本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，尤其是一種抗血管抑素受體單克隆抗體結(jié)合納米膠束及制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

腫瘤是當(dāng)今嚴(yán)重威脅人類健康的三大疾病之一。血管抑素受體(angiostatinreceptorf1f0-atp合成酶)對腫瘤細胞中atp合成起重要作用。在正常人體組織中，血管抑素受體主要在線粒體內(nèi)膜上定位，但也有少量存在于內(nèi)皮細胞的細胞膜上。相對而言，很多腫瘤細胞超量表達血管抑素受體，并大量定位于細胞膜上。因而腫瘤細胞膜上的血管抑素受體是一個潛在的抗腫瘤藥物靶標(biāo)。

單克隆抗體市場作為制藥行業(yè)中增長最快、獲利最大的市場之一，其在2003年和2004年間的增長率已經(jīng)達到了48.1％。由于受從嵌合體、人源化到完全人源化抗體等一系列技術(shù)發(fā)展的推動，這一市場份額在未來6年內(nèi)有可能上升三倍。隨著生物技術(shù)的發(fā)展，單克隆抗體經(jīng)歷了從鼠源單抗、人源化/嵌合單抗、人單抗和全人單抗四個主要發(fā)展階段。單克隆抗體的上述四個發(fā)展階段使鼠源性蛋白成分分別從100％下降至33％，乃至0％，成為真正的全人抗體。目前治療性單克隆抗體藥物的臨床指征覆蓋了惡性腫瘤、自身免疫性疾病、傳染性疾病，尤其是在癌癥和疑難雜癥的治療方面療效突出。

全人抗體藥物是利用人－人雜交瘤技術(shù)開發(fā)的單克隆抗體藥物，與現(xiàn)有藥物比較具有以下優(yōu)點：1、全人抗體，無副作用；2、技術(shù)更為簡便，高通量篩選，開發(fā)周期短。3、生產(chǎn)工藝簡單，抗體產(chǎn)量高；4、與人體內(nèi)天然產(chǎn)生的抗體完全一致。截至2006年，美國fda已批準(zhǔn)35個抗體藥物，其中，人源化抗體占60％，全人抗體占20％，全人抗體已成為治療類抗體在抗體類型上必然趨勢。

納米生物技術(shù)是國際生物技術(shù)領(lǐng)域的前沿和熱點問題，在醫(yī)藥衛(wèi)生領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用和明確的產(chǎn)業(yè)化前景，特別是納米藥物載體。這種技術(shù)是以納米顆粒作為藥物載體，將藥物等治療分子包裹在納米顆粒之中或吸附在其表面，同時也在顆粒表面偶聯(lián)特異性的靶向分子，如單克隆抗體等，通過靶向分子與細胞表面特異性受體結(jié)合，在細胞攝取作用下進入細胞內(nèi)，實現(xiàn)安全有效的靶向性藥物和基因治療。目前美國生物科學(xué)公司已研制出了一種紫杉醇白蛋白納米懸浮液(abi-007)，已經(jīng)在歐美上市并應(yīng)用于臨床。雖然臨床研究結(jié)果顯示，abi-007所引起的毒副反應(yīng)明顯輕于同劑量的注射液，但abi一007還是會引起骨髓抑制，粒細胞減少等副反應(yīng)。因此，對紫杉醇納米制劑做更進一步的改進，開發(fā)一種具有靶向治療效果的紫杉醇納米制劑將可提高靶細胞的藥物濃集、增加藥物療效，具有更重要意義和廣泛的臨床應(yīng)用前景。

