guò)給患者服用吲哚美辛，在臨床上可預(yù)防和治療食管癌和乳腺癌。

附圖說(shuō)明

圖1為吲哚美辛在食管癌（編號(hào)：eg37p6）pdx小鼠模型上的腫瘤生長(zhǎng)治療效果：圖中為給藥期間小鼠體重變化趨勢(shì)圖；

圖2為吲哚美辛在食管癌（編號(hào)：eg37p6）pdx小鼠模型上的腫瘤生長(zhǎng)治療效果：圖中為給藥期間小鼠腫瘤體積變化趨勢(shì)圖；

圖3為吲哚美辛在食管癌（編號(hào)：eg37p6）pdx小鼠模型上的腫瘤生長(zhǎng)治療效果：圖中為實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，處死小鼠，稱(chēng)量出腫瘤的重量；

圖4為吲哚美辛在食管癌（編號(hào)：eg37p6）pdx小鼠模型上的腫瘤生長(zhǎng)治療效果：圖中為對(duì)照組與給藥組的腫瘤圖片；

圖5為吲哚美辛在食管癌（編號(hào)：heg5p3）pdx小鼠模型上的腫瘤生長(zhǎng)治療效果：圖中為給藥期間小鼠體重變化趨勢(shì)圖；

圖6為吲哚美辛在食管癌（編號(hào)：heg5p3）pdx小鼠模型上的腫瘤生長(zhǎng)治療效果：圖中為給藥期間小鼠腫瘤體積變化趨勢(shì)圖；

圖7為吲哚美辛在食管癌（編號(hào)：heg5p3）pdx小鼠模型上的腫瘤生長(zhǎng)治療效果：圖中為實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，處死小鼠，稱(chēng)量出腫瘤的重量；

圖8為吲哚美辛在食管癌（編號(hào)：heg5p3）pdx小鼠模型上的腫瘤生長(zhǎng)治療效果：圖中為對(duì)照組與給藥組的腫瘤圖片；

圖9為吲哚美辛在食管癌（編號(hào)：heg18p5）pdx小鼠模型上的腫瘤生長(zhǎng)治療效果：圖中為給藥期間小鼠體重變化趨勢(shì)圖；

圖10為吲哚美辛在食管癌（編號(hào)：heg18p5）pdx小鼠模型上的腫瘤生長(zhǎng)治療效果：圖中為給藥期間小鼠腫瘤體積變化趨勢(shì)圖；

圖11為吲哚美辛在食管癌（編號(hào)：heg18p5）pdx小鼠模型上的腫瘤生長(zhǎng)治療效果：圖中為實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，處死小鼠，稱(chēng)量出腫瘤的重量；

圖12為吲哚美辛在食管癌（編號(hào)：heg18p5）pdx小鼠模型上的腫瘤生長(zhǎng)治療效果：圖中為對(duì)照組與給藥組的腫瘤圖片；

圖13為吲哚美辛在4t1乳腺癌移植瘤小鼠模型上的腫瘤生長(zhǎng)治療效果：圖中為實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，處死小鼠，稱(chēng)量出腫瘤的重量；

圖14為吲哚美辛在4t1乳腺癌移植瘤小鼠模型上的腫瘤生長(zhǎng)治療效果：圖中為乳腺癌肺轉(zhuǎn)移情況；

圖15為吲哚美辛在4t1乳腺癌移植瘤小鼠模型上的腫瘤生長(zhǎng)治療效果：圖中為小鼠血漿里血栓素b2濃度；

圖16為吲哚美辛在4t1乳腺癌移植瘤小鼠模型上的腫瘤生長(zhǎng)治療效果：圖中為小鼠血漿里前列腺素e2濃度；

圖17為吲哚美辛在4t1乳腺癌移植瘤小鼠模型上的腫瘤生長(zhǎng)治療效果：圖中為對(duì)照組與給藥組小鼠腫瘤圖片。

具體實(shí)施方式

以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步地詳細(xì)介紹，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不局限于此。

