本發(fā)明涉及二芳基庚烷類化合物的新用途，具體涉及它們在制備一氧化氮生成抑制劑、治療炎癥、治療敗血癥和/或治療阿爾茨海默病的藥物中的用途。

背景技術(shù)：

二芳基庚烷類化合物是一類具有1、7-二取代芳基并以庚烷骨架為母體結(jié)構(gòu)的化合物的統(tǒng)稱。根據(jù)其成環(huán)與否以及兩個(gè)苯環(huán)連接方式的不同，分為3種類型，即直線型、大環(huán)聯(lián)苯型和環(huán)二苯醚型。該類化合物主要存在于植物的根、莖、皮、花以及果皮等部位。由于其獨(dú)特的化學(xué)結(jié)構(gòu)和廣泛的藥理活性尤其是抗癌活性，近年受到國內(nèi)外植物化學(xué)和藥學(xué)研究者的普遍關(guān)注。已有研究報(bào)道，姜屬植物中的線性二芳基庚烷類化合物姜黃素，具有較強(qiáng)的抗癌活性以及癌化學(xué)預(yù)防作用。

體內(nèi)的NO由一氧化氮合酶(Nitric oxide synthases，NOS)催化L-精氨酸(L-Arg)產(chǎn)生。已知的NOS有不同基因編碼的3種同工酶，即神經(jīng)型(nNOS)、內(nèi)皮型(eNOS)和誘導(dǎo)型(iNOS)。誘導(dǎo)型NO合酶iNOS可被一些外來刺激激活，如內(nèi)毒素(LPS)、干擾素類、細(xì)菌、病毒及促炎癥因子(TNF-α、IL-1、IL-6)等。NO在體內(nèi)發(fā)揮雙重作用，是免疫系統(tǒng)發(fā)揮作用不可缺少的調(diào)節(jié)因子。然而，NO的過度產(chǎn)生則會導(dǎo)致組織損傷，例如導(dǎo)致肝損傷或者炎癥等等。

炎癥(inflammation)是一種常見的疾病，可以由細(xì)菌、病毒感染，組織器官病理變化，免疫系統(tǒng)的異?；蛘哂泻ξ镔|(zhì)刺激及物理損傷時(shí)引起。

敗血癥(septicemia)是指致病細(xì)菌侵入血液循環(huán)中生長繁殖引起的急性全身性感染，臨床癥狀為寒戰(zhàn)、高熱、皮疹、關(guān)節(jié)痛及肝脾腫大，部分患者還可出現(xiàn)煩躁、四肢厥冷及紫紺、脈細(xì)速、呼吸加快、血壓下降等。病死率可達(dá)30～50％，尤其是老人、兒童、有慢性病或免疫功能低下者、治療不及時(shí)及有并發(fā)癥者，預(yù)后更為惡劣。

阿茲海默病(Alzheimer's disease，AD)是發(fā)生在老年期及老年前期的一種原發(fā)性退行性腦病，指的是一種持續(xù)性高級神經(jīng)功能活動障礙，即在沒有意識障礙的狀態(tài)下，記憶、思維、分析判斷、視空間辨認(rèn)、情緒等方面的障礙。其特征性病理變化為大腦皮層萎縮，并伴有β-淀粉樣蛋白沉積，神經(jīng)原纖維纏結(jié)，大量記憶性神經(jīng)元數(shù)目減少，以及老年斑的形成。阿茲海默病病因復(fù)雜，其發(fā)生為多種因素相互作用的結(jié)果。目前尚無特效治療或逆轉(zhuǎn)疾病進(jìn)展的治療藥物。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

為解決上述問題，本發(fā)明提供了式(Ⅰ)和/或式(Ⅱ)所示二芳基庚烷類化合物在制備一氧化氮生成抑制劑、治療炎癥、治療敗血癥和/或治療阿爾茨海默病的藥物中的用途，

其中，R₁～R₄分別獨(dú)立地表示無或者苯環(huán)上的1～5個(gè)取代基，所述取代基分別獨(dú)立地選自羥基或C₁～C₄的烷氧基。

進(jìn)一步地，R₃、R₄表示苯環(huán)上的1個(gè)取代基。

進(jìn)一步地，所述C₁～C₄的烷氧基為甲氧基。

進(jìn)一步地，所述式(Ⅰ)、式(Ⅱ)或式(Ⅲ)化合物為如下化合物之一：

進(jìn)一步地，所述一氧化氮生成抑制劑是抑制巨噬細(xì)胞生成一氧化氮和/或抑制巨噬細(xì)胞增殖的藥物。

進(jìn)一步地，所述治療炎癥的藥物是抑制巨噬細(xì)胞生成一氧化氮和/或抑制巨噬細(xì)胞增殖的藥物。

進(jìn)一步地，所述治療敗血癥的藥物是治療由脂多糖引起的敗血癥的藥物。

進(jìn)一步地，它是以前述的化合物、或它們的組合、或其藥學(xué)上可接受的鹽、或其溶劑合物為活性成分，加上藥學(xué)上可接受的輔料制備而成的制劑。

本發(fā)明還提供了一種治療敗血癥的藥物組合物，它是以前述的化合物、或它們的組合、或其藥學(xué)上可接受的鹽、或其溶劑合物為活性成分，加上藥學(xué)上可接受的輔料制備而成的制劑。

本發(fā)明還提供了一種治療阿爾茨海默病的藥物組合物，它是以前述的化合物、或它們的組合、或其藥學(xué)上可接受的鹽、或其溶劑合物為活性成分，加上藥學(xué)上可接受的輔料制備而成的制劑。

本發(fā)明中，所述一氧化氮生成抑制劑指的是對生物體中一氧化氮生成具有抑制作用的藥物。

本發(fā)明中，C₁～C₄的烷氧基是指C₁、C₂、C₃、C₄的烷氧基，即具有1～4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷氧基。

在本發(fā)明的含義之內(nèi)，“治療”也包括復(fù)發(fā)性(relapse)預(yù)防或階段性(phase)預(yù)防，以及急性或慢性體征、癥狀和/或功能失常的治療。治療可以是對癥治療，例如抑制癥狀。它可以在短期內(nèi)實(shí)現(xiàn)，在中期內(nèi)調(diào)整，或者可以說是長期治療，例如在維持療法里面。所述預(yù)防包括延遲和/或阻止病癥、疾病或病況和/或其伴發(fā)癥狀的發(fā)作；防止對象染上病癥、疾病或病況；或降低對象染上病癥、疾病或病況的風(fēng)險(xiǎn)的方法。

試驗(yàn)證明，本發(fā)明的化合物可以有效抑制一氧化氮生成、治療炎癥、治療敗血癥和治療阿爾茨海默病，大幅擴(kuò)展了二芳基庚烷類化合物應(yīng)用范圍，極具臨床應(yīng)用前景。

顯然，根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容，按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)知識和慣用手段，在不脫離本發(fā)明上述基本技術(shù)思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。

