本發(fā)明涉及核孤兒受體TR3抑制劑多肽及其應用，具體涉及具有抑制核受體TR3活性，治療惡性腫瘤的多肽。
背景技術：
核受體（nuclear receptor，NR）是一類在生物體內(nèi)廣泛分布的，配體依賴的轉(zhuǎn)錄因子。核受體與相應的配體及其輔調(diào)節(jié)因子相互作用，調(diào)控基因的協(xié)調(diào)表達，從而在機體的生長發(fā)育、新陳代謝、細胞分化及體內(nèi)許多生理過程中發(fā)揮重要作用。核受體的功能障礙將導致一系列疾病如癌癥、不育、肥胖、糖尿病。核受體能結合經(jīng)藥物設計而被修飾的小分子，從而調(diào)控相關疾病如癌、骨質(zhì)疏松、糖尿病等。它們是有希望的藥物設計靶標。
在人核受體超家族已發(fā)現(xiàn)的48個成員中，25個成員被劃分為孤兒核受體(orphan nuclear receptor)。TR3(也稱為Nur77)就是其中一個孤兒核受體，能夠被胞內(nèi)和胞外的多種刺激以及特異的激動劑/拮抗劑所調(diào)控， 參與細胞的生長、分化、凋亡和自噬、機體的代謝、衰老與免疫等生理調(diào)控過程。尤其在腫瘤細胞或癌組織中TR3受到異常激活， 往往呈現(xiàn)高水平的蛋白表達、亞細胞定位發(fā)生改變、以及復雜的翻譯后修飾等表征。TR3通過靶向不同的下游靶基因， 或者與不同蛋白的相互作用和相互影響， 最終發(fā)揮其在腫瘤細胞中復雜的生物學功能。因此，TR3成為腫瘤治療的靶點。
本專利中的核孤兒受體TR3抑制劑多肽已證明在胰腺癌和胃癌中有效，具有在其他腫瘤模型中開發(fā)的前景。
技術實現(xiàn)要素：
發(fā)明目的
本發(fā)明提供全新的序列，該序列為核孤兒受體TR3抑制劑，對惡性腫瘤具有很好的療效。
技術方案
核孤兒受體TR3抑制劑多肽，其特征在于其序列為SEQ ID NO：1。
核孤兒受體TR3抑制劑多肽在治療惡性腫瘤，如胰腺癌和胃癌藥物中的應用。
有益效果
利用固相合成法化學合成核孤兒受體TR3抑制劑多肽，該多肽具有全新的序列，該多肽可體外抑制核受體TR3活性，治療惡性腫瘤，如胰腺癌和胃癌。我們發(fā)現(xiàn)的核孤兒受體TR3抑制劑多肽可以同時抑制胰腺癌細胞增殖活力，并在體內(nèi)試驗中提高荷瘤小鼠生存率，具有潛在的新藥開發(fā)價值。
具體實施方式
實施例1
核孤兒受體TR3抑制劑多肽對體外培養(yǎng)人胰腺癌細胞的生長和存活IC50。
采用 MTT 比色法。將對數(shù)生長的人胰腺癌細胞，以 1.0×105加入 96 孔培養(yǎng)板中，培養(yǎng) 24h，實驗孔、陽性藥物對照孔分別加入不同濃度的實驗藥物核孤兒受體TR3抑制劑多肽(上海生工合成)和陽性對照藥物紫杉醇；空白組加入相同體積的溶劑。每孔設五個復孔，培養(yǎng)48h后，每孔加入 MTT，作用 4h 后，加入 DMSO，孵育 30min，在酶標儀 620nm 處測定吸光度 A 值，按公式人胰腺癌細胞生長抑制率＝（1-實驗組吸光值/對照組吸光值）×100％。計算出實驗藥物的 IC50 為6.36μM，紫杉醇的IC50 為4.26μM。
實施例2
核孤兒受體TR3抑制劑多肽對體外培養(yǎng)人胃癌細胞的生長和存活IC50。
采用 MTT 比色法。將對數(shù)生長的人胃癌細胞，以 1.0×105加入 96 孔培養(yǎng)板中，培養(yǎng) 24h，實驗孔、陽性藥物對照孔分別加入不同濃度的實驗藥物核孤兒受體TR3抑制劑多肽(上海生工合成)和陽性對照藥物紫杉醇；空白組加入相同體積的溶劑。每孔設五個復孔，培養(yǎng)48h后，每孔加入 MTT，作用 4h 后，加入 DMSO，孵育 30min，在酶標儀 620nm 處測定吸光度 A 值，按公式人胃癌細胞生長抑制率＝（1-實驗組吸光值/對照組吸光值）×100％。計算出實驗藥物的 IC50 為11.53μM，紫杉醇IC50 為14.01μM。
實施例3
用胰腺癌腫瘤模型檢測核孤兒受體TR3抑制劑多肽的體內(nèi)活力。
建立胰腺癌腫瘤模型，陽性對照藥物紫杉醇；空白組加入相同體積的溶劑， 實驗組多肽(上海生工合成)設3個劑量：5、10、20 mg/Kg。21天后，觀察小鼠存活數(shù)量，計算存活率。結果顯示，核孤兒受體TR3抑制劑多肽可有效地保護荷瘤小鼠，提高荷瘤小鼠的生存率，生存率達到97.2%。
實施例4
用胃癌腫瘤模型檢測核孤兒受體TR3抑制劑多肽的體內(nèi)活力。
建立胃癌腫瘤模型，陽性對照藥物紫杉醇；空白組加入相同體積的溶劑， 實驗組多肽(上海生工合成)設3個劑量：5、10、20 mg/Kg。21天后，觀察小鼠存活數(shù)量，計算存活率。結果顯示，核孤兒受體TR3抑制劑多肽可有效地保護荷瘤小鼠，提高荷瘤小鼠的生存率，生存率達到68.5%。
SEQUENCE LISTING
<110>
<120> 一種核孤兒受體TR3抑制劑多肽及其應用
<130>
<160> 1
<170> Patent In version 3.3
<210> 1
<211> 36
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 1
Met Gly Gly Asn Gln Leu Ile Tyr Ser Met Gly Ser Ser Cys Gly Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Gly Gly Asn Ile Ser Pro Leu Ser Ser Pro Thr Pro Ser
20 25 30
Met Pro Ser Pro
35