本發(fā)明涉及一種南湖無角菱的研究，特別是一種菱殼中抗氧化活性物質(zhì)的優(yōu)化提取及抗氧化驗(yàn)證方法。

背景技術(shù)：

南湖無角菱簡(jiǎn)稱南湖菱，因產(chǎn)自嘉興南湖而得名，一般菱都有角，故稱“菱角”，然而南湖菱比較特殊，是無角的。南湖菱皮色翠綠，兩端圓滑，并以皮薄、肉嫩、汁多、甜脆、清香聞名。南湖菱營(yíng)養(yǎng)豐富，味道甜美，深受廣大消費(fèi)者的喜愛。近年來，種植面積不斷擴(kuò)大。菱殼中含有黃酮、多酚、多糖、生物堿及色素、揮發(fā)性物質(zhì)等，具有抗氧化、抗癌、抑菌、抗衰老、保肝護(hù)肝、降血糖等功效。

隨著南湖菱種植面積的擴(kuò)大，南湖菱殼來源也更加廣泛，每年9-10月，是南湖菱采摘的季節(jié)，大量的菱殼被丟棄，不但造成了資源浪費(fèi)，也帶來了環(huán)境污染問題，由此，南湖菱殼提取物有望被進(jìn)一步開發(fā)成一種具有抗氧化功效的產(chǎn)品。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有的技術(shù)存在上述問題，提出了一種以南湖菱殼為原料，配合超聲波輔助提取，以達(dá)到最佳提取效果，并進(jìn)一步有效驗(yàn)證抗氧化效果的菱殼中抗氧化活性物質(zhì)的優(yōu)化提取及抗氧化驗(yàn)證方法。

本發(fā)明的目的可通過下列技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)：菱殼中抗氧化活性物質(zhì)的優(yōu)化提取及抗氧化驗(yàn)證方法，包括以下操作步驟：

A、優(yōu)化提取方法：

1)、稱取適量的南湖無角菱進(jìn)行去肉留殼操作；

2)、將菱殼置于清水中洗凈，而后放置于電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱中，開啟電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱且設(shè)置于60℃進(jìn)行持續(xù)烘干作業(yè)，經(jīng)過一段時(shí)間直至菱殼達(dá)到恒重，取出菱殼；

3)、將烘干后的菱殼放置入高速多功能粉碎機(jī)進(jìn)行粉碎操作，菱殼粉碎后取出過60目篩網(wǎng)得南湖無角菱的菱殼粉末；

4)、用電子天平準(zhǔn)確稱取一定量的菱殼粉末放入容器中，用移液管將作為提取劑的乙醇溶液加入稱取的菱殼粉末中，進(jìn)一步通過攪拌使菱殼粉末與乙醇溶液混勻；

5)、將菱殼溶液放置于超聲儀中，調(diào)節(jié)超聲儀上的溫度旋鈕設(shè)定溫度，調(diào)節(jié)超聲儀上的時(shí)間旋鈕設(shè)定超聲時(shí)間，開啟超聲儀發(fā)出超聲波對(duì)菱殼溶液進(jìn)行抗氧化活性物質(zhì)的提取，由此經(jīng)過一段時(shí)間的提取作業(yè)；

6)、提取完畢后將菱殼溶液取出，經(jīng)過濾紙過濾得到含有抗氧化活性物質(zhì)的提取液；

B、抗氧化驗(yàn)證方法：

1)、用移液管將1mL提取液移入100mL容量瓶中，加入提取所用溶劑至刻度線，搖勻進(jìn)行稀釋操作；

2)、設(shè)置三組實(shí)驗(yàn)樣本：

第一組：在8.00mL 0.1mmol/L DPPH自由基溶液中加入0.40mL已稀釋過的菱殼提取液，攪拌混勻，放置暗處30min后，將溶液倒入比色皿中，置于分光光度計(jì)中，設(shè)定波長(zhǎng)為517nm，以蒸餾水為空白溶液，調(diào)零，測(cè)定吸光度值，所得數(shù)值記為A1；

