1.一種基于DNA材料的磁性納米治療診斷試劑的制備方法,其特征在于:
(1)DMSA-Zn0.4Fe2.6O4 NPs的制備
首先把FeSO4?(NH4)2SO4?6H2O 和ZnSO4溶解在20ml的水里,使得前體達(dá)到1.73×10-3mol Fe2+ and 2.67×10-4 mol Zn2+ ,其次,把10ml油酸、10ml無水乙醇和1g NaOH混合,在常溫下磁力攪拌直到得到均勻的溶液,再者,把前體Fe2+和Zn2+的混合溶液倒進(jìn)該均勻溶液中,攪拌幾分鐘以后,混合溶液變成深棕色,最后把該溶液轉(zhuǎn)移進(jìn)50ml反應(yīng)釜中,密封,230度加熱15個小時(shí),反應(yīng)結(jié)束以后,冷卻至室溫,產(chǎn)品沉積在釜底,納米顆粒分散在環(huán)己烷取出,再把乙醇加入分散有納米顆粒的環(huán)己烷中,沉淀出納米顆粒,最后納米顆粒再用乙醇反復(fù)洗數(shù)次,顆粒表面的油酸用DMSA進(jìn)行兩次交換,使得納米顆粒徹底分散在水相中;
(2)DNA四面體的制備
DNA四面體(TDN)是由TDN-1,TDN-2,TDN-3,氨基修飾的TDN-4,修飾在5’端記為NH3-TDN-4,四條單鏈組裝而成的,取上述50 μM 的DNA單鏈TDN-1,TDN-2,TDN-3,NH3-TDN-4各2μL加入到42μL Tris-MgCl2緩沖液中, 10 mM Tris 和50 mM MgCl2 ,pH 8;將上述樣品溶液置于PCR儀中在95℃保溫10分鐘后快速冷卻至4℃,繼續(xù)反應(yīng)30分鐘,通過堿基互補(bǔ)配對自組裝成即可得到濃度為2μM 的NH3-DNA四面體;
(3)治療診斷試劑TDN-Zn0.4Fe2.6O4-RGD NPs的制備
取EDC和NHS溶解在PBS緩沖液中,緩沖液PH=7.4, 0.05M,并用0.2M的鹽酸調(diào)解PH,把上述溶解加入到DMSA-Zn0.4Fe2.6O4 NPs中,并超聲10分鐘,室溫下反應(yīng),以活化羧基,將混合物用PBS 緩沖液磁分離洗滌3 次以除去多余的EDC和NHS,緩沖液PH=7.4, 0.01M,將活化后的DMSA-Zn0.4Fe2.6O4 NPs重新分散在PBS緩沖液中,把c(RGD)和NH3-DNA四面體溶解在PBS緩沖液中,并加入到以上活化后的DMSA-Zn0.4Fe2.6O4 NPs溶液中,室溫反應(yīng),混合物用PBS 緩沖液磁分離洗滌3 次以除去多余的游離抗體和NH3-DNA四面體,緩沖液PH=7.4, 0.01M,最后重懸于PBS中,PBS0.01M,pH 7.4,4℃保存。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的一種基于DNA材料的磁性納米治療診斷試劑的制備方法,其特征在于所述的治療診斷試劑的磁共振成像診斷部分是Zn0.4Fe2.6O4 NPs。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的一種基于DNA材料的磁性納米治療診斷試劑的制備方法,其特征在于所述的治療診斷試劑的藥物治療載體部分是DNA四面體。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的一種基于DNA材料的新型磁性納米治療診斷試劑的制備方法,其特征在于所述的治療診斷試劑的靶向分子是氨基修飾的c(RGD)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1的一種基于DNA材料的磁性納米治療診斷試劑的制備方法,其特征在于所述的DNA四面體是氨基修飾的。
6.根據(jù)權(quán)利要求1的一種基于DNA材料的磁性納米治療診斷試劑的制備方法,其特征在于所述的DNA四面體和c(RGD)的分子個數(shù)之比為0.1-10。
7.根據(jù)權(quán)利要求1的一種基于DNA材料的磁性納米治療診斷試劑的制備方法,其特征在于所述的DMSA-Zn0.4Fe2.6O4 NPs與DNA四面體和c(RGD)的分子個數(shù)之比為1:10:10。
8.一種基于DNA材料的磁性納米治療診斷試劑,其特征在于,根據(jù)權(quán)利要求1-7任一所述方法制備得到。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述基于DNA材料的磁性納米治療診斷試劑的應(yīng)用。