本發(fā)明屬于藥物制備技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種刺梨苷在制備抗缺氧藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

細(xì)胞是人體的結(jié)構(gòu)和功能單位。人體結(jié)構(gòu)的老化，首先表現(xiàn)為細(xì)胞的衰老和細(xì)胞數(shù)量的減少。當(dāng)細(xì)胞減少到一定數(shù)量時(shí)，就會(huì)使器官功能下降，甚至危及生命。21世紀(jì)的人體保健目標(biāo)，就是要保護(hù)細(xì)胞，改善細(xì)胞代謝，增強(qiáng)細(xì)胞的抗病能力。由于空氣中氧氣不足(高原缺氧)或人體自身的生理、病理原因而不能攝入足夠的氧，或細(xì)胞不能充分利用氧氣(亞健康缺氧)，均可引起人體代謝、生理功能或形態(tài)上的改變，這種狀態(tài)就是缺氧(anoxia)。急性或嚴(yán)重缺氧常出現(xiàn)呼吸困難、皮膚和黏膜發(fā)紺、精神異常，甚至意識(shí)喪失或昏迷：慢性缺氧常表現(xiàn)乏力、頭痛、眩暈、面色蒼白、食欲不振等癥狀；當(dāng)人體細(xì)胞含氧量低于正常值的65％時(shí)，缺氧細(xì)胞甚至易癌變，導(dǎo)致癌癥。

目前臨床對于人體亞健康性缺氧多采用各種中藥復(fù)方保健品用于抗缺氧。通常有紅景天、冬蟲夏草、銀杏、沙棘、黨參、黃芪、茯苓、人參、唐古特青蘭、刺五加、靈芝、枸杞等等中藥及其有效成分的復(fù)方制劑。對于高原缺氧常用的抗缺氧藥物包括以紅景天提取物為主的復(fù)方制劑；復(fù)方丹參片或復(fù)方丹參滴丸；21金維他；由地塞米松、氨茶堿和安定制成的化學(xué)藥復(fù)方制劑高原康等。乙酰唑胺是FDA批準(zhǔn)的單一成分的抗高原缺氧藥物。上述藥物中中藥復(fù)方通常起效慢，服用時(shí)間長，適用于亞健康的保健調(diào)理，但對于高原缺氧尤其是急性高原缺氧作用不理想。而化學(xué)合成藥的使用往往會(huì)在抗缺氧的同時(shí)帶來其他副作用。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種刺梨苷在制備抗缺氧藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明制備的藥物具有良好的臨床應(yīng)用前景，制備得到的抗缺氧藥物能夠?qū)崿F(xiàn)缺氧類疾病的治療。

本發(fā)明提供了一種刺梨苷在制備抗缺氧疾病藥物中的應(yīng)用。

優(yōu)選的是，所述抗缺氧疾病包括心肌缺氧導(dǎo)致的胸悶、氣短、心絞痛；腦缺氧所致的頭暈、頭痛；高原缺氧性腦水腫、高原缺氧性肺水腫。

優(yōu)選的是，所述藥物的劑型包括片劑、膠囊、糖漿劑和顆粒劑。

優(yōu)選的是，所述藥物還包括輔料，所述輔料包括淀粉、乳糖、蔗糖、甲基纖維素、硬脂酸鎂、微粉硅膠、乙醇、檸檬酸、苯甲酸鈉、香精和色素。

優(yōu)選的是，所述藥物的劑量為0.8～2.4mg/kg。

本發(fā)明提供了一種刺梨苷在制備抗缺氧藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明制備的藥物可通過提高機(jī)體抗氧化能力，改善細(xì)胞呼吸功能，其抗缺氧起效劑量小，且在細(xì)胞及整體動(dòng)物均未觀察到明顯的毒性作用，可用于緩解和治療缺氧導(dǎo)致的機(jī)體不適和病變，尤其適用于高原缺氧導(dǎo)致的高原反應(yīng)和臟器損傷。具有良好的臨床應(yīng)用前景，制備得到的抗缺氧藥物能夠?qū)崿F(xiàn)缺氧類疾病的治療。試驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明制備的藥物能夠顯著減輕急性低壓缺氧大鼠腦水腫，對內(nèi)皮細(xì)胞和心肌細(xì)胞缺氧損傷亦具有顯著的保護(hù)作用。