吲哚美辛為非選擇性的環(huán)氧化酶-2（cyclooxygenase-2）cox-2抑制劑，在很多腫瘤中有抗腫瘤作用，但未有研究表明吲哚美辛在治療食管癌和乳腺癌上有效果。本發(fā)明主要特點(diǎn)在于使用了人源性異種移植模型。該模型保留了固有的基因和表型，是一種更接近人體腫瘤發(fā)生、發(fā)展過(guò)程的模型，對(duì)個(gè)體化治療非常有意義的模型。本發(fā)明使用了兩例pdx模型，試驗(yàn)結(jié)果表明：吲哚美辛可以治療或者預(yù)防人食管癌的異種腫瘤移植模型鼠上腫瘤的生長(zhǎng)，并且使用4t1乳腺癌細(xì)胞移植瘤模型鼠證實(shí)了吲哚美辛可以預(yù)防及治療乳腺癌。

實(shí)施例：

材料與方法

1材料

1.1腫瘤組織

本發(fā)明使用了3例人食管癌組織標(biāo)本。3種模型編號(hào)分別為eg37、heg5和heg18。eg37來(lái)源于河南省鄭州大學(xué)一附院，男性，69歲。術(shù)后病理切片提示為：低分化，淋巴結(jié)無(wú)轉(zhuǎn)移，病理分期：t2n0m0ⅱa。heg5來(lái)源于河南省腫瘤醫(yī)院，男性，63歲，食管鱗癌，低分化。heg18來(lái)源于河南省腫瘤醫(yī)院，女性，73歲，食管低分化鱗癌，侵及外膜。本發(fā)明使用的eg37模型為第6代，heg5為第3代，heg18為第5代。

1.24t1乳腺癌細(xì)胞

4t1乳腺癌細(xì)胞購(gòu)于atcc細(xì)胞庫(kù)。

1.3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

本實(shí)施例中cb-17scid免疫缺陷小鼠與balb/c小鼠購(gòu)于北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司。許可證編號(hào)為：scxk(京)2012-0001。spf級(jí)，scid小鼠為5-6周齡，體重16-18g，雌鼠；balb/c小鼠為8周齡，體重20-22g，雌鼠。小鼠飼料購(gòu)于北京科澳協(xié)力飼料有限公司。許可證號(hào)為：scxk(京)2014-0010。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)于中美（河南）荷美爾腫瘤研究院的動(dòng)物設(shè)施內(nèi)，在恒溫（25-27℃）、恒濕（45%-50%）、新鮮空氣、除塵除菌的無(wú)特殊病原菌（spf級(jí)）飼養(yǎng)室條件下飼養(yǎng)，動(dòng)物先放于有機(jī)塑料盒內(nèi)（蘇州市馮氏實(shí)驗(yàn)動(dòng)物設(shè)備有限公司），再置于ivc系統(tǒng)飼養(yǎng)，每個(gè)飼養(yǎng)盒內(nèi)飼養(yǎng)3-4只動(dòng)物，經(jīng)無(wú)菌處理的飼料供動(dòng)物自由攝入，高溫消毒的墊料每三天更換一次，籠具及飲水每三天紫外線(xiàn)消毒一次，飲用無(wú)菌蒸餾水。更換飼養(yǎng)用品時(shí)嚴(yán)格遵循無(wú)菌原則操作。將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在12:12小時(shí)光照/黑暗循環(huán)下飼養(yǎng)，可以自由接近食物和水，室溫控制在21℃。

1.4試劑

0.4%戊巴比妥鈉（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）：稱(chēng)量0.2g戊巴比妥鈉溶解于50ml無(wú)菌蒸餾水中過(guò)濾；雙抗：青霉素和鏈霉素（華北制藥股份有限公司），兩者濃度為500u/ml；生理鹽水500ml一瓶（辰欣藥業(yè)股份有限公司）；吲哚美辛（sigma）；dfmo（武漢大華偉業(yè)醫(yī)藥化工有限公司）；rpmi-1640細(xì)胞培養(yǎng)基；trypsin-edta胰酶消化液；細(xì)胞培養(yǎng)皿。

1.5儀器與器材：

海爾醫(yī)用低溫保存箱（青島海爾特種電器有限公司）；電子天平（梅特勒-托利多儀器上海有限公司）；thermo超凈工作臺(tái)；ivc飼養(yǎng)系統(tǒng)（蘇州市馮氏實(shí)驗(yàn)動(dòng)物設(shè)備有限公司）；眼科剪，手術(shù)鑷，無(wú)菌培養(yǎng)皿，手術(shù)刀，溶藥針，1ml注射器；細(xì)胞培養(yǎng)箱。