以下通過實(shí)施例形式的具體實(shí)施方式，對本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。

附圖說明

圖1為化合物1-37,39-49對LPS誘導(dǎo)RAW264.7巨噬細(xì)胞生成NO的影響。C(Curcumin)和D(Dexamethasone)為陽性藥物。LPS，0.5μg/mL；Curcumin，5μM；Dexamethasone，10μM。

圖2為化合物21、25、34-36抑制LPS誘導(dǎo)RAW264.7巨噬細(xì)胞生成NO的IC₅₀值。

圖3為化合物對巨噬細(xì)胞增殖的抑制作用。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明化合物可以從生物資源獲得或者通過有機(jī)合成獲得。

實(shí)施例1二芳基庚烷類化合物的提取、分離和鑒定

1.1儀器設(shè)備及材料

Perkin-Elmer FT-IR紅外分光光度計(jì)，KBr壓片；核磁共振實(shí)驗(yàn)采用Bruker AVANCE 400核磁共振儀；使用ES-TOFMS和ES-MS質(zhì)譜分別使用Bruker microTOF and a Finnigan LC-Q II mass spectrometer；旋光測定采用JASCO-1020polarimeter；高效液相色譜：Agilent 1260HPLC，制備柱使用Kromasil 100-10-C18；Merck硅膠60(細(xì)于0.063毫米)和Pharmacia公司交聯(lián)葡聚糖LH-20。

Curcuma comosa根莖在泰國的Nakhon Pathom Sakon Nakhon和Prachin Buri，憑證標(biāo)本(Apichart Suksamrarn，052號和074)存放在Faculty of Science,Ramkhamhaeng University。

1.2化合物分離提取

C.comosa的根莖被切片，風(fēng)干，研磨并用正己烷和EtOH依次浸漬，然后分別進(jìn)行減壓蒸餾，得到正己烷和EtOH提取物。正己烷和EtOH萃取物通過柱層析(Merck硅膠60PF254)分級分離，使用正己烷，正己烷-EtOAc，乙酸乙酯，乙酸乙酯-甲醇和甲醇的梯度洗脫。最終，5個(gè)新的二苯庚烷類化合物1-5和16個(gè)已知的二苯庚烷類化合物6-21[^1,2]。

1.3部分化合物波譜數(shù)據(jù)

1-(4-Hydroxy-3-methoxyphenyl)-7-phenyl-(6E)-6-hepten-3-one(化合物1)

無色油狀物；IR:νmax:3426,2923,2845,1711,1597,1514,1453,1373,1267,1233,1208,1026,967,811,748,699；¹H NMR(400MHz,CDCl3):δ2.82(dd,7.32,7.36,H1),2.70(dd,7.36,7.03,H2),2.55(dd,8.15,7.72,H4),2.45(dd,7.72,7.26,H5),6.14(dt,7.26,15.8,H6),6.55(d,15.8,H7),6.65(s,H2′),6.79(d,8.0,H5′),6.64(d,8.0,H6′),7.18-7.28(m,H2″),7.18-7.28(m,H3″),7.17(m,H4″),7.18-7.28(m,H5″),7.18-7.28(m,H6″),3.82(s,OMe3″)；¹³C NMR(100MHz,CDCl3):δ29.4(C1),44.7(C2),209.2(C3),37.0(C4),29.2(C5),128.7(C6),130.7(C7),132.9(C1′),111.1(C2′),146.3(C3′),143.7(C4′),114.2(C5′),120.9(C6′),137.3(C1″),125.9(C2″),128.4(C3″),127.0(C4″),128.4(C5″),125.9(C6″),55.8(OMe3′).

(3S)-and(3R)-1-(4-Hydroxy-3-methoxyphenyl)-7-phenyl-(6E)-6-hepten-3-ol(化合物2)

無色油狀物；[α]D^27.1＝-1.59[EtOH,C＝0.65w/v]；IR:νmax:3359,3193,2923,2852,1659,1630,1515,1466,1426,1373,1272,1233,1152,1035,965,816,794,735,693；¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ2.54,2.66(m,H1),1.70(m,H2),3.63(m,H3),1.59(m,H4),2.26(m,H5),6.15(dt,6.8,15.8,H6),6.33(d,15.8,H7),6.63(s,H2′),6.75(d,6.4,H5′),6.62(d,6.4,H6′),7.18-7.28(m,H2″),7.18-7.28(m,H3″),7.12(t,7.0,H4″),7.18-7.28(m,H5″),7.18-7.28(m,H6″),3.78(s,OMe3)；¹³C NMR(100MHz,CDCl3):δ31.7(C1),39.4(C2),70.9(C3),37.0(C4),29.2(C5),130.2(C6),130.3(C7),133.9(C1′),120.8(C2′),146.4(C3′),143.7(C4′),114.2(C5′),110.9(C6′),137.5(C1″),125.9(C2″),128.4(C3″),126.9(C4″),128.4(C5″),125.9(C6″),55.8(OMe3′).

2:1Mixture of(3S)-and(3R)-1-(4-Hydroxy-3-methoxyphenyl)-7-phenyl-(4E,6E)-4,6-heptadien-3-ol(化合物3)

淡黃色油狀物；IR:ν_max:3398,3025,2933,2858,1613,1600,1515,1463,1451,1369,1270,1234,1153,1123,1033,991,749,693；¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ2.65(m,H1),1.88(m,H2),4.21(m,H3),5.83(dd,6.8,15.1,H4),6.38(dd,10.7,15.1,H5),6.76(dd,10.7,15.6,H6),6.54(d,15.6,H7),6.70(brs,H2′),6.82(brd,7.4,H5′),6.69(brd,7.4,H6′),7.38(brd,7.2,H2″),7.30(brt,7.6,H3″),7.24(m,H4″),7.30(brt,7.6,H5″),7.38(brd,7.2,H6″),3.86(brs,OMe3)；¹³C NMR(100MHz,CDCl3):δ31.3(C1),39.0(C2),72.0(C3),136.2(C4),130.9(C5),128.1(C6),132.8(C7),133.7(C1′),111.0(C2′),146.4(C3′),143.7(C4′),114.2(C5′),120.9(C6′),137.1(C1″),126.3(C2″),128.6(C3″),127.5(C4″),128.5(C5″),126.3(C6″),55.8(OMe3).

(3S)-1-Phenyl-7-(4-hydroxyphenyl)heptan-3-ol(化合物4)

無色油狀物；[α]_D²⁸＝+1.63[EtOH,C＝0.58w/v]；IR:ν_max:3297,3025,2930,2856,1598,1513,1495,1453,1366,1228,1170,1028,824,745,697；¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ2.56,2.70(m,H1),1.67(m,H2),3.52(H3),1.41(m,H4),1.29,1.41(m,H5),1.50(m,H6),2.44(t,7.56,H7),7.08-7.15(m,H2′),7.18-7.24(m,H3′),7.08-7.15(m,H4′),7.18-7.24(m,H5′),7.08-7.15(m,H6′),6.92(d,8.30,H2″),6.66(d,8.30,H3″),6.66(d,8.30,H5″),6.92(d,8.30,H6″)；¹³C NMR(100MHz,CDCl3):δ31.9(C1),38.8(C2),71.1(C3),37.2(C4),25.0(C5),31.6(C6),34.8(C7),142.2(C1′),128.3(C2′),125.6(C3′),128.3(C4′),125.6(C5′),128.3(C6′),133.8(C1″),129.2(C2″),115.0(C3″),154.2(C4″),115.0(C5″),129.2(C6″).