附圖說明

圖1為本發(fā)明實(shí)施例5提供的刺梨苷對高原缺氧大鼠腦含水量的影響結(jié)果圖；

圖2為本發(fā)明實(shí)施例7提供的刺梨苷對缺氧心肌細(xì)胞活力影響結(jié)果圖；

圖3為本發(fā)明實(shí)施例7提供的刺梨苷對缺氧心肌細(xì)胞LDH外漏影響結(jié)果圖；

圖4為本發(fā)明實(shí)施例7提供的刺梨苷對缺氧心肌細(xì)胞CK外漏影響結(jié)果圖；

圖5為本發(fā)明實(shí)施例7提供的刺梨苷對缺氧心肌細(xì)胞SOD影響結(jié)果圖；

圖6為本發(fā)明實(shí)施例7提供的刺梨苷對缺氧心肌細(xì)胞GSH-Px影響結(jié)果圖；

圖7為本發(fā)明實(shí)施例7提供的刺梨苷對缺氧心肌細(xì)胞MDA影響結(jié)果圖；

圖8為本發(fā)明實(shí)施例7提供的刺梨苷對缺氧心肌細(xì)胞凋亡率影響結(jié)果圖。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明提供了一種刺梨苷在制備抗缺氧疾病藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明對所述刺梨苷的來源沒有特殊的限定，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的刺梨苷的市售產(chǎn)品即可，如購自安徽蕪湖甙爾塔醫(yī)藥科技有限公司的刺梨苷。在本發(fā)明中，所述刺梨苷的純度優(yōu)選>98％。

在本發(fā)明中，所述抗缺氧疾病包括心肌缺氧導(dǎo)致的胸悶、氣短、心絞痛；腦缺氧所致的頭暈、頭痛；高原缺氧性腦水腫、高原缺氧性肺水腫。

在本發(fā)明中，所述藥物的劑型包括片劑、膠囊、糖漿劑和顆粒劑。本發(fā)明對所述劑型藥物的制備方法沒有特殊的限定，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的相應(yīng)劑型的常規(guī)制備方法即可。

在本發(fā)明中，所述藥物還包括輔料，所述輔料包淀粉、乳糖、蔗糖、甲基纖維素、硬脂酸鎂、微粉硅膠、乙醇、檸檬酸、苯甲酸鈉、香精和色素中的一種或多種。本發(fā)明對所述輔料的添加量沒有特殊的限定，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的各輔料的常規(guī)添加量進(jìn)行添加即可。本發(fā)明對所述輔料的來源沒有特殊的限定，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的上述輔料的市售產(chǎn)品即可。

在本發(fā)明中，所述藥物的劑量為0.8～2.4mg/kg。

下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明提供的一種刺梨苷在制備抗缺氧藥物中的應(yīng)用做進(jìn)一步詳細(xì)的介紹，本發(fā)明的技術(shù)方案包括但不限于以下實(shí)施例。

實(shí)施例1

以刺梨苷為原料制成的片劑

將上述配方采用壓片機(jī)進(jìn)行直接壓片，得到片劑。

實(shí)施例2

以刺梨苷為原料制成的膠囊

刺梨苷 20mg

淀粉 70mg

將上述組分混合，裝入2號(hào)膠囊。

實(shí)施例3

以刺梨苷為原料制成的口服糖漿劑：

將上述組分加入水中調(diào)至所需量，混勻后裝瓶即可。

實(shí)施例4

以刺梨苷為原料制成的顆粒劑：

將上述組分混合后加入顆粒機(jī)中，制成顆粒后進(jìn)行包裝。

實(shí)施例5

刺梨苷減輕大鼠高原缺氧性腦水腫實(shí)驗(yàn)

1、方法

(1)實(shí)驗(yàn)分組：將50只wister大鼠隨機(jī)分為常氧對照組、急性高原缺氧模型組、陽性藥地塞米松組、刺梨苷高劑量組和刺梨苷低劑量組，每組10只大鼠。在20±2℃飼養(yǎng)，自由飲水。高劑量組和低劑量組大鼠每次分別灌胃給予刺梨苷15mg/kg和5mg/kg，間隔12h，共給藥3次；陽性藥組大鼠則每次灌胃給予地塞米松6mg/kg，給藥次數(shù)及間隔時(shí)間同刺梨苷組；常氧對照組和急性高原缺氧模型組大鼠以同樣間隔時(shí)間和次數(shù)灌胃給予等體積1％配制藥物所用溶媒。

