本發(fā)明涉及一種載槲皮素和白藜蘆醇的磁性脂質(zhì)納米粒及其制備方法，屬于醫(yī)藥制劑技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

槲皮素(quercetin，qt)屬黃酮類化合物，具有舒張血管、降低血脂、抗氧化等多種生物活性及藥理作用，近年來有關(guān)槲皮素抗腫瘤作用的研究亦日益引起重視。白藜蘆醇(resveratrol，res)是廣泛存在于多種食用和藥用植物中的多酚類化合物。近年的研究表明，白藜蘆醇抗腫瘤活性突出，可誘導(dǎo)肝癌、肺癌、乳腺癌、白血病等多種腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡，被認(rèn)為是最具希望的天然防癌劑之一。然而，槲皮素幾乎不溶于水，在水中的溶解度僅有2.2μg/ml，白藜蘆醇化學(xué)性質(zhì)不穩(wěn)定，見光遇熱易分解，且水溶性差，在水中的溶解度僅為30μg/ml，因此槲皮素和白藜蘆醇均存在口服吸收性差、生物利用度低等缺點(diǎn)，導(dǎo)致其臨床應(yīng)用受到一定程度的限制。

為提高槲皮素和白藜蘆醇的生物利用度，人們已經(jīng)研發(fā)出了一些藥物載體結(jié)構(gòu)，如專利cn1850070a于2006年10月25日公開了一種槲皮素固體脂質(zhì)納米粒制劑，專利cn101982168a于2011年3月2日公開了一種槲皮素納米膠束制劑，專利cn104172184a于2014年12月3日公開了一種槲皮素納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體，專利cn105106117a于2015年12月2日公開了一種槲皮素的納米粒，專利cn102614091a于2012年8月1日公開了一種白藜蘆醇納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體，專利cn103040754a于2013年4月17日公開了一種白藜蘆醇納米脂質(zhì)體，專利cn104688715a于2015年6月10日公開了一種白藜蘆醇固體脂質(zhì)納米粒，專利cn105534724a于2016年5月4日公開了一種包覆白藜蘆醇的納米固體脂質(zhì)載體，等。以上制劑僅載有單一藥物，雖能不同程度的提高槲皮素或白藜蘆醇的生物利用度，但并不能同時(shí)發(fā)揮兩藥的藥效，腫瘤靶向作用亦不明顯。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種載槲皮素和白藜蘆醇的磁性脂質(zhì)納米粒，該磁性脂質(zhì)納米粒穩(wěn)定性好、生物利用度高、腫瘤靶向性好，并且能夠通過兩藥合用協(xié)同發(fā)揮抗腫瘤療效。

本發(fā)明的另一目的是提供上述載槲皮素和白藜蘆醇的磁性脂質(zhì)納米粒的制備方法。

本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：一種載槲皮素和白藜蘆醇的磁性脂質(zhì)納米粒，由以下重量份的組分組成：槲皮素1～4份、白藜蘆醇1～4份、固體脂質(zhì)20～100份、液態(tài)脂質(zhì)40～100份、磷脂20～150份、水溶性乳化劑10～80份、磁性粒子4～15份、水2000～5000份；其中，

所述的固體脂質(zhì)為單硬脂酸甘油酯、硬脂酸、軟脂酸的一種或兩種以上的混合物，

所述的液態(tài)脂質(zhì)為辛酸癸酸甘油三酯、三油酸甘油酯、中鏈脂肪酸甘油三酯、肉豆蔻酸異丙酯、二乙二醇單乙基醚、油酸中的一種，

所述的磷脂為蛋黃卵磷脂或大豆卵磷脂，

所述的水溶性乳化劑為泊洛沙姆、膽酸鈉中的一種或兩種，

所述的磁性粒子為納米四氧化三鐵或油酸改性納米四氧化三鐵。

脂質(zhì)納米粒具有載藥量理想、穩(wěn)定性好、可大規(guī)模生產(chǎn)的特點(diǎn)，其脂質(zhì)材料的組成是影響載藥量和藥物泄露的重要因素，本發(fā)明所述的固體脂質(zhì)優(yōu)選為單硬脂酸甘油酯和硬脂酸的混合物，所述單硬脂酸甘油酯和硬脂酸的質(zhì)量比為5:1～9:1。