(3S)-1-(3,4-Dihydroxyphenyl)-7-phenyl-(4E,6E)-4,6-heptadien-3-ol(化合物5)

白色固體；m.p.105-106℃；IR:νmax:3396,3233,3022,2949,2924,2849,1612,1596,1515,1447,1254,1228,1175,1096,1044,990,825,748,692,513；¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ2.57(m,H1),1.77(m,H2),4.16(H3),5.19(dd,6.1,15.2,H4),6.41(dd,10.3,15.2,H5),6.89(dd,10.3,15.6,H6),6.56(d,15.6,H7),6.53(brs,H2′),6.70(brd,7.9,H5′),6.72(brd,7.9,H6′),7.44(brd,7.5,H2″),7.30(brd,7.5,H3″),7.20(brt,7.5,H4″),7.30(brd,7.5,H5″),7.44(brd,7.5,H6″),3.85(D,4.3,OH3),7.59(brs,OH3′4′)；¹³C NMR(100MHz,CDCl3):δ30.85(C1),39.59(C2),70.65(C3),138.36(C4),129.40(C5),128.90(C6),131.42(C7),134.01(C1′),119.50(C2′),142.89(C3′),144.81(C4′),115.03(C5′),115.39(C6′),115.39(C1″),137.53(C2″),126.13(C3″),128.49(C4″),127.19(C5″),128.49(C6″).

1,7-Diphenylhepta-l,3,5-trien(化合物21)

白色固體；mp 76.0-76.5℃；IR(KBr):3009.5-3101.9,2831.9-2925.9,1595.3,1490.6,1452.0,1427.3,1073.0,1027.7,992.9,742.6,697.3cm-1；¹H NMR(300MHz,CDCl3):δ3.45(d,2H,J＝7.1Hz),5.89(dt,1H,J＝14.8,7.0Hz),6.14-6.34(m,3H),6.51(d,1H,J＝15.6Hz),6.79(m,1H),7.17-7.39(m,10H,ArH)；MS m/e(intensity):246(65.0,M+),155(100.0),142(30.5),129(18.2),I15(20.7),103(3.5),91(31.9).

2.1本發(fā)明涉及的二芳基庚烷類化合物可以根據(jù)以下路線制備

路線1：

備注:a)HCl.NH₂OH,DMF,Pyridine

b)H₂,Pd-C,EtOH

c)Ac₂O,Pyridine

d)PhCH₂Br,DMF,K₂CO₃ e)PCC,CH₂Cl₂

路線2：

備注:(i)excess acetaldehyde,20％aq NaOH,EtOH,0–10℃；

(ii)MeI,K₂CO₃,acetone,rt.；(iii)20％aq NaOH,EtOH,0℃–rt；(iv)H₂(balloon)/10％Pd-C,EtOH.

如路線1所示，對化合物6，12和20進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾，可以獲得化合物22-25，26-29，30-33。如路線2所示，不飽和trienone類似物34-37分別根據(jù)文獻(xiàn)[3]中的條件，堿催化條件下醛醇縮合，在20％的NaOH的存在下，使用乙醇作為溶劑，用cinnamaldehydes 2a和2b取代cinnamones 1a-d。三個(gè)新的二芳基庚烷類似物(39和40-41)和前面的合成方法類似。

2.2部分化合物波譜數(shù)據(jù)

3-Hydroxyoxime-1,7-diphenyl-(6E)-6-heptene(化合物22)

白色固體；m.p.55-56℃；IR:ν_max:3240,3026,2924,1711,1656,1599,1495,1447,1333,966,941,737,691；¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ2.93(dd,J＝8.3,7.6Hz,2H,H-1),2.63(dd,J＝8.3,7.6Hz,2H,H-2),2.49(m,2H,H-4),2.42,2.75(m,2H,H-5),6.24(m,1H,H-6),6.46(dd,J＝15.3,10.3Hz,1H,H-7),7.23-7.38(m,9H,overlapping signal of H2′,3′,5′,6′and H2″-6″)；¹³C NMR(100MHz,CDCl₃):δ29.55(C1),33.90(C2),161.6(C3),31.34(C4),27.95(C5),130.8(C6),131.0(C7),114.8(C1′),128.3(C2′,6′),126.2(C3′,5′),126.8(C4′),140.7(C1″),128.3(C2″,4″,6″),126(C3″,5″)；ESMS:m/z 280.9[M+H]⁺(100),[2M+Na]⁺HR-TOFMS(ES⁺):280.1703[M+H]⁺calcd for C₁₉H₂₁NO+H,280.1696.

1-(4-Benzyloxy-7-phenyl-(6E)-6-hepten-3-ol(化合物23)

白色固體；m.p.70-71℃；IR:ν_max:3305,3028,2939,2868,1607,1583,1509,1453,1380,1296,1237,1221,1175,1084,1007,963,896,819,737,691；¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ2.69,2.77(m,2H,H-1),1.81(m,2H,H-2),3.74(m,1H,H-3),1.69(m,2H,H-4),2.37(m,2H,H-5),6.24(dt,J＝15.8,6.8Hz,1H,H-6),6.45(d,J＝15.8Hz,1H,H-7),7.16(d,J＝8.3Hz,2H,H-2′,6′),6.94(d,J＝8.3Hz,2H,H-3′,5′),7.24-7.48(m,10H,H-2″-5″and H-2″′-5″′)5.07(s,2H,-CH₂-C₆H₅)；¹³C NMR(100MHz,CDCl₃):δ31.1(C1),39.2(C2),70.3(C3),37.0(C4),29.2(C5),130.2(C6,C7),137.2(C1′),129.2(C2′,6′),114.8(C3′,5′),157.0(C4′),134.3(C1″),125.9(C2″,6″),126.9(C4″),127.4(C3″,5″),137.6(C1″′),127.4(C2″′,6″′),127.8(C4″′),128.5(C3″′,5″′),70.0(-CH₂-C₆H₅)；ESMS:m/z 378.3[M+H]⁺；HR-TOFMS(ES⁺):m/z395.1983[M+Na]⁺calcd for C₂₆H₂₈O₂+Na,m/z 395.1982

1-(4-Acethoxy)-7-phenylheptan-3-one(化合物24)

