本發(fā)明涉及一種眼部玻璃體注射用多囊脂質(zhì)體，本發(fā)明還涉及一種眼部玻璃體注射用多囊脂質(zhì)體的制備方法，屬于藥物制劑領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
年齡相關(guān)性黃斑變性(以下簡稱amd)是導(dǎo)致老人不可逆視力障礙的首要原因，主要是由于黃斑區(qū)結(jié)構(gòu)的衰老性改變。老年性黃斑變性大多發(fā)生于45歲以上，其患病率隨年齡增長而增高，是當(dāng)前老年人致盲的重要疾病。amd分干性(非新生血管性)和濕性(新生血管性)兩種。干性amd是視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞和感光細(xì)胞萎縮等引起黃斑區(qū)萎縮變性；濕性amd主要表現(xiàn)為玻璃膜破壞、脈絡(luò)膜血管侵入視網(wǎng)膜下新生血管的生成。干性amd約占90％。濕性amd雖僅占10％，但是其導(dǎo)致嚴(yán)重的視力喪失的比率達到90％以上。歐美amd患者超過1600萬人，預(yù)計2020年將達2500萬人。中國老人的amd患病率為1.89％-15.5％，每年新發(fā)約30萬例。激光療法曾一度是濕性amd的主要療法，近年來隨著各大制藥巨頭對該疾病治療藥物研究的深入，第一個濕性amd治療藥物(注射用維替泊芬)、抗vegf治療藥物(如哌加他尼鈉注射劑)、重組人源化單克隆抗體(avastin、lucentis、eylea)相繼問世，蛋白酪氨酸激酶抑制劑(al-39324、帕唑帕尼)已在臨床試驗中，市場前景不容忽視。
但目前上市制劑大多數(shù)以注射液形式玻璃體注射給藥，以貝伐單抗為例，bevacizumab，分子量149kda，其普通注射劑商品名是安維汀，
多囊脂質(zhì)體為非同心圓蜂窩狀結(jié)構(gòu)，由若干個小室組成的一個近似球形的制劑。其是在1983被研制出的一種新型多囊脂質(zhì)體，主要用于包封水溶性好的藥物，具有包封率高，穩(wěn)定性好等優(yōu)點。其特點是能在注射部位或給藥腔內(nèi)大量積聚，在釋放過程中，每個包藥的小室逐漸破裂釋放藥物，具有良好的緩釋目的和貯庫效應(yīng)，其可減少患者給藥次數(shù)，提高順應(yīng)性。
cn201210579417.9公開了一種含貝伐單抗的長效緩釋微球的制備方法，但其微球材料為聚丙交酯-乙交酯及聚酸酐等，其降解后生成乳酸等的酸性物質(zhì)，該降解產(chǎn)物易在眼部產(chǎn)生炎癥反應(yīng)及并發(fā)癥，而多囊脂質(zhì)體的脂質(zhì)成分無刺激性，安全可靠，不會出現(xiàn)上述類似情況。
目前尚未有多囊脂質(zhì)體用于眼部玻璃體注射的報道。因此，有必要提出有效的技術(shù)方案，研發(fā)出一種緩控釋制劑使其在眼部達到有效、穩(wěn)定的治療濃度，減少患者給藥次數(shù)，增加順應(yīng)性，以解決上述問題。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供了一種副作用低、包封率高，具有長效緩釋可控的眼部玻璃體注射用多囊脂質(zhì)體。
本發(fā)明解決上述技術(shù)問題的技術(shù)方案如下：
一種眼部玻璃體注射用多囊脂質(zhì)體，所述多囊脂質(zhì)體包括下列重量份的各組分：貝伐珠單抗1份、脂質(zhì)0.2-150份、滲透壓調(diào)節(jié)劑5-500份、輔助乳化劑6-200份；