傳統(tǒng)的治療模式(手術(shù)、放療、化療)依然是腫瘤治療的主要手段。然而，臨床絕大多數(shù)抗癌制劑仍不能區(qū)分癌細胞與正常細胞，結(jié)果導(dǎo)致了系統(tǒng)性的毒性與嚴(yán)重副作用。所以提高藥物的腫瘤選擇性，減少其在非靶向部位的聚集是提高抗腫瘤藥物療效的關(guān)鍵。靶向抗腫瘤納米藥物的研究正日益受到人們的普遍關(guān)注和重視。納米技術(shù)和納米生物學(xué)研究的進一步深入已對醫(yī)藥業(yè)產(chǎn)生了巨大的影響，特別是納米藥物載體在藥物傳遞系統(tǒng)(dds)可發(fā)揮重要作用。目前研究的熱點和已有較好基礎(chǔ)及做出實質(zhì)性成果的是藥物納米載體和納米顆粒基因轉(zhuǎn)移技術(shù)。這種技術(shù)是以納米顆粒作為藥物和基因轉(zhuǎn)移載體，將藥物、dna和rna等基因治療分子包裹在納米顆粒之中或吸附在其表面，同時也在顆粒表面偶聯(lián)特異性的靶向分子，如特異性配體、單克隆抗體等，通過靶向分子與細胞表面特異性受體結(jié)合，在細胞攝取作用下進入細胞內(nèi)，實現(xiàn)安全有效的靶向性藥物和基因治療。聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯嵌段聚合物是一類新型的納米載體，它同時具有親水性基團及疏水性基團，在水中溶解后自發(fā)形成高分子膠束，并完成對藥物的增溶和包裹，它具有親水性外殼及疏水性內(nèi)核，適合于攜帶不同性質(zhì)的藥物，且可使藥物能逃避單核巨噬細胞吞噬。因此，推進靶向治療的有效靶點的研究發(fā)現(xiàn)具有重要意義，結(jié)合納米技術(shù)研究新一代治療藥物與治療方法，具有重大的科學(xué)意義與社會意義。

通過檢索，尚未發(fā)現(xiàn)與本發(fā)明專利申請相關(guān)的專利公開文獻。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足之處，提供一種抗血管抑素受體單克隆抗體結(jié)合納米膠束及制備方法和應(yīng)用。

一種抗血管抑素受體單克隆抗體結(jié)合納米膠束，所述納米膠束是由抗血管抑素受體單克隆抗體與羧基化聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯嵌段聚合物連接而成。

而且，所述抗血管抑素受體單克隆抗體與羧基化聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯嵌段聚合物的摩爾比為1：500-1：10000。

而且，所述抗血管抑素受體單克隆抗體為人源化單克隆抗體。

如上所述的抗血管抑素受體單克隆抗體結(jié)合納米膠束的制備方法，步驟如下：

⑴采用高效與高通量全人抗體技術(shù)獲取高表達工程細胞株，制備抗hai-178特異性人源化抗體；

⑵聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯嵌段聚合物的結(jié)構(gòu)修飾：

a)羧基化嵌段聚合物ct-p123的合成與表征；

聚合物表面修飾的具體步驟為：

取聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯嵌段聚合物，將其溶解于2m氫氧化鈉溶液中，105℃油浴回流反應(yīng)7h，反應(yīng)產(chǎn)物溶液以濃鹽酸調(diào)ph值至2，使用與反應(yīng)產(chǎn)物溶液等體積的二氯甲烷萃取加成反應(yīng)產(chǎn)物溶液，加入無水硫酸鈉放置過夜吸除萃取液中所含水分，過濾，濾液經(jīng)40℃水浴旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)揮干溶劑，真空干燥過夜除盡溶劑，得粗產(chǎn)物；將等體積乙醚和粗產(chǎn)物渦旋混合，粗產(chǎn)物沉淀析出，8000rpm離心10min除去溶劑，將等體積35.60℃的石油醚和離心后粗產(chǎn)渦旋混合，粗產(chǎn)物再次沉淀析出，8000rpm離心10min除去溶劑，沉淀經(jīng)30℃真空干燥過夜后即得到純化的ct-p123；

b)ct-p123與抗hai-178特異性人源化抗體的連接：

羧基化聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯嵌段聚合物的羧基與單克隆抗體的氨基連接，將羧基活化劑1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽與ct-p123溶于純水溶液中，200-300r/min振蕩反應(yīng)15分鐘，加入抗hai-178特異性人源化抗體，其中，抗hai-178特異性人源化抗體與ct-p123的摩爾比為1：500-1：10000，繼續(xù)攪拌1-1.2h，制得未標(biāo)記的抗血管抑素受體單克隆抗體結(jié)合納米膠束；

c)¹²⁵i標(biāo)記抗體，測活度，計算抗體結(jié)合率，得¹²⁵i標(biāo)記抗體：

采用常規(guī)方法¹²⁵i標(biāo)記her2單克隆抗體，即得抗血管抑素受體單克隆抗體結(jié)合納米膠束。

如上所述的抗血管抑素受體單克隆抗體結(jié)合納米膠束在作為藥物載體方面中的應(yīng)用。

一種包裹紫杉醇的抗血管抑素受體單克隆抗體結(jié)合免疫膠束，所述免疫膠束是由權(quán)利要求1至3任一項所述的抗血管抑素受體單克隆抗體結(jié)合納米膠束作為載體和包裹在該載體中的紫杉醇組成。