無色油狀物；IR:ν_max:3027,2931,2862,1760,1710,1507,1453,1368,1191,1165,1017,910,747,699；¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ2.94(t,J＝7.50Hz,2H,H-1),2.77(t,J＝7.50HZ,2H,H-2),2.47(br t,J＝7.56Hz,2H,H-4),1.67(br s,4H,H-5,6),2.67(br t,J＝6.38Hz,2H,H-7),7.35(d,J＝8.0Hz,2H,H-2′,6′),7.05(d,J＝8.0Hz,2H,H-3′,5′),7.22-7.33(m,5H,H-2″-6″,2.36(s,3H,-CH₃-C＝O)；¹³C NMR(100MHz,CDCl₃):δ29.0(C1),44.1(C2),209.7(C3),42.8(C4),23.3(C5),30.9(C6),35.6(C7),142.1(C1′),129.2(C2′,6′),121.4(C3′,5′),148.9(C4′),138.6(C1″),128.2(C2″,6″),125.7(4″),128.3(C3″,5″)21.0,169.5(-CH₃-C＝O)；ESMS:m/z 347.9[M+Na]⁺；HR-TOFMS(ES⁺):m/z347.1637[M+Na]⁺calcd for C₂₁H₂₄O₃+Na,347.1618.

1-(3,4-Diacetoxyphenyl)-7-phenyl-(6E)-6-hepten-3-ol(化合物25)

無色油狀物；IR:ν_max:3417,3027,2933,2862,1765,1597,1504,1425,1369,1257,1205,1179,1109,1011,964,898,831,743,693；¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ2.65,2.77(m,2H,H-1),1.76(m,2H,H-2),3.67(m,2H,H-3),1.63(m,2H,H-4),2.30(m,2H,H-5),6.20(dt,J＝15.8,8.6Hz,1H,H-6),6.39(d,J＝15.8Hz,1H,H-7),7.00(s,2H,H-2′),7.05(s,2H,H-5′,6′),7.17-7.29(m,5H,H-2″-6″),2.25(s,3H,-CH₃-C＝O)；¹³C NMR(100MHz,CDCl₃):δ31.3(C1),38.7(C2),70.7(C3),37.0(C4),29.2(C5),130.1(C6,7),130.3(C1′),123.1(C2′),140.9(C3′),137.5(C4′),123.2(C5′),126.5(C6′),130.3(C1″),125.9(C2″,6″),126.9(4″),128.4(C3″,5″),20.6,168.4(-CH₃-C＝O)；ESMS:m/z 405.8[M+Na]⁺,HR-TOFMS(ES⁺):m/z405.1689[M+Na]⁺calcd for C₂₃H₂₆O₅+Na,405.1672.

1-(3,4-Dihydroxyphenyl)-7-phenylheptan-3-ol(化合物26)

無色油狀物；IR:ν_max:3319,2931,2856,1603,1518,1495,1451,1361,1279,1191,1111,1058,954,866,811,786,743,697,631；¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ2.58(m,2H,H-1),1.69(m,2H,H-2),3.60(m,1H,H-3),1.61(m,2H,H-4),1.31,1.47(m,2H,H-5),1.47(m,2H,H-6),2.58(t,J＝7.65Hz,2H,H-7),6.66(s,2H,H-2′,6′),6.74(d,J＝8.0Hz,1H,H-5′),6.59(d,J＝8.0Hz,1H,H-6′),7.13-7.17,7.20-7.27(m,5H,H-2″-6″)；¹³C NMR(100MHz,CDCl₃):δ31.4(C1),38.9(C2),71.5(C3),31.3(C4),25.2(C5),37.3(C6),35.8(C7),141.6(C1′),115.3(C2′,6′),143.5(C3′),142.4(C4′),115.4(C5′),120.6(6′),134.9(C1″),128.2(C2″,6″),125.6(C4″),128.3(C3″,5″)；ESMS:m/z 599.8[2M-H]^-HR-TOFMS(ES⁺):m/z323.1632[M+Na]⁺calcd for C₁₉H₂₄O₃+Na,323.1618.

1-(3,4-Diacetoxyphenyl)-7-phenylheptan-3-ol(化合物27)

無色油狀物；IR:ν_max:3423,3026,2932,2857,1766,1603,1504,1425,1369,1257,1206,1180,1109,1011,899,830,746,699；¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ2.64,2.76(m,2H,H-1),1.77(m,2H,H-2),3.59(m,1H,H-3),1.62(m,2H,H-4),1.36,1.47(m,2H,H-5),1.47(m,2H,H-6),2.59(t,J＝7.5Hz,2H,H-7),6.99(s,1H,H-2′),7.05(dd,J＝8.2,8.2),2H,H-5′,6′),7.14-7.16,7.24-7.27(m,5H,H-2″-6″),2.26(s,6H,-CH₃-C＝O)；¹³C NMR(100MHz,CDCl₃):δ31.4(C1),38.9(C2),71.0(C3),31.3(C4),25.2(C5),37.4(C6),35.8(C7),141.0(C1′),123.1(C2′),142.5(C3′),141.8(C4′),123.2(C5′),125.6(6′),140.0(C1″),128.2(C2″,6″),128.2(C4″),128.3(C3″,5″),20.6(-CH₃-),168.4(C＝O)；ESMS:m/z 791.0[2M+Na]⁺HR-TOFMS(ES⁺):m/z 407.1847[M+Na]⁺calcd for C₂₃H₂₈O₅+Na,407.1829.

3-Acetoxy-1-(3,4-diacetoxyphenyl)-7-phenylheptane(化合物28)

無色油狀物；IR:ν_max:2935,2868,1769,1730,1601,1505,1426,1369,1241,1204,1178,1110,1011,896,831,747,699；¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ2.65(m,2H,H-1),1.91(m,2H,H-2),4.98(m,1H,H-3),1.66(m,4H,H-4,5),1.40(br s,2H,H-6),2.65(m,2H,H-7),6.99(s,1H,H-2′),7.13(d,J＝8.3Hz,1H,H-5′),7.08(d,J＝8.3Hz,1H,H-6′),7.20-7.25,7.30-7.34(m,5H,H-2″-6″),2.06,2.32(s,9H,-CH₃-C＝O)；¹³C NMR(100MHz,CDCl₃):δ35.3(C1),35.6(C2),73.5(C3),31.1(C4),24.7(C5),33.8(C6),31.1(C7),140.4(C1′),123.0(C2′),142.3(C3′),141.8(C4′),123.0(C5′),125.6(6′),140.0(C1″),128.1(C2″,6″),126.3(C4″),128.3(C3″,5″),20.5,21.0,(-CH₃),168.2,168.3,170.8(C＝O)；ESMS:m/z 449.80[M+Na]⁺HR-TOFMS(ES⁺):m/z 449.1936[M+Na]⁺calcd for C₂₅H₃₀O₆+Na,449.1935

1-(3,4-Diacetoxyphenyl)-7-phenylheptan-3-one(化合物29)