固體脂質(zhì)會形成排列整齊的脂質(zhì)晶格，限制納米粒的載藥能力，而液態(tài)脂質(zhì)的引入能夠增加載體的晶體混亂度，使其不易結(jié)晶，有利于提高載藥量，降低藥物在儲存過程中的泄漏，本發(fā)明所述的液態(tài)脂質(zhì)優(yōu)選為辛酸癸酸甘油三酯。

乳化劑的種類可影響納米粒的粒徑、穩(wěn)定性等，納米載體包載藥物和磁性材料得到磁靶向納米給藥系統(tǒng)，通過外磁場定位可選擇性使藥物定位于腫瘤組織。

本發(fā)明優(yōu)選條件下提供的磁性脂質(zhì)納米粒特征為：電鏡下呈類球形粒子，顆粒間分散、獨(dú)立，平均粒徑112nm，zeta電位-27.78mv，白藜蘆醇包封率為96.11％，槲皮素包封率為92.67％。

本發(fā)明的磁性脂質(zhì)納米粒可采用以下不同制備方法中的任意一種制得：

(1)高溫乳化-低溫固化法：按比例分別稱取槲皮素、白藜蘆醇、固體脂質(zhì)、液態(tài)脂質(zhì)和磷脂，溶解于有機(jī)溶劑中，構(gòu)成油相；水溶性乳化劑和磁性粒子分散于水中，構(gòu)成水相；在60～70℃條件下將油相緩慢滴加至水相，恒溫持續(xù)攪拌至除盡有機(jī)溶劑，得初乳；將制得的初乳置冰水浴中攪拌，冷卻后，超聲探頭乳化，即得載槲皮素和白藜蘆醇的磁性脂質(zhì)納米粒；4℃保存或向制備的磁性脂質(zhì)納米粒中加入凍干保護(hù)劑甘露醇，冷凍干燥得固體制劑。

(2)高溫乳化-低溫固化法：按比例分別稱取槲皮素、白藜蘆醇、固體脂質(zhì)、液態(tài)脂質(zhì)和磷脂，溶解于有機(jī)溶劑中，構(gòu)成油相；水溶性乳化劑分散于水中，構(gòu)成水相；在60～70℃條件下將油相緩慢滴加至水相，恒溫持續(xù)攪拌至除盡有機(jī)溶劑，得初乳；取水分散的磁性粒子，與初乳等體積混合后置冰水浴中攪拌，冷卻后，超聲探頭乳化，即得載槲皮素和白藜蘆醇的磁性脂質(zhì)納米粒；4℃保存或向制備的磁性脂質(zhì)納米粒中加入凍干保護(hù)劑甘露醇，冷凍干燥得固體制劑。

(3)薄膜分散法：按比例分別稱取槲皮素、白藜蘆醇、固體脂質(zhì)、液態(tài)脂質(zhì)和磷脂，溶解于有機(jī)溶劑中，構(gòu)成油相，將油相轉(zhuǎn)移至圓底燒瓶中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器減壓蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑，使含藥脂質(zhì)在器壁形成薄膜，加入含水溶性乳化劑和磁性粒子的水相洗脫，將洗脫的混懸液進(jìn)行超聲探頭乳化，即得載槲皮素和白藜蘆醇的磁性脂質(zhì)納米粒；4℃保存或向制備的磁性脂質(zhì)納米粒中加入凍干保護(hù)劑甘露醇，冷凍干燥得固體制劑。

