本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體地說(shuō)，涉及氧化亞銅納米粒的新用途，尤其是在制備治療婦科腫瘤的藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

婦科腫瘤是一種多發(fā)病，由于其致病因素較復(fù)雜，癌變組織結(jié)構(gòu)多樣，受神經(jīng)內(nèi)分泌因素影響的不斷變化，所在部位又極易受細(xì)菌或病毒感染，很早就受到人們重視。婦科生殖器腫瘤又以子宮頸癌，卵巢癌，子宮內(nèi)膜癌較為常見(jiàn)，這三種腫瘤并稱(chēng)為婦科生殖系統(tǒng)三大惡性腫瘤。宮頸癌(cervicalcancer)在女性腫瘤中的發(fā)病率排在第二位，是惡性程度最高的腫瘤之一，全球每年有將近50萬(wàn)的婦女被診斷為宮頸癌，其中將近一半患者死亡。由于宮頸刮片篩查和防癌疫苗的接種，宮頸癌的發(fā)生率顯著下降。但目前宮頸癌在我國(guó)的發(fā)病率和死亡率仍占全球四分之一，嚴(yán)重威脅女性健康。手術(shù)和放化療是宮頸癌的主要治療手段，手術(shù)適用于早期病例，放療雖然適合于各期病例，但可對(duì)卵巢和陰道造成功能上的影響，嚴(yán)重影響年輕患者的生活質(zhì)量，化療主要應(yīng)用于宮頸癌局部晚期病例的輔助性治療和晚期病例的姑息性治療。目前在晚期宮頸癌中廣泛應(yīng)用的順鉑聯(lián)合紫杉醇或拓?fù)涮婵祷煼桨傅挠行什▌?dòng)于28.0％～46.3％之間，預(yù)計(jì)總生存期小于12個(gè)月。子宮內(nèi)膜癌(endometrialcancer，ec)為女性生殖道常見(jiàn)三大惡性腫瘤之一。占女性生殖道惡性腫瘤20％～30％，在許多發(fā)達(dá)國(guó)家，其發(fā)病率居?jì)D科惡性腫瘤首位。中國(guó)衛(wèi)生部2004～2005年中國(guó)惡性腫瘤死亡抽樣回顧調(diào)查顯示，子宮惡性腫瘤死亡率為4.32/10萬(wàn)，位居女性惡性腫瘤死亡率第七位(2012中國(guó)衛(wèi)生統(tǒng)計(jì)年鑒)。鑒于子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病率和死亡率逐年遞增，在我國(guó)ec儼然已經(jīng)成為一個(gè)嚴(yán)重的公共衛(wèi)生難題。綜上所述，尋找新的宮頸癌、子宮內(nèi)膜癌等婦科腫瘤的治療藥物具有現(xiàn)實(shí)意義。

納米科學(xué)的發(fā)展給科學(xué)進(jìn)步注入了新鮮動(dòng)力，給包括醫(yī)學(xué)在內(nèi)的各個(gè)學(xué)科帶來(lái)了深刻的變革。納米醫(yī)學(xué)及其分支納米腫瘤學(xué)是納米科學(xué)的子學(xué)科，它們的發(fā)展給腫瘤治療及抗腫瘤藥物研發(fā)提供了可行的方法和思路。脂質(zhì)體靶向給藥系統(tǒng)、磁性納米粒給藥體系、量子點(diǎn)、納米分子成像技術(shù)以及無(wú)機(jī)納米藥物是抗腫瘤納米藥物的前沿研究對(duì)象。其中，抗腫瘤無(wú)機(jī)納米藥物既可以經(jīng)改造成為載藥體系，也可以作為抗腫瘤藥物靶向腫瘤組織，表現(xiàn)出許多獨(dú)特的作用，有許多有趣的科學(xué)問(wèn)題亟待研究。棒狀納米金、星型納米金、納米氧化鋅、納米金鐵復(fù)合材料等多種無(wú)機(jī)納米藥物表現(xiàn)出顯著的抗腫瘤作用，且具有獨(dú)特的亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)的靶向作用，可以選擇性地靶向腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞核、線粒體等結(jié)構(gòu)，在細(xì)胞水平和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物水平均表現(xiàn)出良好的腫瘤治療應(yīng)用前景。對(duì)于無(wú)機(jī)納米藥物的作用機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)，金納米粒(aunps)可通過(guò)抑制mapk信號(hào)通路抑制腫瘤的轉(zhuǎn)移與增殖；納米tio2可上調(diào)bak/bax的比值；mn納米?？缮险{(diào)轉(zhuǎn)鐵蛋白的表達(dá)；超磁性鐵納米粒通過(guò)激活β-catenin、cancer/testis抗原、間質(zhì)金屬蛋白酶mmp-2等蛋白的表達(dá)參與人間充質(zhì)干細(xì)胞的分化調(diào)控，還可與c-erbb-2受體結(jié)合靶向乳腺癌細(xì)胞；zno納米?？梢种芶kt、erk1/2的磷酸化，激活jnk、p38。其中β-catenin、akt、erk、mmp等蛋白與腫瘤的轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。