無色油狀物；IR:ν_max:2934,2868,1767,1710,1602,1505,1425,1369,1257,1204,1178,1109,1010,899,831,747,699；¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ2.84(t,J＝7.5Hz,2H,H-1),2.68(t,J＝7.5Hz,2H,H-2),2.36(t,J＝6.0Hz,2H,H-4),1.58(m,2H,H-5),1.55(m,2H,H-6),2.58(t,J＝6.5Hz,1H,H-7),6.97(s,1H,H-2′),7.04(dd,J＝12.0Hz,8.2Hz,2H,H-5′,6′),7.13-7.16,7.24-7.26(m,5H,H-2″-6″),2.25(s,-CH₃-C＝O)；¹³C NMR(100MHz,CDCl₃):δ28.9(C1),43.8(C2),209.4(C3),42.8(C4),23.3(C5),30.9(C6),35.6(C7),140.0(C1′),123.2(C2′,5′),142.1(C3′),141.8(C4′),123.2(C5′),125.7(C6′),140.2(C1″),128.2(C2″,6″),126.5(4″),128.3(C3″,5″),20.6,168.3(-CH₃-C＝O)；ESMS:m/z 405.8[M+Na]⁺；HR-TOFMS(ES⁺):m/z 405.1691[M+Na]⁺calcd for C₂₃H₂₂₆O₅+Na,405.1672

Cinnamaldehyde(or(E)-3-(2,4-Dimethoxyphenyl)acrylaldehyde)).(化合物3c)

淡黃色固體；IR:ν_max 2840,2767,1660,1606,1570,1502,1425,1324,1296,1275,1202,1166,1023,969,921,835,783cm^-1；¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ9.60(d,J＝7.9Hz,1H),7.71(d,J＝15.9Hz,1H),7.46(d,J＝8.6Hz,1H),6.68(dd,J＝15.9,7.9Hz,1H),6.51(dd,J＝8.6,2.3Hz,1H),6.44(d,J＝2.3Hz,1H),3.86(s,3H),3.83(s,1H).；¹³C NMR(100MHz,CDCl₃):δ194.6,163.7,159.9,148.4,130.5,126.8,116.2,105.6,98.3,55.53,55.51；ESMS(+ve):m/z 407[2M+Na]⁺.

Cinnamaldehyde 2d((E)-3-(2,5-Dimethoxyphenyl)acrylaldehyde).(化合物3d)

淡黃色固體；IR:ν_max 2921,2839,2810,2738,2712,1668,1610,1493,1424,1224,1134,1040,1022,973,846,804,711cm^-1；¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ9.67(d,J＝7.8Hz,1H),7.81(d,J＝16.1Hz,1H),7.05(d,J＝3.0Hz,1H),6.96(dd,J＝9.0,3.0Hz,1H),6.87(d,J＝9.0Hz,1H),6.73(dd,J＝16.1,7.8Hz,1H),3.85(s,3H),3.78(s,3H).；¹³C NMR(100MHz,CDCl₃):δ194.3,153.6,152.8,147.7,129.2,123.5,118.5,113.0,112.6,56.1,55.8；ESMS(+ve):m/z 193[M+H]⁺.

1,7-Bis(3-hydroxyphenyl)-1,4,6-heptatrien-3-one(化合物34).

橙黃色固體；m.p.191-194℃；ESMS(+ve):m/z 607[2M+Na]⁺；HR-TOFMS(ES^–):m/z291.1019[M–H]^–(Calcd.for C₁₉H₁₆O₃–H,291.1021).

1-(3-Hydroxyphenyl)-7-(3-methoxyphenyl)-1,4,6-heptatrien-3-one(化合物35).

亮黃非晶固體；m.p.120-122℃；ESMS(+ve):m/z 307[M+H]⁺；HR-TOFMS(ES⁺):m/z329.1161[M+Na]⁺(Calcd.for C₂₀H₁₈O₃+Na,329.1154).

1-(3-Methoxyphenyl)-7-(3-hydroxyphenyl)-1,4,6-heptatrien-3-one(化合物36).

亮黃非晶固體；m.p.120-121℃；ESMS(+ve):m/z 307[M+H]⁺；HR-TOFMS(ES⁺):m/z329.1157[M+Na]⁺(Calcd.for C₂₀H₁₈O₃+Na,329.1154).

(1-(3-Hydroxyphenyl)-7-(2,4-dimethoxyphenyl)-1,4,6-heptatrien-3-one(化合物39).

橙色固體；IR:ν_max 3281,2940,2837,1659,1594,1559,1446,1267,1206,1088,1024,996,976,860,828,779,672cm^-1；¹H NMR(400MHz,acetone-d₆):δ8.61(s,1H),7.53-7.65(m,3H),7.16-7.34(m,5H),7.06(dd,J＝15.6,11.2Hz,1H),6.90(m,1H),6.54-6.64(m,3H),3.91(s,3H),3.84(s,3H)；¹³C NMR(100MHz,acetone-d₆):δ188.8,163.1,160.0,158.7,145.4,142.5,137.6,137.3,130.8,129.5,128.8,126.2,126.1,120.7,118.9,118.2,115.5,106.8,99.1,56.0,55.8.；ESMS(+ve):m/z 359[M+Na]⁺；HR-TOFMS(ES⁺):m/z 359.1250[M+Na]⁺(Calcd.for C₂₁H₂₀O₄+Na,359.1254).

1-(3-Hydroxy-4-methoxyphenyl)-7-(2,4-dimethoxyphenyl)-1,4,6-heptatrien-3-one(化合物40).

橙色固體；IR:ν_max 3298,3005,2938,2838,1639,1571,1505,1438,1261,1199,1022,984,836cm^-1；¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ7.57(d,J＝15.8Hz,1H),7.51(dd,J＝15.2,11.2Hz,1H),7.44(d,J＝8.6Hz,1H),7.25(d,J＝15.6Hz,1H),7.20(d,J＝1.5Hz,1H),7.08(dd,J＝8.3,1.5Hz,1H),6.91(dd,J＝15.6,11.2Hz,1H),6.89(d,J＝15.8Hz,1H),6.84(d,J＝8.3Hz,1H),6.50(d,J＝15.2Hz,1H),6.49(dd,J＝8.6,2.0Hz,1H),6.43(d,J＝2.0Hz,1H),5.68(s,1H),3.91(s,3H),3.85(s,3H),3.81(s,3H)；¹³C NMR(100MHz,CDCl₃):δ189.0,161.9,158.9,148.6,145.9,144.8,142.3,136.8,128.7(2C),127.7,125.4,123.8,122.3,118.4,113.0,110.6,105.3,98.5,56.0,55.5,55.4；ESMS(-ve):m/z 356[M-H]^-；HR-TOFMS(ES⁺):m/z389.1367[M+Na]⁺(Calcd.for C₂₂H₂₂O₅+Na,389.1365)

(1-(3-Hydroxy-4-methoxyphenyl)-7-(2,5-dimethoxyphenyl)-1,4,6-heptatrien-3-one(化合物41).