(4)乳化-高壓均質(zhì)法：按比例分別稱取槲皮素、白藜蘆醇、固體脂質(zhì)、液態(tài)脂質(zhì)和磷脂，溶解于有機(jī)溶劑中，構(gòu)成油相；將水溶性乳化劑分散于水中，構(gòu)成水相；在60～70℃條件下將水相一次性快速加入油相，高速攪拌形成初乳，迅速倒入高壓均質(zhì)機(jī)，1000bar壓力下循環(huán)6次；冷卻至室溫，加入磁性粒子，攪拌，即得載槲皮素和白藜蘆醇的磁性脂質(zhì)納米粒；4℃保存或向制備的磁性脂質(zhì)納米粒中加入凍干保護(hù)劑甘露醇，冷凍干燥得固體制劑。

(5)微乳法：按比例分別稱取固體脂質(zhì)、液態(tài)脂質(zhì)和磷脂，熱熔后構(gòu)成油相，將槲皮素、白藜蘆醇溶解于有機(jī)溶劑中，與油相混合均勻，攪拌至除去有機(jī)溶劑；稱取水溶性乳化劑、磁性粒子分散于水中，構(gòu)成水相；在60～70℃條件下將水相緩緩滴加到油相中，攪拌均勻，即得載槲皮素和白藜蘆醇磁性脂質(zhì)納米粒；4℃保存或向制備的磁性脂質(zhì)納米粒中加入凍干保護(hù)劑甘露醇，冷凍干燥得固體制劑。

上述任一制備方法中，所述的有機(jī)溶劑為無水乙醇和丙酮的混合溶液，所述無水乙醇和丙酮的體積比為0.25:1～4:1。

本發(fā)明提供的磁性脂質(zhì)納米粒利用脂質(zhì)納米載體的疏水內(nèi)核同時(shí)包載槲皮素和白藜蘆醇，并將超順磁納米四氧化三鐵載入含藥脂質(zhì)納米粒，制成含藥磁性脂質(zhì)納米粒，有效提高了槲皮素和白藜蘆醇的溶解度和生物利用度，同時(shí)還可通過外磁場定位實(shí)現(xiàn)腫瘤靶向治療，使藥物能夠定向濃集于靶區(qū)并釋放，從而進(jìn)一步增強(qiáng)了槲皮素和白藜蘆醇兩藥合用的抗腫瘤效果，并降低藥物在正常組織中的分布和聚集，減小其毒副作用。

本發(fā)明的制備方法多種多樣、操作簡便、清潔安全、無有毒有機(jī)溶劑殘留，且可連續(xù)化生產(chǎn)，制得的磁性脂質(zhì)納米粒形態(tài)均一、粒徑小、包封率高、穩(wěn)定性好，實(shí)現(xiàn)了槲皮素和白藜蘆醇的靶向載運(yùn)與緩釋。

附圖說明

圖1是超順磁納米四氧化三鐵透射電鏡圖；

圖2是油酸改性納米四氧化三鐵透射電鏡圖；

圖3是載槲皮素和白藜蘆醇的磁性脂質(zhì)納米粒透射電鏡圖；

圖4是載槲皮素和白藜蘆醇的磁性脂質(zhì)納米粒溶液高效液相色譜圖；

圖5是載槲皮素和白藜蘆醇的磁性脂質(zhì)納米粒體外釋放曲線圖；

圖6是載槲皮素和白藜蘆醇的磁性脂質(zhì)納米粒磁滯回線圖；

圖7是槲皮素裸藥、白藜蘆醇裸藥以及載槲皮素和白藜蘆醇的磁性脂質(zhì)納米粒對hepg2肝癌細(xì)胞的抑制效果圖。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說明。