(2)高原缺氧模型建立：除常氧對照組外，各組大鼠于末次灌胃后立即置于低壓氧艙中進(jìn)行缺氧實(shí)驗(yàn)，在15min內(nèi)使氧艙達(dá)到海拔7000m高度的大氣壓，溫度15±2℃，濕度30％±5％，缺氧18h。缺氧結(jié)束后在15min內(nèi)使低壓氧艙內(nèi)壓力降至海拔高度150m大氣壓(實(shí)驗(yàn)地區(qū)海拔高度)。常氧對照組大鼠則于相同溫、濕度在艙外正常飼養(yǎng)。

(3)指標(biāo)檢測：

①生化指標(biāo)檢測：各組大鼠出艙后迅速用25％烏拉坦麻醉，經(jīng)腹主動(dòng)脈取血，肝素抗凝，3500rpm/min離心10min，吸取上層血漿樣本；大鼠取血后迅速斷頭冰浴下取海馬組織，準(zhǔn)確稱重，剪碎，按重量(g)：體積(ml)＝1:9的比例加入9倍體積生理鹽水，冰浴下勻漿制成10％勻漿液，離心取上清液，按試劑盒操作步驟分別檢測各組大鼠腦組織中MDA、GSH含量、LDH、SOD活性以及血漿中NO含量。

②腦含水量測定：各組大鼠出艙后迅速用25％烏拉坦腹腔注射麻醉，斷頭后在冰浴下取腦，用濾紙吸干全腦表面水分，左半腦放于預(yù)先稱重并編號(hào)的錫紙上，稱重，放入120℃烘箱中烘干，24h后再次稱重。腦濕干比＝(濕重/干重)/體重。右半腦留取備用制作石蠟切片。

③H.E染色：各組大鼠斷頭取腦后，右半腦用4％多聚甲醛固定，制作石蠟切片，進(jìn)行常規(guī)HE染色，在正置顯微鏡下觀察各組大鼠腦組織病理學(xué)變化。

2、結(jié)果

(1)生化指標(biāo)檢測結(jié)果

①血漿中NO含量檢測結(jié)果

與常氧對照組相比，急性高原缺氧模型組大鼠血漿中NO含量顯著降低(P＜0.05)；與缺氧模型組相比，刺梨苷高、低劑量組和地塞米松組大鼠血漿中NO含量均顯著上升(P＜0.01或P＜0.05)(表1)。

表1刺梨苷對高原缺氧大鼠血漿NO水平及腦組織LDH活性的影響(x±s,n＝10)

注:^**P<0.01vs常氧對照組；^##P<0.01vs缺氧模型組

②腦組織中LDH、SOD活性和MDA、GSH含量檢測結(jié)果

與常氧對照組相比，急性低壓缺氧后，大鼠腦海馬中MDA含量和LDH活力均顯著提高(P＜0.01)，GSH含量和SOD活性均顯著降低(P＜0.01)；與缺氧模型組相比，刺梨苷高、低劑量組和地塞米組大鼠腦海馬中MDA含量和LDH活力均顯著降低(P＜0.01)；刺梨苷高劑量組和地塞米松組大鼠腦海馬中GSH含量和SOD活性與低壓缺氧模型組相比顯著提高(P＜0.01或P＜0.05)，刺梨苷低劑量組大鼠腦海馬中GSH含量和SOD活性與缺氧模型組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)(表1,2)。

表2刺梨苷對高原缺氧大鼠腦組織SOD,MDA,GSH的影響(x±s,n＝10)

注:^**P<0.01vs常氧對照組；^##P<0.01vs缺氧模型組

(2)腦含水量測定結(jié)果

與常氧對照組相比，急性低壓缺氧模型組大鼠腦含水量顯著增加(P＜0.01)；與缺氧模型組相比，刺梨苷高、低劑量組和地塞米松組大鼠腦含水量均顯著減少(P＜0.01或P＜0.05)(刺梨苷對高原缺氧大鼠腦含水量的影響結(jié)果如圖1所示，**P<0.01vs常氧對照組；##P<0.01vs缺氧模型組)。