2.人食管癌免疫缺陷鼠種植瘤模型的建立

將新鮮腫瘤組織取出壞死組織，剪成直徑為3立方毫米左右，塞入6周齡、18g左右的雌性小鼠的背部皮下。將小鼠放入小鼠ivc系統(tǒng)飼養(yǎng)。等待腫瘤形成約15mm左右，無(wú)菌切除皮下腫瘤，選擇實(shí)性腫塊，取材剪成3立方毫米小塊，移植于另外小鼠。頸椎脫臼處死小鼠，腫瘤周?chē)つw用75%酒精消毒，用溶藥針扎開(kāi)一個(gè)小口，用鑷子撐開(kāi)后取出腫瘤放到小鼠皮下。

用上述方法進(jìn)行腫瘤傳代，至第三代小鼠，小鼠皮下移植瘤均出現(xiàn)且腫瘤大小差異不大。再移植至免疫缺陷小鼠皮下，傳三代。分別記錄每一次皮下移植瘤小鼠腫瘤生長(zhǎng)情況及成瘤率，皮下移植瘤等待腫瘤長(zhǎng)到1.5mm時(shí)，取第四代小鼠皮下移植瘤標(biāo)本，將組織10%甲醛固定，石蠟包埋，切片he染色。

3.4t1乳腺癌細(xì)胞移植瘤模型鼠的建立

將2×10⁵的4t1乳腺癌細(xì)胞溶于100ul無(wú)菌pbs中，注射于8周齡balb/c雌鼠的第四個(gè)乳房墊下。一周后小鼠乳房墊下有腫瘤凸起則視為模型建立成功。

4.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的治療研究

4.1吲哚美辛抑制人食管癌異種移植小鼠腫瘤生長(zhǎng)

接種后一周或者兩周后，小鼠背部腫瘤結(jié)節(jié)長(zhǎng)到200立方毫米左右時(shí)開(kāi)始分組，即按照腫瘤體積大小均勻分配小鼠至每組，每組分10只以上。3組小鼠分別按照以下劑量自由飲水。當(dāng)對(duì)照組小鼠腫瘤長(zhǎng)到1500立方毫米左右時(shí)，終止實(shí)驗(yàn)，取下背部皮下腫瘤并稱(chēng)重。每周兩次記錄小鼠體重以及腫瘤體積。當(dāng)對(duì)照組小鼠腫瘤體積長(zhǎng)到15立方毫米左右（約40天），終止實(shí)驗(yàn)，取出腫瘤組織，稱(chēng)量腫瘤重量以及拍照。分組如下所示。

（1）.飲用無(wú)菌蒸餾水（對(duì)照組），

（2）.每天以100mg/kg灌胃阿司匹林（阿司匹林組），

（3）.每天以1mg/kg灌胃低劑量吲哚美辛（吲哚美辛低劑量組），

（4）.每天以4mg/kg灌胃高劑量吲哚美辛（吲哚美辛高劑量組），

（5）.每天以2%劑量飲水依氟鳥(niǎo)氨酸，1mg/kg灌胃高劑量吲哚美辛（依氟鳥(niǎo)氨酸dfmo與吲哚美辛低劑量組）。

4.2吲哚美辛預(yù)防4t1乳腺癌細(xì)胞移植瘤小鼠腫瘤生長(zhǎng)

4t1乳腺癌細(xì)胞移植于小鼠乳房墊下一周后開(kāi)始給藥。給藥4周后處死小鼠，稱(chēng)量腫瘤重量。取小鼠血液。留取小鼠腫瘤組織和肺組織，將組織10%甲醛固定。分組如下所示。

（1）.飲用無(wú)菌蒸餾水（對(duì)照組），

（2）.每天以100mg/kg灌胃阿司匹林（阿司匹林組），

（3）.每天以1mg/kg灌胃低劑量吲哚美辛（吲哚美辛低劑量組），

（4）.每天以4mg/kg灌胃高劑量吲哚美辛（吲哚美辛高劑量組）。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