而且，所述抗血管抑素受體單克隆抗體納米膠束與紫杉醇的質(zhì)量比為40-400：1。

如上所述的包裹紫杉醇的抗血管抑素受體單克隆抗體結(jié)合免疫膠束的制備方法，步驟如下：

⑴采用如權(quán)利要求4所述的方法連接羧基化聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯嵌段聚合物和抗血管抑素受體單克隆抗體，得到抗血管抑素受體單克隆抗體結(jié)合納米膠束；

⑵采用星點設(shè)計法將紫杉醇包裹進抗血管抑素受體單克隆抗體結(jié)合納米膠束中，所述星點設(shè)計法的具體步驟為：

步驟⑴的納米膠束的固定載體量為20mg，選擇對膠束形成有顯著影響的兩個因素：主藥的投藥量x1及水化時的水相量x2進行考察，實驗采取兩因素、五水平的星點設(shè)計，該設(shè)計為在二水平析因設(shè)計的基礎(chǔ)上加上極值點和中心點構(gòu)成，其代碼分別為±1，±a和0，a＝(f)^1/4，f＝2k(k為因素數(shù))；對于二因素的星點設(shè)計a＝1.414.確定各因素水平的極大(+a)和極小值(-a)后，±1，0水平的安排遵循任意兩個物理量之間的極差與對應(yīng)代碼之間差值成正比的原則安排實驗，將各實驗?zāi)z束用0.22um濾膜過濾后測定濾液中藥物的濃度，除以未過濾膠束中藥物的濃度，為該膠束的載藥量；以載藥量為因變量分別對各因素及其相互作用進行回歸處理，分析各因素對各效應(yīng)值的影響，選取載藥量較多的工藝條件將紫杉醇包裹進抗血管抑素受體單克隆抗體結(jié)合納米膠束中，即得包裹紫杉醇的抗血管抑素受體單克隆抗體結(jié)合納米膠束。

如上所述的包裹紫杉醇的抗血管抑素受體單克隆抗體結(jié)合免疫膠束在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明取得的優(yōu)點和有益效果是：

1、本抗血管抑素受體單克隆抗體結(jié)合納米膠束納米膠束為具有親水端和疏水端的兩親性納米膠束，其所包含的人源化抗體免疫原性低，副作用小，同時該免疫膠束封包性能穩(wěn)定、封包率高、抗體活性良好，可以用作藥物載體，使得被包裹的藥物能夠更加準(zhǔn)確地識別靶位，在提高藥物治療效果的同時，也降低了藥物的毒副作用。

2、本發(fā)明中包裹了紫杉醇的抗血管抑素受體單克隆抗體結(jié)合免疫膠束既能使藥物送到一定的靶位，發(fā)揮紫杉醇與抗血管抑素受體單克隆抗體的抗腫瘤作用，特異性殺傷腫瘤細胞及新生血管內(nèi)皮細胞，并延長藥物在腫瘤部位的作用時間；顯示出更優(yōu)越的抗腫瘤活性和更小的毒副作用。同時，本發(fā)明的免疫膠束采用納米粒子制備技術(shù)，表面改性等技術(shù)，在體內(nèi)減輕納米載藥顆粒與血清成分的相互作用，減小其被清除系統(tǒng)吞噬的概率，延長在血液循環(huán)系統(tǒng)中的時間，同時又實現(xiàn)在體內(nèi)緩釋的目的，避免了抗體半衰期短的缺點，在保持其抗體活性的同時，使之更適合體內(nèi)應(yīng)用。與現(xiàn)有的單抗藥物相比，可以大大降低用藥頻率。

