本發(fā)明涉及醫(yī)藥，特別是一種澤蘭多糖制備方法及其應用。
背景技術：
：澤蘭為唇形科植物毛葉地瓜兒苗（LycopuslucidusTurcz.Var.HirtusRegel）的干燥地上部分。別名地瓜兒苗、地筍、地參等，始載于《神農本草經》，歷代本草均有記載，是一種用途廣泛的傳統(tǒng)中藥材，收載于《中華人民共和國藥典》2015年版一部。澤蘭廣泛分布于黑龍江、吉林、遼寧、安徽、江蘇、浙江、湖北、四川、山西等地。眾多文獻報道表明澤蘭具有豐富的生物活性成分和多種藥理作用，極具應用價值。澤蘭味苦、辛，微溫，歸肝、脾經，具有活血調經、祛瘀消癰、利水消腫之功效，用于治療月經不調、經閉、經痛、產后瘀血腹痛、水腫等?，F代藥理作用研究表明澤蘭具有抗凝血、降血脂、保肝利膽等生理活性，還有改善免疫力、活血化瘀、抗氧化等生理功能，能防治冠心病、高血壓、肝硬化等疾病。目前文獻大多報道澤蘭中三萜酸類、酚酸類、黃酮類、揮發(fā)油等化學成分提取分離及藥理作用。但是到目前為止，還沒有澤蘭多糖具有促進腸道菌群增殖和改善便秘功能和用途的相關報道，也沒有如何從澤蘭中將澤蘭多糖提取的公開報導。技術實現要素：針對上述情況，為克服現有技術之缺陷，本發(fā)明之目的就是提供一種澤蘭多糖制備方法及其應用，可有效解決澤蘭多糖的制備及其在制備調節(jié)腸道菌群失調及改善便秘藥物中的應用。本發(fā)明解決的技術方案是，澤蘭多糖的制備方法是，將澤蘭飲片粉碎后過20～60目篩，在50～80℃下以料水質量比1:5～20進行超聲微波提取0.5～2h，得提取液，提取液經8000～12000rpm高速離心20～30min，取上清液，得第一次上清液，加入第一次上清液體積3～5倍的Sevag試劑，震蕩0.5～1h，8000～12000rpm高速離心20～30min，取上清液，得第二次上清液，第二次上清液減壓濃縮至相對密度為1.0～1.2的濃縮液，濃縮液加入3～5倍體積的95%乙醇沉淀，得沉淀物，干燥即得澤蘭多糖；該澤蘭多糖可有效用于制備調節(jié)腸道菌群失調及改善便秘的藥物，從而實現澤蘭多糖在制備調節(jié)腸道菌群失調及改善便秘藥物中的應用。本發(fā)明制備方法簡單，易生產制備，成本低，效率高，有效用于從澤蘭中提取澤蘭多糖，并實現澤蘭多糖在制備調節(jié)腸道菌群失調及改善便秘藥物中的應用，還可用于制備保健品、食品，開拓了澤蘭新的藥價值，有良好的經濟和社會效益。具體實施方式以下結合具體情況對本發(fā)明的具體實施方式作詳細說明。本發(fā)明制備方法可由以下實施例給出。實施例1本發(fā)明在具體實施中，澤蘭多糖的制備方法是，將澤蘭飲片粉碎，過30目篩，以料水質量比1：8，在70℃下進行超聲微波提取1.5h，超聲提取功率為500w，頻率為25KHz，微波功率為600W，頻率為2450KHz，提取液經10000rpm高速離心25min，取上清液，得第一次上清液，加入第一次上清液3倍體積的Sevag試劑，震蕩0.5h，10000rpm高速離心25min，取上清液，得第二次上清液，減壓濃縮至相對密度為1.15的濃縮液，濃縮液加入3倍體積的95%乙醇沉淀，得沉淀物，干燥即得澤蘭多糖。