1.菱殼中抗氧化活性物質(zhì)的優(yōu)化提取及抗氧化驗(yàn)證方法,其特征在于,包括以下操作步驟:
A、優(yōu)化提取方法:
1)、稱取適量的南湖無(wú)角菱進(jìn)行去肉留殼操作;
2)、將菱殼置于清水中洗凈,而后放置于電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱中,開啟電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱且設(shè)置于60℃進(jìn)行持續(xù)烘干作業(yè),經(jīng)過(guò)一段時(shí)間直至菱殼達(dá)到恒重,取出菱殼;
3)、將烘干后的菱殼放置入高速多功能粉碎機(jī)進(jìn)行粉碎操作,菱殼粉碎后取出過(guò)60目篩網(wǎng)得南湖無(wú)角菱的菱殼粉末;
4)、用電子天平準(zhǔn)確稱取一定量的菱殼粉末放入容器中,用移液管將作為提取劑的乙醇溶液加入稱取的菱殼粉末中,進(jìn)一步通過(guò)攪拌使菱殼粉末與乙醇溶液混勻;
5)、將菱殼溶液放置于超聲儀中,調(diào)節(jié)超聲儀上的溫度旋鈕設(shè)定溫度,調(diào)節(jié)超聲儀上的時(shí)間旋鈕設(shè)定超聲時(shí)間,開啟超聲儀發(fā)出超聲波對(duì)菱殼溶液進(jìn)行抗氧化活性物質(zhì)的提取,由此經(jīng)過(guò)一段時(shí)間的提取作業(yè);
6)、提取完畢后將菱殼溶液取出,經(jīng)過(guò)濾紙過(guò)濾得到含有抗氧化活性物質(zhì)的提取液;
B、抗氧化驗(yàn)證方法:
1)、用移液管將1mL提取液移入100mL容量瓶中,加入提取所用溶劑至刻度線,搖勻進(jìn)行稀釋操作;
2)、設(shè)置三組實(shí)驗(yàn)樣本:
第一組:在8.00mL 0.1mmol/L DPPH自由基溶液中加入0.40mL已稀釋過(guò)的菱殼提取液,攪拌混勻,放置暗處30min后,將溶液倒入比色皿中,置于分光光度計(jì)中,設(shè)定波長(zhǎng)為517nm,以蒸餾水為空白溶液,調(diào)零,測(cè)定吸光度值,所得數(shù)值記為A1;
第二組:在8.00mL 0.1mmol/L DPPH自由基溶液中加入0.40mL乙醇溶液,攪拌混勻,放置暗處30min后,將溶液倒入比色皿中,置于分光光度計(jì)中,設(shè)定波長(zhǎng)為517nm,以蒸餾水為空白溶液,調(diào)零,測(cè)定吸光度值,所得數(shù)值記為A0;
第三組:在8.00mL 70%的乙醇溶液中加入0.40mL已稀釋過(guò)的菱殼提取液,攪拌混勻,放置暗處30min后,將溶液倒入比色皿中,置于分光光度計(jì)中,設(shè)定波長(zhǎng)為517nm,以蒸餾水為空白溶液,調(diào)零,測(cè)定吸光度值,所得數(shù)值記為A2;
通過(guò)公式I%=[1-(A1-A2)/A0]×100%,計(jì)算DPPH自由基清除率I。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的菱殼中抗氧化活性物質(zhì)的優(yōu)化提取及抗氧化驗(yàn)證方法,其特征在于,單因素試驗(yàn)提取工藝的優(yōu)化方案為:準(zhǔn)確稱取菱殼粉末0.5000g,乙醇溶液的濃度為40%~60%,菱殼粉末的質(zhì)量和乙醇溶液的體積比為1:40~1:60;在提取過(guò)程中超聲儀的設(shè)定溫度為40℃~60℃,設(shè)定超聲時(shí)間為20min~40min。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的菱殼中抗氧化活性物質(zhì)的優(yōu)化提取及抗氧化驗(yàn)證方法,其特征在于,正交試驗(yàn)提取工藝的最佳方案為:乙醇溶液的濃度為60%,菱殼粉末的質(zhì)量和乙醇溶液的體積比為1:60;在提取過(guò)程中超聲儀的設(shè)定溫度為60℃,設(shè)定超聲時(shí)間為30min。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的菱殼中抗氧化活性物質(zhì)的優(yōu)化提取及抗氧化驗(yàn)證方法,其特征在于,步驟B的2)中,DPPH自由基溶液的制備方法為:準(zhǔn)確稱取DPPH自由基試劑19.7mg,用70%乙醇溶液溶解并定容至500mL,搖勻,得0.1mmo l/L DPPH自由基溶液,置于4℃冰箱中冷藏備用。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的菱殼中抗氧化活性物質(zhì)的優(yōu)化提取及抗氧化驗(yàn)證方法,其特征在于,步驟A的2)中,電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱具體為DGG-9023A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的菱殼中抗氧化活性物質(zhì)的優(yōu)化提取及抗氧化驗(yàn)證方法,其特征在于,步驟A的3)中,高速多功能粉碎機(jī)具體為JR-500B-2型高速多功能粉碎機(jī)。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的菱殼中抗氧化活性物質(zhì)的優(yōu)化提取及抗氧化驗(yàn)證方法,其特征在于,步驟A的5)中,超聲儀具體為KQ-100B型超聲儀。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的菱殼中抗氧化活性物質(zhì)的優(yōu)化提取及抗氧化驗(yàn)證方法,其特征在于,步驟B的2)中,分光光度計(jì)具體為UV757CRT紫外可見分光光度計(jì)。