1.圖1至圖8為吲哚美辛在人食管癌pdx模型上對(duì)腫瘤的治療效果。

1.1如圖1所示，高劑量（4mg/kg）吲哚美辛組對(duì)小鼠體重從給藥第九天起與飲用蒸餾水的對(duì)照組相比有較明顯的下降。如圖2所示，阿司匹林與高劑量（4mg/kg）吲哚美辛組抑制腫瘤生長(zhǎng)效果明顯，吲哚美辛高劑量組在給藥第22天起小鼠腫瘤體積較對(duì)照組有顯著差異p<0.05。圖3可觀(guān)察到高劑量（4mg/kg）吲哚美辛組的腫瘤體積和對(duì)照組相比得到更明顯的抑制p<0.01。圖4小鼠腫瘤圖片可觀(guān)察到阿司匹林與高劑量（4mg/kg）吲哚美辛組的腫瘤生長(zhǎng)與對(duì)照組相比得到明顯抑制。由此得出，高劑量吲哚美辛在食管癌（編號(hào)：eg37p6）pdx小鼠模型上的腫瘤生長(zhǎng)治療效果顯著。

1.2.如圖5所示，各給藥組對(duì)小鼠體重沒(méi)有影響。如圖6所示，高劑量（4mg/kg）吲哚美辛組在給藥第25天起小鼠腫瘤體積較對(duì)照組比有顯著差異p<0.05，從第50天起差異更加顯著p<0.01。低劑量組（1mg/kg）從給藥第36天起較對(duì)照組有差異p<0.05。阿司匹林給藥組較對(duì)照組相比，腫瘤體積也有所下降。圖7腫瘤重量以及圖8小鼠腫瘤圖片可觀(guān)察到，所有給藥組與對(duì)照組相比，小鼠腫瘤生長(zhǎng)均得到抑制，其中，高劑量（4mg/kg）吲哚美辛組最為明顯p<0.01。由此得出，高劑量（4mg/kg）吲哚美辛（編號(hào)：heg5p3）pdx小鼠模型上的腫瘤生長(zhǎng)治療效果很顯著，吲哚美辛能夠抑制腫瘤的生長(zhǎng)。

1.3如圖9所示，各給藥組對(duì)小鼠體重沒(méi)有影響。如圖10所示，高劑量（4mg/kg）吲哚美辛組在給藥第35天起小鼠腫瘤體積較對(duì)照組比有顯著差異p<0.05，從第53天起差異更加顯著p<0.01。dfmo與吲哚美辛低劑量聯(lián)合給藥組在給藥第36天起小鼠腫瘤體積較對(duì)照組比有顯著差異p<0.05，之后差異更加明顯p<0.01。低劑量組（1mg/kg）與阿司匹林給藥組較對(duì)照組相比，腫瘤體積也有所下降，但無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。圖11腫瘤重量以及圖12小鼠腫瘤圖片可觀(guān)察到，所有給藥組與對(duì)照組相比，小鼠腫瘤生長(zhǎng)均得到抑制，其中dfmo與吲哚美辛低劑量聯(lián)合給藥組、及吲哚美辛高劑量組最為明顯p<0.01。由此得出，高劑量（4mg/kg）吲哚美辛（編號(hào)：heg18p5）pdx小鼠模型上的腫瘤生長(zhǎng)治療效果很明顯，與dfmo聯(lián)合使用時(shí)能夠增強(qiáng)其抑制腫瘤的生長(zhǎng)的效果。

2.圖13至圖17為吲哚美辛在4t1乳腺癌細(xì)胞移植瘤小鼠模型上對(duì)腫瘤的治療效果。

圖13、圖17分別為小鼠腫瘤重量與腫瘤圖片，如圖所示：吲哚美辛處理組較對(duì)照組腫瘤重量明顯減小p<0.05。圖14為乳腺癌肺轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)，阿司匹林與吲哚美辛給藥組較對(duì)照組相比轉(zhuǎn)移均減小，低劑量的吲哚美辛轉(zhuǎn)移最不明顯p<0.05。圖15與圖16分別為小鼠血漿血栓素b2與前列腺素e2的濃度檢測(cè)結(jié)果，給藥組與對(duì)照組相比血栓素b2與前列腺素e2的濃度明顯降低，且有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,其中吲哚美辛比阿司匹林效果更為明顯（吲哚美辛組:p<0.01;阿司匹林組:p<0.05）。

由此得出，吲哚美辛與阿司匹林對(duì)4t1乳腺癌移植瘤小鼠有顯著的腫瘤治療效果，并且對(duì)乳腺癌肺轉(zhuǎn)移有明顯抑制作用，其中吲哚美辛效果更為顯著。