(3)組織病理學(xué)改變

H.E染色結(jié)果顯示：常氧對照組大鼠軟腦膜與腦皮質(zhì)貼合緊密，不可見或極少見紅染的血紅細(xì)胞；腦皮質(zhì)呈均一紅色淡染，細(xì)胞分布均勻，呈圓形或多邊形，胞核呈藍(lán)色淡染，胞漿呈紅色淡染，毛細(xì)血管周圍間隙均勻；腦海馬區(qū)錐形細(xì)胞排列整齊，大小均一，胞核呈藍(lán)色淡染，胞漿呈紅色淡染。急性低壓缺氧18h后，大鼠軟腦膜與腦皮質(zhì)間出現(xiàn)明顯分離，間隙中可見大量紅色深染的血紅細(xì)胞；腦皮質(zhì)明顯可見紅色深染的血腫部位，大部分細(xì)胞呈藍(lán)色深染，出現(xiàn)明顯皺縮變形，少數(shù)細(xì)胞腫脹并淡染，同時(shí)可見毛細(xì)血管變粗、周圍間隙變大；大部分錐形細(xì)胞胞體明顯皺縮變形并深染，部分細(xì)胞核溶解消失。給予刺梨苷高、低劑量和地塞米松處理后上述病理改變均明顯改善。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，刺梨苷可通過提高大鼠腦組織清除自由基的能力，減輕大鼠急性高原缺氧導(dǎo)致的腦水腫。

實(shí)施例6

刺梨苷對EA.hy926內(nèi)皮細(xì)胞缺氧損傷的保護(hù)作用研究

1、方法

(1)EA.hy926內(nèi)皮細(xì)胞缺氧損傷模型建立EA.hy926內(nèi)皮細(xì)胞用含10％FBS的高糖DMEM培養(yǎng)液(培養(yǎng)液含有100U/ml青霉素和100μg/ml鏈霉素)在二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，將生長成單層的EA.hy926細(xì)胞換無血清無糖的DMEM培養(yǎng)基連續(xù)培養(yǎng)12小時(shí)后，用預(yù)先以95％N₂-5％CO₂混合氣飽和30min的D-hanks液替代正常培養(yǎng)基，而后將培養(yǎng)板移入混合氣體培養(yǎng)箱(95％N₂、5％CO₂、O₂濃度＜1％)，于37℃缺氧培養(yǎng)2h。

(2)實(shí)驗(yàn)分組實(shí)驗(yàn)設(shè)空白對照組、缺氧模型組、刺梨苷高濃度組(1×10^-11mol/L)、刺梨苷中濃度組(1×10^-12mol/L)和刺梨苷低濃度組(1×10^-13mol/L)、維拉帕米對照組(1×10^-11mol/L)，共6組，每組8孔。除空白對照組外，其他各組均缺氧處理2h，正常對照組則于37℃、5％CO₂培養(yǎng)箱中同步孵育2h。

(3)缺氧損傷內(nèi)皮細(xì)胞MTT實(shí)驗(yàn)取出各組樣本，每孔加入20μl MTT(5g/L)，于37℃、5％CO₂孵箱中繼續(xù)孵育4h，終止培養(yǎng)，倒板。加入150μl DMSO振搖15min，使結(jié)晶充分溶解，于測定波長570nm、參考波長630nm處，測定各孔吸光度(A)值。

(4)生化指標(biāo)檢測接種于24孔板的EA.hy926內(nèi)皮細(xì)胞，缺氧損傷模型組及刺梨苷干預(yù)組缺氧處理2h，正常對照組二氧化碳培養(yǎng)箱同步孵育，取各組細(xì)胞培養(yǎng)上清液200μl，按試劑盒說明用比色法測定培養(yǎng)基中LDH活性，細(xì)胞內(nèi)MDA含量，SOD、CAT活性和GSH含量。

2、結(jié)果

與正常對照組相比，缺氧損傷模型組內(nèi)皮細(xì)胞活力明顯降低，MDA含量明顯增高，GSH含量和SOD、CAT活性明顯下降，LDH外漏增加(P<0.01)；與模型組相比，各濃度刺梨苷組內(nèi)皮細(xì)胞代謝活力、SOD、CAT活性及GSH含量均提高，MDA產(chǎn)生及LDH外漏均減少。(P<0.01)(表3～5)。

表3刺梨苷對缺氧損傷EA.hy926細(xì)胞代謝活力及細(xì)胞外LDH活性的影響(x±s,n＝8)

^**P<0.01vs對照組；^#P<0.05，^##P<0.01vs模型組

表4刺梨苷對缺氧損傷EA.hy926細(xì)胞內(nèi)SOD活性及MDA含量的影響(x±s,n＝8)

Note:^**P<0.01vs對照組；^#P<0.05，^##P<0.01vs模型組

表5刺梨苷對缺氧損傷EA.hy926細(xì)胞內(nèi)CAT活性及GSH含量的影響(x±s,n＝8)