附圖說明

圖1為本發(fā)明抗血管抑素受體單克隆抗體結(jié)合免疫膠束的制備方法的工藝流程圖；

圖2為本發(fā)明羧基化聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯嵌段聚合物(ct-p123)的合成工藝流程圖；

圖3為本發(fā)明的相關(guān)粒徑檢測圖；其中，圖3-1為的pluronicp123膠束的粒徑檢測圖，圖3-2為載有紫杉醇的pluronicp123膠束的粒徑檢測圖，圖3-3為抗hai-178人源化抗體-ptx免疫膠束的粒徑檢測圖。

具體實施方式

下面結(jié)合實施例，對本發(fā)明進一步說明；下述實施例是說明性的，不是限定性的，不能以下述實施例來限定本發(fā)明的保護范圍。

本發(fā)明中所使用的原料，如無特殊說明，均為常規(guī)的市售產(chǎn)品；本發(fā)明中所使用的方法，如無特殊說明，均為本領(lǐng)域的常規(guī)方法。

本發(fā)明用二維液相色譜分離技術(shù)獲得了與轉(zhuǎn)移相關(guān)的蛋白hai-178，該蛋白為atp合成酶的同源物，然后利用高效與高通量(het-fat)全人抗體技術(shù)，獲得高表達工程細胞株，制備出抗血管抑素受體人源化單克隆抗體。在此基礎(chǔ)上，將羰基化聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯嵌段聚合物與抗血管抑素受體單克隆抗體結(jié)合制得抗血管抑素受體單克隆抗體結(jié)合納米膠束。然后采用星點設(shè)計法優(yōu)化將廣譜抗癌藥紫杉醇包裹于上述納米膠束中，制得抗血管抑素受體單克隆抗體結(jié)合免疫膠束。

下面結(jié)合實施例進一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明，而非限制本發(fā)明的范圍。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法及未說明配方的試劑均為按照常規(guī)條件如sambrook等人，分子克?。涸囼炇謨?newyork:coldspringharborlaboratorypress,1989)中所述的條件或者制造商建議的條件進行或配置。

本發(fā)明中所使用的聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯嵌段聚合物可以購自廠家basf。

一種抗血管抑素受體單克隆抗體結(jié)合納米膠束，所述納米膠束是由抗血管抑素受體單克隆抗體與羧基化聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯嵌段聚合物連接而成，較佳地，所述抗血管抑素受體單克隆抗體與羧基化聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯嵌段聚合物的摩爾比為1：500-1：10000，其中，所述抗血管抑素受體單克隆抗體可以為人源化單克隆抗體，該抗血管抑素受體單克隆抗體結(jié)合納米膠束可以應(yīng)用于作為藥物載體中。

上述抗血管抑素受體單克隆抗體結(jié)合納米膠束的制備方法，步驟如下：

⑴采用高效與高通量全人抗體技術(shù)獲取高表達工程細胞株，制備抗hai-178特異性人源化抗體，具體方法參見專利200810202087.5的專利公開文獻；

⑵聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯嵌段聚合物的結(jié)構(gòu)修飾：

b)羧基化嵌段聚合物p123(ct-p123)的合成與表征；

聚合物表面修飾的具體步驟為：

取聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯嵌段聚合物，將其溶解于20ml2m氫氧化鈉溶液中，105℃油浴回流反應(yīng)7h，反應(yīng)產(chǎn)物溶液以濃鹽酸調(diào)ph值至2，使用與反應(yīng)產(chǎn)物溶液等體積的二氯甲烷萃取加成反應(yīng)產(chǎn)物溶液，加入無水硫酸鈉放置過夜吸除萃取液中所含水分，過濾，濾液經(jīng)40℃水浴旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)揮干溶劑，真空干燥過夜除盡溶劑，得粗產(chǎn)物；將等體積乙醚和粗產(chǎn)物渦旋混合，粗產(chǎn)物沉淀析出，8000rpm離心10min除去溶劑，將等體積石油醚(35.60℃)和離心后粗產(chǎn)物渦旋混合，粗產(chǎn)物再次沉淀析出，8000rpm離心10min除去溶劑，沉淀經(jīng)30℃真空干燥過夜后即得到純化的ct-p123(羧基化聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯嵌段聚合物即為ct-p123)。羧基化羧基化嵌段聚合物p123(ct-p123)過程見圖2。