黃色固體；IR:ν_max 3228,3001,2945,2839,1635,1630,1557,1505,1233,1133,1016,874,803cm^-1；¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ7.58(d,J＝15.8Hz,1H),7.51(dd,J＝15.2,11.1Hz,1H),7.30(d,J＝15.6Hz,1H),7.20(d,J＝1.8Hz,1H),7.08(dd,J＝8.2,1.8Hz,1H),7.05(d,J＝2.2Hz,1H),6.96(dd,J＝15.6,11.1Hz,1H),6.88(d,J＝15.8Hz,1H),6.84(d,J＝8.2Hz,1H),6.82(overlapped,1H),6.81(overlapped,1H),6.56(d,J＝15.2Hz,1H),5.73(br s,1H),3.91(s,3H),3.82(s,3H),3.79(s,3H)；¹³C NMR(100MHz,CDCl₃):δ189.0,153.6,152.1,148.7,145.9,143.9,142.7,136.3,128.9,128.5,127.7,125.8,123.6,122.4,115.7,113.1,112.4,112.1,110.6,56.2,56.0,55.8；ESMS(+ve):m/z 367[M+H]⁺；HR-TOFMS(ES⁺):m/z389.1365[M+Na]⁺(Calcd.for C₂₂H₂₂O₅+Na,389.1365)

1-(4-Methoxyphenyl)-7-(3-hydroxyphenyl)-heptan-3-one(化合物42).

無色油狀物；IR:ν_max 3384,2931,2859,1698,1511,1454,1242,1177,1154,1033,825,781,695cm^-1；¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ7.10(distorted t,J＝8.5Hz,1H),7.07(d,J＝8.5Hz,2H),6.80(d,J＝8.5Hz,2H),6.69(distorted d,J＝7.5Hz,1H),6.63(distorted d,J＝8.1Hz,1H),6.56(br s,1H),3.77(s,3H),2.81(distorted t,J＝7.4Hz,2H),2.66(distorted t,J＝7.4Hz,2H),2.50(distorted t,J＝7.1Hz,2H),2.36(distorted t,J＝6.8Hz,2H),1.44-1.69(m,4H)；¹³C NMR(100MHz,CDCl₃):δ211.0,158.0,155.8,144.0,133.1,129.4,129.3(2C),120.6,115.3,113.9(2C),112.7,55.3,44.5,42.9,35.5,30.6,28.9,23.3；ESMS(-ve):m/z 311[M-H]^-.

1-(3-Hydroxy-4-methoxyphenyl)-7-(3-hydroxyphenyl)-heptan-3-one(化合物43).

無色油狀物；IR:ν_max 3465,3326,2917,2853,1693,1594,1514,1446,1377,1275,1237,1198,1131,1025,999,924,780,691cm^-1；¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ7.10(t,J＝7.7Hz,1H),6.57-6.77(m,6H),3.83(s,3H),2.77(distorted t,J＝7.1Hz,2H),2.65(distorted t,J＝7.0Hz,2H),2.50(distorted t,J＝6.7Hz,2H),2.36(distorted t,J＝6.5Hz,2H),1.44-1.63(m,4H)；¹³C NMR(100MHz,CDCl₃):δ211.0,155.8,145.4,144.9,144.0,134.3,129.4,120.7,119.8,115.3,114.5,112.8,110.8,56.0,44.2,42.8,35.4,30.5,29.2,23.3；ESMS(-ve):m/z 327[M-H]^-.

1-(3-Hydroxyphenyl)-7-(2,4-dimethoxyphenyl)-heptan-3-one(化合物44).

無色油狀物；IR:ν_max 3436,2934,2836,1702,1610,1585,1502,1459,1209,1156,1124,1030,844,778,687cm^-1；¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ7.11(t,J＝7.8Hz,1H),6.97(d,J＝8.1Hz,1H),6.71(d,J＝7.6Hz,1H),6.59-6.67(m,2H),6.36-6.44(m,2H),5.13(br s,1H),3.77(s,3H),3.75(s,3H),2.80(distorted t,J＝7.5Hz,2H),2.66(distorted t,J＝7.5Hz,2H),2.50(distorted t,J＝7.3Hz,2H),2.38(distorted t,J＝7.2Hz,2H),1.43-1.65(m,4H)；¹³C NMR(100MHz,CDCl₃):δ211.1,159.0,158.2,155.9,142.9,129.9,129.6,123.0,120.4,115.2,113.1,103.9,98.5,55.3,55.2,43.9,43.0,29.6,29.5,29.1,23.6.；ESMS(-ve):m/z 683[2M-H]^-.

1-(3-Hydroxyphenyl)-7-(2,4-dimethoxyphenyl)-heptan-3-ol(化合物45).

無色油狀物；IR:ν_max 3317,2933,2857,1705,1611,1587,1505,1455,1285,1258,1206,1153,1035,934,832,783,696cm^-1；¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ7.12(t,J＝8.2Hz,1H),6.98(d,J＝8.1Hz,1H),6.74(d,J＝7.5Hz,1H),6.64(m,2H),6.37-6.44(m,2H),3.77(s,3H),3.76(s,3H),3.60(m,1H),2.70(m,1H),2.60(m,1H),2.52(t,J＝7.5Hz,2H),1.70(m,2H),1.27-1.60(m,6H)；¹³C NMR(100MHz,CDCl₃):δ158.9,158.3,155.9,144.0,129.9,129.6,123.4,120.6,115.4,112.8,103.9,98.6,71.5,55.4,55.3,38.6,37.3,31.9,30.0,29.4,25.3；ESMS(-ve):m/z 687[2M-H]^-.

1-(3-Hydroxy-4-methoxyphenyl)-7-(2,4-dimethoxyphenyl)-heptan-3-one(化合物46).

無色油狀物；IR:ν_max 3429,2935,2841,1707,1612,1587,1505,1270,1206,1153,1125,1030,832,801,760cm^-1；¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ6.97(d,J＝8.0Hz,1H),6.73(m,2H),6.62(d,J＝8.1Hz,1H),6.39(m,2H),5.56(br s,1H),3.83(s,3H),3.76(s,3H),3.75(s,3H),2.77(distorted t,J＝7.4Hz,2H),2.65(distorted t,J＝7.5Hz,2H),2.50(distorted t,J＝7.3Hz,2H),2.37(distorted t,J＝7.1Hz,2H),1.47-1.60(m,4H)；¹³C NMR(100MHz,CDCl₃):δ210.4,159.0,158.2,145.5,144.9,134.4,129.9,123.0,119.6,114.4,110.7,103.8,98.5,56.0,55.3,55.2,44.3,42.9,29.6,29.2(2C),23.6；ESMS(+ve):m/z 767.9[2M+Na]⁺.

1-(3-Hydroxy-4-methoxyphenyl)-7-(2,4-dimethoxyphenyl)-heptan-3-ol(化合物47).