Note:^**P<0.01vs對照組；^#P<0.05，^##P<0.01vs模型組

細(xì)胞缺氧損傷時(shí)，線粒體功能異常，氧化呼吸鏈?zhǔn)軗p，電子傳遞阻斷，ATP產(chǎn)生減少。琥珀酸脫氫酶是琥珀酸氧化呼吸鏈里重要的復(fù)合酶之一，可催化琥珀酸脫氫生成延胡索酸，從而使FAD接受兩個(gè)氫原子生成FADH₂，然后再將氫傳遞給C_OQ，生成C_OQH₂，繼續(xù)呼吸鏈的電子傳遞過程。故琥珀酸脫氫酶的活性，可以反映細(xì)胞缺氧損傷的程度。MTT的實(shí)驗(yàn)原理就是利用琥珀酸脫氫酶可以催化噻唑蘭(MTT)生成紫紅色不溶性有色產(chǎn)物的特性，通過吸光度值可間接反映細(xì)胞活性。本實(shí)驗(yàn)檢測結(jié)果顯示：EA.hy926內(nèi)皮細(xì)胞缺氧損傷2h，與正常對照組比較，缺氧模型組吸光度值顯著降低，細(xì)胞代謝活力降低，培養(yǎng)液中LDH活性顯著升高，表明細(xì)胞膜受缺氧損傷，胞內(nèi)LDH外漏增加。刺梨苷干預(yù)組，與缺氧損傷模型組比較吸光度值均增加，培養(yǎng)液中LDH活性顯著降低，表明刺梨苷能對抗缺氧對內(nèi)皮細(xì)胞琥珀酸脫氫酶活性的損害，維持缺氧損傷細(xì)胞的呼吸功能；缺氧導(dǎo)致細(xì)胞膜損傷時(shí)，細(xì)胞內(nèi)LDH將外漏，導(dǎo)致培養(yǎng)基中LDH活性升高，本試驗(yàn)顯示3個(gè)劑量刺梨苷組與模型組相比培養(yǎng)基中LDH活性均明顯降低，表明刺梨苷可在急性缺氧條件下，保持內(nèi)皮細(xì)胞膜的完整性。

SOD,CAT和GSH反映了細(xì)胞清除自由基的能力，MDA則反映了細(xì)胞膜脂質(zhì)過氧化損傷程度，缺氧損傷模型組EA.hy926內(nèi)皮細(xì)胞與正常對照組比較，SOD,CAT活性和GSH含量下降，MDA含量顯著增加；3個(gè)劑量刺梨苷干預(yù)組均可提高細(xì)胞內(nèi)SOD,CAT活性和GSH含量，減少M(fèi)DA的產(chǎn)生，表明刺梨苷可通過增強(qiáng)內(nèi)皮細(xì)胞清除自由基的能力，對抗缺氧導(dǎo)致的細(xì)胞膜氧化損傷。

實(shí)施例7

刺梨苷對H9c2心肌細(xì)胞缺氧損傷的保護(hù)作用研究

1、方法

(1)H9c2心肌細(xì)胞缺氧損傷模型建立H9c2心肌細(xì)胞37℃培養(yǎng)于含10％胎牛血清的高糖DMEM培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基中加入100IU/L青霉素及100μg/mL鏈霉素。取狀態(tài)良好的H9c2心肌細(xì)胞消化后接入平皿中，飽和度達(dá)到90％左右，經(jīng)過24h后，以提前低氧處理40min的D-Hank’s液代替正常培養(yǎng)基，然后將細(xì)胞立即放入混合氣體培養(yǎng)箱(<1％O₂)中缺氧6h。

(2)實(shí)驗(yàn)分組實(shí)驗(yàn)設(shè)空白對照組(Control)、缺氧模型組(Hypxia)、缺氧+刺梨苷高濃度組(1×10^-10mol/L，H+KI 10^-10mol/L)、缺氧+刺梨苷中濃度組(1×10^-11mol/L，H+KI 10^-11mol/L)和缺氧+刺梨苷低濃度組(1×10^-12mol/L，H+KI 10^-12mol/L)、缺氧+維拉帕米對照組(1×10^-10mol/L，H+Ver 10^-10mol/L)，共6組，每組8孔。除空白對照組外，其他各組均缺氧處理6h，正常對照組則于37℃、5％CO₂培養(yǎng)箱中同步孵育6h。