實施例2本發(fā)明在具體實施中，澤蘭多糖的制備方法是，將澤蘭飲片粉碎，過20目篩，以料水質量比1：10，在80℃下進行超聲微波提取1h，超聲提取功率為600w，頻率為25KHz，微波功率為800W，頻率為2450KHz，提取液經12000rpm高速離心20min，取上清液，得第一次上清液，加入第一次上清液4倍體積的Sevag試劑，震蕩0.6h，12000rpm高速離心20min，取上清液，得第二次上清液，減壓濃縮至相對密度為1.18的濃縮液，濃縮液加入4倍體積的95%乙醇沉淀，得沉淀物，干燥即得澤蘭多糖。實施例3本發(fā)明在具體實施中，澤蘭多糖的制備方法是，將澤蘭飲片粉碎，過40目篩，以料水質量比1：15，在85℃下進行超聲微波提取1h，超聲提取功率為800w，頻率為25KHz，微波功率為700W，頻率為2450KHz，提取液經9000rpm高速離心30min，取上清液，得第一次上清液，加入第一次上清液5倍體積的Sevag試劑，震蕩0.8h，9000rpm高速離心30min，取上清液，得第二次上清液，減壓濃縮至相對密度為1.16的濃縮液，濃縮液加入5倍體積的95%乙醇沉淀，得沉淀物，干燥即得澤蘭多糖。實施例4本發(fā)明在具體實施中，澤蘭多糖的制備方法是，將澤蘭飲片粉碎，過24目篩，以料水質量比1：20，在60℃下進行超聲微波提取1h，超聲提取功率為900w，頻率為25KHz，微波功率為900W，頻率為2450KHz，提取液經10000rpm高速離心25min，取上清液，得第一次上清液，加入第一次上清液5倍體積的Sevag試劑，震蕩1h，10000rpm高速離心25min，取上清液，得第二次上清液，減壓濃縮至相對密度為1.2的濃縮液，濃縮液加入5倍體積的95%乙醇沉淀，得沉淀物，干燥即得澤蘭多糖。上述方法所制備的澤蘭多糖可有效用于制備調節(jié)腸道菌群失調及改善便秘的藥物和制備治療便秘、肥胖的保健品及食品，其中澤蘭多糖在治療便秘、肥胖的保健品及食品中的質量含量為40-80%，在制備調節(jié)腸道菌群失調及改善便秘的藥物時，其藥物為片劑、顆粒劑、膠囊劑、散劑、口服液，其中澤蘭多糖質量含量為40-80%，并經試驗和實地應用取得了非常好的有益技術效果，有關試驗資料如下：實驗1將澤蘭多糖分別以2.5%、5%、10%比例（質量含量）混合于大鼠飼料中。SD大鼠60只，隨機分為5組，分別為生理鹽水組、高脂飼料組、2.5%、5%、10%（質量含量）劑量組。生理鹽水組正常飼料喂養(yǎng)，其余大鼠經灌胃連續(xù)給予高脂飼料15天，通過聚合酶鏈式反應（PCR）技術檢測糞便菌群豐度，當硬壁菌門：擬桿菌門的比例大于1:1時，提示菌群開始失調，大鼠飼料更換為含有澤蘭多糖的飼料14天后，收集糞便，PCR測定細菌豐度。結果如下表1、表2所示。表1顯示澤蘭多糖對腸道菌群紊亂的調節(jié)作用，表2顯示了澤蘭多糖對腸道菌群中擬桿菌、梭桿菌和乳桿菌的影響。由表1、表2可見，高脂飼料組大鼠糞便硬壁菌門豐度顯著升高，擬桿菌門豐度明顯減小，給予澤蘭多糖的大鼠糞便中硬壁菌門豐度顯著下降，梭桿菌豐度顯著下降，益生菌豐度明顯增加，顯示出明顯地改善腸道菌群失調的作用。