所述脂質(zhì)包括中性磷脂、三甘油酯、帶電荷磷脂和膽固醇；
其中，所述中性磷脂占脂質(zhì)總質(zhì)量的百分比為20-60％，所述三甘油酯占脂質(zhì)總質(zhì)量的百分比為5-20％，所述帶電荷磷脂占脂質(zhì)總質(zhì)量的百分比為5-20％，所述膽固醇占脂質(zhì)總質(zhì)量的百分比為10-50％。
優(yōu)選的，所述中性磷脂是二油酰基磷脂酰膽堿，所述三甘油酯是三油酸甘油酯，所述帶電荷磷脂是二棕櫚酰磷脂酰甘油。
優(yōu)選的，所述多囊脂質(zhì)體的粒徑為10-50μm。
本發(fā)明還提供一種眼部玻璃體注射用多囊脂質(zhì)體的制備方法，包括如下步驟：
(1)配制含滲透壓調(diào)節(jié)劑的貝伐珠單抗溶液作為內(nèi)水相；
(2)配制中性磷脂、三甘油酯、帶電荷磷脂和膽固醇作為脂質(zhì)，將所述脂質(zhì)溶于有機溶劑中，得到脂質(zhì)相；其中，所述中性磷脂占脂質(zhì)總質(zhì)量的百分比為20-60％，所述三甘油酯占脂質(zhì)總質(zhì)量的百分比為5-20％，所述帶電荷磷脂占脂質(zhì)總質(zhì)量的百分比為5-20％，所述膽固醇占脂質(zhì)總質(zhì)量的百分比為10-50％；
(3)配制含滲透壓調(diào)節(jié)劑和輔助乳化劑的水溶液作為外水相；
(4)按照所述內(nèi)水相與所述脂質(zhì)相的體積比為1:1-1:10，將所述內(nèi)水相分散到所述脂質(zhì)相中，形成w/o初乳；
(5)按照所述w/o初乳和所述外水相的體積比為1:1-1:5，將所述w/o初乳分散到所述外水相中，形成w/o/w型復(fù)乳；
(6)將所述w/o/w型復(fù)乳轉(zhuǎn)移至外水相中，除去復(fù)乳中的有機溶劑，所得溶液500-3000rpm離心，取下層沉淀，加入生理鹽水重新分散，得到本發(fā)明所述多囊脂質(zhì)體；所述w/o/w型復(fù)乳與外水相體積比為1:1-1:4。
優(yōu)選的，將步驟(4)所述內(nèi)水相分散到脂質(zhì)相中，其中所述分散的條件為：分散速度8000-12000rpm，分散時間3-5min。
優(yōu)選的，將步驟(5)所述初乳分散到外水相中，其中所述分散的條件為：分散速度為4000-7000rpm，分散時間1-3min。
本發(fā)明還涉及一種眼部玻璃體注射用多囊脂質(zhì)體在制備治療或預(yù)防年齡相關(guān)性黃斑變性的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明提供了用于眼部玻璃體注射的以治療眼部疾病的多囊脂質(zhì)體，其脂質(zhì)成分在玻璃體內(nèi)降解成無刺激性成分，不會造成炎癥及并發(fā)癥的發(fā)生；同時延長藥物在玻璃體的釋放時間，減少患者用藥痛苦。
本發(fā)明所提供的方法，制備的多囊脂質(zhì)體包封率高，粒徑大小在10-50μm之間，具有良好的緩釋作用，減少了給藥次數(shù)，提高了患者的順應(yīng)性。
附圖說明
后文將參照附圖以示例性而非限制性的方式詳細(xì)描述本發(fā)明的一些具體實施例。附圖中相同的附圖標(biāo)記標(biāo)示了相同或類似的部件或部分。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該理解，這些附圖未必是按比例繪制的。附圖中：
圖1為本發(fā)明實施例一所述的多囊脂質(zhì)體的體外釋放曲線圖。