b)ct-p123與抗hai-178特異性人源化抗體的連接：

羧基化聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯嵌段聚合物的羧基與單克隆抗體的氨基連接，將羧基活化劑1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(edc)與ct-p123溶于純水溶液中，200-300r/min振蕩反應(yīng)15分鐘，加入抗hai-178特異性人源化抗體，其中，抗hai-178特異性人源化抗體與ct-p123的摩爾比為1：500-1：10000，繼續(xù)攪拌1-1.2h，制得未標(biāo)記的抗血管抑素受體單克隆抗體結(jié)合納米膠束；

c)¹²⁵i標(biāo)記抗體，測活度，計算抗體結(jié)合率(常規(guī)方法)，得¹²⁵i標(biāo)記抗體：

采用常規(guī)方法¹²⁵i標(biāo)記her2單克隆抗體，即得抗血管抑素受體單克隆抗體結(jié)合納米膠束。

一種包裹紫杉醇的抗血管抑素受體單克隆抗體結(jié)合免疫膠束，所述免疫膠束是由上述抗血管抑素受體單克隆抗體結(jié)合納米膠束作為載體和包裹在該載體中的紫杉醇組成，其中，較佳地，所述抗血管抑素受體單克隆抗體納米膠束與紫杉醇的質(zhì)量比為40-400：1，該包裹紫杉醇的抗血管抑素受體單克隆抗體結(jié)合免疫膠束可以應(yīng)用在制備抗腫瘤藥物中。

如上所述的包裹紫杉醇的抗血管抑素受體單克隆抗體結(jié)合免疫膠束的制備方法，步驟如下：

⑴采用如上所述的方法連接羧基化聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯嵌段聚合物和抗血管抑素受體單克隆抗體，得到抗血管抑素受體單克隆抗體結(jié)合納米膠束；

⑵采用星點設(shè)計法將紫杉醇包裹進抗血管抑素受體單克隆抗體結(jié)合納米膠束中，所述星點設(shè)計法的具體步驟為：

步驟⑴的納米膠束的固定載體量為20mg，選擇對膠束形成有顯著影響的兩個因素：主藥的投藥量(x1)及水化時的水相量(x2)進行考察，實驗采取兩因素、五水平的星點設(shè)計，該設(shè)計為在二水平析因設(shè)計的基礎(chǔ)上加上極值點和中心點構(gòu)成，其代碼分別為±1，±a和0，a＝(f)^1/4，f＝2k(k為因素數(shù))；對于二因素的星點設(shè)計a＝1.414.確定各因素水平的極大(+a)和極小值(-a)后，±1，0水平的安排遵循任意兩個物理量之間的極差與對應(yīng)代碼之間差值成正比的原則安排實驗，將各實驗?zāi)z束用0.22um濾膜過濾后測定濾液中藥物的濃度，除以未過濾膠束中藥物的濃度，為該膠束的載藥量；以載藥量為因變量分別對各因素及其相互作用進行回歸處理，分析各因素對各效應(yīng)值的影響，選取載藥量較多的工藝條件將紫杉醇包裹進抗血管抑素受體單克隆抗體結(jié)合納米膠束中，即得包裹紫杉醇的抗血管抑素受體單克隆抗體結(jié)合納米膠束。

上述包裹紫杉醇的抗血管抑素受體單克隆抗體結(jié)合納米膠束的相關(guān)檢測：

⑴采用動態(tài)光散射法(dls)等對制備的納米藥物進行表征：

使用malvern公司mastersizer2000型納米粒徑分析儀，采用動態(tài)光散射法測定pbs(ph7.4)溶液中抗hif.1qptx免疫膠束的粒徑與粒徑分布。測定參數(shù)為：光源：he.ne激光；測定角度：900；溫度：25℃；粘度：0.8872cp；折光系數(shù)：1.33；波長：633nm；每個樣品重復(fù)測定10次，每次10s。