氧化亞銅納米粒(cuprousoxidenanoparticles，conps)為一種含銅納米藥物。中國(guó)專(zhuān)利文獻(xiàn)cn201610307984.7，公開(kāi)日2016.08.10，公開(kāi)了氧化亞銅納米粒在制備治療腎癌藥物中的應(yīng)用，所述腎癌是透明細(xì)胞型腎癌、顆粒細(xì)胞型腎癌、混合細(xì)胞型腎癌、未分化細(xì)胞型腎癌。中國(guó)專(zhuān)利文獻(xiàn)cn201610308780.5，公開(kāi)日2016.08.10，公開(kāi)了氧化亞銅納米粒在制備治療前列腺癌藥物中的應(yīng)用。目前未知氧化亞銅納米粒對(duì)于婦科腫瘤是否具備治療效果。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供氧化亞銅納米粒的新用途。

本發(fā)明第一方面提供了氧化亞銅納米粒在制備治療婦科腫瘤的藥物中的應(yīng)用。

作為本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選例，所述的婦科腫瘤為宮頸癌，子宮內(nèi)膜癌或卵巢癌。

更優(yōu)地，所述的婦科腫瘤為宮頸癌或子宮內(nèi)膜癌。

本發(fā)明另一方面提供了氧化亞銅納米粒在制備體外抑制宮頸癌細(xì)胞增殖的試劑中的應(yīng)用。

作為本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選例，所述的宮頸癌細(xì)胞為siha，caski，ms751或hela細(xì)胞。

本發(fā)明再一方面提供了氧化亞銅納米粒在制備體外抑制子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞增殖的試劑中的應(yīng)用。

作為本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選例，所述的子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞為ecc1或hec1a細(xì)胞。

本文中，所述的“藥物”是指能影響機(jī)體生理、生化和病理過(guò)程，用以臨床上預(yù)防、診斷、治療疾病和計(jì)劃生育的化學(xué)物質(zhì)。所述的“試劑”又可稱(chēng)作生物化學(xué)試劑或試藥，是專(zhuān)用于實(shí)現(xiàn)化學(xué)反應(yīng)、分析化驗(yàn)、研究試驗(yàn)、教學(xué)實(shí)驗(yàn)、化學(xué)配方使用的純凈化學(xué)品。本發(fā)明的氧化亞銅納米?？膳c藥用載體共同制成藥物組合物以便于給藥，所述藥用載體包括生理適合的任何和所有的溶劑、分散介質(zhì)、包衣劑、等滲和吸收延緩試劑等，給藥途徑可以是靜脈內(nèi)的、肌肉的、皮下的、腸胃內(nèi)的、脊柱的或表皮的等。

本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)在于：本發(fā)明經(jīng)體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)conps可顯著抑制宮頸癌細(xì)胞和子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的增殖，表現(xiàn)出顯著的殺傷作用；又經(jīng)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證實(shí)conps與化療藥順鉑抑制腫瘤效果相當(dāng)，但不會(huì)引起裸鼠體重的下降，具備較低的副作用。本發(fā)明擴(kuò)大了conps的用途，應(yīng)用范圍將不僅限于腎癌、前列腺癌等，還可用于與之發(fā)病誘因、發(fā)病機(jī)制均不同的婦科腫瘤如宮頸癌、子宮內(nèi)膜癌的治療；另一方面，conps對(duì)于上述細(xì)胞的體外殺傷作用有助于研究相應(yīng)腫瘤的發(fā)生發(fā)展機(jī)制，以及不同腫瘤之間的比較，或用作對(duì)照品用于評(píng)價(jià)其他類(lèi)受試品對(duì)癌細(xì)胞的增殖抑制作用。

附圖說(shuō)明

圖1：conps可顯著抑制宮頸癌細(xì)胞的增殖。

圖2：conps可顯著抑制子宮內(nèi)膜癌癌細(xì)胞的增殖。

圖3：conps可顯著抑制宮頸癌瘤體的生長(zhǎng)。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明提供的具體實(shí)施方式作詳細(xì)說(shuō)明。

實(shí)施例1

一、材料

siha，caski，ms751，hela，ecc1，hec1a：中科院細(xì)胞庫(kù)引進(jìn)。

dmem、胎牛血清fbs：gibco公司。

裸鼠：上海華東師范大學(xué)動(dòng)物房購(gòu)買(mǎi)。

conps：自行制備，具體方法參見(jiàn)文獻(xiàn)：ywang,xyzi,jsu,etal.cuprousoxidenanoparticlesselectivelyinduceapoptosisoftumorcells.internationaljournalofnanomedicine,2012,7(8):2641-2652。