第二組：在8.00mL 0.1mmol/L DPPH自由基溶液中加入0.40mL乙醇溶液，攪拌混勻，放置暗處30min后，將溶液倒入比色皿中，置于分光光度計(jì)中，設(shè)定波長(zhǎng)為517nm，以蒸餾水為空白溶液，調(diào)零，測(cè)定吸光度值，所得數(shù)值記為A0；

第三組:在8.00mL 70％的乙醇溶液中加入0.40mL已稀釋過的菱殼提取液，攪拌混勻，放置暗處30min后，將溶液倒入比色皿中，置于分光光度計(jì)中，設(shè)定波長(zhǎng)為517nm，以蒸餾水為空白溶液，調(diào)零，測(cè)定吸光度值，所得數(shù)值記為A2；

通過公式I％＝[1-(A1-A2)/A0]×100％，計(jì)算DPPH自由基清除率I。

DPPH法廣泛應(yīng)用于測(cè)定植物提取物自由基清除能力的實(shí)驗(yàn)。在乙醇溶液中，DPPH是一種呈紫紅色的穩(wěn)定自由基，在517nm處有強(qiáng)吸收。當(dāng)溶液中存在抗氧化劑時(shí)，抗氧化劑能夠給DPPH自由基提供氫原子使其發(fā)生推送，使其吸光值變小，顏色變得越淺表明抗氧化能力越強(qiáng)。因此，通過測(cè)定樣品對(duì)DPPH自由基的清除能力可以反映其抗氧化活性的強(qiáng)弱。

本菱殼中抗氧化活性物質(zhì)的優(yōu)化提取及抗氧化驗(yàn)證方法中，利用超聲波輔助提取，對(duì)南湖菱殼提取液體外清除DPPH自由基能力進(jìn)行考察，采用單因素和正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化提取條件。所得結(jié)果為：影響提取液體外抗氧化能力的因素主次順序?yàn)椋撼晻r(shí)間＞料液比＞提取溫度＞乙醇濃度。得出結(jié)論為：南湖菱殼提取液具有較強(qiáng)的抗氧化能力。

在上述的菱殼中抗氧化活性物質(zhì)的優(yōu)化提取及抗氧化驗(yàn)證方法中，單因素試驗(yàn)提取工藝的優(yōu)化方案為：準(zhǔn)確稱取菱殼粉末0.5000g，乙醇溶液的濃度為40％～60％，菱殼粉末的質(zhì)量和乙醇溶液的體積比為1：40～1：60；在提取過程中超聲儀的設(shè)定溫度為40℃～60℃，設(shè)定超聲時(shí)間為20min～40min。

在上述的菱殼中抗氧化活性物質(zhì)的優(yōu)化提取及抗氧化驗(yàn)證方法中，正交試驗(yàn)提取工藝的最佳方案為：乙醇溶液的濃度為60％，菱殼粉末的質(zhì)量和乙醇溶液的體積比(料液比)為1：60；在提取過程中超聲儀的設(shè)定溫度為60℃，設(shè)定超聲時(shí)間為30min。經(jīng)驗(yàn)證該最佳工藝操作下，使南湖菱殼提取液對(duì)DPPH自由基的清除能力達(dá)到85.6％。

在上述的菱殼中抗氧化活性物質(zhì)的優(yōu)化提取及抗氧化驗(yàn)證方法中，步驟B的2)中，DPPH自由基溶液的制備方法為：準(zhǔn)確稱取DPPH自由基試劑19.7mg，用70％乙醇溶液溶解并定容至500mL，搖勻，得0.1mmol/L DPPH自由基溶液，置于4℃冰箱中冷藏備用。

在上述的菱殼中抗氧化活性物質(zhì)的優(yōu)化提取及抗氧化驗(yàn)證方法中，步驟A的2)中，電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱具體為DGG-9023A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱。

在上述的菱殼中抗氧化活性物質(zhì)的優(yōu)化提取及抗氧化驗(yàn)證方法中，步驟A的3)中，高速多功能粉碎機(jī)具體為JR-500B-2型高速多功能粉碎機(jī)。