超順磁納米四氧化三鐵的制備實(shí)驗(yàn)如下：

分取0.1mol/l的fecl2·4h2o和fecl3溶液各60ml，轉(zhuǎn)移至250ml三頸燒瓶中。在體系溫度50℃，1000rpm機(jī)械攪拌和氮?dú)獗Ｗo(hù)下，緩慢滴加25％的氨水溶液至ph值為12，攪拌反應(yīng)30min后，冷卻至室溫，用水和無水乙醇反復(fù)洗滌生成物至近中性，磁吸后100℃真空干燥，即得超順磁納米四氧化三鐵粒子。取適量四氧化三鐵粒子的水分散液滴加到覆蓋有碳膜的銅網(wǎng)上，自然晾干后，透射電鏡下觀察形態(tài)，透射電鏡圖如圖1所示，粒子大小約5～10nm。

油酸改性納米四氧化三鐵的制備實(shí)驗(yàn)如下：

稱取上述制備的超順磁納米四氧化三鐵粒子0.5mg，均勻分散于水中，在體系溫度60℃，1000rpm機(jī)械攪拌和氮?dú)獗Ｗo(hù)下，逐滴加入15ml油酸，攪拌反應(yīng)30min，反應(yīng)停止后，溶液冷卻至室溫，用無水乙醇洗滌油酸表面改性的fe3o4至中性，磁吸分離后100℃真空干燥，即得油酸改性納米四氧化三鐵粒子。取適量油酸改性納米四氧化三鐵粒子的水分散液滴加到覆蓋有碳膜的銅網(wǎng)上，自然晾干后，透射電鏡下觀察形態(tài)，透射電鏡圖如圖2所示，粒子大小約10nm。

實(shí)施例1：精密稱取槲皮素4.0mg、白藜蘆醇4.0mg、單硬脂酸甘油酯50mg、硬脂酸10mg、辛酸癸酸甘油三酯40mg、蛋黃卵磷脂100mg，溶解于2.5ml無水乙醇和丙酮的混合溶劑(體積比1:1)中，70℃水浴下溶解作為油相；精密稱取膽酸鈉35mg、納米fe3o410mg，用5ml水分散作為水相；70℃、1000rpm機(jī)械攪拌下，將油相緩緩滴加到水相中，恒溫持續(xù)攪拌2h除盡有機(jī)溶劑，得初乳；將制得的初乳置冰水浴中，800rpm攪拌30min，以300w的功率超聲探頭乳化6min，即得載槲皮素和白藜蘆醇磁性脂質(zhì)納米粒。4℃保存或向制備的磁性脂質(zhì)納米粒中加入適量的甘露醇，冷凍干燥得固體制劑。

實(shí)施例2：

精密稱取槲皮素2.5mg、白藜蘆醇2.5mg、單硬脂酸甘油酯60mg、硬脂酸40mg、辛酸癸酸甘油三酯80mg、蛋黃卵磷脂100mg，溶解于2.5ml無水乙醇和丙酮的混合溶劑(體積比2:1)中，60℃水浴下溶解作為油相；精密稱取泊洛沙姆50mg，用2.5ml水溶解作為水相；在60℃恒溫條件及磁力攪拌下(1000rpm)，將油相緩緩滴加到水相中，繼續(xù)攪拌2h除盡有機(jī)溶劑，即得初乳。精密稱取納米fe3o415mg，量取與初乳等量的水分散后，與初乳等體積混合，置冰浴下攪拌固化2h，以300w的功率超聲探頭乳化6min，即得載槲皮素和白藜蘆醇磁性脂質(zhì)納米粒。

實(shí)施例3：

精密稱取槲皮素2.5mg、白藜蘆醇2.5mg、中鏈脂肪酸甘油酯100mg、硬脂酸50mg、單硬脂酸甘油酯50mg、大豆卵磷脂100mg，溶解于5ml無水乙醇和丙酮的混合溶劑(體積比0.5:1)中，70℃水浴下溶解作為油相；精密稱取膽酸鈉35mg，油酸改性納米fe3o415mg，用2.5ml水分散作為水相；在70℃恒溫條件及機(jī)械攪拌下(1000rpm)，將油相緩緩滴加到水相中，繼續(xù)攪拌2h除盡有機(jī)溶劑，將其分散到適量的水中，使其總體積為5ml，冰水浴下攪拌30min，以300w的功率超聲探頭乳化6min，即得載槲皮素和白藜蘆醇磁性脂質(zhì)納米粒。