無色油狀物；IR:ν_max 3428,2932,2856,2835,1611,1587,1505,1454,1438,1271,1205,1153,1128,957,920.832,802,760,631cm^-1；¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ6.98(d,J＝8.1Hz,1H),6.76(br s,1H),6.74(distorted d,J＝8.4Hz,1H),6.65(d,J＝8.0Hz,1H),6.41(br s,1H),6.39(distorted d,J＝8.3Hz,1H),5.55(br s,1H),3.84(s,3H),3.77(s,6H),3.59(m,1H),2.67(m,1H),2.57(m,1H),2.51(t,J＝7.5Hz,2H),1.69(m,2H),1.26-1.60(m,6H)；¹³C NMR(100MHz,CDCl₃):δ159.0,158.3,145.5,144.7,135.6,129.9,123.4,119.7,114.6,110.7,103.8,98.5,71.3,56.0,55.3,55.2,39.1,37.4,31.4,30.1,29.4,25.4.；ESMS(+ve):m/z 771.8[2M+Na]⁺.

1-(3-Hydroxy-4-methoxyphenyl)-7-(2,5-dimethoxyphenyl)-heptan-3-one(化合物48).

無色油狀物；IR:ν_max 3406,2932,2835,1589,1497,1440,1272,1218,1128,1044,1025,957,867,800,760cm^-1；¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ6.60-6.76(m,6H),5.54(br s,1H),3.83(s,3H),3.74(s,6H),2.77(distorted t,J＝7.5Hz,2H),2.65(distorted t,J＝7.4Hz,2H),2.54(distorted t,J＝7.3Hz,2H),2.38(distorted t,J＝7.1Hz,2H),1.55(m,4H)；¹³C NMR(100MHz,CDCl₃):δ210.3,153.4,151.7,145.5,144.9,134.4,131.9,119.6,116.2,114.4,111.2,110.8,110.7,56.0,55.9,55.6,44.3,42.9,29.9,29.4,29.2,23.6；ESMS(+ve):m/z 767[2M+Na]⁺.

1-(3-Hydroxy-4-methoxyphenyl)-7-(2,5-dimethoxyphenyl)-heptan-3-ol(化合物49).

無色油狀物；IR:ν_max 3406,2932,2857,2835,1589,1497,1440,1272,1218,1128,1044,1025,957,867,800,760,710cm^-1；¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ6.60-6.79(m,6H),5.56(br s,1H),3.84(s,3H),3.75(s,3H),3.74(s,3H),3.59(m,1H),2.67(m,1H),2.56(m,3H),1.27-1.80(m,8H)；¹³C NMR(100MHz,CDCl₃):δ153.4,151.7,145.4,144.7,135.5,132.3,119.6,116.2,114.6,111.2,110.6(2C),71.2,55.9(2C),55.3,39.0,37.3,31.3,30.1,29.4,25.4；ESMS(+ve):m/z 771[2M+Na]⁺.

2.3參考文獻(xiàn)：

1.Suksamrarn,A.,Ponglikitmongkol,M.,Wongkrajang,K.,Chindaduang,A.,Kittidanairak,S.,Jankam,A.,Yingyongnarongkul,B.,Kittipanumat,N.,Chokchaisiri,R.,Khetkam,P.,Piyachaturawat,P.Diarylheptanoids,new phytoestrogens from the rhizomes of Curcuma comosa:Isolation,chemical modification and estrogenic activity evaluation.Bioorg.Med.Chem.2008,16,6891-6902.

2.Sornkaew,N.,Lin,Y.,Wang,F.,Zhang,G.,Chokchaisiri,R.,Zhang,A.,Wongkrajang,K.,Suebsakwong,P.,Piyachaturawat,P.and Suksamrarn,A.Diarylheptanoids of Curcuma comosa with Inhibitory Effects on Nitric Oxide Production in Macrophage RAW 264.7Cells.Natural Product Communications.2015,10(1),89-93.

3.Chuprajob,T.；Changtam,C.；Chokchaisiri,R.；Chunglok,W.；Sornkaew N.；Suksamrarn,A.Synthesis,cytotoxicity against human oral cancer KB cells and structure-activity relationship studies of trinone analogues of curcuminoids.Bioorg.Med.Chem.lett.2014,16,2839-2844.

4.Sodsai,A.；Piyachaturawat,P.；Sophasan,S.；Suksamrarn,A.；Vongsakul,M.Suppression by Curcuma comosa Roxb.of pro-inflammatory cytokine secretion in phorbol-12-myristate-13-acetate stimulated human mononuclear cells.Int.Immunopharmacol.2007,7,524-531.

實(shí)施例2二芳基庚烷類化合物抑制NO產(chǎn)生的活性作用。

1材料

化合物(1-37,39-49)；小鼠RAW264.7巨噬細(xì)胞；內(nèi)毒素(LPS，0.5μg/mL)；BAY(10μM，陽性對照)NO檢測試劑盒(Beyotime，Haimen，China)。

2主要儀器

熒光酶標(biāo)儀(Thermo Scienti fic，Waltham，MA，USA)

3方法

3.1 LPS刺激RAW264.7巨噬細(xì)胞生成NO的測定

RAW264.7巨噬細(xì)胞接種于96-孔板，每孔接種量為1×10⁴細(xì)胞，待接種細(xì)胞貼壁以后，加入待測化合物(1-37,39-49)孵育2h，然后加入LPS(終濃度為0.5μg/mL)，繼續(xù)培養(yǎng)24h。最后取96孔板培養(yǎng)基，用NO試劑盒進(jìn)行檢測，NO的含量通過測定其OD₅₅₀來表示。每次實(shí)驗(yàn)取3個(gè)復(fù)孔，重復(fù)3次實(shí)驗(yàn)。

3.2 NO抑制率的計(jì)算

NO的抑制率(％)，根據(jù)以下公式進(jìn)行計(jì)算：

抑制率(％)＝(A-B)/(A-C)×100，

A：LPS(+)，化合物(－)；B：LPS(+)，化合物(+)，C：LPS(－)，化合物(－)。

3.3統(tǒng)計(jì)方法

所有的統(tǒng)計(jì)方法均使用GraphPad Prism 5.01軟件進(jìn)行處理。數(shù)據(jù)以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤差表示，數(shù)據(jù)使用單因素方差分析(ANOVA)。p<0.05

4結(jié)果

結(jié)果如圖1所示，結(jié)果表明化合物21，25，34-36在初篩濃度為5μM條件下，可明顯抑制LPS誘導(dǎo)的NO生成，其抑制率在80％以上。

進(jìn)一步測定活性較好的化合物21，25，34-36的IC₅₀值，結(jié)果如圖2所示，它們的IC₅₀值在0.32-1.61μM。

實(shí)施例3二芳基庚烷類化合物對巨噬細(xì)胞增殖的抑制作用

1材料

化合物(1-37,39-49)；小鼠RAW264.7巨噬細(xì)胞；Alamar-Blue試劑。

2主要儀器

熒光酶標(biāo)儀(Thermo Scienti fic，Waltham，MA，USA)