在上述的菱殼中抗氧化活性物質(zhì)的優(yōu)化提取及抗氧化驗(yàn)證方法中，步驟A的5)中，超聲儀具體為KQ-100B型超聲儀。

在上述的菱殼中抗氧化活性物質(zhì)的優(yōu)化提取及抗氧化驗(yàn)證方法中，步驟B的2)中，分光光度計(jì)具體為UV757CRT紫外可見分光光度計(jì)。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本菱殼中抗氧化活性物質(zhì)的優(yōu)化提取及抗氧化驗(yàn)證方法，以優(yōu)化南湖菱殼抗氧化活性物質(zhì)的提取條件，并測(cè)定其體外抗氧化能力為目的，配合超聲波輔助提取，以達(dá)到最佳提取效果，并進(jìn)一步有效驗(yàn)證抗氧化效果。經(jīng)過試驗(yàn)表明南湖菱殼中抗氧化活性物質(zhì)的超聲輔助最佳提取條件為乙超聲時(shí)間30min、乙醇濃度60％、料液比1:60、提取溫度60℃，在此條件下DPPH自由基清除率達(dá)到85.6％。該提取法成本低，操作簡(jiǎn)單，效率高，具有良好的應(yīng)用前景。

附圖說明

圖1是本菱殼中抗氧化活性物質(zhì)的優(yōu)化提取及抗氧化驗(yàn)證方法的流程圖。

具體實(shí)施方式

以下是本發(fā)明的具體實(shí)施例并結(jié)合附圖，對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步的描述，但本發(fā)明并不限于這些實(shí)施例。

如圖1所示，本菱殼中抗氧化活性物質(zhì)的優(yōu)化提取及抗氧化驗(yàn)證方法，包括以下操作步驟：

A、優(yōu)化提取方法：

1)、稱取適量的南湖無角菱進(jìn)行去肉留殼操作；

2)、將菱殼置于清水中洗凈，而后放置于電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱中，開啟電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱且設(shè)置于60℃進(jìn)行持續(xù)烘干作業(yè)，經(jīng)過一段時(shí)間直至菱殼達(dá)到恒重，取出菱殼；

3)、將烘干后的菱殼放置入高速多功能粉碎機(jī)進(jìn)行粉碎操作，菱殼粉碎后取出過60目篩網(wǎng)得南湖無角菱的菱殼粉末；

4)、用電子天平準(zhǔn)確稱取一定量的菱殼粉末放入容器中，用移液管將作為提取劑的乙醇溶液加入稱取的菱殼粉末中，進(jìn)一步通過攪拌使菱殼粉末與乙醇溶液混勻；

5)、將菱殼溶液放置于超聲儀中，調(diào)節(jié)超聲儀上的溫度旋鈕設(shè)定溫度，調(diào)節(jié)超聲儀上的時(shí)間旋鈕設(shè)定超聲時(shí)間，開啟超聲儀發(fā)出超聲波對(duì)菱殼溶液進(jìn)行抗氧化活性物質(zhì)的提取，由此經(jīng)過一段時(shí)間的提取作業(yè)；

6)、提取完畢后將菱殼溶液取出，經(jīng)過濾紙過濾得到含有抗氧化活性物質(zhì)的提取液；

B、抗氧化驗(yàn)證方法：

1)、用移液管將1mL提取液移入100mL容量瓶中，加入提取所用溶劑至刻度線，搖勻進(jìn)行稀釋操作；

2)、設(shè)置三組實(shí)驗(yàn)樣本：

第一組：在8.00mL 0.1mmol/L DPPH自由基溶液中加入0.40mL已稀釋過的菱殼提取液，攪拌混勻，放置暗處30min后，將溶液倒入比色皿中，置于分光光度計(jì)中，設(shè)定波長(zhǎng)為517nm，以蒸餾水為空白溶液，調(diào)零，測(cè)定吸光度值，所得數(shù)值記為A1；

第二組：在8.00mL 0.1mmol/L DPPH自由基溶液中加入0.40mL乙醇溶液，攪拌混勻，放置暗處30min后，將溶液倒入比色皿中，置于分光光度計(jì)中，設(shè)定波長(zhǎng)為517nm，以蒸餾水為空白溶液，調(diào)零，測(cè)定吸光度值，所得數(shù)值記為A0；