表1澤蘭多糖對大鼠糞便硬壁菌門和擬桿菌門的影響組別動物數硬壁菌門擬桿菌門比例生理鹽水123.8±0.464.0±0.520.9高脂飼料125.8±0.683.7±0.491.5澤蘭多糖（2.5%）123.9±0.534.0±0.611.0*澤蘭多糖（5%）123.5±0.494.6±0.570.7**澤蘭多糖（10%）123.1±0.354.9±0.620.6***P﹤0.05，**P﹤0.01VS高脂飼料表2澤蘭多糖對大鼠糞便中擬桿菌、梭桿菌和乳桿菌的影響組別動物數擬桿菌梭桿菌乳桿菌生理鹽水120.35±0.0231.3±0.232.8±0.33高脂飼料120.62±0.0672.9±0.460.7±0.06澤蘭多糖（2.5%）120.68±0.0762.6±0.520.9±0.09澤蘭多糖（5%）120.65±0.0821.5±0.26*2.1±0.35*澤蘭多糖（10%）120.69±0.0971.1±0.31**2.6±0.43***P﹤0.05，**P﹤0.01VS高脂飼料實驗2將澤蘭多糖分別以2%、4%、8%比例（質量含量）混合于大鼠飼料中。SD大鼠60只，隨機分為5組，分別為生理鹽水組、高脂飼料組、2%、4%、8%（質量含量）劑量組。生理鹽水組正常飼料喂養(yǎng)，其余大鼠經灌胃連續(xù)給予高脂飼料15天，通過聚合酶鏈式反應（PCR）技術檢測糞便菌群豐度，當硬壁菌門：擬桿菌門的比例大于1:1時，提示菌群開始失調，大鼠飼料更換為含有澤蘭多糖的飼料14天后，收集糞便，PCR測定細菌豐度。結果如下表3、表4所示。表3顯示澤蘭多糖對腸道菌群紊亂的調節(jié)作用，表4顯示了澤蘭多糖對腸道菌群中擬桿菌、梭桿菌和乳桿菌的影響。由表3、表4可見，高脂飼料組大鼠糞便硬壁菌門豐度顯著升高，擬桿菌門豐度明顯減小，給予澤蘭多糖的大鼠糞便中硬壁菌門豐度顯著下降，梭桿菌豐度顯著下降，益生菌豐度明顯增加，顯示出明顯地改善腸道菌群失調的作用。表3澤蘭多糖對大鼠糞便硬壁菌門和擬桿菌門的影響組別動物數硬壁菌門擬桿菌門比例生理鹽水123.7±0.393.9±0.480.9高脂飼料125.3±0.723.4±0.571.5澤蘭多糖（2%）124.0±0.464.1±0.531.0*澤蘭多糖（4%）123.6±0.394.5±0.490.8*澤蘭多糖（8%）123.2±0.314.8±0.560.6***P﹤0.05，**P﹤0.01VS高脂飼料表4澤蘭多糖對大鼠糞便中擬桿菌、梭桿菌和乳桿菌的影響組別動物數擬桿菌梭桿菌乳桿菌生理鹽水120.38±0.0261.2±0.312.7±0.43高脂飼料120.67±0.0582.8±0.420.8±0.07澤蘭多糖（2%）120.65±0.0612.5±0.460.9±0.08澤蘭多糖（4%）120.68±0.0731.7±0.31*2.2±0.42*澤蘭多糖（8%）120.69±0.0711.3±0.26**2.5±0.38***P﹤0.05，**P﹤0.01VS高脂飼料實驗3將澤蘭多糖分別以1.25%、2.5%、5%比例（質量含量）混合于大鼠飼料中。SD大鼠60只，隨機分為5組，分別為生理鹽水組、高脂飼料組、1.25%、2.5%、5%（質量含量）劑量組。生理鹽水組正常飼料喂養(yǎng)，其余大鼠經灌胃連續(xù)給予高脂飼料15天，通過聚合酶鏈式反應（PCR）技術檢測糞便菌群豐度，當硬壁菌門：擬桿菌門的比例大于1:1時，提示菌群開始失調，大鼠飼料更換為含有澤蘭多糖的飼料14天后，收集糞便，PCR測定細菌豐度。結果如下表5、表6所示。表5顯示澤蘭多糖對腸道菌群紊亂的調節(jié)作用，表6顯示了澤蘭多糖對腸道菌群中擬桿菌、梭桿菌和乳桿菌的影響。