具體實施方式
本發(fā)明涉及一種眼部玻璃體注射用多囊脂質(zhì)體，包括貝伐珠單抗、脂質(zhì)、滲透壓調(diào)節(jié)劑和輔助乳化劑。其中，所述貝伐珠單抗?jié)舛葹?5-100mg/ml，所述滲透壓調(diào)節(jié)劑質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1-10％，所述輔助乳化劑濃度為10-80mmol/l。
所述脂質(zhì)含有中性磷脂、三甘油酯、帶電荷磷脂、膽固醇。具體為二油酰基磷脂酰膽堿，二棕櫚酰磷脂酰甘油，膽固醇，三油酸甘油酯。脂質(zhì)中各原料及其組分的選擇，對于本發(fā)明中多囊脂質(zhì)體的包封率、球形及分散程度來說是重要的。其中，所述中性磷脂占脂質(zhì)總質(zhì)量的百分比為20-60％，所述三甘油酯占脂質(zhì)總質(zhì)量的百分比為5-20％，所述帶電荷磷脂占脂質(zhì)總質(zhì)量的百分比為5-20％，所述膽固醇占脂質(zhì)總質(zhì)量的百分比為10-50％。
本發(fā)明中，所述的中性磷脂是二油?；字Ｄ憠A，其是形成多囊脂質(zhì)體的主要成分，只有具有含有雙分子層的磷脂，藥物才能被包封在其中。
本發(fā)明中，所述的三甘油酯是三油酸甘油酯，其是形成多囊脂質(zhì)體的關(guān)鍵因素，否則，只能得到普通脂質(zhì)體；三油酸甘油酯填充于多囊脂質(zhì)體囊與囊之間的空隙中，起著連接穩(wěn)定各個小室的作用；不同鏈長的三甘油酯，影響藥物的體外釋放速率。
本發(fā)明中，所述的帶電荷磷脂是二棕櫚酰磷脂酰甘油，其作用是增強所形成的多囊脂質(zhì)體之間的穩(wěn)定性，主要是由于中性磷脂由于范德華力作用易產(chǎn)生凝聚效應(yīng)，相同電荷之間的排斥力可更好防止顆粒的凝集。其在脂質(zhì)相中的濃度為1-10mg/ml,荷負(fù)電磷脂效果更佳。經(jīng)過實驗對比發(fā)現(xiàn)，含有二棕櫚酰磷脂酰甘油的多囊脂質(zhì)體比不含有的在球形圓整及分散程度上均有較明顯優(yōu)勢，前者粘連在一起，分散性不好。
本發(fā)明中，所述的膽固醇作為膜穩(wěn)定劑，可改善磷脂膜的流動性，減少藥物的滲漏率，用量過多或過少都會影響多囊脂質(zhì)體的穩(wěn)定性和包封率，脂質(zhì)相中膽固醇的濃度在5-20mg/ml，實驗發(fā)現(xiàn)若不加膽固醇，所制得的多囊脂質(zhì)體很快便破碎，達不到緩釋效果。
本發(fā)明中，所述內(nèi)水相中的滲透壓調(diào)節(jié)劑為蔗糖、海藻糖及氯化鈉中的一種或多種，優(yōu)選蔗糖,但需要理解的是，本發(fā)明內(nèi)水相中的滲透壓調(diào)節(jié)劑不能是葡萄糖。本發(fā)明內(nèi)水相中的滲透壓調(diào)節(jié)劑的選擇主要是依據(jù)貝伐單抗在5％葡萄糖及右旋糖中容易發(fā)生濃度依賴性降解，且處方篩選中也得到論證。
本發(fā)明中，所述的外水相中的滲透壓調(diào)節(jié)劑為蔗糖、葡萄糖、山梨醇、甘露醇和氯化鈉中的一種或多種，優(yōu)選葡萄糖。
本發(fā)明中，所述的內(nèi)水相滲透壓調(diào)節(jié)劑、外水相滲透壓調(diào)節(jié)劑的存在，是保證內(nèi)外水相壓力差在一定范圍內(nèi)，增加多囊脂質(zhì)體的穩(wěn)定性，盡可能減少發(fā)生藥物泄露。