實(shí)施例4：

精密稱取槲皮素3.0mg、白藜蘆醇3.0mg、單硬脂酸甘油酯90mg、硬脂酸10mg、肉豆蔻酸異丙酯40mg、大豆卵磷脂100mg，溶解于2ml無水乙醇和丙酮的混合溶劑(體積比4:1)中，70℃水浴下溶解作為油相；精密稱取泊洛沙姆25mg、膽酸鈉25mg，油酸改性納米fe3o410mg，用2.5ml水分散作為水相；在70℃恒溫條件及機(jī)械攪拌下(1000rpm)，將油相緩緩滴加到水相中，繼續(xù)攪拌2h除盡有機(jī)溶劑，將其分散到適量的水中，使其總體積為5ml，冰水浴下攪拌30min，以300w的功率超聲探頭乳化6min，即得載槲皮素和白藜蘆醇磁性脂質(zhì)納米粒。

實(shí)施例5：

精密稱取槲皮素2.0mg、白藜蘆醇2.0mg、三油酸甘油酯80mg、軟脂酸20mg、大豆卵磷脂150mg，溶解于5ml無水乙醇和丙酮的混合溶劑(體積比0.25:1)中，60℃水浴下溶解作為油相；將油相轉(zhuǎn)移至250ml圓底燒瓶中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器減壓蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑，使含槲皮素和白藜蘆醇的脂質(zhì)在器壁形成一層薄膜，加入含膽酸鈉35mg和納米fe3o410mg的5ml水相進(jìn)行洗脫，洗脫的混懸液轉(zhuǎn)移至西林瓶中，以300w的功率超聲探頭乳化6min，即得載槲皮素和白藜蘆醇的磁性脂質(zhì)納米粒。

實(shí)施例6：

稱取槲皮素50mg、白藜蘆醇50mg、單硬脂酸甘油酯1g、辛酸癸酸甘油三酯2g、大豆卵磷脂1g，溶解于5ml無水乙醇和丙酮的混合溶劑(體積比1:1)中，構(gòu)成油相；稱取泊洛沙姆500mg，在70℃下用100ml水分散作為水相；將水相一次性快速加入到油相中，高速攪拌(6000rpm，3min)制成初乳，迅速倒入pandaplus2000型高壓均質(zhì)機(jī)，1000bar壓力下循環(huán)6次(每次10min)，冷卻至室溫，加入納米fe3o4200mg，60℃、1000rpm機(jī)械攪拌30min，即得載槲皮素和白藜蘆醇的磁性脂質(zhì)納米粒。4℃保存或向制備的磁性脂質(zhì)納米粒中加入適量的甘露醇，冷凍干燥得固體制劑。

實(shí)施例7：

精密稱取硬脂酸80mg、油酸60mg、大豆卵磷脂50mg熱熔后作為油相，精密稱取槲皮素2.0mg、白藜蘆醇2.0mg，溶解于1ml無水乙醇和丙酮的混合溶劑(體積比1:1)后，與油相于60℃下混合均勻，1000rpm機(jī)械攪拌至除去有機(jī)溶劑；另精密稱取泊洛沙姆80mg、納米fe3o48mg，用2.5ml水分散作為水相；在60℃恒溫條件及機(jī)械攪拌下(1000rpm)，將水相緩緩滴加到油相中，繼續(xù)攪拌1h，即得載槲皮素和白藜蘆醇的磁性脂質(zhì)納米粒。4℃保存或向制備的磁性脂質(zhì)納米粒中加入適量的甘露醇，冷凍干燥得固體制劑。