由表5、表6可見，高脂飼料組大鼠糞便硬壁菌門豐度顯著升高，擬桿菌門豐度明顯減小，給予澤蘭多糖的大鼠糞便中硬壁菌門豐度顯著下降，梭桿菌豐度顯著下降，益生菌豐度明顯增加，顯示出明顯地改善腸道菌群失調的作用。表5澤蘭多糖對大鼠糞便硬壁菌門和擬桿菌門的影響組別動物數硬壁菌門擬桿菌門比例生理鹽水123.6±0.413.9±0.420.9高脂飼料125.9±0.623.8±0.361.5澤蘭多糖（2.5%）123.8±0.373.9±0.431.0*澤蘭多糖（5%）123.3±0.424.8±0.430.7**澤蘭多糖（10%）123.1±0.294.9±0.410.6***P﹤0.05，**P﹤0.01VS高脂飼料表6澤蘭多糖對大鼠糞便中擬桿菌、梭桿菌和乳桿菌的影響組別動物數擬桿菌梭桿菌乳桿菌生理鹽水120.34±0.0211.2±0.212.7±0.29高脂飼料120.66±0.0752.8±0.520.8±0.09澤蘭多糖（2.5%）120.67±0.0582.5±0.431.1±0.12澤蘭多糖（5%）120.66±0.0691.4±0.36*2.2±0.43*澤蘭多糖（10%）120.65±0.0831.2±0.29**2.7±0.48***P﹤0.05，**P﹤0.01VS高脂飼料實驗4昆明小鼠60只，隨機分為4組，分別為生理鹽水組、澤蘭多糖低、中、高劑量組。經灌胃給藥，每天一次，連續(xù)7天，末次給藥后，灌胃給予碳素墨水0.1ml/10g，6h后收集糞便稱重；小鼠脫頸椎處死，立即取出胃腸，平鋪，測定碳素墨水前端至幽門的距離及小腸全長，計算小腸推進率(小腸推進率=碳素墨水前端至幽門的距離/小腸全長×100%)。結果見表7。表7澤蘭多糖對小鼠小腸運動推動作用組別動物數墨汁推進率（%）6h糞便重量（mg）生理鹽水1225.5±6.256.3±8.2澤蘭多糖（1000mg/kg）1236.1±5.675.1±12.6澤蘭多糖（2000mg/kg）1245.5±8.1*82.3±13.5*澤蘭多糖（4000mg/kg）1253.2±9.6**89.8±12.3**P﹤0.05，**P﹤0.01VS生理鹽水結果表明，澤蘭多糖可顯著提高墨汁推進率，6h糞便總重量顯著高于鹽水對照組，說明澤蘭多糖具有顯著潤腸通便作用。上述經反復試驗多次，均取得了相同或相近似的結果，表明本發(fā)明方法穩(wěn)定可靠，其制備物澤蘭多糖具有潤腸通便、改善腸道菌群失調之功效，有效用于制備調節(jié)腸道菌群失調及改善便秘藥物及便秘、肥胖的保健品及食品，開拓了澤蘭的新用途，與現有技術相比，本發(fā)明所具有的優(yōu)勢：（1）本發(fā)明在預防或治療腸道菌群失調或便秘的藥品、保健品、食品中的應用上，開辟了澤蘭藥材新的用途，具有較廣的發(fā)展前景；（2）本發(fā)明中所使用的原料均為天然植物來源，不含防腐劑、添加劑、增白劑及西藥成分，有實際的經濟價值和臨床價值；（3）本發(fā)明制備及實驗方法簡單方便，科學先進，成本低，結果準確，為此澤蘭多糖在預防或治療腸道菌群失調或便秘上的應用提供科學依據；（4）避免患者長期口服其他藥物造成的毒副作用，安全性好，利于身體健康，是運用中醫(yī)藥在預防或治療腸道菌群失調或便秘上的創(chuàng)新，并在商業(yè)上有更好的推廣，利于獲得商業(yè)成功，有良好的經濟和社會效益。當前第1頁1 2 3