(3)缺氧損傷心肌細(xì)胞MTT實(shí)驗(yàn)取出各組樣本，每孔加入20μL MTT(5g/L)，于37℃、5％CO₂孵箱中繼續(xù)孵育4h，終止培養(yǎng)，倒板。加入150μl DMSO振搖15min，使結(jié)晶充分溶解，于測定波長570nm、參考波長630nm處，測定各孔吸光度(OD)值。

(4)生化指標(biāo)檢測接種于24孔板的H9c2心肌細(xì)胞，缺氧損傷模型組及刺梨苷干預(yù)組缺氧處理6h，正常對照組二氧化碳培養(yǎng)箱同步孵育，取各組細(xì)胞培養(yǎng)上清液200μl，按試劑盒說明用比色法測定培養(yǎng)基中LDH和CK活性，細(xì)胞內(nèi)MDA含量，SOD和GSH-Px活性。

(5)細(xì)胞凋亡檢測取對數(shù)生長期細(xì)胞用胰酶消化并計(jì)數(shù)，調(diào)整細(xì)胞濃度為6×10⁵/ml，1ml/孔接種在6孔培養(yǎng)板中。培養(yǎng)24h后更換1％FBS高糖DMEM 24h，按分組進(jìn)行缺氧。缺氧結(jié)束后，將細(xì)胞收集于EP管中，離心1200rpm，10min，再用培基重懸，離心10min，1200rpm。棄去上清液，用PBS緩沖液洗兩次后加入binding buffer，調(diào)整細(xì)胞濃度，使之為10⁶個(gè)/ml，從中吸取100μl并加入5μl AnnexinⅤ和10μl PI,4℃避光孵育15min后加入400μl binding buffer。過300目篩網(wǎng)使之成為單個(gè)細(xì)胞懸液，采用流式細(xì)胞檢測儀檢測。使用FlowJo 7.6軟件分析數(shù)據(jù)。

2、結(jié)果

刺梨苷各濃度組均可提高其缺氧損傷后的心肌細(xì)胞活性，細(xì)胞活力隨刺梨苷濃度的減少而降低(P<0.01)，呈現(xiàn)一定的濃度依賴關(guān)系，同濃度的刺梨苷組其細(xì)胞活力明顯高于維拉帕米組(P<0.05)。

與正常對照組相比較，缺氧損傷組LDH、CK、MDA水平顯著升高(P<0.01)，SOD、GSH-px水平降低(P<0.01)，與缺氧損傷組比較，維拉帕米組及刺梨苷高、中、低濃度組LDH、CK、MDA降低(P<0.01)，SOD、GSH-px升高，但維拉帕米組較刺梨苷高濃度組LDH升高(P<0.05),表明維拉帕米和刺梨苷各濃度組均可明顯減少缺氧引起的LDH的外漏量，降低CK水平及MDA含量，同時(shí)可升高細(xì)胞內(nèi)SOD活性及GSH-px水平。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖2～8所示，^##P<0.01vs control；^**P<0.01vs Hypoxia；^△P<0.05，^△△P<0.01vs H+Ver 10^-10mol/L。其中圖2為刺梨苷對缺氧心肌細(xì)胞活力影響結(jié)果圖；圖3為刺梨苷對缺氧心肌細(xì)胞LDH外漏影響結(jié)果圖；圖4為刺梨苷對缺氧心肌細(xì)胞CK外漏影響結(jié)果圖；圖5為刺梨苷對缺氧心肌細(xì)胞SOD影響結(jié)果圖；圖6為刺梨苷對缺氧心肌細(xì)胞GSH-Px影響結(jié)果圖；圖7為刺梨苷對缺氧心肌細(xì)胞MDA影響結(jié)果圖；圖8為刺梨苷對缺氧心肌細(xì)胞凋亡率影響結(jié)果圖。

上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：刺梨苷可保護(hù)缺氧心肌細(xì)胞細(xì)胞膜，提高細(xì)胞活力?？赏ㄟ^提高H9c2心肌細(xì)胞的抗氧化酶活性減輕缺氧損傷?？擅黠@抑制缺氧誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡。提示刺梨苷可對抗缺氧導(dǎo)致的心肌細(xì)胞損傷。

經(jīng)一年動(dòng)物實(shí)驗(yàn)觀察，應(yīng)用本發(fā)明藥物對動(dòng)物未發(fā)現(xiàn)明顯的毒副作用。

以上可看出，刺梨苷具有顯著的抗缺氧損傷作用，此外動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)該藥物毒性較低，可以用于制備防治缺氧損傷的藥物。

以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤飾，這些改進(jìn)和潤飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。