實(shí)施例8：

精密稱取硬脂酸100mg、二乙二醇單乙基醚50mg、大豆卵磷脂50mg熱熔后作為油相，精密稱取槲皮素2.0mg、白藜蘆醇2.0mg，溶解于1.5ml無水乙醇和丙酮的混合溶劑(體積比2:1)后，與油相于60℃下混合均勻，1000rpm機(jī)械攪拌至除去有機(jī)溶劑；另精密稱取膽酸鈉50mg、納米fe3o48mg，用2.5ml水分散作為水相；在60℃恒溫條件及機(jī)械攪拌下(1000rpm)，將水相緩緩滴加到油相中，繼續(xù)攪拌1h，即得載槲皮素和白藜蘆醇的磁性脂質(zhì)納米粒。4℃保存或向制備的磁性脂質(zhì)納米粒中加入適量的甘露醇，冷凍干燥得固體制劑。

通過以下試驗(yàn)(實(shí)施例1為例)對本發(fā)明的應(yīng)用效果作進(jìn)一步的說明：

1.形態(tài)觀察

取載槲皮素和白藜蘆醇的磁性脂質(zhì)納米粒水分散液少量滴于銅網(wǎng)上，自然干燥后，于tecnaig2spirittwin型透射電鏡下觀察，為類球形粒子，粒徑在20～180nm之間。結(jié)果見圖3。

2.粒徑與zeta電位

取載槲皮素和白藜蘆醇的磁性脂質(zhì)納米粒，用適量的水稀釋，采用nicomp380/zls型納米粒度-zeta電位測定儀測定其粒徑及zeta電位。zeta電位值為-27.78mv，平均粒徑為112nm，與透射電鏡結(jié)果基本吻合。

3.包封率的測定

用超濾離心法-高效液相色譜法分離測定納米粒中包封藥物和游離藥物，計(jì)算其包封率和載藥量：取1.0ml納米粒溶液置超濾離心管中，6500rpm離心20min，hplc測定上清液中游離藥物，計(jì)為w游；另取納米粒溶液1ml，加甲醇適量，超聲破乳，用甲醇定容至10ml，取適量分散液，離心，過濾，hplc測定濾液中藥物的含量，為w總。包封率(％)＝(w總-w游)/w總×100。

液相色譜條件為：shimadzulc-20a高效液相色譜儀；色譜柱：zorbaxsb-c18色譜柱；流動相：甲醇-0.1％甲酸溶液；進(jìn)樣體積：20μl；柱溫：30℃；流速：1ml/min；dad檢測器；檢測波長：306nm(白藜蘆醇)、360nm(槲皮素)。

hplc圖譜見圖4。根據(jù)測定結(jié)果，計(jì)算得到白藜蘆醇包封率為96.11％，槲皮素包封率為92.67％。

4.體外釋放試驗(yàn)

精密量取納米粒溶液裝入透析袋(mwco:3500)，置于裝有60ml0.01mol/l磷酸鹽緩沖液(pbs，ph7.4)溶液的燒杯中，保鮮膜封口。將裝有透析袋的燒杯置于恒溫氣浴振蕩器中(37℃，100rpm)考察其釋放行為。分別于0.5、1、2、4、6、8、12、24、28h取1.5ml溶液，同時(shí)補(bǔ)充等量pbs；樣品液用0.45μm微孔濾膜過濾，除去初濾液，取續(xù)濾液lml加入適量的流動相稀釋，混勻，經(jīng)高效液相色譜儀測定槲皮素和白藜蘆醇含量，計(jì)算其累積釋放百分率，繪制釋放曲線。

載槲皮素和白藜蘆醇的磁性脂質(zhì)納米粒體外釋放曲線見圖5，由圖可知，12h內(nèi)兩種藥物累積釋放百分率達(dá)到80％以上，并具明顯的緩釋特征。

5.磁性特征

采用lakeshore7410型磁性超導(dǎo)量子磁強(qiáng)計(jì)測定載槲皮素和白藜蘆醇的磁性脂質(zhì)納米粒的磁性特征，磁滯回線見圖6。

6.腫瘤靶向性試驗(yàn)