第三組:在8.00mL 70％的乙醇溶液中加入0.40mL已稀釋過的菱殼提取液，攪拌混勻，放置暗處30min后，將溶液倒入比色皿中，置于分光光度計(jì)中，設(shè)定波長(zhǎng)為517nm，以蒸餾水為空白溶液，調(diào)零，測(cè)定吸光度值，所得數(shù)值記為A2；

通過公式I％＝[1-(A1-A2)/A0]×100％，計(jì)算DPPH自由基清除率I。

DPPH法廣泛應(yīng)用于測(cè)定植物提取物自由基清除能力的實(shí)驗(yàn)。在乙醇溶液中，DPPH是一種呈紫紅色的穩(wěn)定自由基，在517nm處有強(qiáng)吸收。當(dāng)溶液中存在抗氧化劑時(shí)，抗氧化劑能夠給DPPH自由基提供氫原子使其發(fā)生推送，使其吸光值變小，顏色變得越淺表明抗氧化能力越強(qiáng)。因此，通過測(cè)定樣品對(duì)DPPH自由基的清除能力可以反映其抗氧化活性的強(qiáng)弱。

本菱殼中抗氧化活性物質(zhì)的優(yōu)化提取及抗氧化驗(yàn)證方法中，利用超聲波輔助提取，對(duì)南湖菱殼提取液體外清除DPPH自由基能力進(jìn)行考察，采用單因素和正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化提取條件。所得結(jié)果為：影響提取液體外抗氧化能力的因素主次順序?yàn)椋撼晻r(shí)間＞料液比＞提取溫度＞乙醇濃度。得出結(jié)論為：南湖菱殼提取液具有較強(qiáng)的抗氧化能力。

單因素試驗(yàn)提取工藝的優(yōu)化方案為：準(zhǔn)確稱取菱殼粉末0.5000g，乙醇溶液的濃度為40％～60％，菱殼粉末的質(zhì)量和乙醇溶液的體積比為1：40～1：60；在提取過程中超聲儀的設(shè)定溫度為40℃～60℃，設(shè)定超聲時(shí)間為20min～40min。

正交試驗(yàn)提取工藝的最佳方案為：乙醇溶液的濃度為60％，菱殼粉末的質(zhì)量和乙醇溶液的體積比(料液比)為1：60；在提取過程中超聲儀的設(shè)定溫度為60℃，設(shè)定超聲時(shí)間為30min。經(jīng)驗(yàn)證該最佳工藝操作下，使南湖菱殼提取液對(duì)DPPH自由基的清除能力達(dá)到85.6％。

步驟B的2)中，DPPH自由基溶液的制備方法為：準(zhǔn)確稱取DPPH自由基試劑19.7mg，用70％乙醇溶液溶解并定容至500mL，搖勻，得0.1mmol/L DPPH自由基溶液，置于4℃冰箱中冷藏備用。

步驟A的2)中，電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱具體為DGG-9023A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱。

步驟A的3)中，高速多功能粉碎機(jī)具體為JR-500B-2型高速多功能粉碎機(jī)。

步驟A的5)中，超聲儀具體為KQ-100B型超聲儀。

步驟B的2)中，分光光度計(jì)具體為UV757CRT紫外可見分光光度計(jì)。

本菱殼中抗氧化活性物質(zhì)的優(yōu)化提取及抗氧化驗(yàn)證方法，以優(yōu)化南湖菱殼抗氧化活性物質(zhì)的提取條件，并測(cè)定其體外抗氧化能力為目的，配合超聲波輔助提取，以達(dá)到最佳提取效果，并進(jìn)一步有效驗(yàn)證抗氧化效果。經(jīng)過試驗(yàn)表明南湖菱殼中抗氧化活性物質(zhì)的超聲輔助最佳提取條件為乙超聲時(shí)間30min、乙醇濃度60％、料液比1:60、提取溫度60℃，在此條件下DPPH自由基清除率達(dá)到85.6％。該提取法成本低，操作簡(jiǎn)單，效率高，具有良好的應(yīng)用前景。

本文中所描述的具體實(shí)施例僅僅是對(duì)本發(fā)明作舉例說明。本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員可以對(duì)所描述的具體實(shí)施例做各種各樣的修改或補(bǔ)充或采用類似的方式替代，但并不會(huì)偏離本發(fā)明的精神或者超越所附權(quán)利要求書所定義的范圍。