本發(fā)明中，所述的有機溶劑為本領(lǐng)域常規(guī)使用的有機溶劑，一般為能溶解脂質(zhì)成分的任何有機溶劑，較佳的為乙醚、甲醇、三氯甲烷、丙酮的一種或多種。
本發(fā)明中，所述的外水相中的輔助乳化劑為甘氨酸、組氨酸、l-賴氨酸中的一種或多種，優(yōu)選l-賴氨酸。
下面通過實施例來具體闡述本發(fā)明所述一種眼部玻璃體注射用多囊脂質(zhì)體的制備方法。
實施例一
一種眼部玻璃體注射用多囊脂質(zhì)體的制備方法，包括如下步驟：
精密稱取二油?；字Ｄ憠A，二棕櫚酰磷脂酰甘油，膽固醇，三油酸甘油酯分別22mg、6mg、18mg、6mg于10ml燒杯中，加3ml氯仿溶解，得到脂質(zhì)相；
將上述得到的脂質(zhì)相與4ml含7％蔗糖的25mg/ml的貝伐珠單抗溶液合并，渦旋混合，形成w/o型初乳；
將上述得到的初乳注入盛有10ml的4％葡萄糖和60mmol/l的賴氨酸水溶液中，渦旋混合,形成w/o/w型復(fù)乳；
將上述得到的復(fù)乳快速倒入20ml外水相中，37℃左右進行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，除去有機溶劑氯仿，1000r/min離心，棄去上清液，下部沉淀加適量生理鹽水，得到本發(fā)明的多囊脂質(zhì)體。
實施例一所述的多囊脂質(zhì)體的體外釋放曲線如圖1所示，結(jié)果顯示，貝伐珠單抗多囊脂質(zhì)體具有明顯體外緩釋效果。
對比例一
精密稱取二油酰基磷脂酰膽堿，二棕櫚酰磷脂酰甘油，膽固醇分別22mg、6mg、18mg于10ml燒杯中，加3ml氯仿溶解，得到脂質(zhì)相；
將上述脂質(zhì)相與4ml含7％蔗糖的25mg/ml貝伐珠單抗溶液合并，渦旋混合，形成w/o型初乳；
將上述初乳注入盛有10ml的4％葡萄糖和60mmol/l的賴氨酸水溶液中，渦旋混合,形成w/o/w型復(fù)乳；
將復(fù)乳快速倒入20ml外水相中，37℃左右進行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，除去有機溶劑氯仿，1000r/min離心，棄去上清液，下部沉淀加適量生理鹽水，得到對比例一的多囊脂質(zhì)體。
對比例一的制備方法與實施例一相同。不同之處僅在于對比例一中的脂質(zhì)相組分缺少三油酸甘油酯。
對比例二
精密稱取二油?；字Ｄ憠A，二棕櫚酰磷脂酰甘油，三油酸甘油酯分別22mg、6mg、6mg于10ml燒杯中，加3ml氯仿溶解，得到脂質(zhì)相；
將上述脂質(zhì)相與4ml含7％蔗糖的25mg/ml貝伐珠單抗溶液合并，渦旋混合，形成w/o型初乳；
將上述初乳注入盛有10ml的4％葡萄糖和60mmol/l的賴氨酸水溶液中，渦旋混合,形成w/o/w型復(fù)乳；
將復(fù)乳快速倒入20ml外水相中，37℃左右進行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，除去有機溶劑氯仿，1000r/min離心，棄去上清液，下部沉淀加適量生理鹽水，得到對比例一的多囊脂質(zhì)體。
對比例二的制備方法與實施例一相同。不同之處僅在于對比例二中的脂質(zhì)相組分缺少膽固醇。
對比例三
精密稱取二油?；字Ｄ憠A，膽固醇，三油酸甘油酯分別22mg、18mg、6mg于10ml燒杯中，加3ml氯仿溶解，得到脂質(zhì)相；
將上述脂質(zhì)相與4ml含7％蔗糖的25mg/ml貝伐珠單抗溶液合并，渦旋混合，形成w/o型初乳；