荷h22肝癌細(xì)胞小鼠模型的建立：取昆明小鼠18只，體重15-20g，隨即在每只小鼠右前側(cè)腋下接種0.2ml的h22肝癌細(xì)胞懸液于皮下，接種后第3d，小鼠右側(cè)腋下可觸及移植局部有隆起的腫瘤硬塊，接種第7d時(shí)腫瘤體積約100mm³，腫瘤形成。將成瘤小鼠隨機(jī)分為3組，每組6只。給藥方案分別為：生理鹽水組、載槲皮素和白藜蘆醇脂質(zhì)納米粒組(不含磁)、載槲皮素和白藜蘆醇磁性脂質(zhì)納米粒組。給藥方式為小鼠尾靜脈注射，其中載槲皮素和白藜蘆醇磁性脂質(zhì)納米粒組于小鼠腫瘤組織部位施加外磁場。小鼠尾靜脈注射后，分別于0.5、4、12、24h取出動物，頸椎脫臼法處死小鼠，立刻進(jìn)行解剖，取出心、肝、脾、肺、腎、腫瘤，在生理鹽水中洗涮，濾紙吸干表面水分，稱量記錄組織濕重，取部分組織稱重后加入等量蒸餾水進(jìn)行組織勻漿，取組織勻漿液20μl，渦旋混合均勻,加入蛋白沉淀溶劑乙腈60μl，渦旋混合3min，然后再補(bǔ)充加入萃取劑，10000rpm離心10min，沉淀蛋白及脂質(zhì)，hplc測定上清液中藥物的含量。

結(jié)果顯示載槲皮素和白藜蘆醇磁性脂質(zhì)納米粒組的荷瘤小鼠除腫瘤組織外其余組織中的分布量均較少；而載槲皮素和白藜蘆醇脂質(zhì)納米粒(不含磁)組的荷瘤小鼠腫瘤組織和肝臟分布最多，再次是心、腎、脾、肺，充分證明磁性脂質(zhì)納米粒較不含磁的脂質(zhì)納米粒相比，具有更明顯的腫瘤靶向性。

7.腫瘤細(xì)胞殺傷試驗(yàn)

hepg2肝癌細(xì)胞株在含10％胎牛血清、100u/ml青霉素、100μg/ml鏈霉素的dmem培養(yǎng)液中，置于37℃，5％co2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。采用cck-8法測定腫瘤細(xì)胞活力。具體操作如下：將hepg2細(xì)胞懸液以1×10⁵/ml的密度接種于96孔板，設(shè)對照組和實(shí)驗(yàn)組，每組3個(gè)復(fù)孔，以未處理的細(xì)胞作為對照組，實(shí)驗(yàn)組分設(shè)槲皮素、白藜蘆醇、槲皮素+白藜蘆醇、槲皮素磁性脂質(zhì)納米粒、白藜蘆醇磁性脂質(zhì)納米粒、載槲皮素和白藜蘆醇磁性脂質(zhì)納米粒，培養(yǎng)24h后，每孔加入20μlcck-8溶液，繼續(xù)培養(yǎng)2h，隨后用biotekelx808型多功能酶標(biāo)儀測定細(xì)胞在450nm處的吸光度(od值)，并按以下公式計(jì)算腫瘤細(xì)胞活力(％)，各實(shí)驗(yàn)組對hepg2細(xì)胞的抑制效果見圖7。

腫瘤細(xì)胞活力(％)＝od實(shí)驗(yàn)/od對照×100％。

結(jié)果表明，載槲皮素和白藜蘆醇的磁性脂質(zhì)納米粒對hepg2細(xì)胞具有明顯的抑制作用，且載槲皮素和白藜蘆醇的磁性脂質(zhì)納米粒對于腫瘤細(xì)胞的殺傷作用明顯優(yōu)于載槲皮素或載白藜蘆醇單藥的脂質(zhì)納米粒(p＜0.05)。