順鉑(ddp)：sigma公司。

二、方法

1、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

選擇siha，caski，ms751，hela宮頸癌細(xì)胞系，ecc1，hec1a子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系為研究對(duì)象，使用dmem培養(yǎng)基培養(yǎng)，細(xì)胞培養(yǎng)基添加10％fbs和1％青霉素-鏈霉素，取96孔板，每孔加入200μl的細(xì)胞懸液，每孔3000個(gè)細(xì)胞，孵育過(guò)夜，棄培養(yǎng)基，按濃度梯度加入conps，除對(duì)照組以外，實(shí)驗(yàn)組濃度梯度設(shè)定為1.25μg/ml、2.5μg/ml、5μg/ml、10μg/ml每個(gè)濃度梯度設(shè)置5個(gè)復(fù)孔，在72h棄去加入藥物的培養(yǎng)基，按10:1的比例每孔加入10μl的cck8溶液和100μl培養(yǎng)基配好的混合液，37℃孵箱避光孵育4h，用酶標(biāo)儀在450nm處測(cè)定細(xì)胞吸光度，按照抑制率(％)＝(1－實(shí)驗(yàn)組平均a值/對(duì)照組平均a值)×100％的公式計(jì)算出抑制率，通過(guò)spss16.0計(jì)算出ic50，利用graphpadprism5進(jìn)行量效柱狀圖繪制。

2、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

選擇ms751宮頸癌細(xì)胞系進(jìn)行裸鼠皮下成瘤實(shí)驗(yàn)，每只裸鼠皮下注射2×10⁶細(xì)胞，待裸鼠皮下瘤長(zhǎng)至5～7mm時(shí)分別予以處理。共分為4組，control組：皮下注射50μl5％gs+腹腔注射100μl5％gs；conps：皮下注射50μlconps(4mg/kg)；順鉑組(ddp)：腹腔注射100μl順鉑(2mg/kg)；conps+順鉑組：皮下注射50μlconps(4mg/kg)+腹腔注射100μl順鉑(2mg/kg)。14d后裸鼠處死，測(cè)量裸鼠體重及腫瘤重量，利用graphpadprism5進(jìn)行量效柱狀圖繪制。三、結(jié)果

1、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果

不同濃度的conps處理培養(yǎng)于96孔板的宮頸癌細(xì)胞72小時(shí)之后，采用cck8法檢測(cè)conps對(duì)細(xì)胞增殖的影響。檢測(cè)結(jié)果顯示，48h時(shí)間節(jié)點(diǎn)，conps對(duì)宮頸癌細(xì)胞系siha，caski，ms751，hela細(xì)胞的半效抑制濃度ic50依次為5.76μg/ml、3.48μg/ml、5.27μg/ml、3.04μg/ml。72h時(shí)間節(jié)點(diǎn)，conps對(duì)宮頸癌細(xì)胞系siha，caski，ms751，hela細(xì)胞的半效抑制濃度ic50依次為5.61μg/ml、1.23μg/ml、1.35μg/ml、0.92μg/ml。結(jié)果顯示，conps可以顯著抑制宮頸癌細(xì)胞系的增殖(圖1)。

不同濃度的conps處理培養(yǎng)于96孔板的子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞72小時(shí)之后，采用cck8法檢測(cè)conps對(duì)細(xì)胞增殖的影響。檢測(cè)結(jié)果顯示，48h時(shí)間節(jié)點(diǎn)，conps對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系hec1a，ecc1細(xì)胞的半效抑制濃度ic50依次為5.328μg/ml、3.767μg/ml。72h時(shí)間節(jié)點(diǎn)，conps對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系hec1a，ecc1細(xì)胞的半效抑制濃度ic50依次為4.162μg/ml、2.310μg/ml。結(jié)果顯示，conps可以顯著抑制子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系的增殖(圖2)。

2、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果

裸鼠皮下成瘤實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，conps較對(duì)照組可顯著抑制腫瘤的增長(zhǎng)(p<0.0001)，并且并未引起裸鼠體重的下降。順鉑組較對(duì)照組雖可顯著抑制腫瘤的增長(zhǎng)(p<0.0001)，但可引起裸鼠體重的顯著下降(p<0.0001)。conps較順鉑組相比，抑制腫瘤效果無(wú)差異(p＝0.8127)，但順鉑組裸鼠體重較conps組有顯著下降(p<0.0001)(圖3)。這一結(jié)果為進(jìn)一步臨床應(yīng)用打下堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。

以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員，在不脫離本發(fā)明方法的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和補(bǔ)充，這些改進(jìn)和補(bǔ)充也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。