將上述初乳注入盛有10ml的4％葡萄糖和60mmol/l的賴氨酸水溶液中，渦旋混合,形成w/o/w型復(fù)乳；
將復(fù)乳快速倒入20ml外水相中，37℃左右進行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，除去有機溶劑氯仿，1000r/min離心，棄去上清液，下部沉淀加適量生理鹽水，得到對比例一的多囊脂質(zhì)體。
對比例三的制備方法與實施例一相同。不同之處僅在于對比例三中的脂質(zhì)相組分缺少二棕櫚酰磷脂酰甘油。
貝伐珠單抗包封率的測定：
包封率是指被包裹物質(zhì)(如某藥物)在脂質(zhì)體懸液中占藥物總量的百分比。它是脂質(zhì)體和納米粒質(zhì)量控制的一個重要的指標(biāo)，反映了藥物被載體包封的程度。
測定條件：色譜柱agilentbio-monolithproteina(5.2×4.95mm，0.1ml)；流動相：pbs溶液與醋酸溶液，等度洗脫；紫外檢測器，檢測波長：280nm，流速1.5ml/min，柱溫：室溫，進樣量20ul。
測定過程：
1)取貝伐珠單抗多囊脂質(zhì)體混懸液0.5ml，2500rpm，離心6min，棄去上清液除去游離藥物，沉淀部分加入適量生理鹽水重新混懸，再按照上述離心方法得沉淀部分，加入曲拉通溶解，測得所包封藥物質(zhì)量；
2)取貝伐珠單抗多囊脂質(zhì)體混懸液0.5ml，加曲拉通溶解，測得總藥物質(zhì)量；
3)根據(jù)式i計算包封率。
包封率＝包封藥物質(zhì)量/總藥物質(zhì)量×100％
式i
采用本發(fā)明所述貝伐珠單抗包封率的測定方法測定實施例一所述的多囊脂質(zhì)體的包封率為72.6％。
采用本發(fā)明所述貝伐珠單抗包封率的測定方法測定對比例一所述的多囊脂質(zhì)體的包封率為6.8％。
采用本發(fā)明所述貝伐珠單抗包封率的測定方法測定對比例二所述的多囊脂質(zhì)體的包封率為40.3％。
采用本發(fā)明所述貝伐珠單抗包封率的測定方法測定對比例三所述的多囊脂質(zhì)體的包封率為50.3％。
測包封率時，對比例一所得下部沉淀明顯較少，包封率僅為6.8％；對比例二所得下部沉淀較少，包封率僅為40.3％；對比例三所得混懸液分散性較差，有結(jié)塊現(xiàn)象，包封率為50.3％。
通過實施例與對比例可知，本發(fā)明所用的各類材料缺一不可，若缺少其中之一，其包封率、球形及分散程度上將受到較大影響。
本發(fā)明所述藥物為貝伐珠單抗，所述藥物還可以為其他小分子藥物或生物大分子藥物。具體而言，所述小分子藥物包括兩性霉素、萬古霉素、頭孢他啶、慶大霉素、地塞米松、曲安奈德、糖皮質(zhì)激素、帕唑帕尼；蛋白多肽類大分子藥物包括雷珠單抗、阿柏西普及其衍生物等。
本發(fā)明所述眼部玻璃體注射用多囊脂質(zhì)體治療范圍包括但不限于老年性黃斑變性(年齡相關(guān)性黃斑變性、amd)、青光眼、眼內(nèi)炎及其它玻璃體視網(wǎng)膜疾病等。
本發(fā)明可用其他的不違背本發(fā)明的精神或主要特征的具體形式來概述。因此，無論從哪一點來看，本發(fā)明的上述實施方案都只能認(rèn)為是對本發(fā)明的說明而不能限制本發(fā)明，權(quán)利要求書指出了本發(fā)明的范圍，而上述的說明并未指出本發(fā)明的范圍，因此，在與本發(fā)明的權(quán)利要求書相當(dāng)?shù)暮x和范圍內(nèi)的任何改變，都應(yīng)認(rèn)為是包括在本發(fā)明的權(quán)利要求書的范圍內(nèi)。