為了達到在體內(nèi)長循環(huán)即緩釋的目的，膠束必須要有足夠小的粒徑以躲避res系統(tǒng)的識別與吞噬。利用dls技術(shù)檢測了pluronicp123膠束、載有紫杉醇的pluronicp123膠束、抗hai-178人源化抗體-ptx免疫膠束及粒徑分布，其粒徑大小分別為19.3±3.1nm，28.2±3.0nm，47.85±6.8nm，粒徑分布見圖3，由圖3可以看出所有膠束的粒徑分布范圍均較窄，粒徑均在50nm以下，雖然具備主動靶向性的載藥膠束粒徑有所增大(mwofptx：853.9g/mol)，但仍小于大多數(shù)具主動靶向性的藥物載體。

⑵hplc法測定免疫膠束對藥物的包封率及隨時間變化(常規(guī)方法)：使用常規(guī)方法進行檢測；

⑶應(yīng)用之細胞實驗：觀察紫杉醇免疫膠束躲避體內(nèi)清除細胞的能力、進入乳腺癌細胞的效率與殺傷效應(yīng)，并設(shè)立對照；

a)采用血漿蛋白結(jié)合實驗、巨噬細胞吞噬實驗探討紫杉醇免疫膠束躲避體內(nèi)清除的能力和機制；(常規(guī)方法)；

b)fitc標(biāo)記抗體，設(shè)立對照，觀察紫杉醇免疫膠束進入乳腺癌細胞的效率(常規(guī)方法)；

c)體外癌細胞殺傷實驗，體外毒性(mtt)

人乳腺癌細胞培養(yǎng)使用含10％新生牛血清、100μg/μl青霉素、100μg/μl鏈霉素的rpmi1640培養(yǎng)液，置5％c02、37。c培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)液隔天更換。收集細胞鋪種于96孔板，鋪種密度5000個/孔，繼續(xù)培養(yǎng)一天，加藥，各孔所加樣液體積均為200μl，依次加入ptx濃度梯度從1到100ng/ml的抗血管抑素受體抗體-ptxpluronicp123免疫膠束(anti-hai178-ptx-pluronicp123)、ptxpluronicp123膠束(nms.ptx)，對照孔為不含ptx的抗hai178與羧基功能化pluronicp123膠束的僑聯(lián)物(mcabs.nms)、單純羧基功能化pluronicp123膠束(nms)。加樣完畢后置入細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)48h，每孔加2μl濃度為5mg/ml的mttpbs(ph＝7.4)溶液，置入細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)4h，加入200μl二甲亞砜(dmso)37℃震搖10min以溶解紫色結(jié)晶，酶標(biāo)儀570nm讀取吸光度。

d)流式細胞儀檢測細胞凋亡周期計算凋亡率(常規(guī)方法)。

⑷藥物動力學(xué)研究

a)建立紫杉醇免疫膠束在wistar大鼠體內(nèi)的檢測方法

b)設(shè)立對照，對紫杉醇免疫膠束在wistar大鼠體內(nèi)的藥物動力學(xué)過程進行研究、靶向效率評價。

⑸組織分布學(xué)研究

a)建立紫杉醇免疫膠束在乳腺癌動物(balb小鼠乳腺注射mcf-7)各組織中的檢測方法，乳腺癌小鼠體內(nèi)靶向示蹤顯像采用免疫膠束包載疏水性量子點標(biāo)記，定量分析采用3h同位素標(biāo)記，或羅丹明標(biāo)記。

b)設(shè)立對照，對紫杉醇免疫膠束在乳腺癌動物體內(nèi)的組織分布過程進行研究。

c)組織靶向性評價。

⑹藥效實驗

a)balb小鼠乳腺注射mcf-7建立乳腺癌動物模型；

b)采用靜脈注射給藥，設(shè)計對照，觀察紫杉醇免疫膠束的抑癌效果。

⑺、安全性評價

a)對紫杉醇免疫膠束的溶血性、血漿蛋白結(jié)合率、ld50實驗、刺激性實驗；

b)紫杉醇免疫膠束對組織器官的影響實驗，對關(guān)鍵臟器考慮切片分析。

經(jīng)檢測，本發(fā)明的抗血管抑素受體單克隆抗體結(jié)合納米膠束和包裹紫杉醇的抗血管抑素受體單克隆抗體結(jié)合免疫膠束的各檢測結(jié)果均較優(yōu)，因此其可以應(yīng)用在作為藥物載體方面中，特別是應(yīng)用在制備抗腫瘤藥物中。