3方法

3.1化合物(1-37,39-49)對RAW264.7巨噬細(xì)胞增殖的影響

接種RAW264.7巨噬細(xì)胞于96-孔板，每孔接種1×10⁴細(xì)胞，待接種細(xì)胞貼壁以后，加入待測化合物(1-37,39-49)孵育24h。然后每個(gè)每孔加入Am-Blue細(xì)胞增殖與活性檢測試劑(SunBio^TM)10μL并于培養(yǎng)箱中孵育2～6小時(shí)。當(dāng)培養(yǎng)基的顏色由靛青藍(lán)變成粉紅色后用熒光酶標(biāo)儀測定各孔相對熒光單位(RFU值)，激發(fā)光波長560nm，發(fā)射光波長590nm。每次實(shí)驗(yàn)取3個(gè)復(fù)孔，重復(fù)3次實(shí)驗(yàn)。

3.2統(tǒng)計(jì)方法

所有的統(tǒng)計(jì)方法均使用GraphPad Prism 5.01軟件進(jìn)行處理。數(shù)據(jù)以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤差表示，數(shù)據(jù)使用單因素方差分析(ANOVA)，當(dāng)p<0.05時(shí)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

4結(jié)果

測定抑制NO生成活性較好的化合物21,25,27-29,34-37,39,41,40的IC₅₀值，結(jié)果如圖3所示，化合物34-36在20μM的濃度下對細(xì)胞增殖有明顯的抑制作用，IC₅₀值19.26-21.12μM。

實(shí)施例4化合物21、化合物34、化合物36抑制LPS誘導(dǎo)的大鼠敗血癥

1材料

化合物21、化合物34、化合物36；健康SD雄性大鼠，體重260～310g；LPS。

2方法

(1)SD雄性大鼠分成8組(control、LPS、化合物21、化合物34、化合物36)，體重260～310g，每組10只。

(2)用化合物(化合物21、化合物34、化合物36,濃度均為25mg/kg)預(yù)處理組于尾靜脈予，然后立即腹腔注射LPS(10mg/kg)；LPS模型組尾靜脈予以生理鹽水后，立即腹腔注射LPS(10mg/kg)；Control組僅尾靜脈予以生理鹽水。

(3)各組均于4h后予3％戊巴比妥鈉(10ml/100g)麻醉，將充滿肝素生理鹽水的動脈插管插入右頸總動脈描記血壓10min，10min后于左頸總動脈取血。

3結(jié)果

結(jié)果如表1。腹腔大劑量注射LPS后，LPS模型組血小板1min聚集度(PAG1)、5min聚集度(PAG5)、最大聚集度(MA)、最大聚集時(shí)間(TMA)與Control組對比均顯著下降；在化合物21、化合物34、化合物36預(yù)處理組血小板聚集性各項(xiàng)指標(biāo)較LPS模型組明顯升高。表明化合物21、化合物34、化合物36顯著抑制LPS誘導(dǎo)的大鼠敗血癥。

表1化合物對敗血癥大鼠血小板聚集性的影響

備注：5min聚集度(PAG1)、5min聚集度(PAG5)、最大聚集度(MA)、最大聚集時(shí)間(TMA)；**P<0.01各個(gè)化合物組vs LPS組。

實(shí)施例5化合物36抑制小鼠老年癡呆(AD)模型

1材料

化合物36健康昆明種小鼠雌雄各半，體重25～30g，隨機(jī)分為6組，即正常對照組、模型組、化合物36實(shí)驗(yàn)組，每組10只。

2方法

2.1動物實(shí)驗(yàn)

(1)昆明種小鼠雌雄各半，體重25～30g，隨機(jī)分為6組，正常對照組、模型組化合物36實(shí)驗(yàn)組，每組10只。

(2)模型組及各試驗(yàn)藥物組小鼠每天頸背部皮下給予1％D-半乳糖(150mg/kg)注射，共6周，在2周對化合物36實(shí)驗(yàn)組進(jìn)行灌胃給藥實(shí)驗(yàn)(25mg/kg)，模型組生理鹽水處理，共4周。

2.2 Morris水迷宮系列試驗(yàn)

隱蔽平臺試驗(yàn)水迷宮為直徑100cm，高50cm的圓形水池，水池內(nèi)壁被漆為黑色，池內(nèi)水深25cm，水溫保持在25度，房間內(nèi)光照恒定，無光線直射在水池內(nèi)。池壁上以4個(gè)等距離點(diǎn)將水池分為4個(gè)象限，任選其中1個(gè)象限，正中放置1個(gè)圓形黑色安全平臺，直徑為12cm，高24cm，位于水面下1cm。迷宮上方安置連接顯示系統(tǒng)的攝像機(jī)，同步記錄大鼠運(yùn)動軌跡。實(shí)驗(yàn)歷時(shí)5d，每天上下午各1次，入池位置為平臺所鄰2個(gè)象限的池壁中點(diǎn)。將小鼠面向池壁分別從入水點(diǎn)放入水中，記錄其在100s內(nèi)尋找到平臺的時(shí)間(逃避潛伏期)。如果小鼠在100s未找到平臺，則由實(shí)驗(yàn)者用手牽引其至平臺上，停留10s，逃避潛伏期記成100s。每天以兩次潛伏期算術(shù)均值作為這一天的成績進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

探索試驗(yàn)撤除平臺，任選1個(gè)入水點(diǎn)將小鼠放入水中，使小鼠在無平臺情況下尋找記憶中平臺，記錄其100s內(nèi)的游泳軌跡，計(jì)算其在原平臺象限游泳時(shí)間和穿越原平臺次數(shù)。

3結(jié)果

表2的結(jié)果表明，隱蔽平臺試驗(yàn)從第1天起，模型組小鼠的逃避潛伏期明顯長于正常組；化合物36實(shí)驗(yàn)組顯著增加癡呆小鼠逃避潛伏期。因此表明在用化合物36后能改善癡呆小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。

表2各實(shí)驗(yàn)組隱蔽平臺試驗(yàn)逃避潛伏期比較

備注：**P<0.01各個(gè)化合物組VS AD模型組；*P<0.05各個(gè)化合物組vs AD模型組。

表3結(jié)果表明，觀察小鼠的空間探索能力，發(fā)現(xiàn)模型組小鼠基本圍繞池壁游泳，其運(yùn)動軌跡呈隨機(jī)分布于各象限之中；化合物36實(shí)驗(yàn)組停留原平臺象限時(shí)間和穿越原平臺次數(shù)均明顯多于模型組，再次表明化合物36可以提高癡呆小鼠的記憶能力。

表3各實(shí)驗(yàn)組小鼠探索試驗(yàn)比較

備注：**P<0.01化合物組VS AD模型組；*P<0.05化合物組vs AD模型組。

綜上所述，本發(fā)明的化合物可以有效抑制一氧化氮生成、治療炎癥、治療敗血癥和治療阿爾茨海默病，大幅擴(kuò)展了二芳基庚烷類化合物應(yīng)用范圍，極具臨床應(yīng)用前景。